鼓槌石斛生长发育规律研究

目的掌握鼓槌石斛在栽培条件下的生长发育规律。方法定株丛、定时期对鼓槌石斛生根、开花结果、植株生长进行观察。结果人工条件下,从播种到出瓶炼苗,需要近一年的时间;一定的湿润条件能促进新根的快速萌发生长;鼓槌石斛的盛花期为4月初至4月中旬;茎的长度生长时间仅有60~70d,此后不再生长,同时,叶片的数量也不再增加,但可保持数年不落。结论鼓槌石斛生长发育的研究结果为其生产栽培提供科学依据。     

金钗石斛的位点特异性PCR鉴别研究

目的建立一种简便、实用的金钗石斛的DNA分子鉴别方法。方法根据金钗石斛及其他黄草类、枫斗类石斛的rDNA ITS序列数据库,寻找金钗石斛特异性的序列位点,设计专用于金钗石斛鉴别的PCR引物,用该引物在不同条件下扩增石斛属植物的模板DNA,建立只有金钗石斛具有阳性扩增的PCR鉴别条件。结果在66℃、40 s的复性条件下进行鉴别PCR,金钗石斛的模板DNA扩增出约300 bp的阳性扩增带,而其他39种石斛的模板DNA在同样条件下无扩增产物。结论运用位点特异性PCR能有效地从其他石斛属植物中鉴别出金钗石斛,该方法具有高效、准确、简便、省时的特点,应用前景广泛。     

鼓槌石斛化学成分的研究

目的 研究鼓槌石斛的化学成分,为阐明其活性成分,开发其资源提供科学依据。方法 采用硅胶柱层析法进行分离,根据光谱数据鉴定结构。结果 从中分得4个化合物,分别为：2,4,7－三羟基－9,10－二氢菲（Ⅰ）,2,7－二羟基－3,4,6－三甲氧基菲(Ⅱ）,5,4′－二羟基－3,3′－二甲氧基联苄（Ⅲ）,3,4－二羟基苯甲酸（Ⅳ）。结论 化合物Ⅰ-Ⅳ均为首次从石斛属植物中分得。     

鼓槌石斛化学成分的研究

目的 研究鼓槌石斛的化学成分，为阐明其活性成分，开发其资源提供科学依据。方法 采用胶柱层析法进行分离，根据光谱数据鉴定结构。结果 从中分得10个化合物，分别为：erianin(Ⅰ），chrysotobibenzy(Ⅱ),chrysotoxene(Ⅲ),confusarin(Ⅳ),erianthridin(Ⅴ),dendroflorin(Ⅵ),chrysotoxone(Ⅶ),dengibsin(Ⅷ）和β-sitosterol(Ⅸ），daucosterol(Ⅹ)。结论 化合物Ⅴ为首次从石斛属植物中分得，化合物Ⅵ为首次从该植物中分得。     

霍山石斛及相似种的位点特异性PCR鉴别

目的设计出霍山石斛的位点特异性鉴别引物,仅通过PCR就能对霍山石斛的真伪进行准确鉴别。方法利用石斛属植物基因库中rDNA ITS序列数据库进行同源性比较,在与霍山石斛差异较大的区段设计1对特异性引物,然后对19份石斛属植物DNA模板进行PCR扩增,阳性者即为霍山石斛正品。结果发现在退火温度为60℃时,该引物能把霍山石斛的模板从19份石斛属植物中扩增出来,而其他的石斛属植物均为阴性。结论运用位点特异性鉴别引物成功地对霍山石斛进行PCR鉴别,该鉴别反应重现性好,能在霍山石斛鉴别时发挥重要的作用,与形态学、DNA测序等鉴别方法相比,该方法具有高效、准确、简便、省时等优点。     

鼓槌石斛及其化学成分的抗肿瘤活性作用

鼓槌石斛及其化学成分的抗肿瘤活性作用马国祥,徐国钧,徐珞珊,王佾先（中国药科大学生药学教研室,江苏省肿瘤研究所,南京２１０００９）关键词鼓槌石斛;毛兰素;毛兰菲;鼓槌菲;抗肿瘤活性中药石斛主要来源于兰科Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ石斛属Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ...     

云南鼓槌石斛提取物体外自由基清除活性研究

目的 研究鼓槌石斛（Dendrobium chrysotoxum） 95％乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇五种粗提物体外自由基清除活性.方法 采用DPPH自由基清除法对云南鼓槌石斛五种提取物的体外自由基清除作用进行研究.结果 鼓槌石斛乙酸乙酯粗提物的自由基清除效果最显著,其IC50为0.12 mg/mL.结论 鼓槌石斛提取物在体外自由基清除活性方面有一定的应用价值.     

中药石斛显微鉴定研究Ⅲ

本文报道了剑叶石斛Dendrobium acinaciforme Foxb等8种“石斛”的显微鉴定。主要比较其表皮和角质层,皮下层细胞,维管束、外侧纤维群,木质部导管,内侧纤维群等。并附有这8种石斛茎横切面图。     

石斛属药用植物鉴定研究

石斛是一种常用中药，以新鲜或干燥茎入药。有益胃生津、滋阴清热之功效。不同种类石斛药用成分及含量差异较大．药理活性也不尽相同，历代本草著作中称之为医工难辨之种类。近年来，以石斛为原料开发的保健品日益走俏，对石斛的研究也方兴未艾。但目前市场上流通的商品石斛中，药典收载较少，主流品种大多为非药典收载种；植株在采集后，     

广地龙特异性PCR分子鉴定

【目的】筛选出对广地龙具有特异性鉴别意义的PCR引物,建立一种快速、准确鉴别广地龙基原真实性的方法。【方法】收集药典收载的4种地龙原动物以及市场常见地龙混淆品6种,从GenBank数据库中下载有关蚯蚓的12SrRNA基因序列,采用通用引物对10种样本PCR扩增后进行测序,依其序列间差异设计3对非保守区特异性引物,筛选对广地龙具有特异性扩增的引物。【结果】引物12St/12Sf对广地龙产生特异性扩增,当退火温度提升至64℃时,其反应表现出高度特异性,仅广地龙具有良好的单一扩增带,而其他样品在同样的条件下无扩增带。所得特异性引物在15种市售广地龙药材中验证结果良好,与传统形态学鉴定结果基本一致。【结论】引物12St/12Sf可作为广地龙物种鉴定的特异性标记物,可以实现广地龙近缘多个物种快速而又准确的鉴定,且不受实验材料的完整性、加工干燥等因素的影响。     

石斛属植物及其混淆品的茎表皮细胞特征及其鉴别价值

目的 分析石斛及其混淆品茎表皮细胞特征,评价其鉴别价值。方法 采用石蜡切片技术制作药用石斛及其混淆品的茎横切片;利用测微尺测量茎表皮细胞的显微特征。结果 39种药用石斛及其混淆品的茎细胞形状特征和细胞壁的增厚程度种间差异较大,而种内差异较小;石斛及其混淆品茎表皮细胞的细胞壁有3种增厚现象,分别为不均匀增厚型、均匀增厚型和无增厚型;金钗石斛属于无增厚型,马鞭石斛和铁皮石斛属于不均匀增厚型,但密花石豆兰和云南石仙桃属于均匀增厚型;《中国药典》收载药用石斛茎表皮细胞的切向和径向直径比值为小于1.65±0.24或大于2.39±0.49,而3种混淆品均为在（1.98±0.23）～（2.35±0.77）。结论 表皮细胞类型和大小以及切向与径向直径比值可以作为鉴别石斛的主要显微特征,尤其对《中国药典》收载的3种药用石斛能够提供更加可靠的鉴别依据。     

温度对金钗石斛生长及代谢的影响

目的 研究温度对一年生和两年生金钗石斛生长和生理代谢的影响。方法 设置4、15、25、35、45 ℃ 5个温度梯度,人工气候箱培养,观察一年生和两年生金钗石斛生长及生理代谢指标的变化情况。结果 25 ℃培养下,金钗石斛株高增长量最大,其叶片和根系中丙二醛、可溶性糖和游离脯氨酸量均最低,且随处理时间的延长并无显著变化。结论 25 ℃是一年生和两年生金钗石斛生长的最佳温度。     

金钗石斛茎的化学成分研究

目的 对金钗石斛Dendrobium nobile茎的化学成分进行研究。方法 采用正相及反相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱及制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,根据波谱数据进行结构鉴定。结果 分离得到11个化合物,分别鉴定为石斛碱（1）、石斛醚碱（2）、邻苯二甲酸丁酯（3）、松脂素（4）、N-反式桂皮酸酰对羟基苯乙胺（5）、N-反式阿魏酸酰对羟基苯乙胺（穆坪马兜铃酰胺,6）、N-顺式阿魏酸酰对羟基苯乙胺（7）、N-反式香豆酰酪胺（8）、N-顺式香豆酰酪胺（9）、山药素III（10）、二氢松柏醇二氢对羟基桂皮酸酯（11）。结论 化合物3、5～9均为首次从该植物中分离获得,其中化合物9为首次从石斛属植物中分离获得。     

铁线莲属8种药用植物ITS序列分析

目的 通过测定并比较柱果铁线莲、单叶铁线莲、威灵仙、山木通、毛蕊铁线莲、转子莲、女萎和天台铁线莲的ITS序列,为铁线莲属药用植物的分子鉴定提供依据。方法 利用PCR法从叶片基因组DNA中扩增ITS,借助Clustal X、MEGA、DNASTAR等软件比较和分析ITS的序列特征。结果 铁线莲属8种药用植物ITS1与ITS2之间的长度为534～561 bp,变异位点50个,信息位点22个;天台铁线莲与转子莲的遗传距离最小,与女萎遗传距离最大,亲缘关系最远。序列已提交至NCBI数据库,登录号为JF714638－JF714645。结论 获得铁线莲属8种药用植物的ITS序列,为分子鉴定奠定了基础。     

霍山石斛细胞悬浮培养及条件优化

目的 利用细胞悬浮培养技术生产霍山石斛单细胞,解决石斛药用植物资源短缺问题。方法 以霍山石斛叶片等外植体为实验材料,通过不同的制备方法获得霍山石斛单细胞,研究霍山石斛细胞培养的多种影响因素,应用正交设计优化霍山石斛细胞悬浮培养的条件。结果 在蔗糖35 g/L,NH₄NO₃ 1.3 g/L,pH 5.6,激素IAA 0.4 mg/L,6-BA 1.0 mg/L,培养时间14～18 d,在此条件下培养的霍山石斛细胞数为9.42×10⁵个/mL。结论 经过4次继代培养后石斛细胞多为圆状或椭圆状,细胞碎片减少。应用优化的细胞悬浮培养条件,能获得较大量的霍山石斛细胞。     

黄花白及的SCAR分子标记转化研究

目的 建立黄花白及的SCAR标记,为黄花白及的分子鉴定提供科学依据。方法 用随机引物进行随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA,RAPD）标记筛选,获得特异的RAPD标记条带,经回收、克隆、测序后,根据RAPD标记条带的两端序列设计特异引物进行常规PCR反应,以获得序列特征化扩增区（sequence characterized amplified region,SCAR）标记。结果 利用50对随机引物筛选得到黄花白及的一条896 bp的特异片段,可以区别于小白及、独叶白芨和白及。该序列设计特异引物后,经过多次重复试验,该RAPD标记的特异片段已成功转化为SCAR标记。结论 建立的SCAR标记条带清晰明亮,结果稳定,可作为黄花白及分子鉴定的依据。     

铁皮石斛人工栽培居群的遗传多样性研究

目的 了解铁皮石斛人工栽培居群的遗传多样性,为种质资源的保护与新品种的选育提供基础。方法 利用RAPD分子标记对浙江义乌、天台、建德、武义,云南麻栗坡、勐海的14个居群的铁皮石斛和1个居群的紫皮石斛进行遗传多样性分析。结果 从225个RAPD引物中筛选出15个引物,对105个铁皮石斛和3个紫皮石斛样本进行PCR扩增,共扩增出138条带,其中133条为多态性条带,多态性条带比率（PPB）为96.38%;14个铁皮石斛居群的多态位点（PPL）在10.79%～76.26%,平均为45.32%。结论 全国主产区人工栽培的铁皮石斛遗传多样性丰富,铁皮石斛种质的亲缘关系远近与其地理种源具有显著的相关性,与栽培地点无关。     

藏红花病毒病原的分子鉴定

目的 研究栽培藏红花的病毒病原。方法 综合运用病毒粒子形态和细胞病理学电镜观察、DAS-ELISA检测、RT-PCR检测及序列测定等技术进行病原鉴定。结果 透射电镜负染色观察到病株汁液含有600～900 nm的线状病毒粒子;超薄切片观察到病株细胞质内有大量线状病毒粒子、II型风轮状内含体和电子致密无定型体,符合菜豆黄花叶病毒Beam yellow mosaic virus（BYMV）的病理学特征。应用BYMV抗体进行病株DAS-ELISA检测结果为阳性,应用马铃薯Y病毒属特异性引物Sprimer和M4对病株进行RT-PCR检测结果为阳性,对阳性结果进行分子克隆及序列测定发现目标序列与BYMV有99%的同源性。结论 综合检测结果判明侵染浙江藏红花的病毒病原为BYMV。     

我国不同地区天门冬核DNA ITS序列分析

目的 研究我国不同地区天门冬核DNA ITS序列差异及其与地理位置的关系,为不同居群天门冬的鉴定和道地产区的确定提供理论依据。方法 运用PCR法对25个地区的75个样本ITS序列扩增后双向测序,用软件DNAMAN和MEGA 4分析测序结果。结果 每个地区的3个样本的ITS序列基本相同,不同地区样本间的ITS全序列存在一定差异,ITS2片段变异高于ITS1。贵州产天门冬遗传分化度较大,变异位点和信息位点较多。ITS序列构建的系统树表明,同一个地区的3个样本优先聚类,然后是同省的样本聚类,位于北纬24.6°～36.6°和22.2°～24.4°的样本分别聚为1大支;第1大支中包括青海、湖南和贵州省的样本,第2大支则包括浙江、广东、云南和广西4省的样本。结论 ITS序列可鉴定不同产地的天门冬,贵州省是天门冬药材道地产区之一,不同地区天门冬的亲缘聚类主要与纬度相关,与经度关系不大。     

四倍体平贝母的诱导及鉴定

目的 运用组织培养技术诱导平贝母四倍体。方法 采用不同质量浓度（200、500、1 000、2 000 mg/L）秋水仙素和不同的诱导时间（12～72 h）处理平贝母愈伤组织。结果 离体培养条件下,平贝母激素自养型培养材料在秋水仙素诱导下得到四倍体,四倍体染色体4n＝44,四倍体植株出现明显的多倍体特征。结论 500 mg/L秋水仙素处理24 h为最佳组合,可以诱导四倍体平贝母以平贝母子球做鉴定材料,获得较好的结果。