慢性乙型肝炎患者PBMC和IFN—γ和IL—10生成量及其与若干临床指标的关系

本文通过检测慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)培养上清中IFN-γ、IL-10含量,以探讨病毒定量、肝脏炎症病变程度及是否存在HBeAg等因素与细胞因子生成量之间的关系.取CHB患者和健康对照者PBMC,分别加人特异性刺激剂rHBcAg和非特异刺激剂PHA,培养72 h后收集上清,采用双抗体夹心法检测IL-10和IFN-γ.结果表明rHBeAg 刺激CHB患者生成的IFN-γ与正常对照组无明显差异,IL-10较正常对照组高(P＜0.01).病毒量明显影响IFN-γ和IL-10的产主,IL-10的生成在高病毒量组较高,而IFN-γ与此相反.按肝脏炎症活动程度分组发现,G4、G3组IL-10明显低于G1、G2组,但rHBcAg刺激产生的IFN-γ在各组间无明显差异.HBeAg(+)组较HBeAg(-)组生成的IL-10高,而IFN-γ低.高病毒量、HBeAg抑制CHB患者IFN-γ生成,而IL-10的生成相对增加,肝功能损害程度与IL-10明显负相关     

慢性乙型肝炎患者PBMC的IFN-γ和IL-10生成量及其与若干临床指标的关系

本文通过检测慢性乙型肝炎 (CHB )患者外周血单个核细胞 (PBMC )培养上清中IFN γ、IL 10含量 ,以探讨病毒定量、肝脏炎症病变程度及是否存在HBeAg等因素与细胞因子生成量之间的关系。取CHB患者和健康对照者PBMC ,分别加入特异性刺激剂rHBcAg和非特异刺激剂PHA ,培养 72h后收集上清 ,采用双抗体夹心法检测IL 10和IFN γ。结果表明rHBcAg刺激CHB患者生成的IFN γ与正常对照组无明显差异 ,IL 10较正常对照组高 (P <0 0 1)。病毒量明显影响IFN γ和IL 10的产生 ,IL 10的生成在高病毒量组较高 ,而IFN γ与此相反。按肝脏炎症活动程度分组发现 ,G4、G3组IL 10明显低于G1、G2组 ,但rHBcAg刺激产生的IFN γ在各组间无明显差异。HBeAg ( + )组较HBeAg ( )组生成的IL 10高 ,而IFN γ低。高病毒量、HBeAg抑制CHB患者IFN γ生成 ,而IL 10的生成相对增加 ,肝功能损害程度与IL 10明显负相关。     

系统性红斑狼疮患者的Th2偏移不受CD40/CD154影响

目的 探讨系统性红斑狼疮(SEE)患者外周血Th极化状况的改变以及其受CD40/CD154和地塞米松(Dex)的影响.方法 使用ELISA法检测SEE患者和对照组血浆IFN-γ和IL-10水平,分离、培养外周血单个核细胞(PBMC),应用CD40 mAb和Dex进行干预,使用ELISA法检测培养液上清IFN-γ和IL-10水平.结果 SLE患者血浆IFN-γ水平明显低于对照组(P<0.01,P<0.05),活动期组血浆IL-10水平明显高于缓解期组和对照组(均P<0.01);CD40 mAb对PBMC培养液上清IFN-γ和IL-10水平无影响(均P>0.05);Dex可使SLE患者PBMC培养液上清IFN-γ水平升高(P<0.05,P<0.01),Dex可以明显降低SEE患者和对照组PBMC培养液上清IL-10水平(均P<0.05).结论 SEE患者血浆IFN-γ水平降低、IL-10水平增高,存在Th2偏移;此种改变不受CD40/CD154影响但能被Dex抑制.     

卡介苗多糖核酸对过敏性支气管哮喘外周血单个核细胞TH1/TH2反应的作用

目的观察卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)对支气管哮喘患者外周血淋巴细胞TH1/TH2反应的作用,并与结核菌素纯蛋白衍生物(TB-PPD)进行比较. 方法缓解期过敏性支气管哮喘患者16例,对照组健康成人13例,分离外周血单个核细胞(PBMC),分别加入不同浓度的BCG-PSN(1、10、100、1000 μg/ml)、TB-PPD(10 μg/ml)、尘螨抗原(DerP, 10 μg/ml)体外培养4 d,不加刺激剂者为阴性对照.收集培养上清,ELISA检测IFN-γ、IL-5浓度的变化. 结果 PSN(1～100 μg/ml)刺激正常人PBMC分泌IFN-γ水平均高于哮喘患者(P＜0.05).BCG-PSN(10 μg/ml)可以刺激哮喘患者PBMC分泌IFN-γ(358.7 pg/ml,范围0～2433.0 pg/ml),但显著低于同等浓度的TB-PPD刺激作用(13 036 pg/ml,范围600.5～35 100.0 pg/ml,P＜0.01).PSN刺激PBMC分泌IFN-γ呈浓度依赖性,当浓度达到100 μg/ml时,与低浓度相比刺激作用显著增强(P＜0.01),与TB-PPD的刺激作用类似.DerP刺激哮喘患者PBMC分泌IL-5水平显著高于正常人(P＜0.05).BCG-PSN刺激PBMC分泌IL-5的作用较弱,显著低于TB-PPD和DerP的刺激作用. 结论 BCG-PSN具有一定的TH1刺激作用,但低于TB-PPD的刺激作用,有待对BCG-PSN组分进一步优化以增强疗效.     

卡介苗(BCG)通过诱导IL-12产生和受体表达促进人NK细胞功能

目的:研究卡介苗(BCG)对人自然杀伤细胞(NK)功能的作用及其机制.方法:分离抗结核抗体阴性志愿者外周血PBMC、纯化NK细胞, 分别与BCG、 IL-12、 BCG+IL-12、 BCG+抗IL-12Rβ1 mAb(2B10)培养.利用ELISA方法检测培养上清液IFN-γ、 IL-12p40含量;利用ELISpot方法检测IFN-γ、颗粒酶B产生细胞的频率;利用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定杀伤功能.利用流式细胞术检测NK细胞IL-12Rβ1的表达.结果:BCG呈剂量依赖的方式诱导PBMC产生IFN-γ.在BCG刺激条件下, PBMC颗粒酶B分泌细胞数明显高于不加任何刺激剂组(P<0.05).BCG增强PBMC杀伤活性.BCG不能诱导纯化NK细胞产生IFN-γ, 但与IL-12同时刺激则表现出协同作用.纯化NK细胞经BCG刺激后杀伤活性与未刺激相比差异无统计学意义.BCG呈剂量依赖方式诱导PBMC产生IL-12、并促进NK细胞不同亚群表达IL-12Rβ1.2B10抗体抑制BCG对PBMC产生IFN-γ和分泌颗粒酶B的诱导作用.结论:BCG间接地促进NK细胞的生物学活性, 其部分机制是通过诱导单核细胞产生内源性IL-12、并上调NK细胞表达IL-12R.     

体外阻断CD134对LN患者外周血单个核细胞TH1/TH2细胞因子表达的影响

目的 探讨CD134／CD134L共刺激分子对TH1，TH2细胞因子表达的影响及在狼疮性肾炎（LN）发病机制中的可能作用。方法活动期LN患者10例，分别采取外周静脉血，用密度梯度离心法制备新鲜PBMC，分成6组：（1）对照培养组；（2）单纯刺激组；（3）抗CD134组；（4）抗Ⅱ，4组；（5）rhCD134：Fc组；（6）地塞米松（Dex）组。另选取10例健康体检者作为健康对照组。采用ELISA法分别测定培养液上清中IFN-γ、IL-4、IL-10表达水平。结果（1）在抗CD3ε单抗／rIL-2刺激前，活动期LN患者PBMC培养液上清分泌的IFN-γ、IL-4和IL-10水平都明显高于健康对照组；（2）在抗CD3ε单抗／rIL-2刺激下，活动期LN患者PBMC分泌的IFN-γ，4和IL-10又较刺激前明显增加；（3）抗IL-4单抗、抗CDl34单抗均可使经抗CD3ε单抗／rIL-2刺激的LN患者PBMC分泌IL-4、IL-10水平显著下降，导致IFN-γ水平显著增高，免疫应答朝TH1方向偏离；（4）Dex能显著抑制抗CD3ε单抗／rIL-2刺激的原代培养PBMC中IL-4、IFN-γ的分泌水平，但对IL-10的产生并没有明显的抑制或促进作用；（5）rhCD134：Fc能显著降低抗CD3ε单抗／rIL-2刺激的原代培养PBMC中IFN-γ及IL-4、IL-10的分泌水平，对TH1和TH2细胞因子的产生都有显著抑制作用。结论糖皮质激素的抗炎机制具有多重性，对TH1、TH2细胞因子的作用并不均衡；抗CD134单抗对减轻LN患者PBMC的异常活化有一定作用；CD134-IgG融合蛋白与抗CD134单抗相比，抑制作用更明显，对急性期LN有更好的治疗作用。     

刀豆蛋白A对帕金森患者外周血单个核细胞分泌IL-10和IFN-γ的作用

目的:观察帕金森病(PD)病人外周血单个核细胞(PBMC)经刀豆蛋白A(Co-nA)诱导培养后分泌白介素-10(IL-10)和干扰素-γ(IFN-γ)的能力。方法:23例PD患者分为早中期组(12例)和晚期组(11例),24例健康人群作为对照组,分离各组外周血单个核细胞,并用ConA诱导刺激。采用ELISA分别检测各组培养上清液中IL-10和IFN-γ含量。结果:对照组和早中期组PD患者经ConA诱导培养的PBMC分泌IL-10水平显著高于普通培养(P<0.05);晚期组分泌IL-10水平明显低于对照组和早中期组(P<0.01)。各组PD患者PBMC分泌IFN-γ水平ConA培养比普通培养都有升高,早中期组最高(P<0.01);PD早中期组ConA培养的PBMC分泌IFN-γ水平显著高于对照组和晚期组(P<0.01)。结论:刀豆蛋白对PD患者PBMC分泌IL-10和IFN-γ有促进作用;免疫机制在PD发病和发展中起着重要的作用。     

IL—12对慢性乙型肝炎患者TH2／TH2分化的影响

目的 观察IL-12对慢性乙肝患者TH1/TH2类细胞分化的影响。方法 分离50例慢性乙型肝炎患者PBMC,分别与植物血凝素（PHA,100ug/mL）、HBcAg(1ug/mL）、HBeAg(1ug/mL）单独或联合IL-12（10ng/mL）体外培养48h,ELISA法检测培养上清液 IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平。20例健康人群做对照。结果 IL-12对健康人群PBMC产生TH1/TH2类细胞因子无显著影响,但对慢性乙型肝炎患者则显著增强PBMC产生IFN-γ,且慢性中度患者最为突出。IL-12与HBeAg联合诱导,不但显著增强慢性乙型肝炎患者PBMC产生IL-12和IFN-γ,还抑制IL-4和IL-10的产生。结论 IL-12可增强慢性乙型肝炎患者IFN-γ优势表达,可促进HBeAg诱导的TH2型优势表达向TH1型优势表达转换。     

热灭活白念珠菌通过Dectin-1诱导外周血单个核细胞表达IL-12和IFN-γ

为研究Dectin-1在热灭活白念珠菌刺激外周血单个核细胞(PBMC)免疫应答中的作用。我们用不同浓度昆布多糖(Dectin-1封闭剂)与PBMC共培养1 h后,再用热灭活白念珠菌刺激PBMC 4 d;同时用不同剂量的Dectin-1激活剂酵母聚糖(zymosan)刺激PBMC 4 d,收集培养液上清,经ELISA检测IL-12和IFN-γ水平。结果发现,昆布多糖可以部分抑制热灭活白念珠菌刺激PBMC合成IL-12和IFN-γ的能力,酵母聚糖可以诱导PBMC合成IL-12和IFN-γ。因此,Dectin-1是介导热灭活白念珠菌诱导PBMC产生IL-12和IFN-γ的受体之一。     

新型CpGODN对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

目的:探讨我室自行设计的CpG ODN(CpG BW001)在体外对乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用.方法:CpG BW001刺激人外周血单个核细胞(PBMC)48小时,用VSV病毒保护实验及ELISA法检测培养上清的病毒保护能力及其中的IFN-α含量.将上述CpG BW001刺激人PBMC的上清与HepG2.2.15细胞共孵育12天后收集培养上清,用放射免疫法检测该培养上清液中HBsAg及HBeAg的含量,用点杂交法检测HBV DNA的含量.结果:CpG BW001刺激人PBMC产生以IFN-α为主的抗病毒物质;CpG BW001刺激人PBMC的培养上清作用于HepG2.2.15细胞后,HepG2.2.15细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的含量明显减少,且细胞内HBV DNA的含量也显著降低.结论:CpG BW001能通过刺激细胞产生抗病毒物质如IFN-α等,从而在体外抑制HBsAg和HBeAg的表达及HBV的复制.     

IL-33增强体外培养的外周血单个核细胞细胞因子的分泌以及杀伤功能

目的探讨白细胞介素33(IL-33)是否能在体外增强外周血单个核细胞(PBMC)分泌细胞因子和杀伤功能。方法常规分离培养健康人PBMC,分别经CD3单克隆抗体(m Ab)/CD28mAb/IL-2、CD3mAb/CD28mAb/IL-2/IL-12、CD3mAb/CD28m Ab/IL-2/IL-12/IL-33三种组合刺激培养72 h,收集细胞。经实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞γ干扰素(IFN-γ)、颗粒酶B(granzyme B)mRNA的水平;CCK-8法检测各组细胞对A549人肺腺癌细胞的杀伤活性;采用流式细胞术分析各组细胞IFN-γ、程序性死亡蛋白1(PD-1)的水平。结果各组因子组合刺激的PBMC,形态无明显差异;qRT-PCR检测发现,IL-33刺激组的PBMC中IFN-γ、granzyme B mRNA的水平升高;IL-33刺激组的PBMC对A549的杀伤能力更强;IL-33刺激组的PBMC中CD3+CD8+细胞亚群IFN-γ的水平升高、PD-1的水平降低。结论 IL-33能够在体外增强PBMC的效应功能。     

EB病毒转化B淋巴母细胞在汉滩病毒CTL表位研究中的应用

目的:建立EB病毒转化B淋巴母细胞系(B-LCL),作为抗原提呈细胞(APC)提呈抗原肽,刺激短期培养的特异性T细胞活化并分泌IFN-γ,从而应用于T细胞表位鉴定中.方法:用B95-8细胞培养上清中的EB病毒转化肾综合征出血热(HFRS)患者PBMC,建立HFRS患者的B-LCL,以自身BLCL为APC,加载抗原肽后,刺激短期培养的G9L特异的HFRS患者CD8+ T细胞系,应用ELISPOT测定CD8+ T细胞受到抗原肽刺激后产生IFN-γ的能力.结果:加载过抗原肽G9L或V15R的B-LCL可刺激G9L特异的CD8+ T细胞活化并产生IFN-γ,而与G9L无同源序列的115P则不能刺激G9L特异的CD8+ T细胞活化.结论:B-LCL可作为非专职APC有效地将抗原肽提呈给特异性T细胞.     

慢性乙型肝炎患者细胞毒T细胞内穿孔素的表达与病毒载量的关系

目的 研究慢性乙型肝炎患者细胞毒T细胞内穿孔素(Perforin)、干扰素(IFN-γ)和白细胞介素10(IL-10)表达与病毒消除的关系.方法 对50例慢性乙型肝炎患者外周血进行短期培养后,利用流式细胞术测定CD8~+细胞内Perforin、IFN-γ和IL-10表达,并与30例正常对照进行比较;利用荧光定量PCR检测慢性乙型肝炎患者HBV DNA的载量,分析其与CD8~+细胞内Perforin、IFN-γ和IL-10表达的关系.结果 慢性乙型肝炎组CD8~+T细胞Perforin、IFN-γ和IL-10的表达分别为(5.30 ±2.62)%、(4.05±2.25)%和(0.77 ±0.50)%,明显低于正常对照组(t分别为4.50、4.56、4.20,P均<0.01);26例HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者CD8~+T细胞Pefforin和IFN-γ的表达分别为(4.54 ±1.93)%和(3.32 ±1.59)%,明显低于24例HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者(t分别为2.22、2.54,P均<0.05);慢性乙型肝炎患者CD8~+T细胞内Perforin和IFN-γ表达率与乙肝病毒DNA载量成负相关(r分别为-0.539、-0.340,P<0.01、P<0.05).结论 慢性乙型肝炎患者细胞毒T细胞内Perforin、IFN-γ和IL-10表达减少,可能与慢性乙型肝炎患者病毒长期存在,病程迁延不愈有关.     

慢性乙型肝炎患者血清维生素E水平与肝组织病理的关系研究

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者血清维生素E水平与肝组织病理的关系.方法 选择66例慢性乙型肝炎患者进行肝穿刺病理学检查,健康对照组10例.化学比色法检测血清维生素E表达水平,同时检测HBV DNA、HBeAg及肝功能.结果 与正常对照组相比,慢性乙型肝炎患者血清维生素E水平明显降低(P<0.01);HBeAg阳性组与HBeAg阴性组比较,血清维生素E水平无明显差别(P0.05).CHB患者血清维牛素E水平与肝脏组织炎症呈负相关关系(r=-0.451,P<0.05),而与肝脏组织纤维化程度无明显相关(r=0.02,P0.05).结论 维生素E作为体内重要的抗氧化剂,参与了慢性乙型肝炎的炎症过程.在肝脏炎症过程中,适当补充维生素E,可能有助于缓解病情.     

环磷酰胺和环孢素A对SLE患者外周血Th细胞亚群免疫调节的作用

目的:探讨环磷酰胺(CY)和环孢素A(CsA)对SLE患者外周血Th细胞亚群的免疫调节作用.方法:以10例重度活动的SLE患者和6例正常对照的PBMC为研究对象,将细胞悬液分为空白组、植物血凝素(PHA)刺激组、PHA CY组、PHA CsA组、CY组和CsA组分别给药,体外细胞培养24 h后,利用三色流式细胞术检测CD4 IL-10 T细胞、CD4 IFN-γ T细胞比例和CD8 IL-10 T细胞、CD8 IFN-γ T细胞等比例,同时记录相应细胞的荧光强度.结果:CsA促进静息和活化状态下PBMC培养中表达CD4 IL-10 T细胞比例增加,同时CD4 T细胞表达IL-10荧光强度增强.CY虽然促进SLE PBMC培养中表达CD4 IL-10 T细胞比例增加,但对CD4 T细胞表达IL-10的荧光强度无明显增强.CsA抑制PBMC培养中表达CD8 IL-10 T细胞的比例,同时CD8 T细胞表达IL-10的荧光强度减弱.而CY虽然抑制SLE PBMC培养中表达CD8 IL-10 T细胞的比例,但CD8 T细胞表达IL-10的荧光强度却是减弱的.CsA对活化状态下正常对照和SLE PBMC培养中表达CD4 IFN-γ T细胞比例的抑制作用优于CY,且CY对SLE患者PBMC培养中CD4 T细胞表达IFN-γ荧光强度抑制作用也是减弱的.CsA和CY均可抑制活化状态下,正常对照PBMC和静息状态下SLE PBMC培养中表达CD8 IFN-γ T亚群细胞的比例,且CY的抑制作用优于CsA.但CY对SLE PBMC培养中CD8 T细胞表达IFN-γ荧光强度的增强作用不如CsA.结论:CsA和CY均能使CD4 T细胞受抑,CD8 T细胞上升.但CsA对T细胞活化,炎症相关细胞因子表达启动的反应更为敏感,免疫调节作用更为显著.     

慢性乙肝病毒感染者不同免疫阶段IFN-γ斑点水平及其在低丙氨酸氨基转移酶抗病毒治疗中的作用

目的 探讨ELISPOT(Enzyme-linked immuno-spot assay,酶联免疫斑点检测)技术检测IFN-γ斑点数在评价慢性乙肝感染者免疫状态和指导慢性乙肝患者抗病毒治疗的应用价值.方法 将入选的慢性乙肝感染者(低水平丙氨酸氨基转移酶组17例、免疫耐受组14例、免疫清除组16例)和正常对照组15例研究对象分离PMBC(Peripheral blood mononuclear cell,外周血单个核细胞),用HBsAg刺激物与实验对象的PBMC细胞孵育,采用ELISPOT检测慢性乙肝感染者IFN-γ斑点水平,同时对17例低水平ALT(Manine aminotransferase,丙氨酸氨基转移酶)组行肝穿刺病理检查,分析其IFN-γ斑点水平与肝脏病理炎症分级的相关性;其中9例肝穿病理结果≥G2/S2并接受抗病毒治疗的慢性乙肝感染者3个月后再次采用ELISPOT检测IFN-γ斑点水平.结果 HBsAg刺激PBMC产生IFN-γ斑点水平在各组分别为免疫清除组117 ±53、低ALT组15 ±2、免疫耐受组13 ±2)和正常对照组59±10,除低ALT组与免疫耐受组之间无显著性差异外(P =0.85 ＞0.05),其余均有显著性差异.免疫清除组的慢性乙肝感染者中,HBsAg刺激物的IFN-γ斑点水平与血清ALT有显著相关性(r=0.976,P＜0.05).肝病理穿刺中17例低水平ALT慢性乙肝感染者,其中肝组织病理分期≥G2/S2的共9例,占52.9％;同时其IFN-γ斑点水平与肝脏炎症分级有显著相关性(r=0.630,P=0.009).9例肝穿病理结果≥G2/S2并接受抗病毒治疗的慢性乙肝感染者抗病毒治疗前后IFN-γ斑点水平有统计学差异(P=0.01).结论 慢性乙肝感染者免疫清除组IFN-γ斑点水平最高,低水平ALT的慢性乙肝感染者肝穿刺病理结果提示有很大一部分达到抗病毒指征,且其IFN-γ斑点水平与肝脏炎症程度呈正相关,通过ELISPOT检测IFN-γ斑点水平,可更好地判断慢性乙肝感染者免疫状态和评估慢性乙肝感染者抗病毒治疗效果.     

绿脓杆菌制剂与IL-12在诱导人NK细胞IFN-γ产生中的协同作用

探讨绿脓杆菌制剂(piliated Pseudomonas Aeruginosa,PPA)与IL-12协同诱导人PBMC和NK细胞IFN-γ的产生。分离健康人PBMC和纯化NK细胞分别与培养液、PPA、IL-12或PPA+IL-12共同培养,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测无细胞培养上清中IFN-γ的水平。同时采用流式细胞仪在单个细胞水平上分析PPA和IL-12诱导IFN-γ产生的淋巴细胞亚群。结果显示,单独应用亚适剂量的IL-12或PPA刺激人PBMC或纯化NK细胞,不能诱导或只能诱导低水平IFN-γ的产生。当PPA和IL-12共同与人PBMC或纯化NK细胞孵育后,PPA呈时间和剂量依赖性与IL-12协同诱导PBMC和纯化NK细胞产生大量IFN-γ。细胞亚群分析的结果表明,PPA和IL-12协同诱导CD56+NK细胞产生IFN-γ,但对CD4+T和CD8+T细胞无明显作用。PPA与IL-12协同促进NK细胞IFN-γ的产生,提示PPA和IL-12能直接刺激NK细胞发生免疫应答。     

尘螨诱导新生儿脐血单个核细胞ICOS与转录因子表达的研究

为了解尘螨(HDM)抗原对新生儿脐血单个核细胞(CBMC)及成人外周血单个核细胞(PBMC)CD3+ICOS+细胞阳性率、转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3 mRNA表达水平以及培养上清中IL-4、IL-10、IFN-γ表达水平的影响。用流式细胞术,检测新生儿CBMC、成人PBMC体外经PHA和/或HDM抗原刺激前、后CD3+ICOS+细胞阳性率;用RT-PCR法检测细胞体外经PHA和/或HDM抗原刺激前、后T-bet、GATA-3以及Foxp3 mRNA表达水平;用ELISA法,检测细胞在体外经PHA和/或HDM刺激前、后培养上清液中IL-4、IL-10、IFN-γ表达水平。结果表明,高剂量HDM抗原显著下调CBMC经PHA刺激后的CD3+ICOS+阳性率(P<0.05),同时也显著上调PHA刺激前其T-bet mRNA表达(P<0.05),而显著下调该类细胞经PHA刺激后的Foxp3 mRNA的表达(P<0.05)。也显著增加其PHA刺激前的IFN-γ分泌(P<0.01),减少其PHA刺激后IL-10分泌(P<0.05)。高剂量HDM抗原对CBMC的作用强于PBMC,可下调CD3+ICOS+阳性率,显著上调PHA刺激前CBMC T-bet mRNA表达,增加PHA刺激前IFN-γ的分泌,减少PHA刺激后IL-10分泌,提示早期接触高剂量HDM抗原对机体免疫功能的影响较强,可促进新生儿Th1样反应,高剂量HDM抗原可能通过作用于下调Foxp3 mRNA的表达而下调CD4+CD25+调节性T细胞的功能。     

TH1类细胞因子对结核病患者产生单核细胞趋化蛋白1的调节作用

目的 探讨TH1类细胞因子干扰素γ(IFN—γ)、白细胞介素—2(IL-2)对结核病患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌MCP—1的影响。方法 将12例结核患者和8例健康人PBMCs在LPS诱导前，用IL2、IFN-γ进行预刺激1h，采用ELCSA法检测各组培养上清液中MCP—1的水平。结果 与单纯用LPS组相比，加入IL-2、IFN-γ能明显上调结核患者及健康人PBMC的MCP—1分泌，且呈现浓度依赖性，两者联用具有协同效应。结论 TH1类细胞因子IL-2、IFN—γ通过上调MCP—1，使单核细胞、淋巴细胞向炎症部位趋化，参与组织炎症及肉芽肿形成，从而发挥保护性的免疫效应。     

慢性HBV 感染者IFN-γ+ NK 细胞与Treg 及IL-10 的关系研究

目的:探讨慢性HBV感染者外周血自然杀伤(NK)细胞分泌的IFN-γ与CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)及IL-10等细胞因子含量的关系。方法:收集119例慢性HBV感染肝病患者,其中CHB患者57例,LC患者40例,HCC患者22例,另收集同期健康志愿者(HC) 27例。流式细胞仪检测外周血Treg、NK细胞及IFN-γ~+NK细胞比例,CBA细胞因子(IL-10、IFN-γ、IL-2、IL-4、TNF及IL-5)含量,全自动生化分析仪检测血清ALT、AST水平。结果:CHB、LC、HCC患者外周血Treg百分比和血清中IL-10水平均显著高于HC组, CHB、HCC患者外周血Treg绝对数值显著高于HC组(P0.05),CHB、LC及HCC患者Treg与IL-10呈正相关(P0.01,r=0.564;P0.05,r=0.426;P0.05,r=0.476)。NK细胞绝对数、IFN-γ~+ NK细胞百分比及血清中IFN-γ含量在CHB、LC、HCC组中均显著低于HC组(P0.01)。同时CHB患者组IFN-γ~+NK细胞比例与Treg细胞比例、血清IL-10水平均负相关(P0.05,r=-0.618;P0.05,r=-0.635),血清IFN-γ水平亦与Treg负相关(P0.01,r=-0.342);LC患者中,外周血中NK细胞绝对数值与Treg细胞比例负相关(P0.05,r=-0.317),IFN-γ~+NK细胞比例与血清中IL-10水平负相关(P0.05,r=-0.514);HCC患者组IFN-γ~+NK细胞比例与Treg细胞比例、血清IL-10水平均负相关(P0.01,r=-0.676;P0.01,r=-0.615)。结论:CHB患者及其进展疾病如LC和HCC外周血IFN-γ~+NK细胞比例与Treg比例、血清IL-10水平负相关,提示Treg和IL-10参与抑制IFN-γ~+ NK细胞可能是慢性HBV感染及其进展的重要因素之一,因此逆转Treg及IL-10所致的免疫耐受,将会有力提高NK细胞抗HBV慢性感染及恶性进展。