受精和人工激活诱导的小鼠卵内游离钙离子变化

目的：研究哺乳类动物卵母细胞激活机制，方法：将休止于第二次成熟分裂中期的小鼠卵母细胞负载Ｆｕｒａ２－ＡＭ后用乙醇，钙离子载体，电脉冲或受精等激活，采用ＳｐｅｘＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子检测系统测定卵激活过程中细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度变化；电镜下检测卵激活后皮质颗粒释放，结果在含Ｃａ＾２＋（１．７ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１）的ＩＶＦ液中，精子受精诱发卵内Ｃａ＾２＋浓度波动，这种Ｃａ＾２＋波动持续达３－４ｈ直到     

烟碱诱导的海马脑片CA_1区长时程增强呈钙离子依赖性(英文)

目的:观察钙离子在烟碱诱导的大鼠海马脑片CA_1区长时程增强中的作用。方法:细胞外记录离体海马脑片CA_1区锥体细胞层群体峰电位。结果:至少烟碱1μmol·L~(-1)可诱导海马CA_1区长时程增强形成。移去脑脊液中的钙离子,烟碱不能诱导CA_1区长时程增强形成。硝苯地平1与10μmol·L~(-1)部分抑制而Tharpsigargin 1与10μmol·L~(-1)完全抑制烟碱诱导的长时程增强形成。结论:烟碱诱导的海马CA_1区长时程增强呈钙离子依赖性,胞外钙内流和胞内钙释放都参与了长时程增强形成。     

胞内钙离子浓度与咖啡因保护小脑颗粒神经元作用的关系(英文)

用凝胶电泳和 fura- 2荧光技术测定 [Ca2 + ]i方法研究咖啡因对低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的保护作用与 [Ca2 + ]i 升高之间的关系 .将体外培养的小脑颗粒神经元从高钾 ( 2 5mmol· L-1KCl)培养基中转移到低钾 ( 5mmol· L-1KCl)培养基中 ,神经元发生凋亡 .但低钾引起的神经元死亡可被咖啡因 ( 5- 2 0 mmol· L-1)浓度依赖性地保护 ,且咖啡因的这种作用不受蓝尼定 ( ryanodine) -敏感钙释放阻断剂蓝尼定和丹曲林 ( dantrolene)的影响 ;也不被 L-型钙通道阻断剂硝苯地平 ,尼莫地平 ,维拉帕米和 NMDA受体阻断剂地佐环平抑制 .结果说明 [Ca2 + ]i 的升高并不是咖啡因对小脑颗粒神经元的保护作用所必需的 .     

取卵后卵冠丘复合物体外孵育时间对IVF-ET受精和胚胎质量的影响

目的探讨体外受精-胚胎移植中取卵后卵冠丘复合物体外孵育时间对IVF-ET受精和胚胎质量的影响。方法对2012年10月-2013年1月进行体外受精-胚胎移植673个常规IVF-ET周期分为3组,组1取卵后〈1h授精,组2取卵后1-3h授精,组3取卵后3-4h授精,分别统计并比较组间的2PN受精率、1PN受精率,多PN受精率、优质胚胎率及优质囊胚形成率。结果组1的1PN受精率显著高于组2和组3,P〈0.05。其它变量均无显著差异。结论与取卵后1-4h授精相比,取卵后〈1h授精会显著增加1PN受精率,授精尽可能在取卵后1-4h内完成。且在取卵后1-4h内授精,其正常受精率、优胚率、囊胚形成率等都不受明显影响。     

乳腺肿瘤钙离子激活中性蛋白酶活性的变化及其意义

目的 观察乳腺肿瘤钙离子激活中性蛋白酶(CANP)活性的变化并探讨其临床意义。方法 用蛋白印迹分析法显示乳腺肿瘤细胞和组织CANP小亚基的蛋白水解或周期蛋白E低分子(LMW)片断的形成,并通过LabWorks软件进行结果定量分析以判断CANP活性的变化。结果乳腺癌细胞和组织CANP小亚基蛋白水解或LMW周期蛋白E的定量分析结果能反映CANP活性的变化。乳腺肿瘤组织和细胞CANP活性明显高于正常对照组;而且不同临床阶段乳腺癌之间CANP活性也存在明显差异,随着肿瘤的发展其CANP活性进一步显著升高。结论 周期蛋白E或CANP小亚基的蛋白水解程度可作为测定CANP活性的有效指标。乳腺肿瘤组织及细胞CANP活性均明显高于正常组织;CANP活性变化可作为判断乳腺肿瘤临床进展的重要标记。     

1－烯丙基氯－3诱导脑神经细胞内游离钠和游离钙离子的改变

１－烯丙基氯－３诱导脑神经细胞内游离钠和游离钙离子的改变谢克勤，张磊，高树君，厉保秋，孙克任山东医科大学毒理研究室（济南２５００１２）慢性１－烯丙基氯－３中毒主要损害周围神经系统，可引起接触工人轴突变性型周围神经病，患者电生理检查可见胖总神经传导速度...     

辣椒素对人心房肌的电生理效应(英文)

目的　研究辣椒素对人心房肌的电生理效应及其作用机制。方法　应用经典玻璃微电极方法记录人心房肌特殊细胞的动作电位。结果　辣椒素(1～ 30 μmol·L- 1)浓度依赖性地抑制人心房肌纤维的动作电位幅值 ,0期最大除极速率 ,舒张期 (4相 )除极化速率和起搏细胞放电频率 ,此外还缩短 90 %动作电位时程。应用L 型钙通道开放剂BayK86 44(0 .5 μmol·L- 1)可拮抗辣椒素对人心房肌纤维的上述电生理效应 ,但辣椒素受体竞争性抑制剂cap sazepine(10 μmol·L- 1)对辣椒素的效应并无影响。结论　辣椒素对人心房肌具有负性变时作用 ,并可缩短复极化时程。这些效应可能与其抑制钙离子内流有关。     

缓激肽受体介导的v-Ki-ras转化成纤维细胞内钙离子振荡的调节(英文)

由单个细胞内钙离子的分析显示:缓激肽B_2受体拮抗剂,抑制了缓激肽所诱导的在v-Ki-ras转化成纤维细胞内的钙离子振荡,B_1受体拮抗剂无此作用。降低胞外钙离子浓度以及用thapsigargin处理细胞均阻止了钙离子振荡的发生。这些结果提示,持续地激活B_2受体,导致钙离子内流及钙离子从内源性贮存部位释放的波动,从而引起钙离子的振荡。     

神经对大鼠骨骼肌小电导钙激活钾通道(SK3)表达的影响

目的小电导钙激活的钾通道(SK3)介导了动作电位后的后超极化电位的产生,在调节可兴奋细胞的膜电位中起关键作用。使去神经支配和肌强直营养不良患者骨骼肌SK3表达显著上调。本实验拟观察神经对骨骼肌SK3钾通道表达的调节作用。方法在Wistar大鼠,分别通过切断坐骨神经和局部注射河豚毒素(TTX)建立比目鱼肌去神经支配模型,和通过钳夹损伤比目鱼肌神经建立比目鱼肌去神经后神经再支配模型。在体给予去神经比目鱼肌频率为30Hz的电刺激(100脉冲/100 s)。实验结束后,免疫荧光法测定比目鱼肌中SK3钾通道的表达和定位;提取比目鱼肌组织总mRNA和蛋白,逆转录PCR和Western Blot分别检测SK3 mRNA和蛋白水平。结果切断坐骨神经能显著上调比目鱼肌SK3 mRNA和蛋白表达,且分别在术后第6 d和第9 d到达稳定。TTX诱导肌肉瘫痪也能显著上调比目鱼肌SK3 mRNA和蛋白表达。钳夹比目鱼肌神经所造成的暂时神经损伤能诱导SK3蛋白表达上调,而随着神经功能的恢复SK3蛋白表达也随之显著下调。在切断除坐骨神经术后6 d,在体给予电刺激6 d能显著下调比目鱼肌SK3的高表达;而且,在去除坐骨神经的同时给予电刺激则能阻止比目鱼肌SK3表达的上调。结论神经对骨骼肌SK3钾通道表达具有抑制作用,其作用与唤起肌肉活性密切相关。在体电刺激能抑制和防止去神经诱导的骨骼肌SK3蛋白表达上调,可能是改善神经损伤后或相关疾病所致的肌强直症状的有效手段之一。     

Intracellular calcium in the fertilization and development of mammalian eggs

1. Mammalian eggs are arrested at metaphase of their second meiotic division when ovulated and remain arrested until fertilized. The sperm delivers into the egg phospholipase C (PLC) zeta, which triggers a series of Ca(2+) spikes lasting several hours. The Ca(2+) spikes provide the necessary and sufficient trigger for all the events of fertilization, including exit from metaphase II arrest and extrusion of cortical granules that block the entry of other sperm. 2. The oscillatory Ca(2+) signal switches on calmodulin-dependent protein kinase II (CaMKII), which phosphorylates the egg-specific protein Emi2, earmarking it for degradation. To remain metaphase II arrested, eggs must maintain high levels of maturation-promoting factor (MPF) activity, a heterodimer of CDK1 and cyclin B1. Emi2 prevents loss of MPF by blocking cyclin B1 degradation, a process that is achieved by inhibiting the activity of the anaphase-promoting complex/cyclosome. However, CaMKII is not the primary initiator in the extrusion of cortical granules. 3. Ca(2+) spiking is also observed in mitosis of one-cell embryos, probably because PLCzeta contains a nuclear localization signal and so is released into the cytoplasm following nuclear envelope breakdown. The function of these mitotic Ca(2+) spikes remains obscure, although they are not absolutely required for passage through mitosis. 4. Intriguingly, the pattern of Ca(2+) spikes observed at fertilization has an effect on both pre- and postimplantation development in a manner that is independent of their ability to activate eggs. This suggests that the Ca(2+) spikes set in train at fertilization are having effects on processes initiated in the newly fertilized egg but whose influences are only observed several cell divisions later. The nature of the signals remains little explored, but their importance is clear and so warrants further investigation.     

油茶皂甙对缺血大鼠心肌线粒体Na^＋、Ca^2＋、Mg^2＋含量及ATPase活性的影响

目的观察大鼠心肌缺血时心肌线粒体Na 、Ca2 、Mg2 含量、ATPase活性的变化及油茶皂甙(SQS)对它们的影响。方法以皮下多点注射异丙肾上腺素(ISO4mg·kg-1)诱导心肌缺血损伤为模型 ,测定Na 、Ca2 、Mg2 含量及ATPase活性。结果心肌缺血时线粒体Mg2 含量明显减少 ,Na 、Ca2 含量显著增多 ;Na _K _ATPase、Ca2 _Mg2 _ATPase活性显著下降。SQS(0 2mg·kg-1,iv)能显著对抗缺血心肌线粒体Na 、Ca2 、Mg2 含量及Na _K _ATPase、Ca2 _Mg2 _ATPase活性的上述改变。结论SQS具有抗钠钙超载的心肌细胞保护作用。     

细胞外钙受体的结构特点以及临床应用的新领域

细胞外钙受体 (CaR)对调节机体细胞外钙 (Ca2 + o )平衡发挥着重要作用。CaR属于由G蛋白介导的受体 ,是由 10 79个氨基酸组成的多肽。CaR广泛分布于甲状旁腺、甲状腺C细胞、肾脏、肠、骨等参与钙调节的重要器官 ,其基因缺损可导致钙调节紊乱。由于CaR的生理意义非常重要 ,它已成为治疗钙代谢紊乱性疾病的靶点。CaR拮抗剂和激动剂可分别用于治疗甲状旁腺机能亢进、骨质疏松症和肾结石 ,颇具临床应用潜力     

Toxic trace metals and human oocytes during in vitro fertilization (IVF)

Trace exposures to the toxic metals mercury (Hg), cadmium (Cd) and lead (Pb) may threaten human reproductive health. The aim of this study is to generate biologically-plausible hypotheses concerning associations between Hg, Cd, and Pb and in vitro fertilization (IVF) endpoints. For 15 female IVF patients, a multivariable log-binomial model suggests a 75% reduction in the probability for a retrieved oocyte to be in metaphase-II arrest for each μg/dL increase in blood Pb concentration (relative risk (RR) = 0.25, 95% confidence interval (CI) 0.03–2.50, P = 0.240). For 15 male IVF partners, each μg/L increase in urine Cd concentration is associated with an 81% decrease in the probability for oocyte fertilization (RR = 0.19, 95% CI 0.03–1.35, P = 0.097). Because of the magnitude of the effects, these results warrant a comprehensive study with sufficient statistical power to further evaluate these hypotheses.     

Reproductive toxicity of Aroclor-1254: Effects on oocyte, spermatozoa, in vitro fertilization, and embryo development in the mouse

Polychlorinated biphenyls (PCBs) have been reported to adversely affect reproduction in laboratory and wild animals. The present study was undertaken to determine the toxic potential of Aroclor-1254 (A-1254) on in vitro fertilizing ability of oocytes and epididymal sperm and on preimplantation embryo development in the mouse. A-1254 was added to the IVF medium at concentrations of 0.01, 0.1, 1.0, and 10.0 μg/mL. Cumulus masses containing the oocytes were obtained from superovulated B6D2F1 mice and were placed in the culture medium containing A-1254 to which epididymal sperm, capacitated in a medium without A-1254, were added. The IVF rate was assessed 20 to 24 h after insesemination. A-1254 significantly reduced the mean percent ova fertilized even at 0.1 μg/mL. Incubation of the cumulus masses in various concentrations of A-1254 for 6 h, followed by insemination with sperm capacitated in the presence of A-1254, also significantly reduced the IVF rate. Capacitation of sperm in A-1254-containing medium, followed by co-culture with untreated oocytes, failed to affect the IVF rate. No significant effect on sperm motility was observed following exposure to 1 and 10 μg/mL of A-1254. Estradiol-17 β also reduced the IVF rate, however, the effect of A-1254 was more severe compared to the estradiol treatment. Furthermore, addition of A-1254 to the embryo culture medium was associated with a significant decrease in embryo growth at 48 h and 96 h. These results demonstrate adverse effects of A-1254 on oocytes, IVF, and embryonic development in the mouse.     

普鲁托品对兔血小板内钙的影响(英文)

目的:研究普鲁托品(Pro)对血小板内钙离子水平的作用,方法:用Fura 2-AM作荧光指示剂,测定血小板内钙浓度。结果:在胞外含CaCl_2 lmmol·L~(-1)时,Pro 10,20和40 μmol·L~(-1)对ADP,花生四烯酸(AA)和血小板激活因子(PAF)引起的血小板内钙变化分别由(420±57),(280±36)和(350±42)nmol·L~(-1)降至(320±26),(264±21)和(180±14)nmol·L~(-1),(210±17),(184±21)和(143±16)nmol·L~(-1)及(282±31),(223±30)和(165±15)nmol·L~(-1),在依他酸lmmol·L~(-1)存在时,Pro 10,20和40 μmol·L~(-1)呈浓度相关性减少ADP,AA和PAF诱导的血小板内钙释放及外钙内流,结论:Pro不仅抑制血小板的内钙释放,而且抑制其外钙内流。     

异丙酚和硫喷妥钠对大鼠心肌细胞钙离子移动的影响

目的　观察不同浓度异丙酚和硫喷妥钠对氯化钾、异丙肾上腺素和咖啡因诱发的大鼠心肌细胞钙离子移动的影响 ,探讨其心肌抑制作用的机制。方法　用Fluo 3AM钙荧光指示剂染色培养的大鼠心肌细胞 ,在激光共聚焦显微镜下动态观察用药前和使用临床麻醉诱导峰浓度和 5倍诱导峰浓度的异丙酚 (5 0、2 5 0 μmol·L-1)和硫喷妥钠 (10 0、5 0 0μmol·L-1)后 ,氯化钾、异丙肾上腺素和咖啡因诱发的细胞内钙离子荧光强度的变化。结果　诱导峰浓度的异丙酚和硫喷妥钠减弱氯化钾和异丙肾上腺素诱发的钙离子跨膜内流 ,细胞内钙荧光强度的峰值下降 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,硫喷妥钠的抑制作用较异丙酚大。 5倍诱导峰浓度的异丙酚和硫喷妥钠使钙离子跨膜内流进一步降低。但两种浓度的异丙酚和硫喷妥钠对咖啡因诱发的细胞肌浆网内储存钙的释放、钙荧光强度的升高均无影响 (P >0 0 5 )。结论　异丙酚和硫喷妥钠呈浓度依赖地抑制电压门控和受体门控性钙通道的开放 ,钙离子跨膜内流 ,降低兴奋收缩耦联时细胞内钙离子浓度 ,这可能是其心肌抑制作用的原因之一 ,而对肌浆网的功能无明显影响     

压力超负荷左心室肥大和心衰大鼠心肌收缩系统Ca~(2 )敏感性和肌浆网Ca~(2 )释放(英文)

目的:探讨压力超负荷左心衰心肌收缩能力下降的亚细胞机制。方法:采用升主动脉缩窄法制备左心室压力超负荷心肌肥大(LVH)和充血性心衰(CHF)大鼠病理模型;采用皂苷500或50mg·L~(-1)制备左室肌小梁蜕膜标本,皂苷500mg·L~(-1)蜕膜标本的相对Ca~(2 )激活张力(T_(6.0)％和T_(5.6)％)和皂苷50mg·L~(-1)蜕膜标本的咖啡因挛缩幅值分别是收缩系统Ca~(2 )敏感性和肌浆网Ca~(2 )释放的指标。结果:1)基础状态下,LVH、CHF和同龄假手术对照大鼠的相对Ca~(2 )激活张力不存在显著差异(P>0.05);但变力因素咖啡因10mmol·L~(-1)干预后Ca~(2 )激活张力的增量δT％在LVH组和CHF组明显高于对照组(P<0.01);2)咖啡因5和10mmol·L~(-1)引发的挛缩幅值在对照组为(0.66±0.14)和(1.20±0.27)g/mm~2,LVH组略低于对照组19.8％和25.8％(P<0.05),CHF组大幅低于对照组78.8％和80.9％(P<0.01)。结论:导致衰竭心肌收缩能力低下,可能主要源于肌浆网Ca~(2 )释放功能的显著下降而非收缩系统的Ca~(2 )敏感性改变。     

锌对大鼠成骨细胞内游离钙离子浓度和钙调蛋白活性的影响

实验旨在阐明锌对体外培养大鼠成骨细胞胞内游离钙离子浓度 ( [Ca2 +]i)及钙调蛋白 (CaM)活性的影响 .各研究因素分别作用于成骨细胞 3d或短时作用后 ,分别测定 [Ca2 +]i 和CaM活性 ;采用CaM PDE实验体系深入研究锌对CaM可能存在的潜在作用 .结果表明 :无论是长期或短时作用 ,锌对大鼠成骨细胞 [Ca2 +]i 及CaM活性均无影响 ;在CaM PDE实验体系中 ,低浓度锌可以激活CaM ,但高浓度抑制CaM ,这可能与锌竞争结合CaM上钙结合位点有关 .在本实验条件下 ,锌对Ca2 +/CaM信号途径无影响 ,但具有潜在激活或抑制CaM的生物学效应     

牛磺酸抗脂质过氧化作用与调节Ca~（2＋）作用

在培养心肌细胞缺氧－再给氧模型上，发现牛磺酸（２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１，终浓度）能显著降低细胞内脂质过氧化物（ＬＰＯ）荧光强度；剂量依赖性地提高心肌细胞超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性；以荧光比率法（荧光探针为Ｉｎｄｏ－１－ＡＭ）在粘附式细胞仪（ＡＣＡＳ５７０）上测定细胞内游离Ｃａ２＋荧光比率，结果显示缺氧及再给氧后细胞内Ｃａ２＋荧光比率明显升高，２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１牛磺酸能显著减少Ｃａ２＋荧光比率；分别以２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１、０．４ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｃａ２＋及０．１ｍｍｏｌ·Ｌ－１维拉帕米处理细胞，牛磺酸能降低高Ｃａ２＋引起的细胞搏动加快；而提高低Ｃａ２＋及维拉帕米处理后的细胞搏动。提示牛磺酸对培养心肌细胞再给氧损伤有保护作用，其机理与其提高心肌细胞ＳＯＤ活性、降低细胞内游离Ｃａ２＋浓度及对细胞Ｃａ２＋双向调节作用有关。