Smad7基因转染人胰腺癌细胞后uPA及PAI-1表达的变化

目的: 通过对人胰腺癌细胞BxPC3转染Smad7基因,观察转染阳性细胞克隆尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)表达的改变,进一步阐明Smad7在胰腺癌侵袭和转移中的作用.方法: 经脂质体介导将含有Smad7重组表达质粒转染BxPC3细胞,用G418筛选及RT-PCR、蛋白质印迹法鉴定;又分别采用RT-PCR与蛋白质印迹法检测转染阳性细胞克隆uPA及PAI-1的表达.结果: 成功建立高表达Smad7的阳性BxPC3克隆(F-16、F-21),并证实其uPA、PAI-1 mRNA及蛋白表达均显著增加.结论: Smad7可能通过增强胰腺癌组织内uPA及PAI-1的生成而起到促进胰腺癌进展的作用.     

卵巢恶性肿瘤组织中uPA及其PAI-1表达的临床意义

目的：探讨卵巢恶性肿瘤组织中尿型纤溶酶原激活因子（uPA）及其1型抑制因子（PAI-1）表达的临床意义。方法：采用免疫组化SABC法检测uPA、PAI-1在40例卵巢恶性肿瘤、20例卵巢良性肿瘤及20例正常卵巢组织中的表达情况并分析其与临床病理因素及预后的相关性。结果：①uPA、PAI-1在卵巢恶性肿瘤组织中的阳性表达率明显高于卵巢良性肿瘤组织和正常组织（P〈0.05）。②在临床分期Ⅲ～Ⅳ期者其卵巢恶性肿瘤组织中uPA、PAI-1阳性表达率明显高于Ⅰ～Ⅱ期（P〈0.05）。③uPA、PAI-1表达阳性者,平均生存时间分别均为29.32、31.78个月,明显低于uPA、PAI-1表达阴性者的49.0、52.23个月（P〈0.05）。Cox模型分析显示PAI-1表达为影响卵巢癌预后的独立因子。结论：uPA、PAI-1表达与卵巢恶性肿瘤的发生及侵袭、转移相关,并与卵巢恶性肿瘤的不良预后关系密切。     

上皮性卵巢癌组织uPA、uPAR及PAI-1表达及意义

目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)、uPA受体(uPAR)及其抑制剂(PAI-1)在上皮性卵巢癌组织中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学PV-9000法检测60例上皮性卵巢癌、30例良性卵巢肿瘤及30例正常卵巢组织中uPA、uPAR及PAI-1蛋白表达,并结合临床病理因素进行分析.结果 uPA、uPAR、PAI-1在上皮性卵巢癌中的表达率(75.0%、65.0%、66.7%)明显高于良性肿瘤(40.0%、33.3%、30.0%)及正常组织(30.0%、26.7%、33.3%),差异均有显著性(χ2=11.779～19.510,P<0.05),而良性肿瘤与正常组织比较无明显差异.uPA、uPAR、PAI-1在上皮性卵巢癌组织表达与手术病理分期、组织分级和有无淋巴结转移有关(χ2=8.242～36.906,P<0.05).结论 uPA、uPAR、PAI-1在上皮性卵巢癌组织高表达,可能与卵巢癌发生、发展及浸润有关.     

卵巢癌组织中uPA与PAI-1 mRNA表达及意义

目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）和纤溶酶原激活剂抑制物-1（PAI—1）mRNA在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用逆转录-聚合酶链反应技术,检测38例卵巢癌、21例卵巢良性上皮性肿瘤及17例正常卵巢组织中uPA及PAI-1 mRNA的表达,并分析其与病理分化程度的相关性。结果 uPA及PAI—1 mRNA在卵巢癌中的表达水平均较卵巢良性上皮性肿瘤、正常卵巢组织显著升高（F=184．51、51．00,q=11．34～26．69,P〈0．05）。在不同分化程度的卵巢癌组织中uPA及PAI-1 mRNA的表达量随肿瘤分化程度的降低而增加（F=110．62、38．43,q=3．10～6．86,P〈0．05）。结论 卵巢癌组织中uPA及PAI—1 mRNA呈高表达,且与卵巢癌的病理分化程度相关。     

胰腺癌组织中Smad7、uPA及PAI-1的表达及临床意义

目的: 研究Smad7、uPA及PAI-1在胰腺癌组织及细胞中的表达水平,以阐明Smad7对胰腺癌侵袭和转移的作用机制.方法: 构建胰腺癌组织芯片,采用免疫组织化学方法检测Smad7、uPA及PAI-1蛋白表达情况,并与临床病理资料作对照分析.结果: 88例胰腺癌组织标本中Smad7、uPA和PAI-1阳性率分别为72.7%,76.1%和71.6%,明显高于正常胰腺组织中的表达水平(P<0.01).Smad7、uPA和PAI-1蛋白的阳性表达与胰腺癌患者的性别、年龄、肿瘤的位置及大小、组织病理学分级均无关(P>0.05),而与胰腺癌的临床TNM分期及淋巴结转移密切相关(P<0.01).Smad7、uPA和PAI-1在胰腺癌组织中的蛋白表达均呈正相关(P<0.01).结论: Smad7、uPA及PAI-1在胰腺癌中共同高表达,Smad7可能通过增强胰腺癌组织内uPA及PAI-1的生成而起到促进胰腺癌进展的作用.     

尿激酶型纤溶酶原激活剂及其受体、抑制剂在卵巢腺癌中的表达及临床意义

目的：探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA)及其受体（uPAR)和纤溶酶原激活剂抑制剂（PAI－1）在卵巢癌发生发展中的可能作用和临床意义。方法：采用免疫组化SABC法检测uPA,uPAR,PAI-1在40例卵巢腺癌,10例卵巢良性肿瘤及10例正常卵巢组织中的表达。结果：卵巢腺癌组织中uPA,uPAR和PAI－1的阳性表达率明显高于卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织（P＜0．05）,在卵巢腺癌组织中uPA,uPAR同时阳性19例,uPA,PAI-1同时阳性14例,三者同时阳性表达13例,三者间存在着相关性（P＜0．05）,uPA,uPAR,PAI-1在不同分化程度和不同临床分期卵巢腺癌中的阳性表达率无显著性差异（P均＞0．05）,结论：卵巢腺癌中uPA,uPAR,PAI-1的阳性表达明显升高,三者的阳性表达间存在着相关性。三者的阳性表达率与卵巢腺癌的分化程度及临床分期无关。     

二烯丙三硫对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和侵袭的抑制及对uPA系统的调节

目的 研究二烯丙三硫（DATS）对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和侵袭能力的影响及对尿激酶型纤溶酶激活物（uPA）系统的调节作用。方法 实时定量PCR法(real time PCR)检测乳腺癌细胞株uPA系统中uPA、uPA受体（uPAR）和uPA抑制物（PAI-1）的表达;使用不同浓度DATS处理乳腺癌细胞,MTS比色法测定细胞的增殖能力;Matrigel体外浸润实验检测DATS（20~60μmol/L） 对细胞浸润能力的影响;Transwell小室迁移实验和划痕试验评价60μmol/L DATS对细胞迁移能力的影响;RT-PCR和Western blot分别测定60μmol/L DATS作用后,乳腺癌细胞中uPA、uPAR和PAI-1 mRNA和蛋白表达的变化;ELISA法检测细胞培养液中PAI-1蛋白含量的变化。结果 20~80μmol/L DATS对高侵袭性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。60μmol/L DATS明显抑制MDA-MB-231细胞的浸润和迁移能力,并在mRNA和蛋白水平上,显著上调PAI-1的表达,但对uPA和uPAR的表达水平无显著影响。结论 DATS抑制MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭能力,并在mRNA和蛋白水平上,显著上调PAI-1的表达。     

尿激酶型纤溶系统在乳腺癌细胞侵袭中的作用

目的研究尿激酶型纤溶系统组分uPA、uPAR、tPA及PAI-1在人乳腺癌细胞侵袭中的作用。方法以3株具有不同侵袭转移能力的乳腺癌细胞株作为研究对象,应用RT?PCR方法比较纤溶组分在此3株细胞中的表达,牛奶板法检测细胞培养上清中的纤溶活性,用Boyden小室模型测定细胞侵袭能力。结果发现MDA-MB-231细胞表达较高水平的uPA、uPAR、PAI-1和中等水平的tPA,无血清培养上清中总纤溶活性和uPA纤溶活性最高;MDA-MB-435细胞表达较低水平的uPA和较高水平的tPA,但未测出uPAR和PAI-1的表达,无血清培养上清中总纤溶活性较高,主要是tPA活性;MCF-7细胞表达较低水平的uPAR和较高水平的PAI-1,但未测出uPA和tPA的表达,无血清培养上清中几乎没有纤溶活性。与纤溶活性相一致的是,Boyden小室模型实验结果发现MDA-MB-231在3株细胞中体外侵袭能力最强,MDA-MB-435次之,MCF-7则几乎无体外侵袭能力。经抗uPA和抗uPAR抗体预处理MDA-MB-231细胞,分别使侵袭能力下降83.1%和43.9%(P<0.05)。结论uPA和uPAR的活性与乳腺癌细胞的侵袭转移能力密切相关     

转染Smad3基因的大鼠肾系膜细胞uPA及PAI-1表达的改变

目的:通过对大鼠肾小球系膜细胞(MsC)转染Smad3基因,观察转染阳性细胞克隆尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)表达的改变,以进一步阐明转移生长因子-β(TGF-β)介导肾小球硬化发生的作用机制。方法:经脂质体介导将含有Smad3重组表达质粒转染大鼠MsC,用G418筛选及RT-PCR,West-ern blot法鉴定;又分别采用RT-PCR与Western blot法,检测转染阳性细胞克隆uPA及PAI-1表达改变。结果:成功建立高表达Smad3的阳性MsC克隆(Th-8,Th-15),并证实其uPAmRNA及蛋白表达明显降低,而PAI-1 mRNA及其蛋白的表达显著增加。结论:TGF-β可能通过上调Smad3而减少组织内uPA的生成和增加PAI-1的合成,从而促进肾小球硬化的进展。     

uPA和PAI-1基因克隆及真核表达载体的构建及鉴定

目的：克隆人卵巢上皮癌组织uPA和PAI-1基因cDNA全长,构建表达uPA和PAI-1基因的真核表达载体。方法：采用RT-PCR技术从人卵巢上皮癌组织总RNA中逆转录uPA和PAI-1基因的cDNA全长,克隆到pGEM-TEasy Vector上,通过酶切和测序进行鉴定;酶切后与真核表达载体pcDNA3.1/myc-his（-）B连接,酶切及测序再次鉴定;采用脂质体法将重组质粒DNA转染至卵巢癌上皮细胞SKOV3细胞;采用有限稀释法和G418分别加压筛选并培养SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞及对照细胞;Western blot法检测转染前后SKOV3细胞uPA和PAI-1基因的表达。结果：成功扩增出uPA和PAI-1基因的cDNA的全长,并克隆入T载体,DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建含正确目的基因的表达载体pcDNA3.1-uPA和pcDNA3.1-PAI-1,Western blot能检测到uPA和PAI-1基因蛋白分别在SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞中的表达。结论：成功构建了uPA和PAI-1表达基因的真核表达载体,为进一步研究uPA和PAI-1基因在卵巢癌侵袭转移中的作用提供了实验基础。     

乳腺肿瘤组织中Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂的表达

探查乳腺肿瘤组织中Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂（ＰＡＩ－１）的表达，并比较乳腺恶性肿瘤组织与良性纤继腺瘤及正常组织中ＰＡＩ－１的差异。用免疫组织化学和原位杂交的方法，确定了乳腺癌、乳腺纤维腺瘤及瘤旁正常组织中ＰＡＩ－１的分布；用发色底物法检测组织提取液中ＰＡＩ－１的活性；用图象分析的方法对组织切片上的ＰＡＩ－１进行灰度定量。结果：ＰＡＩ－１主要分布在乳腺正常腺上皮细胞、瘤上皮细胞和腺癌细胞的胞浆中，但恶性组织中的成纤维细胞、巨噬细胞以及癌旁纤维组织也有染色。癌组织中ＰＡＩ－１的活性（Ｐ＜０．００１）和含量（Ｐ＜０．００５）均高于良性乳腺纤维腺瘤及瘤旁正常组织。结论：ＰＡＩ－１在乳腺恶性肿瘤组织中明显升高，ＰＡＩ－１的检测可能为临床乳腺肿瘤的诊断、预后提供新的指标。     

慢性肺心病血浆纤溶活性的动态变化

对慢性肺心病患者血浆纤溶指标监测发现:与正常组相比,急性加重期t-PA含量,PAI活性明显升高,t-PA活性、t-PA比活性,活性型t-PA明显降低;t-PA含量分别与PaCO_2、PaO_2呈正、负相关;缓解期t-PA含量更高,PAI活性降低,t-PA活性回升到接近正常值水平.     

正常人静脉血流阻断后血浆组织型纤溶酶原激活剂含量、活性及其抑制物活性的变化

用酶联免疫吸附法(ELISA)和比色分析法测定了20名正常人血浆组织型纤溶酶原激活剂(Tissue plasminogen activator,tPA)的含量、活性及纤溶酶原激活剂抑制物(Plasminogen activator inhibitor,PAI)的活性。检测到正常人在静脉血流阻断后,血浆tPA含量、活性均有显著增高,PAI活性变化不大。讨论了血浆tPA和PAI测定的临床意义。     

慢性扁桃体炎组织中的纤溶酶原激活剂测定

目的:为探讨蛋白分解酶在扁桃体炎发展和转归中所起的作用.方法:运用纤维蛋白平板的方法对19例慢性扁桃体炎患者的扁桃体组织进行初步研究.结果:慢性扁桃体炎的扁桃体组织中有纤溶酶原激活物的活性,平均比活性值为(228.847±227.905)mm2/μg.结论:提示抗纤溶疗法是治疗慢性扁桃体炎很有潜力的手段.     

INVESTIGATION OF THROMBOMODULIN AND PLASMINOGEN ACTIVATOR INHIBITOR TYPE-I IN PREGNANCY INDUCED HYPERTENSION AND ITS CLINICAL SIGNIFICANCE

Objective. To measure the circulating levels of thrombomodulin (TM) and plasminogen activator inhibitor type-I (PAI-I) inwomen with pregnancy induced hypertension (PIH). Methods. Blood samples were drawn from 97 pregnant women in their third trimester, grouped as 25 mild PIH, 26 moderate PIH, 22 severe PIH and 24 normotensive healthy pregnant women for determining levels of TM by ELISA, PAI-I by colorimetric assay methods, and creatinine (Cr) in serum by biochemical method. Results. Circulating levels of TM, PAI-I and TM/Cr ratio increased with increasing severity of PIH. There were no significant differences between mild and normotensive pregnant women. The parameters were significantly changed in the moderate and severe PIH groups. Conclusion. TM and PAI-I may serve as meaningful clinical markers for the assessment of the endothelial damage in PIH,which is very important in evaluating and following the development of PIH.     

子宫内膜癌组织uPA和PAI-1 mRNA表达及其意义

目的 探讨纤溶酶原激活因子(uPA)及纤溶酶原抑制因子-1(PAI-1) mRNA在子宫内膜癌组织表达及意义.方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测35例子宫内膜癌、18例子宫内膜增生和16例正常子宫内膜组织中uPA及PAI-1 mRNA的表达情况.结果 uPA 、PAI-1 mRNA在子宫内膜癌组织中表达水平均显著高于子宫内膜增生组织及正常子宫内膜组织(F=55.22、51.78,q=11.696～12.218,P<0.01);而子宫内膜增生组织中uPA 、PAI-1 mRNA的表达与正常子宫内膜组织比较,差异无统计学意义(q=0.215、0.441,P>0.05).子宫内膜癌组织中uPA、PAI-1 mRNA的表达水平随手术病理分期(F=17.28、21.88,q=9.347～84.716,P<0.01)及组织学分级的增高(F=31.22、27.95,q=6.960～10.931,P<0. 01)、肌层浸润深度的增加(t=2.885、3.316,P<0.01)及淋巴结的转移显著增高(t=5.177、3.954,P<0.01),与病人病理类型无关(t=0.060、0.115,P>0.05).结论 子宫内膜癌组织uPA及PAI-1 mRNA的高表达与子宫内膜癌发生、发展及浸润转移有一定关系,并且与疾病进展、预后有关.     

纤溶酶原激活剂与抑制剂检测对恶性肿瘤诊断的临床价值

目的：探讨恶性肿瘤患者血液纤溶酶原激活剂与抑制剂检测的临床应用价值。方法：检测185例恶性肿瘤患者血液纤溶酶原激活剂（t—PA）、纤溶酶原抑制剂（PAI-1）活性变化,对检测数据进行统计学分析。结果：不同类型的恶性肿瘤患者与正常对照组t—PA及PAI-1比较差异有统计学意义（P〈0．05）。应用全自动血凝仪底物发光法检测恶性肿瘤患者纤溶活性变化具有敏感性、特异性、准确性高的优点。结论：检测t—PA及PAI-1活性变化,从而判断恶性肿瘤细胞侵润、增殖、转移及出血、血栓形成的原因。     

脑血栓形成患者体外反搏后血浆t－PA，PAI，D－dimer的变化及意义

了解体外反搏治疗对脑血栓患者的疗效及作用机制。用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）和比色分析法分别测定了２０例脑血栓形成患者和１０例非脑血栓形成患者体外反搏前后血浆组织型纤溶酶原激活剂（ｔｉｓｓｕｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ，ｔ－ＰＡ）和纤溶酶原激活剂抑制物（ｐｌａｓｍｉｎｏｇａｃｔｉｖａｔｏｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＰＡＩ）活性及Ｄ－二聚体（Ｄ－ｄｉｍｅｒ）含量的变化。结果：检测到脑血栓形成患者在体外反博（ＥＣＰ）后，血浆ｔ－ＰＡ活性增高伴有Ｄ－ｄｉｍｅｒ含量增加；在非脑血栓形成患者有血浆ｔ－ｐＡ活性增高无Ｄ－ｄｉｍｅｒ含量变化。ＰＡＩ的活性于两组中均无变化。结论：体外反搏治疗后，脑血栓患者血浆中ｔ－ＰＡ水平升高，并可使纤维血块溶解。     

溶栓药APSAC的制备和鉴定

重组链激酶（ｒ－ＳＫ）由工程菌提取液经ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱纯化，比活性达１０５ＩＵ／ｍｇ，十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）显示分子量为７８．０２４７×１０－２４ｋｇ的一条带。人新鲜血浆经Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５凝胶过滤制备纤溶酶原（ｐｌｇ），比活性达２３．７ＩＵ／ｍｇ，活性回收率为１３．６％，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示分子量为１４７．７４８９×１０－２４ｋｇ的一条带。对－茴香酸－对－脒基ｒ－ＳＫ和ｐｌｇ的混合物经苯酯盐酸盐（ＡＰＡＮ）修饰后制备茴香酰纤溶酶原链激酶激活剂复合物（ＡＰＳＡＣ），产物经Ｌ－ｌｙｓｉｎｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示分子量为７８．０２４７×１０－２４ｋｇ和１４７．７４８９×１０－２４ｋｇ两条带，其拟一级水解速率常数为１．２６×１０－４ｓｅｃ－１。体外溶栓实验证明其有溶栓活性。     

EXPRESSION OF TISSUE－TYPE PLASMINOGENACTIVATOR IN SMOOTH MUSCLE CELLS OF INJUREDILIAC ARTERIES IN RABBITS

ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＴＩＳＳＵＥ－ＴＹＰＥＰＬＡＳＭＩＮＯＧＥＮＡＣＴＩＶＡＴＯＲＩＮＳＭＯＯＴＨＭＵＳＣＬＥＣＥＬＬＳＯＦＩＮＪＵＲＥＤＩＬＩＡＣ　ＡＲＴＥＲＩＥＳＩＮＲＡＢＢＩＴＳＭａＸｉａｏｌｉ；（马晓莉），ＨｕａｎｇＷｅｎｙｉｎｇ；（黄文...