益气化瘀方对腰神经压迫模型大鼠背根节神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响

目的：观察益气化瘀方对腰神经根压迫损伤大鼠背根节神经细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）的影响。方法：雄性SD大鼠40只随机分为假手术组、模型组、弥可保组和益气化瘀方组,每组10只。造模各组用自制胶块压迫于大鼠右侧L;神经根背根节处,假手术组仅切开皮肤和椎旁肌。造模后假手术组和模型组大鼠给予生理盐水灌胃,益气化瘀方组大鼠给予益气化瘀方煎剂灌胃,弥可保组大鼠肌肉注射弥可保。于造模10d后取右侧受压神经根,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测神经细胞的凋亡情况;分光光度法结合考马斯亮蓝法检测受压迫神经根caspase-3活性;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测神经根组织caspase-3mRNA表达变化。结果：腰神经根受压迫后背根节的神经细胞凋亡明显增加,模型组大鼠神经细胞的凋亡指数高于假手术组（P〈0．01）;益气化瘀方和弥可保可减少背根节神经细胞的凋亡,两组大鼠神经细胞的凋亡指数低于模型组（P〈0．05）。模型组大鼠神经根组织caspase-3活性和mRNA表达明显增高,与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）;益气化瘀方和弥可保可降低造模后大鼠神经根组织caspase-3活性及其mRNA表达,二者与模型组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论：腰神经根压迫可导致受压神经根组织caspsae-3的过表达和神经细胞凋亡的增加。益气化瘀方可抑制神经根组织caspase-3的过表达,减轻背根节神经细胞的凋亡。     

雌激素对大鼠局灶性脑缺血神经细胞caspase-3表达的影响

目的:探讨雌激素对局灶性脑缺血大鼠神经细胞caspase-3表达的影响。方法:健康雌性Wistar大鼠30只,随机等分为假手术组、缺血对照组及雌激素用药组。采用栓线法阻断大脑中动脉建立局灶性脑缺血模型。缺血2 h再灌注24 h后断头取脑,用体积分数为1%四氮唑染色分别观察各组大鼠脑梗死灶的大小,应用免疫组织化学方法检测大鼠脑组织caspase-3的表达。结果:假手术组未发现脑梗死灶和caspase-3表达阴性;雌激素用药组(16.7±2.1)%脑梗死体积明显小于缺血对照组(21.9±4.3)%(P<0.01);caspase-3的表达雌激素用药组(131±15)个明显小于缺血对照组(86±11)个(P<0.01)。结论:雌激素可抑制大鼠脑神经细胞caspase-3活性,减少脑神经元凋亡,具有脑神经保护作用。     

急性脊髓损伤后神经细胞凋亡及其意义

目的：研究急性脊髓损伤后神经细胞凋亡的分布特点及其意义。方法：Wistar雌性大白鼠54只，使用改良Allen法制作急性脊髓损伤模型，分别于术后1、4、8、24、72h及7、14、21天处死取材。应用苏木精-伊红染色及凋亡细胞原位末端标记(TUNEL)法对脊髓组织进行标记。结果：损伤后4h，在损伤段及邻近段可见末端标记的阳性神经细胞，损伤段灰质中阳性细胞数24h达高峰，白质中阳性胶质细胞数量72h达高峰。相邻节段阳性细胞数量在72h达高峰。灰质中神经元及胶质细胞均有阳性表达，但以胶质细胞为主。结论：脊髓损伤后神经细胞凋亡是继发损伤期的重要病理变化，并有其时相和空间分布特点。     

川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型caspase-3和NF表达的影响

目的:观察川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型损伤段半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和神经丝蛋白(NF)表达的影响.方法:SD大鼠88只,随机分为空白对照组,生理盐水组和川芎嗪组.采用改良ALLEN氏打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型.采用改良Rivlin斜板实验和BBB评分对大鼠脊髓功能进行行为学评分.在建模后1h,3h,6h,1d,3d,7d,14d和21d获取损伤段脊髓标本,HE染色观察其组织病理变化;免疫组织化学染色检测caspase-3和NF-L,NF-H,NF-M表达,并进行相关分析.结果:随着时间推移,术后斜板临界度数和BBB评分均逐渐升高,且术后7,14和21d,川芎嗪组斜板临界度数和BBB评分均较对照组高(P＜0.05).术后3,7和14d,川芎嗪组caspase-3表达值较生理盐水组低(p＜0.05),NF表达值较生理盐水组高(P＜0.05).改良Rivlin斜板临界角度与NF的表达正相关:BBB评分值与NF的表达正相关,与caspase-3的表达负相关;Caspase-3的表达与NF的表达负相关.结论:川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型损伤段脊髓有保护作用,可能与川芎嗪增加NF表达,抑制caspase-3表达有关.     

大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡的实验研究

目的:研究细胞凋亡在急性脊髓损伤中的作用.方法:以大鼠脊髓压迫性损伤的动物模型,应用透射电镜,HE染色,原位缺口末端标记(TUNFEL)观察急性脊髓损伤后神经细胞的死亡形式.结果:急性脊髓损伤后2 h电镜清晰观察到神经细胞凋亡的形态变化,HE染色和TUNEL显示急性脊髓损伤后6 h和8 h凋亡阳性细胞达高峰.结论:细胞凋亡为急性脊髓损伤后神经细胞的主要死亡形式,也是加重脊髓损伤的一个因素.     

caspase-3和caspase-8在铅中毒大鼠心肌细胞中的表达特点研究

目的 构建铅中毒大鼠模型,观察心脏中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(cysteinyl aspartate specific proteinase-8,caspase-8)蛋白及mRNA的表达特点。方法 40只SD(Sprague Dawley)大鼠在适应性喂养2周后采用数字表法随机分为正常组(无铅水)、低剂量铅中毒组(0.5g/L醋酸铅水溶液)、中剂量铅中毒组(1g/L醋酸铅水溶液)和高剂量铅中毒组(2g/L醋酸铅水溶液),中毒1个月后处死,收集血液和心脏,检测血铅、心铅、心功能指标[肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)]、血清炎性指标[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)和白介素-8(interleukin-8,IL-8)]和心肌caspase-3和caspase-8蛋白及mRNA的表达特点。结果 心肌组织病理学显示,正常组心肌纤维排列整齐,低剂量铅中毒和中剂量铅中毒组有一定紊乱,高剂量铅中毒组则明显排列无序,细胞界限不清晰;与正常组比较,低剂量、中剂量和高剂量铅中毒组血铅、心铅、TNF-α、IL-6和IL-8明显升高(P<0.05),与低剂量铅中毒组比较,中剂量和高剂量铅中毒组血铅、心铅、TNF-α、IL-6和IL-8明显升高(P<0.05),此外高剂量铅中毒组血铅、心铅、TNF-α、IL-6和IL-8也明显高于中剂量铅中毒组(P<0.05);与正常组比较,低剂量和中剂量铅中毒组CK、CK-MB、LDH、caspase-3与caspase-8蛋白和mRNA表达差异无统计学意义,高剂量铅中毒组明显升高(P<0.05),此外高剂量铅中毒组明显高于低剂量和中剂量铅中毒组(P<0.05)。结论 2g/L醋酸铅水溶液中毒大鼠可引起其心肌中caspase-3和caspase-8表达异常,诱发血液炎性介质TNF-α、IL-6和IL-8的升高,最终造成心肌损伤。     

caspase-3在脑室内低温动物模型脑组织中的表达

目的:对家兔急性脑出血模型进行脑室内低温保护,通过对动物行为和对出血灶周围脑组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达的观察,探讨脑室内低温对家兔急性脑出血模型细胞凋亡的影响。方法:4～6月龄雄性家兔12只,随机分为等温组、低温组各6只。于右侧内囊点注入耳中动脉血0.5ml制作脑出血模型。用双腔微导管穿刺左侧侧脑室,建立脑室内灌注装置,以等温/低温等渗盐水灌注2h。术后24h观察其肢体运动后取材、固定、染色,观察脑组织caspase-3表达情况。结果:经脑室内低温保护的动物肢体偏瘫程度轻,血肿周围脑组织内出现的caspase-3阳性细胞数量较少,与对照组的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:对家兔急性脑出血模型进行脑室内低温脑保护可以减少血肿周围脑组织的细胞凋亡,脑室内低温作为选择行脑部低温的一个新的思路值得关注。     

注射Aβ25-35后大鼠海马超微结构及caspase-3表达的改变

目的：探讨大鼠双侧海马注射Aβ25-35后海马组织形态、超微结构及caspase-3表达的改变.方法：采用Aβ25-35双侧海马注射的阿尔茨海默病（AD）大鼠模型,光镜及透射电镜观察海马组织结构,免疫组化法观察caspase-3蛋白的表达.结果：苏木素伊红（HE）染色显示,模型组大鼠海马CA1-CA4区及齿状回神经元数量较对照组明显减少,可见较多的神经细胞胞质浓染,核固缩;透射电镜下,模型组海马CA1区神经元较少,可见部分神经细胞膜皱缩,胞体缩小,核膜完整,核染色质电子密度增强;海马区Caspase-3蛋白的表达明显增加.结论：Aβ25-35可在体内诱导大鼠海马神经元凋亡.     

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后caspase-3、p53表达的影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素（minocycline）对caspase-3、053表达及细胞凋亡的影响。方法成年大鼠随机分为脊髓损伤后应用二甲胺四环素的治疗组（A组）和应用生理盐水对照组（B组）,损伤后不同时间点（4h、8h、1d、3d、7d、14d、21d）取材,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测caspase-3、053表达阳性细胞,原位末端标记法（TUNEL法）标记凋亡细胞,及荧光酶联测定法测定caspase-3的活性。结果HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组。A、B两组均发现凋亡细胞及caspase-3、053表达,神经细胞凋亡指数及caspase-3、053表达均为B组〉A组（P〈0．05）。结论二甲胺四环素能抑制大鼠脊髓损伤后caspase-3、053表达及细胞凋亡。     

脊伤颗粒对大鼠急性脊髓损伤后运动功能及Caspase-3表达的影响

目的 研究脊伤颗粒对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后运动功能及半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响.方法 随机抽取大鼠32只作为假手术组,其余118只大鼠采用改良Allen'S打击器制作大鼠SCI模型,将造模成功的96只大鼠随机分为模型组、甲基强的松龙组(下称甲强龙组)、脊伤颗粒组.分别给予假手术组、模型组生理盐水灌胃,甲强龙组尾静脉注射药物,脊伤颗粒组予以相应药物灌胃.在给药后1、3、7、14 d的4个不同时间点采用BBB行为学功能评分;再分批处死大鼠,取出SCI组织用HE染色观察其病理变化,用免疫组化染色检测Caspase-3表达阳性细胞,原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞.结果 (1)BBB运动功能评分方面,与假手术组比较,模型组评分低(P＜0.01);与模型组比较,脊伤颗粒组、甲强龙组评分高(P＜0.05);与甲强龙组比较,SCI后1、3d,脊伤颗粒组评分偏低,(P＜0.05),SCI后7、14 d脊伤颗粒组评分偏高(P＜0.05).(2)在平均积分光密度值和细胞凋亡率方面,与假手术组比较,模型组数值偏高(P＜0.01);与模型组比较,甲强龙组、脊伤颗粒组平均数值低(P＜0.05);与甲强龙组比较,SCI后1、3d,脊伤颗粒组平均数值偏高(P＜0.05),SCI后7、14 d,脊伤颗粒组平均数值偏低(P＜0.05).结论 脊伤颗粒能部分恢复SCI后模型大鼠的运动功能并可明显抑制细胞Caspase-3表达和细胞凋亡.     

补阳还五汤对急性脊髓损伤模型大鼠神经细胞凋亡的影响

目的观察补阳还五汤对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)的治疗作用及其机制。方法 SD大鼠随机分为空白组、损伤对照组、补阳还五汤组,各10只。采用Allen’s打击法建立急性脊髓损伤模型,空白组和损伤对照组造模后予蒸馏水1m L灌胃,补阳还五汤组造模后予补阳还五汤1m L灌胃,均1天1次,连续3天。各组分别于术后1、7、14天观察其行为学BBB评分,14天通过免疫组化的方法观察脊髓损伤部位神经细胞凋亡(caspase-3p20、Bcl-2与Bax)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平。结果 1行为学观察评分:术后7、14天补阳还五汤组与损伤对照组下肢功能均有恢复(P0.05),且补阳还五汤组较损伤对照组恢复更明显[(9.05±0.95)分比(5.75±1.97)分,(12.6±1.55)分比(8.80±3.34)分,P0.05]。2免疫组化检测:补阳还五汤组caspsase-3p20阳性细胞数表达较损伤对照组少[(16.70±2.21)个比(20.30±4.13)个,P0.05];补阳还五汤组Bcl-2阳性细胞的表达较损伤对照组增加[(10.57±0.97)个比(6.42±3.20)个,P0.05];补阳还五汤组Bax阳性细胞的表达较损伤对照组少[(18.29±2.21)个比(21.14±2.41)个,P0.05];补阳还五汤组VEGF阳性细胞的表达较损伤对照组多[(11.75±1.03)个比(9.50±1.30)个,P0.05]。结论补阳还五汤可提高脊髓损伤部位VEGF的表达,使细胞凋亡明显减少,促进骨髓功能的恢复。     

羟基红花黄色素A对急性脊髓损伤模型大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：观察羟基红花黄色素A（HSYA）对急性脊髓损伤（ASCI）模型大鼠神经细胞凋亡的影响。方法30只SD大鼠随机分为空白对照组、损伤对照组和HSYA治疗组,每组10只。采用Allens’s打击法建立急性脊髓损伤大鼠模型,分别于术后1、7、14天观察各组大鼠行为学评分,术后14天通过免疫组化方法观察脊髓损伤部位神经细胞caspase-3 p20、Bcl-2和Bax表达。结果HSYA治疗组与损伤对照组大鼠下肢功能均有恢复（P〈0.05）,且HSYA治疗组恢复更明显（P〈0.05）;与损伤对照组比较,HSYA治疗组caspsase-3p20阳性细胞数表达明显减少（P〈0.05）,Bcl-2阳性细胞显著增加（P〈0.05）,Bax阳性细胞明显减少（P〈0.05）。结论 HSYA对急性脊髓损伤模型大鼠神经细胞凋亡有明显抑制作用,从而减少脊髓损伤部位继发性损伤,促进功能恢复。     

肿瘤坏死因子受体家族与脊髓损伤后的细胞凋亡信号传递

神经元凋亡是脊髓损伤后二次损伤的关键因素。在脊髓损伤中,凋亡细胞可于受伤脊髓部位甚至周边节段被检测出来,凋亡发生于几乎脊髓所有种类的细胞中。发生于损伤局部的细胞凋亡如何导致神经功能丧失目前仍不明确,但研究已经证实,损伤后脊髓局部多种生物化学信号的出现是导致脊髓内各种细胞凋亡的始动因素。现对肿瘤坏死因子受体家族与细胞凋亡的关系进行综述,并探讨脊髓损伤后的凋亡信号传递机制。     

Caspase-1及其下游炎症因子在大鼠脊髓损伤中的表达及意义

目的探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）及其下游炎症因子自介素-1beta（IL-1β）和白介素-18（IL-18）在大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）中的表达及意义。方法将成年雄性Sprague—Dawley（SD）大鼠84只随机分为对照组和脊髓损伤组,每组42只。脊髓损伤组应用改良的Allen’S重物打击法建立大鼠脊髓损伤模型,对照组只做全椎板切除。以损伤部位为中心取材,HE染色观察脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测Caspase-1、IL-1β及IL-18的表达情况。结果对照组大鼠脊髓组织中Caspase-1及其下游炎症凶子阳性细胞有少量表达,而脊髓损伤组Caspase—1及其下游炎症因子的阳性表达较对照组显著增高,Caspase-1及IL-18存脊髓损伤后3d表达达到峰值,而IL-1β于损伤后6h表达达到高峰。结论Caspase—1及其下游炎症因子可能参与了SCI后的继发性损伤,并且可能是继发性脊髓损伤的主要损伤因素之一。     

Fas蛋白在鼠急性脊髓组织损伤中分布特点的初步研究

目的 :探讨大白鼠急性脊髓损伤后损伤区Fas蛋白的表达及其分布特点。方法 :Wistar雌性大鼠 4 2只 ,使用改良Allen氏法制作急性脊髓损伤模型 36只 ,采取HE、Nissl染色和免疫组化方法 ,检测损伤后 1 ,4 ,8,2 4 ,72h及 7d的脊髓组织。结果 :在损伤后 4h ,损伤段灰质可见Fas阳性细胞 ,8h表达达高峰。正常组未见Fas阳性细胞表达。高倍镜观察 ,阳性细胞具有凋亡细胞的特征。结论 :Fas蛋白可能在诱导脊髓损伤后神经细胞凋亡的过程中 ,发挥着重要作用     

急性损伤对大鼠脊髓血管内皮生长因子表达的影响

目的了解血管内皮生长因子(VEGF)在急性损伤后的大鼠脊髓中表达的动态变化。方法采用改良Allen重量打击法大鼠急性脊髓损伤模型，用免疫组织化学方法观察了急性损伤后大鼠脊髓VEGF表达的动态变化。结果急性损伤12hVEGF即可在大鼠脊髓软脊膜、脊髓内的血管内皮细胞、胶质细胞和巨噬细胞内表达，1d达高峰，并持续到3d，7d时开始下降。结论急性损伤可上调VEGF在脊髓血管内皮细胞、胶质细胞和巨噬细胞内的表达，VEGF可能通过促进血管内皮细胞生长对损伤神经元起一定的保护作用。     

脊髓损伤后碱性成纤维细胞生长因子的表达及意义

目的　观察脊髓损伤 (SCI)后大鼠后肢功能恢复情况 ,以及损伤后不同时间碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)表达的变化及意义。　方法　取雌性 SD大鼠 4 0只随机分为 5组 (n=8) :正常对照组、伤后 2 ,5 ,1 2和 1 8d组。 Allen法致伤脊髓。免疫组织化学和图像分析方法观察神经细胞 b FGF表达变化。大鼠综合行为评分法(CBS)对各级神经功能评分。　结果　 (1 )在行为观察中 ,发现大鼠脊髓损伤后有自行恢复倾向 ,损伤后 1 8d后肢功能恢复 6 8%。 (2 ) b FGF表达 :2 ,5 ,1 2 d b FGF表达量及 b FGF阳性细胞数目呈进行性增加 ,但在 1 8d开始下降。损伤后的前 1 2 d,各组 b FGF灰度值与 CBS评分有显著的相关性 (r=- 0 .95 98,P<0 .0 1 )。　结论　 (1 )急性脊髓损伤后脊髓有自我修复的倾向 ;(2 ) b FGF在急性脊髓损伤后早期可能对脊髓的再生和自我修复起重要作用     

神经生长因子对脊髓损伤后脊髓神经元凋亡的影响

目的：探讨神经生长因子（NGF）对损伤脊髓神经元凋亡的影响及保护机制。方法：采用Allen的weight dropping(WD)法挫伤大鼠Ts节段脊髓，于术后0、2、4、8、12、24h经蛛网膜下隙导管各注入NGF溶液（20／60g)，并与生理盐水组和正常对照组作对照，采用原位末端标记法（TUNEL法）标记脱氧核糖核酸（DNA）片段，检测脊髓损伤前后发生凋亡的脊髓神经元，结果：正常组大鼠脊髓中未见凋亡神经元，生理盐水组于伤后2h始出现凋亡神经元，NGF组与生理盐水组相比较，凋亡神经元明显减少（P＜0．01），结论：NGF可抑制脊髓损伤后神经元的凋亡，从而保护损伤的神经组织。     

Caspase-1及其激活的IL-18在大鼠急性脊髓组织损伤后的表达及意义

目的 探讨Caspase-1及其激活的细胞因子白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)在大鼠急性脊髓组织损伤(SCI)后的表达及意义.方法 成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠48只随机分为对照组和脊髓损伤组,每组24只.两组依据损伤后取材时间各再分4个亚组.脊髓损伤组应用改良的Allen's重物打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型,对照组只做T9全椎板切除术.分别于术后6h、1d、3d、7d处死各组大鼠,以损伤部位为中心取材,HE染色观察脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测Caspase-1、IL-18的表达情况.结果 对照组大鼠脊髓组织中少量细胞Caspase-1、IL-18表达阳性.脊髓损伤后6h,损伤组Caspase-1、IL-18的表达高于对照组,1d继续增高,3d表达最多,7d略有降低,但仍高于对照组.脊髓损伤组各时间点脊髓组织中Caspase-1和IL-18表达阳性的细胞数较对照组显著增高(P＜0.01).结论 正常大鼠脊髓组织内存在少量Caspase-1、IL-18的表达.大鼠脊髓损伤后,Caspase-1和IL-18的表达迅速增强.Caspase-1和IL-18的表达增强表明其可能参与了脊髓继发性损伤,并可能是损伤性因素之一.