细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达

目的：研究细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达,探讨其在牙胚发育中的可能作用。方法：取13.5、14.5、16.5和18.5d（E13.5、E14.5、E16.5和E18.5）的小鼠胚胎以及出生后1和5d（PN1和PN5）的小鼠,分离头部,固定、脱钙、脱水、石蜡包埋、切片,HE染色观察牙胚的组织形态表现,采用免疫组织化学染色方法观察CDC42及PAR3在牙胚发育过程中的表达。结果：HE染色观察,E13.5~E18.5分别为小鼠牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状早期和钟状晚期,PN1小鼠的牙胚中可见分化成熟的成牙本质细胞和成釉细胞,PN5小鼠牙胚可见牙冠部发育完成。免疫组织化学染色,CDC42在E13.5、E14.5和E16.5小鼠牙胚中有广泛表达,在E18.5小鼠牙胚中表达较E13.5、E14.5和E16.5减少,在PN1和PN5小鼠牙胚中主要表达于成牙本质细胞和成釉细胞的分泌端;PAR3弱表达于E13.5和E14.5小鼠牙胚,在E16.5和E18.5小鼠牙胚上皮处表达明显增强,在PN1和PN5小鼠牙胚中表达较E18.5减弱。结论：CDC42和PAR3参与小鼠牙发育的过程,在牙胚发育早期可能参与小鼠牙胚的增殖及迁移,在牙胚发育晚期可能参与了成牙本质细胞和成釉细胞的分化,尤其在成牙本质细胞和成釉细胞极性的形成与维持中可能具有重要作用。     

纤维粘连蛋白及骨形成蛋白-2、4在牙胚发育中的表达研究

目的 观察纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和骨形成蛋白-2、4(BMP-2、4)在大鼠牙胚发育中的表达,探讨其在成牙本质细胞分化及成熟过程的时空表达关系,为明确牙齿发育的分子调控网络提供理论和实验基础.方法 获取SD大鼠蕾状期和钟状期第一磨牙牙胚,通过免疫组化LsAB法观察FN和BMP-2、4的表达差异及相互关系.结果 FN在蕾状期和钟状期都有表达,蕾状期主要分布在牙上皮、牙间质,周围非牙间质细胞为阴性,钟状期主要分布在成牙本质细胞分化活跃的区域和分化中的内釉上皮细胞.钟状期BMP-2、4的表达较强,主要分布在成牙本质细胞分化活跃的区域. 结论 BMP-2、4和FN在牙齿发育的蕾状期和钟状期均有表达,但表达的阳性分布区不同.     

整合素β1和层黏连蛋白受体1在小鼠牙发育不同阶段牙胚组织中的表达及其意义

目的:研究小鼠磨牙发育不同阶段牙胚组织中整合素β1和层黏连蛋白受体1 (LAMR1的表达模式,探讨二者在小鼠磨牙牙胚组织发育过程中可能的作用机制及其意义。方法:取胚胎期第13.5天(E13.5)、 E14.5、 E16.5、 E18.5和出生后5 d (PN5)的小鼠,分别作为E13.5、 E14.5、E16.5、E18.5和PN5组,每组5只,分离小鼠头部,固定、脱钙、脱水、包埋和切片,HE染色观察各阶段小鼠牙胚组织形态表现,免疫组织化学染色观察小鼠磨牙发育不同阶段牙胚组织中整合素β1和LAMR1蛋白的表达分布情况和表达水平。结果:HE染色,E13.5组小鼠牙胚组织发育处于蕾状期,上皮细胞突入到外胚间充质中,形成上皮芽,状如花蕾;E14.5组小鼠牙胚组织发育处于帽状期,上皮芽体积增大,称为帽状期成釉器,成釉器周围外胚间充质细胞密度增加,形成牙乳头;E16.5组小鼠牙胚组织发育处于钟状早期,成釉器进一步长大,形似吊钟,初步具有牙尖形态;E18.5组小鼠牙胚组织发育处于钟状晚期,成釉器进一步发育,內釉上皮细胞向前成釉细胞分化,形态由立方状变为高柱状;PN5组小鼠牙冠发育完成,形成颈环、上...     

SHH在人牙胚钟状期的表达

目的观察信号分子Sonichedgehog（Shh）在人牙胚钟状期的表达,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法采用免疫组化方法观察人牙胚钟状期中Shh的表达。结果在钟状早期,Shh在成釉细胞强阳性表达,成牙本质细胞亦可见Shh阳性信号,而牙乳头细胞、星网层和中间层细胞无明显表达。钟状晚期即硬组织形成期,Shh在成釉细胞的表达仍强于成牙本质细胞,成釉器星网层未见表达。     

人牙胚体外器官培养模型的建立

目的 :建立人牙胚体外器官培养模型 .方法 :分泌前期人牙胚采用Trowell型支架培养法 ,RPMI 16 4 0培养基(含 2 0 0 g·L-1FBS ,2 0 0mg·L-1谷氨酰胺 ,2 0 0mg·L-1L 抗坏血酸 ,1× 10 -7mol·L-1维甲酸 ,10 0kU·L-1青霉素 ,10 0kU·L-1链霉素 ) ,在 37℃ ,5 0mL·L-1CO2 +95 0mL·L-1空气条件下进行培养 ,每 4 8h更换一次培养基 .体外培养 .2 ,4 ,6和 8d随机抽取牙胚进行组织学观察 .结果 :培养的牙胚组织结构关系与对照组一致 ,牙尖部形态进一步突出 ,细胞形态典型 .在 8d时 ,牙尖之间部分造釉器细胞和成牙本质细胞开始出现坏死 .结论 :为体外研究人类牙齿正常发育及各种因素对牙齿发育的影响提供了一个实用的模型     

大鼠牙胚发育中釉原蛋白的表达

0 引言 牙釉质是由一种特殊的、来源于原始口腔上皮的上皮细胞-成釉细胞分泌的. 牙齿的上皮细胞是以一种特殊的时空方式,分化成有一定功能的成釉细胞,它与来源于外胚间充质的成牙本质细胞的分化有密切的关系[1]. 釉原蛋白是一族基质相关蛋白,由成釉细胞在形成牙釉质时合成和分泌. 釉原蛋白具有非常复杂的生物学功能,迄今为止其确切的功能还不清楚[2],我们对大鼠牙胚发育的不同时期釉原蛋白的表达进行定位,为今后进一步研究釉原蛋白的生物学功能、釉质的生物矿化、细胞的分化奠定基础.     

釉鞘蛋白在小鼠牙胚发育中的时空表达

目的:观察釉鞘蛋白(ameloblastin)在小鼠牙胚发育中表达的时空顺序及分布,探讨釉鞘蛋白在釉质发育矿化中的作用。方法:采用原位杂交的实验方法,观察釉鞘蛋白在牙胚发育的增殖分化期、分泌初期及分泌期的表达。结果:釉鞘蛋白mRNA在成釉细胞增殖分化期表达为阴性,分泌初期细胞内及新生釉基质中开始出现弱阳性表达;至分泌期,细胞内及新生釉基质中均呈强阳性表达。成熟釉质中无釉鞘蛋白mRNA的阳性表达。结论:本实验从分子水平上进一步明确了釉鞘蛋白的时空表达,并推测釉鞘蛋白可能介导了釉质的发育矿化,它与牙齿发育、釉基质矿化反应等过程密切相关。     

大鼠牙胚发育中釉原蛋自的表达

0引言牙釉质是由一种特殊的、来源于原始口腔上皮的卜皮细胞一成釉细胞分泌的．牙齿的L皮细胞是以一种特殊的时空方式，分化成有一定功能的成釉细胞，它与来源于外胚间充质的成牙本质细胞的分化有密切的关系’．釉原蛋白是一族基质相关蛋白，由成釉细胞在形成牙釉质时合成...     

Wnt7b受体Frizzled在小鼠脊髓的表达和分布研究

目的：探讨Wnt信号分子受体Frizzled在小鼠脊髓发育中的作用。方法：取孕14天A／J和C57BL／6J近交系小鼠的胎鼠，于胎鼠中部连续冰冻切片，采用大鼠抗小鼠Frizzled7单克隆抗体，免疫组化法测定Frizzled在脊髓上的表达和分布。结果：发育14天的胎鼠脊髓上的Frizzled表达强度和分布范围在两种品系小鼠中差异有显著性，A／J小鼠在神经管周围表达明显强于C57BL／6J，提示在发育晚期Frizzled的强表达与脊髓发育的抑制相关。结论：Wnt7b的信号转导途径介导了控制脊髓发育的过程。本研究为进一步研究脊髓发育的分子机制奠定了基础。     

骨形成蛋白2及骨形成蛋白4在牙胚发育中的时空表达及意义

牙齿发育初期和后期起调节作用的一些信号分子中,骨形成蛋白是与骨和牙齿形成相关的生长因子,作为形态生成信号在牙齿发育不同时期调控上皮与间充质间相互作用。牙胚发育过程中,BMP-2、BMP-4在牙胚发育各个时期的表达提示其在牙胚发育中的作用。研究表明,BMP-2、BMP-4作为上皮-间充质相互作用的继发调节信号参与牙齿发育,BMP-2参与调控牙乳头细胞分化形成成牙本质细胞;BMP-4与多种细胞因子相互作用参与调控牙型的形成。     

转录因子FoxO3a在小鼠牙胚发育过程中的表达

目的：通过观察转录因子FoxO3a在小鼠牙胚发育中的表达特点及分布情况,探讨其在小鼠牙胚发育过程中的作用。方法取出生0 d和3 d的昆明小鼠各3只,处死解剖下颌骨,放于新鲜配置的10％中性甲醛溶液中固定过夜,制备小鼠牙胚0d和3d的组织标本,常规石蜡包埋,近远中向5μm连续切片,采用免疫组化方法观察检测FoxO3 a在小鼠不同时期的牙胚表达情况和分布情况,并对结果进行分析。结果 FoxO3 a在小鼠不同时期的牙胚发育中的分布存在差异,FoxO3a在0d小鼠牙胚中,成牙本质细胞成阴性表达,在3d小鼠牙胚中成牙本质细胞成阳性表达。结论观察FoxO3a在小鼠牙胚发育过程中的表达以及表达的变化,提示FoxO3a可能参与牙本质的形成和矿化。     

BMP4mRNA在大鼠牙胚发育中的表达

目的 研究BMP4mRNA在胚胎SD大鼠牙胚中的表达,探讨BMP4mRNA在牙胚发育中的调控作用和意义.方法 建立和制备sD大鼠胚胎时期13～19 d等多时间点的牙胚发育模型,用HE染色对牙胚发育的时空变化进行组织学观察以确定牙胚发育的时期,再用原位分子杂交检测BMP4 mRNA在牙胚发育中的表达.结果 BMP4 mRNA阳性细胞在SD大鼠牙胚发育的不同时期均有表达,而且规律性地出现在牙上皮和牙乳头的外胚间充质细胞中.结论 BMP4在牙胚发育中的表达特点表明,BMP4可能参与诱导外胚间充质细胞聚集,诱导细胞增殖、分化,诱导成牙本质细胞分泌基质.     

成纤维细胞激活蛋白在小鼠肺纤维化模型中的表达

目的探讨成纤维细胞激活蛋白（FAP）在实验性小鼠肺纤维化组织中的表达,及其与α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β1（TGF-β1）之间的相互关系。方法气管内滴入博莱霉素（7mg/kg）制备肺纤维化模型,采用免疫组化技术检测小鼠肺纤维化组织中FAP、α-SMA和TGF-β1的表达。结果正常肺组织无FAP表达;纤维化组FAP表达于细支气管和大血管周围的成纤维细胞,成纤维细胞灶中FAP、α-SMA和TGF-β1表达部位相似,但FAP比α-SMA的表达更广泛,比TGF-β1的表达更强。FAP、α-SMA和TGF-β1与小鼠肺纤维化程度均呈正相关（r值分别为0.795、0.766和0.628,P〈0.01）,且FAP与TGF-β1的表达呈正相关（r=0.706,P〈0.01）。结论 FAP特异性表达在小鼠肺纤维化组织的成纤维细胞灶中,与肺纤维化程度有关。FAP与TGF-β1可能在肺纤维化形成中起协同作用。     

胎鼠牙胚细胞体外培养研究

目的 摸索正常胎鼠牙胚细胞离体培养所需条件，为进一步将其作为牙组织工程种子细胞奠定基础。方法 体视显微镜下取17d龄胎鼠下颌第一磨牙牙胚，胶原酶／分离酶消化，以含10％胎牛血清(FCS)的DMEM为培养基进行原代培养。倒置显微镜下观察培养细胞的生长特点，MTT法测定细胞活性绘制生长曲线，取原代培养4～9d的细胞进行组织化学和免疫组织化学染色。结果 倒置显微镜下观察，培养细胞在24h内贴壁，约7～9d生长连成片状。细胞有多角形、大而扁平梭形和长梭形几种形态。生长曲线表明：培养细胞在前3天生长缓慢，第4天呈对数生长，第7天达高峰。免疫组化结果表明：培养细胞来源于两种组织。结论 采用酶消化培养法，用胶原做基质饲养层，含10％FCS的低糖DMEM作为培养基，能将胎鼠牙胚细胞培养成活，并维持其细胞学特征。     

Plexin A1蛋白及mRNA在小鼠卵泡发育过程中的表达

目的:探讨Plexin A1在小鼠卵巢不同发育阶段的表达。方法:选择不同发育时期的C57BL/6j小鼠,采用免疫组织化学方法测定小鼠卵巢中Plexin A1蛋白水平的表达,实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)方法检测Plexin A1mRNA水平的表达。结果:Plexin A1蛋白在小鼠卵巢各级卵泡的卵母细胞和颗粒细胞中均有表达。随着卵泡的不断发育,其在卵母细胞和颗粒细胞中的表达水平均逐渐增强。始基卵泡卵母细胞中的Plexin A1蛋白表达水平明显低于初级、次级和窦状卵泡的卵母细胞。始基卵泡颗粒细胞中未见明显Plexin A1蛋白表达,至初级卵泡阶段可见颗粒细胞开始有Plexin A1蛋白表达,其水平低于次级及窦状卵泡。闭锁卵泡中的Plexin A1呈强阳性表达,明显高于生长卵泡中的表达水平。Plexin A1mRNA在卵巢组织中的表达水平随周(日)龄呈先升高后降低的趋势,5d,7d,3周小鼠卵巢中Plexin A1 mRNA表达水平分别为3d小鼠的1.56、1.26、0.79倍(P<0.05),而2周小鼠卵巢中的Plexin A1mRNA表达水平与3d小鼠相当(P>0.05)。结论:Plexin A1在不同级别的小鼠卵泡中均有表达,且表达水平随卵泡的不断生长发育而增强,但闭锁卵泡中表达最强,提示Plexin A1在卵泡的生长发育及闭锁过程中可能发挥重要的调控作用。     

Bax蛋白在高能电子线大鼠皮肤辐射损伤模型中的表达及意义

目的 探讨Bax在高能电子线大鼠皮肤辐射损伤中的作用及机理，为临床的治疗提供线索。方法 运用免疫组化技术SP法检测40例高能电子线大鼠皮肤辐射损伤模型中的表达，分析它们与照射剂量之间的关系。结果 Bax在40例照射的大鼠中，5Gy、15Gy、30Gy、45Gy组阳性表达率分别为30％、30％、70％、70％；各照射剂量组同Bax蛋白阳性表达无相关性，但有趋势性（P＜0．05）。结论 电离辐射能增加大鼠皮肤组织中Bax蛋白的表达；Bax蛋白的表达可能与照射剂量有关；Bax蛋白具促细胞凋亡作用，参与放射性皮肤损伤的形成。     

EGFR在高能电子线大鼠皮肤辐射损伤模型中的表达和意义

目的　探讨辐射对皮肤表皮生长因子受体（EGFR）表达的影响。方法　采用免疫组化链霉亲和素─卵白素─生物素复合物（SABC）法检测40例大鼠皮肤辐射损伤模型标本EGFR的表达,实验动物按照射剂量分为4个剂量组。结果　5Gy组、15Gy组、30Gy组、45Gy组EGFR阳性表达率分别为27.0%、49.3%、72.2%、87.6%,与正常对照组(10.8%)比较,均有显著差异（均P＜0.01）。另外,各照射组间差异亦显著（P＜0.01）,表现为随着照射剂量的增加,EGFR阳性表达率亦增加。结论　辐射可显著增加皮肤组织中EGFR的表达,可能为辐射激活并扩增c-erbB-1基因的结果;并在一定照射剂量范围内,随着照射剂量的增加,c-erbB-1基因的激活与扩增增强,这可能成为皮肤溃疡难以愈合的重要因素之一。     

Survivin蛋白表达与卵巢恶性生殖细胞肿瘤临床病理特征的关系

目的 探讨Survivin蛋白表达与卵巢恶性生殖细胞肿瘤发生发展的关系.方法 采用免疫组化链菌素亲生物素蛋白-过氧化酶连接法(labelled streptavidin biotin method, LSAB)检测10例正常卵巢和29例卵巢恶性生殖细胞肿瘤组织石蜡标本中Survivin蛋白的表达状况.结果 正常卵巢组织中无Survivin蛋白的表达;Survivin蛋白表达定位在肿瘤细胞的胞浆和胞核中;卵巢恶性生殖细胞肿瘤中Survivin蛋白表达阳性率为58.6%,高于正常卵巢组织(P＜0.05),但Survivin蛋白表达与恶性生殖细胞肿瘤的病理类型、FIGO分期、淋巴结转移、血清AFP含量及腹水量间均无明显关联(P＞0.05).结论 Survivin蛋白表达水平增高可能与卵巢恶性生殖细胞的发生有关.     

高糖对小鼠囊胚细胞凋亡调控蛋白Fas表达的影响

目的:探讨高浓度葡萄糖对小鼠囊胚发育及凋亡调控蛋白Fas表达的影响。方法:通过促超排卵,获取妊娠3.5 d小鼠囊胚,随机分成空白对照组、低糖组和高糖组,分别培养在含0、7.5、28.0 mmol/L葡萄糖的M199培养基中,24 h后吸出囊胚。SP法检测囊胚组织Fas蛋白的表达水平。结果:空白组中囊胚细胞胞浆可见少量浅棕黄色颗粒,低糖组无着色,高糖组棕黄色颗粒较多;Fas表达分别呈弱阳性、阴性、强阳性;高糖组Fas表达水平较空白组和低糖组均高(P<0.01)。结论:高浓度葡萄糖可诱导凋亡蛋白Fas表达,致囊胚细胞数目减少而影响囊胚正常发育和着床。