羊红细胞铜锌超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

目的：从羊红细胞中分离纯化铜锌超氧化物歧化酶(Cu，Zn—SOD)．并对其部分理化性质进行研究．方法：采用有机溶剂去除血红蛋白，热变性，超滤浓缩，丙酮沉淀、DF—FF柱色谱的方法．对羊红细胞Cu．Zn-SOD进行分离纯化。结果：羊红细胞520g得Cu，Zn—SOD总活力为467000IU．比活为8126μ／mg.pro，纯化倍数为26．2，活性回收率为61％，理化性质分析表明，该酶的最大紫外吸收波长为285nm，亚基相对分子量为16．1ku，每个亚基含1个铜原子和1个锌原子，pH在6-11范围内该酶稳定性很好，在35℃-75℃范围内，保温20min，酶活基本没有损失。2mmol／L的SDS对Cu，Zn—SOD没有明显的抑制作用，而2mmol／L的H2O2对该酶表现出较强的抑制作用，结论：采用此方法分离纯化的Cu，Zn—SOD达到电泳纯，其理化性质与其它动物血液来源的Cu，Zn—SOD一致。     

柞蚕幼虫铜锌超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

目的从柞蚕幼虫分离铜锌超氧化物歧化酶 (Cu ,Zn SOD) ,并对其部分性质进行研究。方法用氯仿 乙醇除杂蛋白质、丙酮沉淀、热变性、DE 32柱色谱等方法 ,对柞蚕幼虫Cu ,Zn SOD进行分离纯化。结果得Cu ,Zn SOD干粉 9.5 3mg ;比活 10 116 .5 8u/mgpro ;活力回收 5 5 .87% ;纯化倍数为 36 0 .6 7。该酶相对分子质量 (Mr)约为 310 0 0 ;亚基Mr 约为 15 5 0 0 ;最大吸收波长 2 5 8nm ;pH在 5～ 9范围内基本稳定 ;在 4 0℃～ 6 0℃内保温 30min酶活基本不变 ;2mmol/L十二烷基硫酸钠对此酶没有明显的抑制 ;该酶对KCN和H2 O2 敏感。结论柞蚕幼虫含有丰富的Cu ,Zn SOD。     

羊红细胞铜锌超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

目的从羊红细胞中分离纯化铜锌超氧化物歧化酶 (Cu ,Zn SOD) ,并对其部分理化性质进行研究。方法采用有机溶剂去除血红蛋白、热变性、超滤浓缩、丙酮沉淀、DE FF柱色谱的方法 ,对羊红细胞Cu ,Zn SOD进行分离纯化。结果羊红细胞 5 2 0g得Cu ,Zn SOD总活力为 4 6 70 0 0u ,比活为 812 6u/mg·pro,纯化倍数为 2 6 .2 ,活性回收率为 6 1%。理化性质分析表明 :该酶的最大紫外吸收波长为 2 5 8nm ,亚基相对分子量为 16 .1kD ,每个亚基含 1个铜原子和 1个锌原子。pH在 6～ 11范围内该酶稳定性很好 ,在 35℃～ 75℃范围内 ,保温 2 0min ,酶活基本没有损失。 2mmol/L的SDS对Cu ,Zn SOD没有明显的抑制作用 ,而 2mmol/L的H2 O2 对该酶表现出较强的抑制作用。结论采用此方法分离纯化的Cu ,Zn SOD达到电泳纯 ,其理化性质与其它动物血液来源的Cu ,Zn SOD一致。     

紫草种子SOD的分离纯化及部分性质研究

我们采用超临界ＣＯ２萃取紫草种子不饱和脂肪酸后的废渣，进一步用缓冲液抽提，从中提取了高纯度ＳＯＤ，并对其部分理化性质进行了研究。     

利用废弃人红细胞批量生产铜、锌超氧化物歧化酶

本文以干扰素生产中废弃的人红细胞为原料,按乙醇-氯仿沉淀→磷酸氢二钾盐析→丙酮沉淀的操作手续进行了铜、锌超氧化物歧化酶中等规模(300～600毫克)的批量生产。经理化性质鉴定及蛋白纯度分析证实,我们提取的人铜、锌超氧化物歧化酶的比活性和纯度分别可达到2500McCord—Fridovich单位/毫克蛋白和90％以上,聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外吸收光谱等理化性质指标也显示出纯酶的基本特征。     

Effects of Transfection with the Cu,Zn-Superoxide Dismutase Gene on Xanthine/Xanthine Oxidase-Induced Cytotoxicity in Fibroblasts from Rat Skin

Purpose. The effects of transfection with the human Cu, Zn-superoxide dismutase (hSOD)⁴ gene on active oxygen-induced cytotoxicity in rat skin fibroblasts (FR) were studied for the purpose of developing the novel delivery system of hSOD using hSOD gene. Methods. An expression plasmid for hSOD, pRc/RSV-SOD, was constructed and used to transfect FR cells. Xanthine (X)/xanthine oxidase (XO) system were used to generate active oxygen species. The effects of transfection with the hSOD gene on active oxygen-induced cytotoxicity were assessed by comparing the number of surviving cells and the level of lipid peroxidation in host and transformants after exposure to X/XO system. Results. The cellular SOD activity in RSV-SOD cells transfected with pRc/RSV-SOD was significantly increased in comparison with host or RSV cells transfected with the pRc/RSV plasmid containing no hSOD gene as a control. Furthermore, Western blot analysis using an anti-hSOD antibody indicated the production of hSOD in RSV-SOD cells. On the other hand, although the numbers of surviving cells in both host and RSV-SOD cultures after exposure to X/XO system decreased in a time-dependent manner, the decrease in number of surviving RSV-SOD cells was less than that in host cells. In the presence of catalase, the decreases in number of surviving cells in both host and RSV-SOD cultures after exposure to the X/XO system were also less than those in the absence of catalase. However, the decreases in cell survival in RSV-SOD cultures were significantly less than those in host cells in the presence of catalase. Furthermore, the levels of lipid peroxidation in RSV-SOD cells exposed to the X/XO system in the presence or absence of catalase were lower than those in host cells. These results indicated that the increase in cellular SOD activity by transfection with the hSOD gene protects cells from oxidative stress. Conclusions. Human SOD gene therapy may be useful for treatment of diseases in which oxidative tissue damage is produced.     

α-型重组人肿瘤坏死因子衍生物的稳定性研究

应用体外细胞毒实验对2种α－型重组人肿瘤坏死因子衍生物生物学效优的稳定性进行了考察。结果表明，这2种制品对温度和光照都比较敏感，受热后其生物学活性迅速下降。但在一20℃存放1a后，活性光明显变化。建议该2种制品应在低温条件下避光贮存。     

重组人红细胞生成素体内生物活性检测

建立了测定重组人红细胞生成素（rhEPO）体内生物活性的多血小鼠法。实验表明:rhE-PO在0.05～0.8 iu/鼠剂量范围内.对数剂量与反应（~(59)Fe 摄入量）呈直线关系。经多批rhEPO产品的体内生物活性测定,证明该法结果准确,重现性好.     

固定化金属亲和层析胶与亲和层析膜纯化rhMn-SOD和rhCu,Zn-SOD的比较研究

为比较固定化金属亲和层析膜与亲和层析胶的纯化效果,分别用固定化金属亲和层析胶Cu2 柱、Ni2 柱、固定化金属亲和层析膜Cu2 柱、Ni2 柱分离纯化rhCu,Zn-SOD、rhMn-SOD/24a、rhMn-SOD/28.结果表明,亲和胶与亲和膜分离SOD获得相似的纯化效果,纯化倍数均在3到5之间,亲和膜分离所得SOD比活略高于亲和胶,rhCu,Zn-SOD与Cu2 的亲和能力高于rhMn-SOD.固定化金属亲和层析膜色谱为基因工程产物的快速分离鉴定提供了一个简便的方法.     

重组人胰岛素药物利用评价标准的建立

目的 :建立重组人胰岛素药物利用评价(DUE)标准,为临床合理用药提供参考。方法:基于中华医学会糖尿病学分会(CDS)制定的相关指南拟定重组人胰岛素DUE标准草案,形成专家咨询表,进行两轮专家咨询调查,通过相应的统计学分析对标准进行修订完善。结果:重组人胰岛素DUE标准分为用药指征、用药过程、用药结果三个部分。用药指征包括临床诊断标准、疾病诊断、禁忌证;用药过程包括给药途径、注射部位、血糖监测、给药剂量间隔与调整、联用其他降糖药情况、合用非降糖药情况、糖尿病教育;用药结果包括体征症状、控制目标、药品不良反应监测与处置。咨询专家的权威程度系数(Cr)>0.7,克朗巴赫系数(α)>0.6,说明专家权威性和指标体系内部一致性良好。结论:建立的重组人胰岛素DUE标准适用于医疗卫生机构开展DUE研究,同时也可为临床药师开展工作提供参考。     

发酵液中重组人血清白蛋白的纯化

采用摇瓶培养重组毕赤氏酵母（Pichia pastoris）表达并分泌重组人血清白蛋白（recombinant human se-rum alburmin，rHSA）至胞外，发酵液经（NH4）2SO4沉淀、离子交换层析、疏水层析和凝胶过滤分离纯化rHSA，纯化样品经SDS-PAGE检测为单一条带。     

重组人白细胞介素-2细菌内毒素检查法的建立

目的:确定白介素-2合理的内毒素限值,建立快速、准确的细菌内毒素检查法。方法:根据《中国药典》2005年版内毒素检查法并参考其他药物的内毒素限值,确定白介素-2的内毒素限值及最佳稀释倍数。结果:白介素-2的内毒素限值L= 1．5 EU／2 000IU。当用灵敏度为0．25 EU·ml-1的鲎试剂进行细菌内毒素检查时,白介素-2的稀释倍数为6。结论:白介素-2 内毒素限值按1．5 EU／2000IU进行内毒素检查是可行的。     

不同方法应用促红细胞生成素治疗肾性贫血临床观察

目的：评价不同方法应用促红细胞生成素治疗肾性贫血的有效性和安全性.方法：165例慢性肾功能衰竭合并肾性贫血患者随机进入试验组及对照组,观察组给予促红细胞生成素（EPO）10 000 IU皮下注射,每周1次,对照组3 000 IU皮下注射,每周3次,并视病情改善情况适当减少剂量.在12周疗程内观察两组不良反应,监测血常规[血白蛋白（Hb）,红细胞计数（RBC）]、红细胞压积（HCT）、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、丙氨酸氨基转移酶等,比较两组EPO使用的总剂量、总费用及注射次数.结果：观察组74例、对照组76例完成12周的治疗观察.两组疗效比较差异无统计学意义（P＞0.05）.两组治疗后的Hb、RBC、HCT均较治疗前明显升高,而两组Scr及BUN则较治疗前明显降低（P＜0.01）.治疗后两组Hb、RBC、HCT、Scr、BUN,以及不良反应发生率比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）.观察组EPO总剂量、总注射次数、总费用明显少于对照组（P＜0.05或0.01）.结论：与常规3 000IU皮下注射EPO比较,10 000 IU皮下注射EPO在较好地纠正肾性贫血的同时,又能减少慢性肾功能衰竭合并肾性贫血的针刺痛苦和经济负担,且不良反应无明显增多.     

重组人血管内皮抑素联合DIA方案治疗骨肉瘤的临床分析

目的观察重组人血管内皮抑素联合DIA方案治疗骨肉瘤的临床效果。方法将我院2007年9月至2008年9月收治的76例骨肉瘤患者随机分成观察组和对照组,每组38例。所有患者手术治疗后,观察组采用重组人血管内皮抑素联合DIA方案治疗,对照组采用DIA方案治疗,比较两组的临床疗效、不良反应、5年生存曲线以及肢体功能。结果观察组和对照组的临床有效率分别为71.0%、51.3%,观察组显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者不良反应的差异无统计学意义(P>0.05);而5年生存曲线以及肢体功能的差异有统计学意义(P<0.05)。结论重组人血管内皮抑素联合DIA方案治疗骨肉瘤的疗效较单用DIA方案更好,且安全性高,值得在临床推广。     

重组人生长激素治疗垂体性侏儒症的临床观察

用基因工程重组的人生长激素治疗垂体性侏儒症（GHD）13例6个月，所有患儿身高都有不同程度增加。平均共增高8．3±1．2cm，身高落后值（SDS）由治疗前的-5．51±0．94减少到治疗后的-4．20±0．96。在6个月的用药期，13例患儿身高增长速率明显增加，为16．6±2．4cm·y-1，与治疗前24±0.6cm·y-1相比增加非常明显（P＜0．001）。除少数患者用药初期与注射部位皮肤出现暂时性红斑外，未见其他不良反应。