用降钙素基因甲基化做白血病恶性克隆增殖的标志

微小残留病的检测是当今白血病研究领域受人关注的问题之一。检测残留病的关键是寻找肿瘤标志。降钙素基因高度甲基化为急性白血病，特别是急性髓细胞白血病的ＭＲＤ提供了一新的基因标志，对研究白血病，骨髓增生异常综合征的发生发展，可能具有较大意义。     

降钙素基因高甲基化与恶性血液病

降钙素基因及其甲基化 降钙素(calcitonin,CT)基因,又叫降钙素/α-降钙素基因相关肽(CT/α-CGRP)基因,定位于染色体11p15,长约39 kb,转译产物为CT和α-CGRP。1989年,Broad等详细分析了CT基因位点,其结构特点如下:①CT基因包含6个外显子,5’端有一个约1.8kb的侧翼区(flanking region);②第1,2,3和4外显子拼接产生CT mRNA,第1,2,3,5和6外显子拼接产生α-CGRP     

以降钙素基因高度甲基化为分子基因标志检测白血病微量残留病

目的:探讨以降钙素基因高度甲基化为白血病克隆的分子基因标志,检测白血病微量残留病,并预测预后的可能性。方法:用限制性内切酶消化 DNA,应用多聚酶链反应(PCR)技术检测29例急性白血病和8例慢性粒细胞白血病急变患者的降钙素基因的甲基化程度。对降钙素基因高度甲基化阳性者,以降钙素基因高度甲基化为白血病克隆的分子基因标志,应用PCR技术定期追踪检测骨髓微量残留病。结果:20例白血病完全缓解后均存在微量残留病。完全缓解后微量残留病持续阳性或转阴后再次出现阳性,提示将发生骨髓复发,能提早2～11个月预示疾病的复发。微量残留病较早转阴并持续长期阴性者可能获得长期生存。结论:以降钙素基因高度甲基化为白血病克隆的分子基因标志,应用PCR 技术能起到监测白血病骨髓微量残留病的作用,为预测白血病的预后开辟了一条新途径。     

恶性血液病降钙素基因高度甲基化的研究

目的 探讨降钙素(CT)基因高度甲基化在恶性血液病中的临床意义。方法 用限制性内切酶(HPaⅡ)消化 DNA,应用多聚酶链反应(PCR)技术检测了73例恶性血液病和对照组6例正常人以及24例非恶性血液病的 CT 基因的甲基化程度。结果 85.7%(12/14)急性淋巴细胞白血病(ALL)、60%(9/15)急性非淋巴细胞白血痛(ANLL)、80%(8/10)慢性粒细胞白血病(CML)、33.3%(5/15)淋巴瘤、2例(2/5)骨髓增生异常综合征(MDS)、1例(1/2)恶性组织细胞病(MH)、1例(1/3)慢性淋巴细胞白血病(CLL)和1例(1/9)多发性骨髓瘤(MM)的病人出现 CT基因高度甲基化阳性。而对照组6例正常人和24例非恶性血液病无1例阳性。结论 CT 基因高度甲基化可作为恶性血液病恶性克隆增殖的分子基因标志,为恶性血液病的诊断、微小残留病的监测及预示疾病的发展开辟了一条新途径。     

慢性粒细胞白血病降钙素基因甲基化的研究

慢性粒细胞白血病降钙素基因甲基化的研究王顺清洪文德彭爱华罗绍凯戴木水戴丽君慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）是起源于多能干细胞的肿瘤性疾病，其急变发生的机制不清楚。近来有人报道人类降钙素基因（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎｇｅｎｅ，ＣＴ基因）的高度甲基化与不少肿瘤性疾...     

PCR检测恶性血液病降钙素基因高度甲基化

以甲基化敏感酶（ＨｐａⅡ）消化ＤＮＡ，应用ＰＣＲ扩增方法敏感地检测了７４例恶性血液病病人降钙素（ＣＴ）基因的甲基化程度，发现７０％（７／１０）ＡＬＬ，７２．７％（１６／２２）ＡＮＬＬ，５２％（１２／２３）ＣＭＬ，８０％（８／１０）ＭＤＳ，３例（３／３）恶性淋巴瘤（ＭＴ）和１例（１／１）恶性组织细胞增生症（ＭＨ）病人出现ＣＴ基因高度甲基化阳性。结果表明，ＣＴ基因高度甲基化可作为恶性血液病恶性克隆增殖     

降钙素基因甲基化对白血病前期基因诊断的研究

目的：探讨降钙素（ＣＴ）基因甲基化对白血病前期基因诊断的价值。方法：利用多聚酶链反应（ＰＣＲ），扩增ＣＴ基因５’端第４个甲基化位点附近的ＤＮＡ序列，所有样本ＤＮＡ在做ＰＣＲ前用过量的限制性内切酶ＨＰａⅡ消化。检测２１例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）及１２例再障患者，细胞系ＨＬ－６０作阳性对照，５例正常人骨髓作正常对照组。结果：再障组与正常对照组ＣＴ基因处于正常甲基化状态。２１例ＭＤＳ中１６例ＣＴ基因高度甲基化。３例ＣＴ基因高度甲基化的ＭＤＳ转化成ＡＭＬ。ＣＴ基因高度甲基化与原始细胞计数无相关性（ｒ＝００４２）。结论：ＣＴ基因高度甲基化可作为ＭＤＳ基因诊断的一个指标，为探知ＭＤＳ的发病机理以及与白血病的关系提供了有价值的诊断方法。     

降钙素基因甲基化对白血病前期基因诊断的研究

探讨降钙素基因甲基化对白血病基因诊断的价值。方法：利用多聚酶链反应，扩增ＣＴ基因５‘端第４个甲基化位点的ＤＮＡ的序列，的有样本ＤＮＡ在做ＰＣＲ前用过量的这内切酶ＨＰａⅡ消化。检测２１例骨髓增生异常综合征及１２例再障患者，细胞系ＨＬ－６０作阳性对照，５例正常人骨髓作正常对照组。     

HpaⅡ—PCR检测急性白血病降钙素基因高度甲基化

应用聚合酶链反应(PCR)结合HpaⅡ限制性内切酶消化法(HpaⅡ—PCR)检测78例急性白血病(AL)患者降钙素(CT)基因的甲基化快态。病例组待检细胞DNA经 HpaⅡ消化后,再用两对CT基因特异性引物作 PCR扩增,分别产生长度为 566 bp和1.4 kb特异片段。急性淋巴细胞白血病阳性率 68.8％(33/48),急性非淋巴细胞白血病73.3％(22/30),敏感性达10~(-3)。证明CT基因5’高度甲基化是白血病细胞克隆的特异标志。本方法对恶性血液病的诊断治疗及其微小残留病(MRD)的检测都具有重要意义。     

HpaⅡ—PCR检测急性白血病降钙素基因高度甲基化

应用聚合酶链反应结合ＨｐａⅡ限制性内切酶消化法检测７８例急性白血病患者降下素基因的甲基化状态。病例组待检细胞ＤＮＡ经ＨｐａⅡ消化后，再用两对ＣＴ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增，分别产生长度为５６６ｂｐ和１．４ｋｂ特异片段。     

用多聚酶链反应分析降钙素基因的甲基化检测白血病和骨髓增生异常综合征

用多聚酶链反应分析降钙素基因的甲基化检测白血病和骨髓增生异常综合征陈淅泠，朱平，刘福森，张欣欣，张燕玲，史国利，张杰，江继发，陈文杰最近的研究发现，异常的ＤＮＡ甲基化类型与肿瘤有关，尤其降钙素（ＣａｌｃｉｔｏｎｉｎＣＴ）基因，在许多肿瘤中出现甲基化状...     

HpaⅡ—PCR检测小儿急性白血病降钙素基因高度甲基化

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合ＨｐａⅡ限制性内切酶消化法（ＨｐａⅡ－ＰＣＲ）检测５８例急性白血病（ＡＬ）患儿降钙素（ＣＴ）基因的甲基化状态。病例组待检细胞ＤＮＡ经ＨｐａⅡ消化后，再用两对ＣＴ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增，分别产生长度为５６６ｂｐ和１．４ｋｂ特异片段。急性淋巴细胞白血病阳性率７１．４％（２５／３５），急性非淋巴细胞白血病７８．２％（１８／２３）。敏感性达１０－３。证明ＣＴ基因５′高度甲基化是白血病细胞克隆的特异标志。本课题受卫生部、四川省人民医院出国人员基金资助     

白血病等恶性血液病中p15基因甲基化的检测及临床意义

p15基因位于染色体 9p2 1,是一种肿瘤抑制基因 ,其编码产物p15蛋白特异地抑制细胞周期素依赖激酶 4 6 (CDK4 6 ) ,使细胞不能通过G1 期和S期间的监测点 ,从而停留在G1 期。血液系统恶性肿瘤有高频率的p15基因失活[1 ] ,研究发现 5′启动子及转录启始区域内的CpG岛的异常甲基化是p15基因的主要失活方式[2 ] 。Herman等[3] 研究出甲基化特异性聚合酶链反应 (MSP) ,为基因CpG岛甲基化研究提供了有效的方法。对象和方法1　研究对象　急性白血病患者共 4 0例 ,男 2 2例 ,女 18例 ,年龄 14～ 76岁 ,均符合FAB诊断和分型标准 ;其中初治或…     

骨髓增生异常综合征降钙素基因甲基化的定量研究

目的：探讨降钙素（ＣＴ）基因高甲基化能否作为骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）向白血病转化的分子标志。方法：采用设有内、外参照的多聚酶链反应（ＰＣＲ），结合限制性内切酶和激光扫描技术，检测２７例ＭＤＳ和６例由ＭＤＳ转化的急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者骨髓细胞的ＣＴ基因５′端甲基化率（ＣＴＭＲ）。结果：ＭＤＳ患者ＣＴＭＲ为３３．６５％±２３．３７％，显著高于对照组（８．０１％±４．２５％，Ｐ＜０．００１），其中ＲＡＥＢｔ组显著高于对照组和ＲＡ组，已随访３～１０年的ＲＡ患者５例均在正常范围，且无白血病转化。９例ＲＡＥＢｔ的ＣＴＭＲ均＞３０％，随访８例中７例于２个月内转化为ＡＭＬ。结论：ＣＴＭＲ对早期预测ＭＤＳ向白血病转化可能是一个有用的指标。     

用于检测残留白血病细胞的基因标志

用于检测残留白血病细胞的基因标志四川省卫生管理干部学院（成都６１００４１）陶元鋆残留白血病细胞或称白血病微小残留病（ＭＲＤ），是指白血病经化疗或骨髓移植后达完全缓解（ＣＲ），骨髓中原始细胞已≤５％，但仍在体内残留的用传统方法检测不到的微量白血病细胞（...     

用多种特异性基因标志跟踪检测儿童微量残留白血病的研究

用多聚酶链反应技术，以Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ、ＴＣＲδ、ＩｇＨ基因的Ｖ－（Ｄ）－Ｊ结合部Ｎ顺序三种克隆特异基因标志；ＳＩＬ－ＴＡＬ－１、ＨＲＸ基因相关的融合基因和ｂｃｒ／ａｂ１融合基因作为肿瘤特异标志，对２３例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）患儿完全缓解后的微量残留病（ＭＲＤ）作系统的跟踪检测。结果表明，所有小儿ＡＬＬ缓解后均存在ＭＲＤ。６个月内复查的１２例ＡＬＬ中６例（５０％）在缓解６个月内ＭＲＤ测定阴性，１８例（７８．３％）在１２个月内、１９例（８２．６％）在２４个月内ＭＲＤ测定阴性。若持续ＭＲＤ检测阳性或由阴性转阳性则提示将发生骨髓复发。检测的灵敏度是１０－２～１０－６。提示白血病ＭＲＤ的跟踪检测有重要的临床意义。     

PCR检测骨髓增生异常综合征降钙素基因的高度甲基化

ＰＣＲ检测骨髓增生异常综合征降钙素基因的高度甲基化禹华玮刘祥荣谭齐贤乔宏降钙素（ＣＴ）基因位于人类１１号染色体短臂１１ｐ１５。约９０％的非霍奇金Ｔ和Ｂ细胞淋巴瘤和９５％的急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）的肿瘤细胞，其ＣＴ基因５′端ＣＣＧＧ位点高度甲基...     

以T细胞受体γ基因重排为标志分析淋巴瘤和白血病的克隆性

为确定如何通过基因特征来判断恶性肿瘤的克隆性，采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）、限制性酶谱分析、单链构象多态性（ＳＳＣＰ）检测、异源双链形成实验和序列测定等方法分析了有Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γＩ组基因重排的７３例淋巴瘤和白血病等疾病的等位基因特征。用ＰＣＲ获得ＴＣＲγ重排的Ｖ－Ｊ区基因片段后，首先用限制性酶谱分析，发现至少有３４％的患者存在ＴＣＲγ双等位基因重排，急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）双等位基因重排达５４％。提出只有发现两个以上重排的等位基因片段，才能肯定体内存在两个不同的恶性克隆。建立异源双链分析多个等位基因的方法用以弥补限制性酶谱分析存在的缺陷。应用这个方法除了证实限制性酶谱发现的双等位基因重排外，还发现２例ＡＬＬ和１例骨髓增生异常综合征患者存在寡克隆性；１例淋巴瘤化疗１年后瘤细胞出现了克隆演化。此方法可迅速确定ＴＣＲγ重排基因的单克隆、寡克隆和多克隆性。     

甲基化特异性微阵列法定量检测恶性血液病患者p16基因甲基化

DNA甲基化是细胞的一种表观遗传现象,也是一种重要的影响基因表达的机制.当DNA异常甲基化时会导致癌基因的激活和抑癌基因的沉默,促使肿瘤的发生[1].     

慢性粒细胞白血病患者死亡相关蛋白激酶基因甲基化

死亡相关蛋白激酶(DAPK)是一种新发现的抑癌基因,编码蛋白为钙调蛋白依赖的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶[1].DAPK是一种正性细胞凋亡调节因子,通过多种途径诱导肿瘤细胞凋亡.动物实验结果表明DAPK能够在肿瘤发育的早期阶段抑制细胞转化、并且能够抑制晚期转移事件[1].此外,对造血系统肿瘤的研究揭示伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、急性髓系白血病、骨髓增生异常综合征、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤存在着较高频率的DAPK基因启动子甲基化[2-3].目前对慢性粒细胞白血病(CML)的相关研究甚少,我们应用甲基化特异性PCR(MSP)对CML患者DAPK基因启动子甲基化状况进行了检测,现将结果报道如下.