呼吸道合胞病毒感染大鼠脊髓背根节突触囊泡素的表达与气道反应性的关系

目的 研究呼吸道合胞病毒（RSV）感染后大鼠脊髓背根节感觉神经元结构蛋白的表达变化，阐明气道神经可塑性改变的分子机制。方法 1-2周龄SD大鼠共30只，区组随机分为空白对照组、RSV感染组和神经生长因子（NGF）抗体干预组，每组10只。RSV感染组和NGF抗体干预组采用每周1次RSV滴鼻法制作RSV感染模型，NGF抗体干预组先腹膜腔内注射山羊抗大鼠-βNGF抗体，3 h后按照RSV感染组相同的方法进行RSV感染。在第8周进行气道反应性测定，并留取C7-T5脊髓背根节组织，采用免疫组化和RT-PCR检测C7-T5脊髓背根节突触囊泡素的表达。结果 RSV感染组对不同浓度组胺（0.01-0.16 mg/mL）的气道反应性均显著高于空白对照组（P均〈0.05），NGF抗体干预组在≥0.08 mg/mL组胺刺激后气道反应性显著低于RSV感染组，在≥0.04 mg/mL组胺刺激后显著高于正常对照组（P均〈0.05）。RSV感染后突触囊泡素表达较对照组显著升高；NGF抗体干预后突触囊泡素的表达虽低于RSV感染组，但仍高于正常对照组。突触囊泡素mRNA表达亦呈现类似改变。相关分析显示C7-T5脊髓背根节突触囊泡素的蛋白表达与气道反应性呈正相关关系（r=0.813，P〈0.05）。结论 反复RSV感染后脊髓背根节感觉神经元突触囊泡素的表达增高，并与气道反应性增高密切相关。     

呼吸道合胞病毒感染大鼠气道神经营养因子水平与气道神经可塑性研究

目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染SD大鼠肺内神经营养因子水平的变化,及其与气道神经可塑性改变和气道高反应性间的关系.方法 1～2周龄SD幼鼠共20只,随机分为正常对照组和RSV感染组,每组10只.RSV感染组采用每周1次RSV滴鼻法制作RSV感染模型.第8周进行气道阻力测定,留取左肺行HE染色观察肺部病理学变化,免疫组织化学染色检测气道突触囊泡素(SYN)和神经丝(NF)的表达,原位杂交法检测肺组织RSV RNA.EUSA法检测肺组织中神经营养因子[神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养因子3(NT3)及神经营养因子4(NT4)]水平.结果 RSV感染组大鼠肺组织内可见大量炎症细胞浸润,原位杂交显示肺间质细胞中有明显的RSV RNA阳性信号,表明模型建立成功.RSV感染组气道反应性显著增高,气道感觉神经元SYN及NF的表达显著增高,肺部NGF及BDNF水平较对照组明显增高(P<0.05),而NT3及NT4水平与对照组无显著差异(P>0.05).NGF及BDNF浓度与气道SYN表达呈正相关(r1=0.892,r2=0.995,P<0.05),与NF表达呈正相关(r1=0.949,r2=0.936,P<0.05),与气道反应性也呈正相关(r1=0.929,r2=0.910,P<0.05).结论 RSV感染后肺部NGF、BDNF水平增高,并与气道神经可塑性变化和气道高反应性密切相关.     

双黄连对呼吸道合胞病毒感染的气道上皮细胞炎症因子释放的影响

目的：探讨双黄连及其含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的气道上皮细胞(A549)的炎症因子释放的影响及其药物作用机理。方法：以ELISA法测定炎症介质的含量，观察复方双黄连及其含药血清以不同的给药方式(Ⅰ组：感染前给药、Ⅱ组：感染时给药、Ⅲ组：感染后给药)对RSV刺激A549细胞引发的炎症介质IL-8、IL-6、TNF-α释放的作用。结果：RSV刺激气道上皮细胞A549后IL-8的分泌水平增加，而对IL-6、TNF-α影响不大；双黄连复方及其含药血清均能显降低RSV诱导A549释放的IL-8水平，并以感染前给药的途径下调IL-8的作用最为明显。结论：RSV能诱导气道上皮细胞释放炎症因子IL-8，双黄连可通过抑制RSV引起的IL-8释放，并在病毒感染的气道炎症控制中起着一定的作用。     

下呼吸道呼吸道合胞病毒感染患儿气道炎症的研究

目的研究下呼吸道呼吸道合胞病毒感染患儿的气道炎症情况。方法根据特应性疾病家族史分为无家族史组31例,有家族史组36例。所有患儿均进行痰液分析?肺功能检查及外周血嗜酸细胞计数与血清IgE测定。结果有无特应性疾病家族史的患儿在痰液细胞学检查中,淋巴细胞的比例、中性粒细胞比例和嗜酸细胞比例两组比较均差异无显著性(P>0.05),外周血嗜酸细胞计数与血清IgE水平上差异无显著性(P>0.05)。肺功能在代表气道反应性的指标扩张实验改善率方面存在显著性差异(P<0.05)。结论有特应性疾病家族史的患儿,下呼吸道在呼吸道合胞病毒感染后出现了气道高反应。     

呼吸道合胞病毒感染研究的现状

呼吸道合胞病毒(简称RSV)是一种人类广泛感染的病原体。在世界各地都有流行,特别是婴幼儿感染RSV后可能发生严重的毛细支气管炎和肺炎,并且近年来也成为院内感染的重要病原体。本文综述了最近国内外有关RSV感染在流行病学、发病机理、免疫应答、实验室诊断和防治各个方面的研究进展。流行病学情况:RSV是发达国家的幼儿和儿童最常见的呼吸道感染微生物[1]。在细支气管炎住院幼儿中40～80%,肺炎住院幼儿中20～25%是由RSV所引起。在美国,估计每年有10万人因RSV感染住院,耗资300万美元[2]。在发展中国家,RSV感染的流行病学与发达国家类…     

呼吸道合胞病毒感染的研究现状

<正> 呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytialvirus,RSV)是婴幼儿下呼吸道感染的主要病原体。婴幼儿RSV感染通常引起严重的毛细支气管炎和肺炎。近年来,人们对RSV感染进行了广泛深入的研究,在许多方面都取得了较大的进展。本文就RSV抗原特性、流行病学、抗病毒免疫、实验室诊断和防治现状综述如下。 1 RSV的抗原特性 RSV属副粘液病毒科肺炎病毒属的单链     

干扰素调节因子1在呼吸道合胞病毒感染后气道神经源性炎症的调控作用

目的 通过研究呼吸道合胞病毒(RSV)感染后的SD大鼠气道反应性和神经源性炎症的变化及干扰素调节因子1(IRF-1)的调控作用,探讨IRF-1在调控RSV感染后调控气道神经源性炎症的作用地位.方法 对4组SD大鼠(空白对照组、RSV感染组、IRF-1干扰组和IRF-1基因沉寂组)相应处理后进行气道反应性测定,取其左肺行HE染色,右肺行免疫组化检测P物质(SP)及降钙素基因相关肽(CGRP).结果 ①RSV感染组与空白对照组比较:气道反应性明显增高(P＜0.05),炎性细胞浸润明显增多,SP和CGRP的表达明显增多;②IRF-1干扰组与RSV感染组比较:气道反应性无明显差别(P＞0.05),炎性细胞浸润及SP、CGRP的表达无明显差别;③IRF-1基因沉寂组与RSV感染组相比,气道反应性明显降低(P＜0.05),炎性细胞浸润及SP、CGRP的表达明显减少.结论 IRF-1在RSV感染引起气道高反应性的过程中可能是通过参与调节神经源性炎症介质的表达来参与调控,IRF-1有望成为哮喘气道神经源性炎症一个新的治疗靶点.     

神经生长因子及其受体在呼吸道合胞病毒感染肺组织中的表达

目的 探讨NGF及其trk以p75受体在肺内的表达是否具有年龄依赖性，RSV感染是否会引起NGF表达增加。方法 将无病原体感染的F344大鼠分别于第2、4、8及12周龄时处死，并分别将2周龄(乳鼠)和12周龄(成年)大鼠分为RSV接种组和无病毒基质接种组。采用RT—PCR技术进行肺组织内NGF及其高亲和力受体(trkA)和低亲和力受体(p75)mRNA的定量分析，同时采用免疫分析法进行NGF蛋白的定量。结果 无病原体感染的大鼠肺组织中NGF及其受体的表达随年龄增加而逐渐减少，成年大鼠NGF及其受体mRNA和蛋白表达水平均较幼鼠降低50％。RSV感染可使乳鼠和成年大鼠肺内NGF、trkA和p75表达双倍增加。结论 肺内NGF及其受体的表达随着年龄的增加而出现生理性减少，但RSV感染可上调NGF及其受体的表达，这可能促发了RSV感染过程中和感染后异常的神经免疫炎症反应。     

小鼠呼吸道合胞病毒感染肺TLR4表达与气道高反应性

目的:研究小鼠呼吸道合胞病毒(RSV)感染对肺TLR4表达与气道高反应性的影响。方法:生后6周16只清洁级BALB/c小鼠被同等分成RSV感染组和对照组,感染后1周两组经吸入相同递增浓度乙酰甲胆碱检测气道高反应性,使用RT-PCR方法测定肺组织TLR4mRNA表达,并对二者的相关性进行了分析。结果:在吸入乙酰甲胆碱浓度为3.2g/L时两组气道阻力差异有显著性(P<0.01)。TLR4/β-actin的值分别为对照组0.239±0.055,RSV感染组0.361±0.102,两组间有显著性差异(P<0.05);TLR4 mRNA表达与吸入3.2g/L乙酰甲胆碱时的气道反应性呈正相关,相关系数为0.721(P<0.05)。结论:小鼠RSV感染后肺TLR4表达增强并呈气道高反应性,二者之间有显著正相关。     

Effects of respiratory syncytial virus infection on the airway neuronal plasticity and its relationship to the bronchial hyperresponsiveness in rats

Despite intense research efforts, the specific pathogenic mechanisms that underlie the link between respiratory syncytial virus （RSV） and childhood asthma remain unclear. Recent researches suggest that changes in the structure and function of the nerves themselves in response to changing conditions, a phenomenon known as neuronal plasticity, may also contribute to the pathophysiology of airway diseases. Therefore.     

白藜芦醇对呼吸道合胞病毒感染小鼠肺部病毒滴度及其气道炎症的影响

目的 研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）感染小鼠肺部病毒滴度及其所致气道炎症的影响。方法6～8周龄雌性BALB/c小鼠,环磷酰胺100 mg/kg腹腔注射后,随机分为对照组、RSV感染组、白藜芦醇腹腔注射组、白藜芦醇雾化组,每...     

呼吸道合胞病毒NS1基因原核表达及其免疫原性分析

目的:原核表达呼吸道合胞病毒(RSV)非结构NS1蛋白,并对其免疫特性进行研究.方法 采用PCR技术获得NS1基因,将其插入pET41a(+)载体上,导人大肠杆菌后诱导表达;利用GST亲和层析柱对诱导表达的NS1蛋白进行纯化,免疫动物制备抗体,Western blot法鉴定抗体的特异性.结果 重组质粒经酶切鉴定和DNA序列测序完全正确,经IPTG诱导后融合蛋白在大肠杆菌BL21-DE3中得到高效表达,表达产物经超声破碎和GST亲和层析纯化获得重组蛋白,分子量约42 000 Mr,以抗NS1蛋白的多克隆抗体为一抗进行Western blot检测,结果只有RSV感染细胞的样品在15 000 Mr处有特异性带显示,其他病毒感染的细胞和阴性对照没有相应条带.结论 NS1基因得到高效表达,免疫制备得到的抗体与RSV感染细胞有特异性反应,与其他常见呼吸道病毒感染细胞无交叉免疫反应.     

呼吸道合胞病毒感染儿童住院费用影响因素的回归树分析

 目的 利用回归树模型分析和预测呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)感染儿童住院费用的影响因素,为卫生决策提供依据。方法 采用苏州儿童医院2003—2009年完全随机抽样抽取的959例呼吸道合胞病毒感染住院儿童的数据,通过SPSS 18.0,检验用多元线性模型预测住院费用影响因素的适用条件,并构建回归树模型。结果 多元线性回归模型不适用于预测日平均住院费用的影响因素,回归树模型从10个变量中筛选出4个变量:C反应蛋白(C reactive protein,CRP)水平、年龄、是否有哮喘、是否有心肺功能疾病,其中CRP水平是最重要的影响因素,其次为年龄、是否有哮喘和是否有心肺功能疾病, 交叉验证的均方误差(mean squared error,MSE)为0.086。当病例的CRP水平>5.760 mg/L时,仅有CRP水平影响其日平均住院费用;当病例的CRP水平≤3.145 mg/L时,年龄也开始影响日平均住院费用;有哮喘或心肺功能疾病的病例,其日平均住院费用较高。结论 回归树模型在流行病学研究中具有较高的应用价值,在估计呼吸道合胞病毒感染儿童的日平均住院费用时,应重点考虑CRP水平、年龄、是否有哮喘和是否有心肺功能疾病四个因素。     

A亚型人呼吸道合胞病毒G基因的克隆、真核表达

目的克隆A亚型人呼吸道合胞病毒（HRSV）G基因,构建G基因的真核表达载体,并进行表达和鉴定。方法自行设计引物,利用RT-PCR技术,从感染HRSV的HEp-2细胞中获得G基因片段,克隆到pGEM-Teasy载体,经核酸序列分析,进一步亚克隆到真核表达载体pcDNA3．1（＋）,酶切鉴定后,脂质体法转染COS-7细胞,RT-PCR和Western blotting鉴定基因转录和蛋白表达。结果真核表达载体pcDNA3．1（＋）G的限制性内切酶分析结果与预期一致,基因序列分析显示没有发生无义突变。转染COS-7细胞后,RT-PCR检测到G基因有转录,Western blotting分析观察到G蛋白特异性的表达条带。结论成功克隆A亚型HRSVG基因,并在真核细胞中获得表达。     

呼吸道合胞病毒地方株SH蛋白基因序列分析

目的 :分析我国呼吸道合胞病毒 (RSV)地方株SH蛋白基因的遗传特点、变异特征。方法 :从本室保存的不同年份、不同地区、不同流行特征的呼吸道合胞病毒地方株中抽取 7株 ,分别用RT PCR扩增其SH蛋白基因并克隆到PTZ18R载体中进行了序列测定和分析。结果 :我国RSV地方株间SH蛋白基因相比较变异的部位及形式很相似 ,地方株间核苷酸全序列的同源性为 97.0 %～ 10 0 %。结论 :RSV在我国不同地区的不同流行特征与SH蛋白基因的变异无明显关系     

呼吸道合胞病毒对致敏小鼠气道反应性的影响及机制探讨

目的：探讨呼吸道合胞病毒（RSV）对致敏小鼠气道反应性的影响。方法：Balb／C小鼠30只，随机分成3组，分别为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组，鸡卵白蛋白（OVA）组和OVA／RSV组。应用OVA腹腔注射致敏、OVA气道雾化吸人结合RSV滴鼻激发复制哮喘模型，支气管肺泡灌洗液（BALF）作细胞分类计数，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定BALF上清中白细胞介素（IL）-4、IL-5、干扰素（IFN）-γ含量，肺组织切片行苏木精-伊红（HE）染色观察病理变化，动物体描箱法测定气道反应性（以肺阻力RL表示）。结果：与OVA组比较．OVA／RSV组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞均明显增加（P均〈0．01），BALF上清中IFN-γ、IL-4、IL-5含量均明显升高（P〈0．01）；与OVA组比较，OVA/RSV组支气管黏膜增厚．管腔收缩、狭窄，上皮破坏，支气管周围炎症细胞浸润加重．气道反应性亦明显升高（P〈0．01）。结论：OVA致敏小鼠RSV感染后可导致气道反应性明显增加．并和OVA致敏哮喘气道反应性增高具有不同的病理生理特征。     

呼吸道合胞病毒对人支气管上皮细胞通透性的影响

目的 探讨呼吸道合胞病毒对支气管上皮细胞通透性的影响.方法 通过ELISA、荧光定量PCR检测呼吸道合胞病毒感染人支气管上皮细胞后对其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,同时,通过检测细胞的跨膜电阻了解呼吸道合胞病毒对人支气管上皮细胞通透性的影响.结果 呼吸道合胞病毒增加了人支气管上皮细胞VEGF的表达,增加了支气管上皮细胞的通透性,VEGF的单克隆抗体可以明显阻断这一效应.结论 呼吸道合胞病毒通过上调VEGF的表达增加对支气管上皮细胞的通透性.     

反转录—聚合酶链反应在呼吸道合胞病毒感染检测的应用

为呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）感染的临床诊断寻求敏感，特异的检测方法，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增毒培养液和急性呼吸道感染患者鼻咽分泌物中的ＲＳＶ基因，并应用地高辛标记ｃＤＮＡ探针对扩增产物进行鉴定。结果成功地提取了ＲＳＶｍＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，经扩增得到４７１ｂｐ左右ｃＤＮＡ区带。流感病毒Ｂ，副流感病毒２型，腺病毒７对照无扩增带，ＲＳＶ培养液１０倍连续稀释至１：１０００，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增仍可见４