藏药裸茎金腰主要化学成分抑菌活性研究

裸茎金腰为虎儿草科金腰属植物裸茎金腰(Chrysosple-nium nudicauleBunge)全草,藏名亚吉玛。据《晶珠本草》记载:亚吉玛味苦性凉,清胆热,祛胆病;生于高山至雪山碎石隙,叶似金色靠背图案,黄绿带灰,圆形,层叠如莲座。性味功用:苦寒;清热解毒,治胆病引起的发烧头痛、胆囊疾患,急性黄疸型肝炎、急性肝坏死等症[1]。分布于青海、新疆、甘肃、西藏东部和云南西北部,主产于青海海北、海南、黄南、玉树等州。为藏药中常用上品,在藏区广泛使用。全草入药。其90%乙醇提取物对体外培养的肿瘤细胞抑制率为75%[2]。该药主要所含成分为黄酮醇类化合物(RP…     

HPLC-ELSD测定赖氨肌醇维生素B12口服液中肌醇含量

 目的建立简便、快速的HPLC-ELSD测定复方制剂中肌醇含量。方法采用Kromasil NH₂色谱柱,流动相为甲醇-水(60∶40),流速0.8 mL·min^-1,柱温室温。结果肌醇在0.157～2.51g·L_-1内线性关系良好(r=0.999 6),最低检测限为39.3 mg·L^-1,平均回收率99%,RSD为1.1%。在该条件下,样品中辅料及其他成分不干扰肌醇测定。结论本方法简便、快速、灵敏,为肌醇的质量控制提供了一种新的可靠分析手段。     

HPLC—ELSD法测定补中益气膏中黄芪甲苷的含量

补中益气膏,功能补中益气,升阳举陷。用于脾胃虚弱,中气下陷,体倦乏力,食后腹胀,久泻,脱肛,子宫脱垂。黄芪在处方中为君药,用量最大,其有效成分为黄芪甲苷,具有较好的水溶性,而本品为水提工艺。因此拟建立本品的黄芪甲苷含量测定方法。通过方法学研究,HPLC-ELSD法测定本品中黄芪甲苷的含量,具有准确度高、重现性好、专属性强、快捷简便等特点,可用于控制本品的内在质量。     

HPLC法测定强肝益肾颗粒中黄芪甲苷的含量

目的建立强肝益肾颗粒中黄芪甲苷的HPLC测定方法。方法采用C18柱,温度40℃,甲醇-水(75:25)为流动相;流速1mL/min;蒸发光散射检测器检测,漂移管:108℃;气体流速:2.0L/min;外标两点法定量。结果黄芪甲苷含量测定线性范围为0.12⁴.53μg(r=0.998 0),平均回收率99.88%,RSD为0.44%(n=5)。结论高效液相色谱法专属性、灵敏度、重现性好,可用于该制剂的质量控制。     

HPLC-ELSD法测定绞股蓝中人参皂苷Rb1的含量

目的:建立HPLC-ELSD法测定绞股蓝原药材中人参皂苷Rb1的含量。方法:使用Agilent ZOBAX SB-C18(3.0 mm×250 mm,5μm)色谱柱,2%醋酸8%异丙醇水溶液为流动相A,以乙腈为流动相B,ELSD检测器;流速:0.5 m l/m in,柱温:20℃,理论塔板数按人参皂苷Rb1峰计算应不低于5000。结果:人参皂苷Rb1在1.032μg~5.320μg范围内呈线性关系,r=0.99983,平均回收率为98.5%,RSD为1.61%。结论:本方法简便,重复性好,可用于建立绞股蓝原药材质量标准。     

HPLC-ELSD法测定银杏叶软胶囊中萜类内酯的含量

目的:测定银杏叶软胶囊中萜类内酯的含量.方法:采用高效液相色谱法蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定银杏叶软胶囊中萜类内酯的含量.色谱条件为:汉邦Lichrosper C18柱,4.6mm×150mm;正丙醇-四氢呋喃-水(1:15:84)为流动相;蒸发光散射检测器检测参数:漂移管温度115℃;氮气流速3.5L·min-1.结果:该方法简便易行,银杏叶软胶囊中基质对萜类内酯的测定无干扰,线形关系良好;萜类内酯的重现性试验RSD为1.04%;平均加样回收率为97.1%.结论:本方法可作为银杏叶软胶囊中萜类内酯成分质量控制的一种有效方法.     

基于β2AR/β-arrestin2/NF-κB信号通路的清肠化湿颗粒防治溃疡性结肠炎的作用机制

目的:观察清肠化湿颗粒对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠及人结肠癌上皮细胞株HT-29炎症模型β_2肾上腺素受体(β_2AR)/β-抑制蛋白2(β-arrestin2)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的干预作用。方法:取8只大鼠作为空白组,其余大鼠采用三硝基苯磺酸(trinitro-benzene-sulfonic acid,TNBS)灌肠法复制UC大鼠模型;待模型建立成功后,随机分为模型组,柳氮磺胺吡啶(SASP,1.0 g·kg~(-1))组,清肠化湿颗粒低、中、高剂量(2.8,5.5,11.0 g·kg~(-1))组,每组8只,灌胃给药10 d,每日1次;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定UC大鼠结肠组织中巨噬细胞移动抑制因子(MIF),基质金属蛋白酶-1(MMP-1),MMP-2,MMP-9,胰岛素样生长因子-1(IGF-1),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),髓过氧化物酶(MPO),一氧化氮(NO),一氧化氮合成酶(iNOS),谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px);免疫组化法检测模型大鼠结肠黏膜β_2AR,β-arrestin2,NF-κB定位表达;采用肿瘤坏死因子与脂多糖诱导HT-29细胞炎症模型;噻唑蓝(MTT)比色法检测清肠化湿颗粒对细胞增殖的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中β_2AR,β-arrestin2,NF-κB蛋白表达量。结果:造模后,模型组大鼠较空白组大鼠结肠黏膜的结肠损伤分数明显升高;与模型组比较,3个剂量的清肠化湿颗粒给药组结肠黏膜损伤明显下降(P0.05,P0.01),大鼠结肠组织IGF-1,SOD,GSH-Px含量与β_2AR,β-arrestin2表达明显上升,MIF,MMP-2,MMP-9,MDA,MPO,NO,iNOS含量及NF-κB表达明显下降(P0.05,P0.01)。结论:清肠化湿颗粒可缓解UC氧化应激反应及肠道炎症,其作用与激活β_2AR/β-arrestin2/NF-κB信号通路有关。     

高效液相色谱-蒸发光散射法测定阿米卡星滴眼液中阿米卡星的含量

目的建立高效液相色谱法测定阿米卡星滴眼液中阿米卡星的含量。方法以岛津VP-ODS C18(150mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,以甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至5)(5∶95)为流动相,检测波长为340 nm,流速为0.8 mL/min。结果阿米卡星在0.206 2～1.855 8μg范围内具有良好的线性关系(r=0.999 6),平均加样回收率为98.94%,RSD为1.51%。结论本方法准确、灵敏、重现性好,可用于阿米卡星滴眼液的含量测定。     

高效液相色谱-蒸发光散射法测定活血溶栓丸中黄芪甲苷的含量

目的:建立活血溶栓丸中黄芪甲苷的高效液相色谱法。方法:采用C18柱,温度40℃,乙腈-水(32:68)为流动相;流速1ml/min;蒸发光散射检测器检测;外标2点法定量。结果:黄芪甲苷进样量在0.402~15.08μg范围内呈现良好的线性关系(r=0.9980),平均回收率为99.43%,RSD为0.47%。结论:高效液相色谱法专属、灵敏、重现性好,可用于该制剂的质量控制。     

石菖蒲鲜、干药材及其不同部位中挥发油,α-细辛醚和β-细辛醚的含量比较

目的:比较石菖蒲鲜、干药材及其根茎和叶中挥发油,α-细辛醚和β-细辛醚的含量,为该药材的加工和用药方式选样提供实验依据。方法:采用水蒸气蒸馏法提取石菖蒲挥发油,通过超声提取法提取α-细辛醚和β-细辛醚,利用HPLC测定石菖蒲鲜品和干品根茎、叶中α-细辛醚和β-细辛醚的含量,流动相水-甲醇(65∶35),检测波长257 nm。根据样品处理条件折算出α-细辛醚和β-细辛醚的质量分数并进行比较。结果:石菖蒲经烘干处理后挥发油含量降低,根茎中挥发油的含量较叶中的含量高。β-细辛醚在鲜药材和干药材根茎中的质量分数分别为2.81%和1.70%,在鲜药材和干药材叶中质量分数分别为0.90%和0.75%。α-细辛醚在鲜药材和干药材根茎中的质量分数分别为0.03%和0.02%,在鲜药材和干药材叶中的质量分数分别为0.05%和0.04%。结论:石菖蒲干、鲜药材中活性成分的差异较小,均适合药用;石菖蒲叶中的活性成分含量不可忽视,考虑到叶在全草中占较大的比重,建议石菖蒲可以全草入药。     

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠β2AR/β-arrestin2信号通路的影响

目的:探讨二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型β_2肾上腺素受体(β_2AR)/β-抑制蛋白2(β-arrestin2)信号通路的影响,以及血清、肺组织匀浆液和支气管肺泡灌洗液中IL-17表达的影响。方法:将70只SD大鼠随机分为7组,即正常组、模型组、二陈汤加味高、中、低剂量(40,20,10 g·kg~(-1)·d~(-1))组、消咳喘组(5 g·kg~(-1)·d~(-1))、二陈汤组(5 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组10只。以烟熏与脂多糖(LPS)气管滴注并用的方法制备大鼠COPD大鼠模型。造模成功后,治疗组分别灌胃给药,正常及模型组则灌等量的生理盐水。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清、肺组织匀浆液和支气管肺泡灌洗液中白细胞介素-17(IL-17)的含量;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测β_2AR的mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织β_2AR的蛋白表达;采用免疫组化检测肺组织β_2AR,β-arrestin2的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组肺组织中β_2AR的蛋白表达显著降低(P0.01);与模型组比较,肺组织中β_2AR的蛋白表达显著增加(P0.01),其中二陈汤加味中剂量组与其他各组均有差异(P0.05)。与正常组比较,模型组β_2AR mRNA表达显著降低(P0.01);与模型组比较,二陈汤加味高、中、低剂量组、消咳喘组、二陈汤组中β_2AR的mRNA表达均显著升高(P0.01)。其中二陈汤加味中剂量组与其他各给药组比较升高显著(P0.01)。与正常组比较,模型组血清中IL-17含量显著升高(P0.01),与模型组比较,各给药组血清中IL-17的含量均受到一定程度的抑制,其中二陈汤加味中剂量组受到的抑制程度尤为明显(P0.05)。结论:二陈汤加味可能通过升高β_2AR,β-arrestin2的表达,并以此降低IL-17的含量,来对抗COPD大鼠的炎症反应,并改善肺功能。     

斑蝥素β-环糊精包合物的研究

 目的制备斑蝥素β-环糊精包合物,以达到提高药物水溶性和减少黏膜刺激性的目的。方法采用饱和水溶液法制备包合物,采用显微镜、TLC和DSC对包合物进行验证。测定包合前后斑蝥素的水中溶解度。考察包合前后斑蝥素对大鼠胃黏膜的刺激性。结果制备了斑蝥素β-环糊精包合物。斑蝥素的溶解度较包合前提高了11.8倍。包合物未见黏膜刺激。结论斑蝥素制成包合物可以达到提高药物水溶性和减少药物黏膜刺激性的目的。     

杭白菊挥发油中β-榄香烯、樟脑及龙脑含量的测定

 目的测定不同产地、不同等级、不同炮制方法杭白菊挥发油中代表性成分β榄香烯、樟脑、龙脑的含量。方法用水蒸汽蒸馏法提取挥发油,采用毛细管气相色谱法,以正辛醇作为樟脑、龙脑的内标,正十四烷作为β榄香烯的内标测定上述3种成分的含量。结果不同采摘时间的杭白菊β榄香烯含量无明显变化;不同产地、不同等级杭白菊β榄香烯含量有所差异。樟脑及龙脑含量低,变化无规律。结论产地、炮制工艺、等级均可以影响杭白菊挥发油中3成分含量。     

高表达β1肾上腺素受体细胞膜色谱法靶向筛选夏天无中活性成分

目的:从夏天无中筛选与高表达β1肾上腺素受体(β1-AR)作用的活性成分,并考察其对β1-AR的抑制作用。方法:建立β1-AR细胞膜色谱与UPLC/MS联用分析方法筛选鉴别夏天无中的活性成分;用美托洛尔(10μmol·L-1),药根碱(1,5μmol·L-1)处理β1-AR/CHO-S 24 h,换异丙肾上腺素(50μmol·L-1)损伤细胞10 h后,ELISA法测定活性成分对β1-AR下游因子c AMP,PKA水平的影响,评价其对β1-AR的抑制作用。结果:药根碱是夏天无中作用于β1-AR的活性化合物;细胞实验结果表明,与ISO组相比,药根碱和美托洛尔对c AMP,PKA水平均有下调作用(P0.01)。结论:药根碱是夏天无中具有β1-AR抑制作用的活性化合物;建立的β1-AR/CMC-offline-HPLC/MS分析方法可快速有效筛选出作用靶点明确的活性成分,且筛选结果与生物效应相一致。     

裸茎金腰逆转ANIT致小鼠IC型肝损伤有效部位的筛选探究

目的 筛选特色裸茎金腰Chrysosplenium nudicaule Bunge(亚吉玛)逆转ANIT致小鼠肝内胆汁淤积(IC)型肝损伤的有效部位.方法 灌胃ANIT的橄榄油溶液诱导小鼠急性IC,测定小鼠血清中生化指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸(TBA)、直接胆红素(D...     

HPLC法测定藏药六味能消散中没食子酸的含量

目的：建立HPLC法对藏药六味能消散中没食子酸进行含量测定。方法：以ThermoC18色谱柱为分析柱：乙腈-水-冰醋酸（5：95：0．1）流动相为流动相,检测波长为272nm,流速为1．0mL·min-1。结果：阴性对照无干扰,没食子酸在0．058～0．58Ixg范围内线性关糸良好（r=0．9999）,平均加样回收率为98．1％,RSD=0．67％（n=6）．结论：本法简便、快速、结果准确可靠、专属性强、灵敏度高,可用于藏药六味能消散的质量控制。     

HPLC-ELSD测定黄姜中黄姜素A的含量

黄姜（Dioscorea Zingiberensis C．H．Wright）是薯蓣科薯蓣属（Dioscrea．L）多年生草本植物，为我国特有种。黄姜以根状茎入药，具有广泛的药理活性，中医学认为，其性味甘、苦、凉，具有祛湿、清热解毒之功效，民间用于治疗皮肤急性化脓性感染、软组织损伤、蜂蜇、虫咬及各种外科炎症。其主要成分皂苷具有镇咳、平喘、降低胆固醇、预防动脉硬化、     

RP-HPLC同时测定William′s E培养基中地塞米松、睾酮和6β羟基睾酮的含量

 目的建立同时测定William′sE培养基中地塞米松、睾酮和6β羟基睾酮含量的RP-HPLC检测方法,并用该方法研究地塞米松对大鼠原代肝细胞CYP3A的诱导作用。方法采用Agilent1100HPLC系统,Phenomenex色谱柱,以乙腈和磷酸溶液组成的流动相梯度洗脱分离,以酮康唑为内标,流速1.00mL·min^-1,检测波长245nm,柱温20℃。结果地塞米松、睾酮和6β羟基睾酮分别在53～19291,161～29318和58～21091μg·L^-1内呈线性关系;它们的日间和日内精密度均低于15%;地塞米松、睾酮和6β羟基睾酮的最小定量限分别为53.00,161.00和58.00μg·L^-1。结论该方法简便、准确、可靠,可用于地塞米松作用于大鼠原代肝细胞体系后,地塞米松、CYP3A底物睾酮及其代谢产物6β羟基睾酮在William′sE培养基中的浓度测定。     

HPLC 同时测定林蛙油中α-亚麻酸、亚油酸和油酸含量

目的: 建立同时测定林蛙油中α-亚麻酸、亚油酸和油酸含量的HPLC方法。 方法: Alltima C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm), 以乙腈-0.1%磷酸(80:20)为流动相,流速1 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长203 nm。 结果: α-亚麻酸在4.76~152.16 mg·L^-1 (r=1),亚油酸在15.36~491.59 mg·L^-1 (r=0.999 8),油酸在47.28~1512.80 mg·L^-1 (r =0.999 9) 呈良好的线性关系;平均回收率α-亚麻酸为95.8%,RSD 1.79% (n=6);亚油酸为98.6%,RSD 1.32% (n=6);油酸为99.3%,RSD 1.59% (n=6)。 结论: 该法操作简便,结果准确,专属性强,重复性好,可作为林蛙油质量控制的参考。     

下瘀血汤通过Wnt/β-catenin和TGF-β1/Smad信号串联干预肾纤维化大鼠的机制

目的 观察下瘀血汤对腺嘌呤致肾纤维化大鼠的保护作用及其对Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）/Smad信号通路的影响。方法 50只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组,氯沙坦组（9 mg·kg^-1）,下瘀血汤低、高剂量组（2.43,4.86 g·kg^-1）,采用腺嘌呤灌胃（250 mg·kg^-1）诱导肾纤维化大鼠模型,造模连续24 d,随后给予相应药物,给药连续30 d。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血肌酐（SCr）和尿素氮（BUN）水平;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肾脏组织病理改变情况;马松（Masson）染色观察大鼠肾脏胶原沉积情况;免疫组化法（IHC）和蛋白免疫印迹法（Western blot）测定大鼠肾脏Wnt5a,Wnt5b,β-catenin,TGF-β₁,Smad4,Smad7蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠SCr和BUN水平显著升高（P<0.01）,给予下瘀血汤干预后SCr和BUN水平显著降低（P<0.01）;HE和Masson染色结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肾间质损伤严重且肾间质胶原大量沉积,给予下瘀血汤干预后肾间质损伤减轻,胶原物质沉积减少;IHC和Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肾脏Wnt5a,β-catenin,TGF-β₁表达上调（P<0.01）,Wnt5b,Smad7表达下调（P<0.01）,给予下瘀血汤干预后Wnt5a,β-catenin,TGF-β₁表达下调（P<0.01）,Wnt5b,Smad7表达上调（P<0.01）,且下瘀血汤低、高剂量组间差异无统计学意义。结论 下瘀血汤对腺嘌呤致肾纤维化大鼠具有保护作用,其机制与抑制Wnt/β-catenin和TGF-β₁/Smad信号通路串联相关。