香烟烟雾提取物对兔气道平滑肌细胞毒性损伤及对一氧化氮生 …

探讨吸烟对气道平滑肌细胞的影响。方法 分别以０．５％，１０％和３－０％５的香烟烟者提取物孵育兔ＡＳＭＣ，测定其细胞存活率，丙二醛含量，乳酸脱氢酶漏出及一氧化氮稳定代谢终产物亚硝酸盐水平。     

硝苯地平对内皮细胞和平滑肌细胞一氧化氮生成的影响

钙离子通道拮抗药能够有效治疗某些心血管系统疾病。本实验研究了钙拮抗药硝苯地平对离体培养的内皮细胞及平滑肌细胞一氧化氮生成的影响。结果表明硝苯地平能够有效抑制上述细胞一氧化氮的释放,且抑的帽效应呈剂量依赖关系。提示钙拮抗药的治疗作用可能与其抑制一氧化氮的释放有关。     

香烟烟雾提取物对气道平滑肌细胞增殖及内皮素释放的影响

探讨气道平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）自分泌的内皮素（ＥＴ）是否介导了吸烟对ＡＳＭＣ的作用。方法在体外培养的家兔ＡＳＭＣ上加入香烟烟雾提取物（ＣＩＳＥ）测定细胞存活率，乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）水平，并用Ｈ－ＴｄＲ掺入法及放射免疫方法观察ＣＳＥ对ＡＳＭＣ的增殖作用，及对ＥＴ－１释放的影响。用３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验，观察低浓度（５％）ＣＳＥ对ＡＳＭＣ增殖的影响及与ＥＴ的关系。结果１０％和３０％ＣＳＥ对ＡＳＭＣ呈现明显毒性作用，表现为细胞存活率降低，脂质过氧化终产物丙二醛（ＭＤＡ）含量增加和细胞ＬＤＨ漏出随时间进行性增加。５％ＣＳＥ呈时间依赖地刺激ＡＳＭＣ释放ＥＴ－１并促进ＡＳＭＣ（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入（较对照组增加５９．９％，Ｐ＜０．０１）。内皮素Ａ受体（ＥＴＡ受体）拮抗剂ＪＫＣ－３０１呈浓度依赖地抑制５％ＣＳＥ促ＡＳＭＣ增殖作用。结论吸烟可以刺激ＡＳＭＣ释放ＥＴ－１且通过ＥＴＡ受体介导ＡＳＭＣ增殖     

香烟提取物对气道平滑肌细胞增殖中ERKs及NF-κB表达的影响

目的探讨香烟提取物（cigarette smoke extract，CSE）对气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells，ASMCs）增殖中细胞外信号调节蛋白激酶（ERKs）及核因子-κB（NF-κB）表达的影响。方法体外培养Wistar大鼠的气道平滑肌细胞，给予不同浓度的CSE刺激24 h后，MTT法检测细胞增殖情况，采用Western blot方法检测ERKs、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶（p-ERK）和NF-κB p65的表达。结果1/32 CSE组、1/16 CSE组及1/8 CSE组的细胞增殖和ERKs、p-ERK、NF-κB p65的表达均逐渐增高，且与对照组相比差异有显著性意义（P〈0.05，n=4）。NF-κB p65的表达水平与p-ERK的表达水平呈明显正相关（r=0.858，P〈0.05，n=4）。结论一定浓度的CSE作用于平滑肌细胞后引起ERKs及ERKs磷酸化的增加，磷酸化激活后的ERKs可能与NF-κB的活化和ASMCs的增殖有关。     

替普瑞酮对香烟提取物引起的气道平滑肌细胞凋亡中p-JNK表达的影响

目的:探讨替普瑞酮(GGA)诱导的热休克蛋白70(HSP70)在香烟提取物(CSE)引起的气道平滑肌细胞(ASMCs)凋亡中对C-Jun N-terminal激酶(JNKs)的影响。方法:在体外培养Wistar大鼠的气道平滑肌细胞中,给予GGA处理前后,给予CSE刺激3 h。用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡情况,Western blot的方法检测HSP70和p-JNK的表达。结果:CSE诱导ASMCs凋亡随CSE浓度的增加而逐渐增加,两者相比有显著性差异(P<0.05);GGA预处理后再加入不同浓度的CSE处理的气道平滑肌细胞的凋亡较单纯CSE组相比有显著性差异(P<0.05)。在给予CSE刺激后,各组中的HSP70的表达较对照组有明显的降低,而且随CSE浓度越高降低越明显(P<0.05);p-JNK的表达随CSE浓度的增高而增多(P<0.05)。GGA预处理后的各组细胞的HSP70的表达与对照组比较有明显的增多(P<0.05)。在给予GGA预处理后,再加入CSE处理的气道平滑肌细胞中,与对照组比较HSP70的表达有所降低但无显著差异,p-JNK的表达在GGA+CSE组中的表达较单纯CSE组中有所下降(P<0.05)。结论:较高浓度的CSE能引起气道平滑肌细胞的凋亡并且伴随p-JNK的表达的增多。GGA处理气道平滑肌细胞后引起HSP70表达的增加,并且抑制较高浓度CSE所致的平滑肌细胞的凋亡,这可能与HSP70下调p-JNK的活性有关。     

香烟烟雾提取物对猪气道上皮细胞β-连环素及酪氨酸磷酸化的影响

目的 观察香烟烟雾提取物（CSE）和酪氨酸激酶抑制剂（tyrophostin 25)对气道上皮细胞（AEC）酪氨酸磷酸化程度、细胞Src蛋白（c-Src)及β-连环素（β- cat)表达的影响,探讨细胞酪氨酸磷酸化程度及β- cat在吸烟致AEC损伤和修复中的作用及调控机制。方法 体外培养猪AEC,将培养细胞分成3组;N组：加无血清培养基;C组：在无血清培养基上分别加CSE;CT组：加tyrophostin 25及CSE。每组随机检测300个AEC中β- cat免疫细胞化学染色的分布规律;利用图像分析技术,每组随机检测30个AEC的酪氨酸磷酸化程度、c-Src,β- cat mRNA的变化。结果 C组加入20％的CSE作用4h和24h后,AEC蛋白质酪氨酸磷酸化程度分别是N组的1.51倍和3.44倍（P＜0．0001）,胞膜上β- cat阳性表达率分别为26.7%和38．7％,较N组（分别为83.3%和81．3％）明显下降（P＜0．0010）。与N组比较C组胞质中c-Src的浓度分别降低了47．9％和51．4％（P＜0．0001）;CT组酪氨酸磷酸化程度及胞膜上β- cat表达的变化接近N组。而C组和CT组β- cat mRNA含量均较N组有下降（P＜0．0001）。结论 上皮细胞的蛋白质酪氨酸磷酸化程度的变化可能介导了香烟对气道上皮细胞的损伤,而β- cat蛋白质可逆性磷酸化对粘附连接的结构和功能的维持发挥重要作用。     

香烟提取物对气道平滑肌细胞增殖中RKs及NF-κB表达的影响

目的 探讨香烟提取物(cigarette smoke extract,CSE)对气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖中细胞外信号调节蛋白激酶(ERKs)及核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法 体外培养Wistar大鼠的气道平滑肌细胞,给予不同浓度的CSE刺激24 h后,MTT法检测细胞增殖情况,采用Western blot方法检测ERKs、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK)和NF-κB p65的表达.结果 1/32 CSE组、1/16 CSE组及1/8 CSE组的细胞增殖和ERKs、 p-ERK、NF-κB p65的表达均逐渐增高,且与对照组相比差异有显著性意义 (P《0.05, n＝4).NF-κB p65的表达水平与p-ERK的表达水平呈明显正相关(r=0.858, P《0.05,n＝4).结论 一定浓度的CSE作用于平滑肌细胞后引起ERKs及ERKs磷酸化的增加,磷酸化激活后的ERKs可能与NF-κB的活化和ASMCs的增殖有关.     

一氧化氮对血管平滑肌细胞的作用

<正>一氧化氮(No)是生物体内一种结构最简单的多功能生物信号分子.它广泛分布于多种组织中,且在诸多疾病发生和人体正常功能调节中起着十分重要的作用.因此,No被称为20世纪90年代医学生物学领域最重要的“明星分子”,也是当今世界医学研究中的一个热点问题.No本身不带电荷,可以自由地通过膜性结构,又因其带有一个未配对电子(自由基),故而具有很高活性.它的半衰期仅为3分钟～5分钟,因此能被很快地     

香烟烟雾提取物对气道上皮细胞增殖和FIP200表达的影响

目的: 研究香烟烟雾提取物(CSE)对气道上皮细胞增殖和细胞周期的影响及其作用机制. 方法: 利用MTT法研究CSE对气道上皮细胞增殖的影响,采用流式细胞术分析气道上皮细胞细胞周期的影响,以RT-PCR和Western blot检测气道上皮细胞FIP200 mRNA和蛋白表达,以免疫共沉淀检测FIP200与局灶粘着斑激酶(FAK)连接状况. 结果: CSE干预的气道上皮细胞MTT吸光度比对照组明显降低,G1期细胞增多,S和G2期细胞明显减少(P<0.01),FIP200 mRNA, FIP200的表达水平以及FIP200与FAK的连接均显著增高(P<0.01),且随CSE干预时间和CSE浓度而增大;气道上皮细胞FIP200表达水平和FIP200与FAK连接的增高均与G1期细胞增多呈正相关(P<0.01),与S和G2期细胞减少呈负相关(P<0.01). 结论: CSE显著抑制气道上皮细胞的增殖,FIP200的高表达可能是其作用机制之一.     

内源性NO对低氧下大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨内源性一氧化氮(NO)对低氧下离体肺动脉平滑肌细胞( PASMCs)增殖的影响.方法 原代培养Wistar大鼠PASMCs,分常氧组(21％O2,5％CO2)和低氧组(1％ O2,94％N2,5％ CO2)进行培养,分别应用非选择性一氧化氮合酶抑制剂NG-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NG-nitro-arginine methyl ester,L- NAME)进行干预,用细胞计数和四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖水平.结果 低氧下的肺动脉平滑肌细胞2天后明显增殖,与常氧组相比有显著性差异(P＜0.01),5天后细胞数达到峰值.L - NAME低氧干预组细胞增殖水平明显高于低氧组和常氧组(P＜0.01).结论 L-NAME抑制内源性NO的产生进而促进低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖.     

UROTENSIN II RECEPTOR IN THE RAT AIRWAY SMOOTH MUSCLE AND ITS EFFECT ON THE RAT AIRWAY SMOOTH MUSCLE CELLS PROLIFERATION

INTRODUCTIONUrotensinII（U－II）isavasoactive“somatostatin－like”cyclicpeptidewhichwasoriginallyisolatedfromfishspinalcordsandwhichhasrecentlybeenclonedfromman（１,２）．Ames,etal．recently（in１９９９）identifiedanorphanhumanG－protein－coupledreceptorthatishomol－ogoustoratGPR１４andexpressedpredominantlyincar－diovasculartissue,whichfunctionsasaU－IIreceptor．HumanU－IIisfoundwithinbothvascularandcardiactissue,includingcoronaryatheroma．ThepotencyofvasoconstrictionofU－IIi…     

二甲基亚砜和1,2-丙二醇对深低温保存兔颈总动脉平滑肌细胞的影响

①目的 用二甲基亚砜(Me2SO)和1．2-丙二醇(PROH)深低温保存兔颈总动脉,评价两种保护剂对深低温保存复温后血管平滑肌细胞再生能力和超微结构的影响。②方法 将免颈总动脉用含有1.5mol／L的Me2SO或1．5mol／L PROH的低温保护剂深低温保存，并在冰袋中缓慢复温．新鲜血管作为对照。复温后和新鲜血管的平滑肌细胞进行体外培养，观察平滑肌细胞的再生能力;同时在透射电镜下观察平滑肌细胞的超微结构。③结果 体外培养结果显示，新鲜血管的平滑肌细胞体外培养24h后开始生长．PROH保存血管的平滑肌细胞在培养24～36h后开始生长；Me2SO保存血管的平滑肌细胞体外培养36～48h开始生长．而且再生细胞的数目显著少于前者，生长速度慢。透射电镜下，与新鲜血管的平滑肌细胞相比．PROH或Me2SO冷冻保存后血管的平滑肌细胞的线粒体等细胞器均无显著变化。但是Me2SO保存血管的平滑肌细胞核染色质的电子密度发生显著变化，异染色质的电子密度明显降低，与新鲜或PROH深低温保存血管平滑肌细咆核常染色质的低电子密度和异染色质的高电子密度明显不同。④结论 1.5mol／L PROH能够有效地保持平滑肌细胞的活性．并且对细胞的再生能力没有明显的损伤作用。Me2SO损伤平滑肌细胞的再生能力、同时引起平滑肌细胞核染色质超做结构的变化。     

异丙酚和氯胺酮对大鼠大脑皮层、小脑和脑干NOS活性和NO产量的影响

目的了解异丙酚、氯胺酮对大鼠脑ＮＯＳ活性和ＮＯ产量的影响。方法２４只ＳＤ大鼠，随机分为３组，分别腹腔注射（ｉｐ）生理盐水１０ｍｌ·ｋｇ－１（对照组），异丙酚１００ｍｇ·ｋｇ－１或氯胺酮１００ｍｇ·ｋｇ－１。结果与对照组比较，大鼠ｉｐ异丙酚１００ｍｇ·ｋｇ－１能明显抑制小脑、大脑皮层和脑干的ＮＯＳ活性和减少ＮＯ的产量（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。ｉｐ氯胺酮１００ｍｇ·ｋｇ－１后能明显抑制小脑、大脑皮层的ＮＯＳ活性和减少ＮＯ产量（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），并能明显减少脑干的ＮＯ产量（Ｐ＜０．０１），对脑干的ＮＯＳ活性无显著影响。两用药组的ＮＯＳ活性和ＮＯ产量均无明显区别。结论大鼠ｉｐ异丙酚１００ｍｇ·ｋｇ－１和氯胺酮１００ｍｇ·ｋｇ－１均能明显影响脑ＮＯＳ活性和ＮＯ产量，表明ＮＯ可能在异丙酚、氯胺酮的全麻分子学机理中发挥重要作用。     

猪十二指肠类肝素对血管平滑肌细胞增殖的抑制

猪十二指肠类肝素（冠心舒）是一种富含硫酸基的硫酸多糖，对培养的兔主动脉平滑肌细胞增殖以结晶紫、ＭＴＴ染色和３Ｈ－ΤｄＲ掺入等方法测定显示明显抑制作用，作用强度与肝素相仿。同浓度的右旋糖酐对此无抑制作用，说明猪十二指肠类肝素抑制血管平滑肌增生与分子中所含硫酸基有关。猪十二指肠类肝素口服有效，抗凝效价又低于肝素，提示本品有可能用于防治动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄。     

ET和IL－1对VSMC中NOS基因表达的调控及其生物学意义

应用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和３Ｈ－胸腺嘧啶核苷参入技术发现，在正常生理状态下，内皮素可与大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）上内皮素Ａ型受体、内皮素Ｂ型受体结合，通过调控一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）ｍＲＮＡ转录表达水平，从而调节ＶＳＭＣ的分裂和增殖。白细胞介素－１对ＶＳＭＣ中ＮＯＳ基因表达的促进作用和对ＶＳＭＣ分裂的影响，可能部分是通过内皮素及其受体这一途径完成的。     

异氟醚对大鼠不同脑区突触体NOS活性和NO生成的影响

目的了解异氟醚麻醉对大鼠大脑不同脑区突触体ＮＯＳ活性和ＮＯ生成的影响。方法选用５０只雄性ＳＤ大鼠，随机分为突白对照组１．５％异氟醚组、２．２５％异氟醚组、３．０％异氟醚组和３．０％异氟醚恢复组，测定不同浓度组上层，海马，小脑，脑干突触体ＮＯＳ活性和ＮＯ生成量。     

atRA对动脉内皮损伤后平滑肌细胞CDKs表达影响

目的探讨全反式维甲酸（atRA）对受损大鼠主动脉内皮平滑肌细胞周期素依赖性激酶（CDKs）表达的影响。方法77只大鼠随机分为假手术组、损伤组、atRA组,分别于术后2、7、14d取实验动脉段,测定内膜、中膜平滑肌细胞CDK2、CDK4的表达水平。结果损伤组CDK2、CDK4均于术后2d在中膜表达,随后表达渐少,损伤后7d,在内膜有表达,14d内膜表达呈强阳性,并可见向管腔表面聚集现象;atRA组CDK2阳性表达指数较损伤组显著下降（t=-4．97～17．86,P＜0．01）,CDK4阳性表达指数亦显著下降（t=5．64～20．05,P＜0．01）。结论atRA可能通过抑制CDK2、CDK4的过表达而抑制细胞周期进程,从而抑制内膜增生。     

家兔主动脉平滑肌细胞牛磺酸转运和缺氧－复氧损伤对其的影响

目的：观察血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）牛磺酸跨膜转运的特征及缺氧－复氧损伤后的改变。方法：用３Ｈ标记的牛磺酸在培养的家兔主动脉ＶＳＭＣ上进行实验。结果：ＶＳＭＣ的牛磺酸转运是钠浓度依赖的高亲和转运，Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶抑制剂哇巴因呈浓度依赖性地抑制其转运。ＶＳＭＣ经缺氧－复氧处理后Ｖｍａｘ下降３４％（Ｐ＜０．０１），但Ｋｍ值无明显改变。结论：ＶＳＭＣ具有高亲和牛磺酸转运系统，缺氧－复氧处理可能损伤这一转运系统。