补肾助孕方对肾虚薄型子宫内膜大鼠内膜容受性的影响及机制研究

目的：观察补肾助孕方对肾虚薄型大鼠子宫内膜容受性的影响,探讨中药的作用机制。方法：雌性SD大鼠30只,随机分为对照组10只,造模组20只,通过羟基脲灌胃建立肾虚合并着床障碍型子宫内膜大鼠模型。随后将20只造模组大鼠随机分为模型组和补肾助孕方组,每组10只。对照组、模型组均灌服蒸馏水10 mL/kg;补肾助孕方组灌服中药0.3 mg/kg,均1次/d,持续3个动情周期(15 d)。在第3个动情期后处死大鼠,酶联免疫吸附法检测动脉血中雌二醇、孕酮的水平。取子宫标本,光镜下观察子宫内膜形态,测量子宫内膜厚度、子宫间质厚度、子宫腺体数、子宫血管数。免疫组化法检测各组内膜组织中整合素β3和白血病抑制因子的表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠动脉血雌二醇、孕酮的水平减少;子宫内膜腺体稀少,上皮变薄,间质致密,血管少;子宫内膜厚度、子宫间质厚度、子宫腺体数、子宫血管数均减少;整合素β3和白血病抑制因子的表达减少。补肾助孕方组较之模型组,有明显的改善。结论：补肾助孕方可改善肾虚合并着床障碍型状态大鼠子宫内膜的容受性,可能与提高血中激素水平,增加内膜中整合素aβ3和白血病抑制因子的表达有关。     

助孕汤对育龄期妇女子宫内膜容受性的影响

目的 观察助孕汤对育龄期妇女子宫内膜容受性的影响.方法 将育龄期妇女90例,随机分为自然周期组、西药组(克罗米芬+绒毛膜促性腺激素)、中药组(助孕汤)和中西药结合组.随访3个月,统计妊娠率,超声观察子宫内膜厚度和类型,逆转录PCR和免疫组化分别检测子宫内膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、整合素β3 mRNA和蛋白水平.结果 与自然周期组比较,中西药结合组、中药组妊娠率有所上升,而西药组有所下降,差异无统计学意义(P＞0.05).与自然周期组和中西药结合组比较,子宫内膜厚度、ER、PR mRNA和蛋白水平在西药组显著下降而在中药组则显著上升(P＜0.05).结论 助孕汤可能通过调节子宫内膜厚度、增加子宫内膜ER、PR、整合素β3 mRNA和蛋白水平来改善妊娠率,并能拮抗克罗米芬降低子宫内膜容受性的副作用.     

补肾助孕方对大鼠胚胎着床期子宫内膜及卵巢形态学的影响

目的:观察补肾助孕方对SD大鼠胚胎着床期子宫内膜及卵巢的形态学变化,探讨补肾助孕方治疗黄体功能不全性不孕症的机理。方法:将SD雌性大鼠随机分成空白组、模型组、西药组和中药补肾助孕方低、中、高剂量组,西药组及中药低、中、高剂量组均预防性用药2个性周期,然后按雌、雄比例为2:1配以同种雄鼠合笼,于妊娠第3d灌服米非司酮1mg/100g(10mg/kg),妊娠第5d颈总动脉取血3ml后处死,光镜观察子宫内膜及卵巢的形态,透射电镜观察卵巢黄体细胞的超微结构。化学发光法测定血清E2、P、LH、FSH的水平。结果:中药补肾助孕方中、高剂量组与模型组比,能明显促进胚胎着床期子宫内膜的生长及子宫内膜腺体的增生和发育;中药补肾助孕方中、高剂量组与模型组比,能明显促进胚胎着床期卵巢黄体细胞的发育。结论:中药补肾助孕方通过促进子宫内膜的生长、促进子宫内膜腺体的发育,使腺体和间质发育同步;促进卵巢黄体细胞的增生和改善黄体细胞的结构,从而提高子宫内膜的容受性、提高黄体功能,有利于胚胎着床和发育。     

补肾助孕方、逍遥丸对超促排卵小鼠围着床期妊娠结局和子宫内膜容受性的影响

目的研究补肾助孕方、逍遥丸对超促排卵小鼠妊娠结局和子宫内膜容受性的影响及可能作用机制。方法将240只动情周期正常的昆明系雌性小鼠随机分为正常组、模型组、补肾组、疏肝组,每组各60只。除正常组,其余各组小鼠建立控制性超促排卵模型。造模第1天始补肾组、疏肝组分别给予补肾助孕方混悬液(浓度1.5 g/mL)和逍遥丸混悬液(浓度0. 09 g/mL),均0.4 mL/(30 g·d)灌胃,模型组及正常组给予同等剂量蒸馏水灌胃,连续11天。比较各组小鼠围着床期血清雌二醇(E_2)、孕酮(P)、NO含量及子宫内膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白及其mRNA表达,测量子宫内膜厚度,观察小鼠内膜胞饮突表达,统计各组小鼠妊娠数、胚胎着床数。结果与正常组比较,模型组小鼠妊娠数、胚胎着床数减少(P0.05),同时模型组血清E_2、P降低,子宫内膜ER、PR蛋白,VEGF、eNOS蛋白及其mRNA表达,子宫组织匀浆内NO含量均降低(P0.05),子宫内膜厚度变薄,胞饮突发育不良;与模型组比较,补肾组、疏肝组小鼠妊娠数及胚胎着床数增加,血清E_2、P含量及子宫内膜ER、PR蛋白,VEGF、eNOS蛋白及其mRNA表达,子宫组织匀浆内NO含量均升高(P0.05),子宫内膜厚度增加,胞饮突发育接近正常组。结论补肾法、疏肝法均能够增加超促排卵小鼠妊娠率及胚胎着床数,其作用机制可能与调节雌、孕激素水平及其受体,影响VEGF、eNOS表达,调控NO释放,改善小鼠子宫内膜组织形态及血管通透性有关。     

补肾活血方对宫腔粘连子宫内膜ER、PR表达的影响

目的观察补肾活血方联合雌孕激素预防宫腔粘连电切术后再粘连的临床效果。方法选取中重度宫腔粘连患者22例,随机分为2组,其中治疗组10例,对照组12例。所有患者均行宫腔镜下粘连电切术+上环术,并在术中钳取少许内膜组织测定ER、PR、Ki67,术后给予雌孕激素序贯治疗3个月,治疗组同时口服补肾活血方,对照组不给予补肾活血方。比较2组治疗前后增殖期内膜厚度,宫腔粘连评分,ER、PR、Ki67的表达。结果治疗前2组ER、PR、Ki-67表达无显著差异(P 0. 05),治疗后2组上述指标均较治疗前显著上升(P 0. 05)。治疗后治疗组ER、PR表达均显著高于对照组(P 0. 05),2组治疗后Ki67的表达无明显差异(P 0. 05)。2组治疗后内膜厚度均较治疗前显著上升(P 0. 05),评分显著下降(P 0. 05),且治疗组显著优于对照组(P 0. 05)。结论补肾活血方联合雌孕激素可有效预防宫腔粘连电切术后再粘连的发生,改善宫腔环境,增加内膜厚度,其作用机制可能通过提高雌孕激素受体的表达来完成。     

补肾活血方对骨髓间充质干细胞移植治疗薄型子宫内膜大鼠子宫内膜CD34、整合素αvβ3、LIF表达的影响

目的 探讨补肾活血方对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMSCs)移植治疗薄型子宫内膜模型大鼠子宫内膜血管内皮细胞标志蛋白CD34、子宫内膜容受性标志物整合素αvβ3、白细胞抑制因子(LIF)表达的影响.方法 从6～8周龄雄性SD大鼠股骨骨髓中分离提取BMSCs,采用全骨髓贴壁法将其纯化,实验选用纯度较高的第3代细胞,分别采用尾静脉(IV)和宫腔注射(IU)的方法移植到雌性SD大鼠体内;给予雌性SD大鼠宫腔灌注95％无水乙醇及灌胃羟基脲加尾静脉注射高分子右旋糖苷,建立肾虚血瘀薄型子宫内膜模型;将实验大鼠分为正常组、模型组、阳性对照组、BMSCs+ IV组、BMSCs+ IU组、BMSCs+ IV+中药组、BMSCs+ IU+中药组;各干预组分别给予BMSCs静脉或宫腔移植并联合中药干预后经过大鼠3个动情周期,处死取材.免疫组化、Western blot检测子宫内膜中CD34、整合素αvβ3及LIF的表达情况.结果 BMSCs+ IV组、BMSCs+ IU组、BMSCs+ IV+中药组、BMSCs+ IU+中药组均能一定程度地增加子宫内膜CD34、整合素αvβ3、LIF的表达(P＜0.05);在免疫组化检测整合素αvβ3表达方面,BMSCs+ IV组与BMSCs+IU组差异有统计学意义(P＜0.01);BMSCs+ IV+中药组与BMSCs+ IV组,BMSCs+ IU+中药组与BMSCs+ IU组在免疫组化检测整合素αvβ3表达及Western blot检测整合素αvβ3、LIF表达方面差异有统计学意义(P＜0.05).结论 尾静脉注射BMSCs增加整合素αvβ3表达优于宫腔注射BMSCs,加用补肾活血方后能更好地增加整合素αvβ3和LIF的表达.     

益肾填精助孕法对肾虚胚胎着床障碍小鼠子宫内膜表面胞饮突表达的影响

目的:观察益肾填精助孕方药对肾虚胚胎着床障碍模型小鼠子宫内膜表面胞饮突表达的影响,探讨益肾填精助孕法对肾虚胚胎着床障碍改善的可能作用机制。方法:制作肾虚胚胎着床障碍小鼠病证结合模型,分别予益肾填精助孕中药低剂量、中剂量、高剂量、戊酸雌二醇及生理盐水灌胃,扫描电镜下观察子宫内膜表面胞饮突情况。结果:中药组中剂量及高剂量组小鼠子宫内膜细胞表面有大量发育中的胞饮突表达,而西药组表达胞饮突大小不一,略低于正常对照组。结论:益肾填精助孕中药能够改善肾虚胚胎着床障碍小鼠子宫内膜表面胞饮突的发育,有助于提高子宫内膜容受性。     

当归散对小鼠低容受性子宫内膜孕激素受体和整合素β_3表达的影响

目的:探讨当归散及其拆方对低容受性子宫内膜PR和整合素β3表达的影响。方法:采用曲普瑞林注射制备小鼠模型,预防性给予受试液,于排卵后24h和48h测定子宫内膜中PR、整合素β3水平。结果:(1)PR的表达:48h时当归散组和归-芩组的PR表达明显上调,达到正常组水平(P0.05);(2)整合素β3的表达:而当归散组和当归黄芩组整合素β3在2个时间点表达无显著差异,与正常组比较差异不显著(P0.05)。结论:当归散和当归-黄芩能抑制曲普瑞林引起的PR过早下调,抑制整合素β3的提前表达,改善子宫内膜容受性。     

健肾助孕方对着床障碍小鼠雌孕激素及子宫HOXA10表达的影响

目的:观察健肾助孕方对着床障碍小鼠血清雌孕激素浓度和子宫HOXA10表达的影响。方法:将30只孕鼠随机分为模型组3只、健肾助孕方低剂量组6只、健肾助孕方高剂量组6只、黄体酮组7只和正常对照组8只。从妊娠第1天开始,模型组、正常对照组每日给予生理盐水0.2 m L·只-1灌胃,黄体酮组皮下注射黄体酮溶液0.1 m L·只-1,健肾助孕方低剂量组、高剂量组每日灌胃0.2 m L·只-1。妊娠第4天皮下注射米非司酮诱导着床障碍小鼠模型。妊娠第8天处死小鼠,ELISA法检测血清中雌孕激素浓度,免疫组织化学法和Western blot法对子宫中HOXA10的表达和蛋白含量进行检测。结果:健肾助孕方低剂量组、高剂量组血清雌孕激素浓度较模型组明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。健肾助孕方高剂量组、黄体酮组子宫中HOXA10的表达显著增多,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05);健肾助孕方低剂量组、高剂量组、黄体酮组子宫中HOXA10的蛋白含量明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:健肾助孕方可以升调着床障碍小鼠血清雌孕激素水平,提高子宫中HOXA10的表达量,从而改善着床障碍小鼠的子宫内膜容受性,促进胚胎着床。     

补肾活血方对子宫内膜异位症不孕患者子宫内膜的影响

目的观察补肾活血方对子宫内膜接受性指标整合素亚单位β3、肿瘤坏死因子(TNF-α)在子宫内膜异位症(EM)不孕患者子宫内膜上皮细胞中的影响。方法EM不孕患者50例,随机分为补肾活血方治疗组(30例)和丹那唑对照组(20例),治疗前后应用免疫组织化学方法检测种植窗期子宫内膜上皮细胞TNF-α、整合素亚单位β3表达情况,应用HSCORE评分作半定量分析,用非参数Wilcoxon检验做统计学处理。结果治疗组子宫内膜整合素亚单位β3的表达治疗后较治疗前明显提高,而TNF-α则明显降低,整合素亚单位β3较对照组有显著性差异。结论补肾活血方可降低子宫内膜异位症不孕患者种植窗期子宫内膜上皮细胞TNF-α表达,增强整合素亚单位β3的表达,通过调节子宫内膜的接受性来提高EM不孕患者的受孕率。     

补肾调经中药对多囊卵巢综合征患者子宫内膜整合素β_3表达的影响

目的探讨补肾调经中药对多囊卵巢综合征(PCOS)患者促排卵后子宫内膜整合素β3(Integrinβ3)表达的影响。方法将无排卵PCOS患者36例随机分为2组,给予不同的促排卵方案:A组为克罗米芬(CC)/绒毛膜促性腺激素(hCG)组,共17例;B组为CC/hCG加中药组,共19例。同期选择22例月经周期正常妇女为对照组。采用反转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)对3组黄体中期的子宫内膜Integrinβ3进行半定量分析。结果与对照组相比,A组黄体中期子宫内膜Integrinβ3的表达下降(P0.05),B组表达差异无统计学意义(P0.05)。结论CC/hCG促排卵治疗降低了黄体中期子宫内膜容受性,加服补肾调经中药后可改善子宫内膜容受性。     

补肾安胎方及其不同组分对胚泡着床障碍小鼠雌、孕激素及其受体的影响

目的比较补肾安胎方、补肾方及活血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的影响及其机制。方法采用吲哚美辛诱导小鼠胚泡着床障碍模型,从妊娠第1天起分别予补肾安胎方、补肾方、活血方治疗。于妊娠第5、6天处死小鼠,留取血清及子宫标本。采用放射免疫法检测血清雌激素(E2)和孕激素(P)的含量;采用免疫组织化学方法检测子宫雌、孕激素受体(ER、PR)的表达。结果补肾安胎方可以提高妊娠第6天血清P及E2水平,并且促进着床位点ER及PR的表达。而补肾方和活血方虽有轻度促进ER、PR表达作用,但其治疗作用弱于补肾安胎方。结论将补肾法和活血法结合起来的补肾安胎方可以通过对E2、P、ER、PR的影响,从更大程度上改善着床障碍小鼠子宫内膜容受性,促进胚泡着床。     

中药对方对雌激素负荷去势大鼠E2、ER、ERα、ERβ表达的影响

目的:研究中药方对去势雌激素负荷大鼠子宫内膜增生症模型雌激素、雌激素受体及雌激素受体亚型的影响.方法:放射免疫法测定大鼠血清雌激素(E2)水平,免疫组化法观察大鼠子宫内膜腺上皮雌激素受体(ER)及雌激素受体亚型(ERα、ERβ)的表达.结果:与模型组相比,给予药物干预的小组血清雌激素(E2)水平降低,本方可降低大鼠子宫内膜腺上皮细胞ERα、ERβ的表达.结论:实验表明造模大鼠体内存在高雌激素,高雌激素受体及其亚型的病理状态,而本实验对方能有效拮抗其体内雌激素、雌激素受体,雌激素受体亚型水平的提高.本实验成功的利用靶向给药方法祛除增生的子宫内膜,为临床治疗功血提供了新的思路和方法.     

健骨颗粒对体外破骨细胞整合素αV及β3 mRNA表达的影响

目的:探讨补肾健脾中药健骨颗粒对体外破骨细胞整合素(Itg)αV、β3mRNA表达的影响。方法:采用破骨前体细胞系诱导培养法,通过M-CSF和RANKL诱导剂诱导RAW264.7细胞,分化为成熟破骨细胞。分别用健骨颗粒含药血清和生理盐水血清干预,运用实时荧光定量PCR法检测ItgαV、β3mRNA表达,并取骨片行甲苯胺蓝染色,骨陷窝和骨吸收面积计算分析。结果:经M-CSF和RANKL诱导后,RAW264.7细胞的形态特征、TRAP染色均符合成熟破骨细胞特异性表现;含药血清组破骨细胞ItgαV、β3mRNA表达水平明显低于生理盐水血清组(P<0.05),同时骨磨片的骨吸收陷窝数和面积亦呈同样变化趋势。结论:RAW264.7细胞经诱导分化后可以获取成熟破骨细胞;健骨颗粒能有效抑制破骨细胞Itgαv、β3 mRNA表达,影响破骨细胞功能活性。     

助孕增膜方对促排卵周期子宫内膜容受性的影响

目的：探讨应用中药复方助孕增膜方在改善促排卵周期不孕症患者的子宫内膜容受性的影响。方法：将120例促排卵周期中子宫内膜生长不良的不孕患者在下一个促排卵周期中随机分为2组：治疗组60例,月经周期第5天口服助孕增膜方,每日1剂;对照组60例,月经第5天起每天口服戊酸雌二醇2mg;以上2组均在排卵日（B超声像显示优势卵泡消失日为排卵日）停服上述药物。采用阴道B超监测成熟卵泡发育数量、内膜厚度及内膜类型、双侧子宫动脉血流参数及妊娠率。结果：2组用药后患者子宫内膜厚度均有改善,2组之间差异无统计学意义（P〉0.05）;子宫动脉血流参数中,治疗组阻力指数（R I）和搏动指数（PI）明显低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;治疗组成熟卵泡发育数量比对照组多,差异有统计学意义（P〈0.05）;在妊娠率方面,治疗组高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：助孕增膜方组能增加促排卵周期子宫内膜厚度,促进子宫内膜生长并改善子宫动脉血供。     

补肾助孕方对LPD模型大鼠子宫内膜NF-κB、NLRP3、COX-2表达水平的影响

目的 研究补肾助孕方对于由米非司酮诱导的LPD模型大鼠子宫内膜炎性因子NF-κB、NLRP3、COX-2表达水平的影响，探讨补肾助孕方治疗LPD的相关机制。方法 随机将60只雌性SD育龄期大鼠分为空白组、模型组、阳性药地屈孕酮组、补肾助孕方低、中、高剂量治疗组，每组10只进行相应造模给药。分别采用qPCR、Western Blot法检测各组大鼠子宫内膜NF-κB、NLRP3、COX-2的mRNA和蛋白表达水平。结果 与空白组相比，模型组NF-κB、NLRP3的蛋白及mRNA表达水平明显上升(P<0.01),COX-2蛋白及mRNA表达水平明显下降(P<0.01)。与模型组相比，NF-κB中药各剂量组的蛋白及mRNA表达均下调(P<0.05),但地屈孕酮组无统计学差异(P>0.05);NLRP3阳性药、补肾助孕方低、中、高剂量治疗组的mRNA均明显下降(P<0.05),但蛋白水平，仅中、高剂量中药组有统计学差异；补肾助孕方刺激了COX-2表达，其蛋白表达水平在各组间有显著上升(P<0.05),其中中剂量组效果最佳，mRNA水平仅中药高剂量组有统计学差异...     

补肾活血方“导法”调控5/12-LOX/LXA4/FPR2改善子宫内膜容受性不良大鼠的助孕机制

目的 观察补肾活血方“导法”调控肾虚血瘀子宫内膜容受性不良大鼠种植窗期LXA4相关信号轴的助孕机制。方法 通过分子对接预测补肾活血方有效组分与脂氧素A4(LipoxinA4,LXA4)合成酶及受体的结合程度;通过羟基脲灌胃+肾上腺素皮下注射构建肾虚血瘀内膜容受性不良复合模型大鼠;随机分为模型组、空白组、补肾活血导法低、中、高组、阳性组6组;各组造模同时予以相应干预方法,连续10 d,并于动情期按照2∶1雌雄合笼,次日晨检发现阴栓脱落或阴道涂片发现阴栓记为1.0 dpc,于6.0 dpc麻醉处死剖出子宫组织;记录每组子宫内膜、胞饮突形态并评分,观察子宫内膜上胰岛素样生长因子结合蛋白1(insulin-like growth factor-binding protein-1,IGFBP-1)、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF)蛋白分布表达和同源盒基因A10(HomeoboxA10,HOXA10)mRNA表达,测定子宫组织匀浆中炎症介质LXA4、合成酶5/12/15-脂氧合酶(Lipoxygenase, LOX)、受体甲酰肽受...     

益肾填精助孕方药对肾虚胚胎着床障碍小鼠子宫内膜MMP-9及TIMP-3蛋白表达的影响

目的:观察益肾填精助孕方药仙子益真胶囊对肾虚胚胎着床障碍模型小鼠子宫内膜腺上皮细胞、腔上皮细胞和基质细胞MMP-9及TIMP-3的蛋白表达影响,探讨其可能作用机制。方法:建立肾虚胚胎着床障碍小鼠模型,分别予仙子益真胶囊低剂量、中剂量、高剂量、戊酸雌二醇片及生理盐水灌胃,免疫组化法检测MMP-9和TIMP-3的蛋白表达。结果:MMP-9蛋白及TIMP-3蛋白在模型组与正常组的子宫内膜腺上皮细胞、腔上皮细胞中表达有显著性差异(P<0.05)。MMP-9蛋白及TIMP-3蛋白在模型组与仙子益真胶囊各组的子宫内膜腺上皮细胞、腔上皮细胞中表达有显著性差异(P<0.05)。MMP-9蛋白及TIMP-3蛋白在仙子益真胶囊低、中剂量组小鼠子宫内膜腺上皮、腔上皮表达与戊酸雌二醇片组比较无显著性差异。TIMP-3蛋白在仙子益真高剂量组小鼠子宫内膜腺上皮、腔上皮表达与戊酸雌二醇片组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:益肾填精助孕方药可以改善着床障碍小鼠子宫内膜MMP-9、TIMP-3的表达,从而调节滋养细胞对子宫内膜的侵入程度,促进胚胎着床。