经前平颗粒对愤怒模型大鼠皮质中5-HTR2C表达的干预作用

目的:观察愤怒反应模型大鼠顶区皮质和额区皮质5-羟色胺2C受体(5-HTR2C)的表达以及中药经前平颗粒的干预作用,探讨其可能的中枢作用机制。方法:采用居住入侵结合社会隔离的方法制备愤怒反应大鼠模型,并予以经前平颗粒进行药物干预,运用半定量RT-PCR和Western Blot方法检测大鼠顶区皮质和额区皮质中5-HTR2C mRNA及其蛋白表达水平。结果:与正常组相比,愤怒模型大鼠顶区皮质和额区皮质中5-HTR2C mRNA和蛋白表达均显著性升高(P<0.05,P<0.01),经前平颗粒可显著下调其异常表达(P<0.01)。结论:愤怒情志刺激可导致大鼠顶区皮质和额区皮质5-HTR2C表达升高,经前平颗粒可对5-HTR2C表达异常变化起到调节作用,提示5-HTR2C基因与愤怒情绪密切相关,并且可能是经前平颗粒的中枢作用靶点之一。     

调肝方药对愤怒、郁怒模型大鼠下丘脑 5-HTR2C基因表达的影响

目的:通过研究愤怒和郁怒模型大鼠下丘脑5-HTR2C基因的表达,探讨愤怒和郁怒的微观发生机制及中药经前平颗粒、经前舒颗粒的作用靶点。方法:居住入侵法制备愤怒和郁怒证模型大鼠,经前平颗粒、经前舒颗粒干预,均10 g·kg-1,ig,分别为正常组、模型组、经前舒组、经前平组;运用半定量RT-PCR和Western blot方法检测大鼠下丘脑区5-HTR2C mRNA及其蛋白表达水平。结果:与正常组相比较,愤怒组和郁怒组大鼠下丘脑中5-HTR2C mRNA和蛋白相对水平均极显著性降低(P<0.01);愤怒组大鼠的相对表达水平改变明显强于郁怒组大鼠;用药后,与模型组相比较,5-HTR2C mRNA均得到显著性改善,但与正常组相比仍极显著性下降(P<0.01),而蛋白改变均得到极显著性改善,与正常组相比无统计学差异。结论:模型组大鼠下丘脑与5-HTR2C基因表达极显著降低,调肝方药干预可显著上调模型大鼠下丘脑5-HTR2C mRNA和蛋白表达,说明5-HTR2C基因与愤怒和郁怒证相关,并且可能是经前平颗粒和经前舒颗粒治疗该证的作用机制之一。     

加减薯蓣丸通过Akt/GSK3β/Nrf2通路改善APP/PS1小鼠神经元凋亡

目的:探讨加减薯蓣丸对APP/PS1模型小鼠神经保护的效应和作用机制。方法:5月龄雄性APP/PS1小鼠20只和野生型小鼠10只,分为空白组、模型组、加减薯蓣丸组(14 g·kg-1·d-1),灌胃28 d,空白组、模型组给予等体积生理盐水;APP/PS1背景和野生型背景原代神经元,分为空白组、模型组、加减薯蓣丸组、衣霉素组和磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)抑制剂组,空白组、模型组给予10%空白血清,加减薯蓣丸组给予5%加减薯蓣丸含药血清干预,衣霉素组和PI3K/Akt抑制剂组分别在加减薯蓣丸基础上加用2 mg·L-1的衣霉素和10μmol·L-1的LY294002。采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达; Western blot检测内质网应激相关蛋白糖调节蛋白78(GRP78),蛋白激酶样内质网激酶(PERK),磷酸化(p-) PERK,凋亡通路蛋白真核生物的翻译起始因子2的α亚基(e IF2α),p-eIF2α,增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和p-Akt,Akt,糖原激酶3β(GSK3β),Nrf2蛋白表达。结果:体内实验中,与空白组比较,模型组APP/PS1小鼠学习记忆能力显著下降(P 0. 01),海马Nrf2表达显著下调(P 0. 01);与模型组比较,加减薯蓣丸干预4周后,加减薯蓣丸组APP/PS1小鼠学习记忆能力明显提升,海马Nrf2表达水平显著增加(P 0. 01)。体外实验中,与空白组比较,模型组GRP78,p-PERK/PERK,p-eIF2α/e IF2α,CHOP,cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加(P 0. 01);与模型组比较,加减薯蓣丸含药血清明显降低GRP78,p-PERK/PERK,p-eIF2α/e IF2α,CHOP,cleaved Caspase-3蛋白表达(P 0. 05,P 0. 01);而衣霉素抑制加减薯蓣丸对内质网应激诱导凋亡的保护效应(P 0. 05);与空白组比较,模型组p-Akt/Akt,Nrf2蛋白表达显著下降,GSK-3β表达显著增加(P 0. 01);与模型组比较,加减薯蓣丸含药血清干预后p-Akt/Akt,Nrf2蛋白表达显著增加,GSK-3β表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01); LY294002抑制加减薯蓣丸对p-Akt/Akt,Nrf2和GSK3β蛋白表达的影响(P 0. 05,P 0. 01)。结论:加减薯蓣丸通过PI3K/Akt/GSK3β信号通路上调Nrf2蛋白表达,减轻内质网应激诱导的神经元凋亡,改善APP/PS1模型小鼠学习记忆能力。     

脂质过氧化炎症损伤模型中参莲提取物对巨噬细胞功能的药效与机制探讨

目的:研究参莲(SL)提取物在脂质过氧化炎症损伤模型中,对巨噬细胞功能的作用和促进炎症消散的药效和药理机制。方法:利用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)体外诱导小鼠巨噬细胞RAW264. 7细胞和人单核细胞THP-1造成脂质过氧化损伤模型,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测不同质量浓度的SL提取物(2. 5,5. 0,10. 0,20. 0 mg·L~(-1))对巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量;流式细胞术检测巨噬细胞泡沫化形成;transwell实验检测SL提取物对THP-1趋化功能的影响;以及用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS),炎症消散因子5脂氧合酶(ALOX5)以及对核转录因子-κB(NF-κB)信号通路中的磷酸化p65(p-p65)和磷酸化IκK(p-IκK)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,ox-LDL提高M1型巨噬细胞标志物TNF-α,IL-1β,i NOS的表达(P 0. 01),抑制M2型标志物IL-10的表达,促进泡沫细胞形成(P 0. 01),诱导THP-1向ox-LDL趋化,提高MCP-1分泌量(P 0. 01),抑制ALOX5的表达。与模型组比较,SL提取物可以降低TNF-α,IL-1β,i NOS的表达(P 0. 01),提高IL-10的表达(P 0. 05);能显著降低巨噬细胞吞噬脂质后泡沫化的形成(P 0. 01);能降低THP-1细胞MCP-1的分泌(P 0. 01),减少趋化的细胞数目(P 0. 01);促进炎症消散因子ALOX5的升高(P 0. 05),同时抑制p65和IκK磷酸化表达(P 0. 01)。结论:在脂质过氧化炎症损伤模型中,SL提取物具有诱导巨噬细胞M2极化,抑制巨噬细胞对ox-LDL的趋化和泡沫化的形成,提高ALOX5表达,促进炎症消散,从而改善脂质过氧化炎症损伤状态,上述功能与抑制NF-κB信号通路中p65和IκK磷酸化水平有关。     

人参提取物对Ⅰ型干扰素及下游基因表达的调节作用

目的探讨人参提取物对Ⅰ型干扰素及下游基因表达的调节作用。方法培养THP-1细胞并加入人参提取物后,ELISA检测干扰素-α、干扰素-β分泌水平,Real-time PCR检测BST-2、APOBEC3G表达。结果与空白组比较,人参提取物组干扰素-α分泌水平显著提高(P0. 01),但对干扰素-β无明显影响(P0. 05);与对照siRNA组比较,该组BST-2、APOBEC3G表达显著提高(P0. 01),并与干扰素-α诱导呈正相关。结论人参提取物可通过Toll样受体途径诱导单核细胞分泌干扰素-α,从而提高抗病毒因子表达。     

白香丹胶囊对经前期综合征肝气逆证大鼠下丘脑GABA_ARβ_2亚基分布及表达的影响

目的:研究白香丹胶囊对经前期综合征(PMS)肝气逆证模型大鼠下丘脑γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)β2亚基蛋白分布和蛋白、mRNA表达的影响及PMS肝气逆证发病中枢机制。方法:以免疫荧光技术(IF)、蛋白印迹技术(Western blot)、半定量逆转录多聚合酶链式反应(半定量RT-PCR)依次检测大鼠下丘脑GABAARβ2亚基蛋白的分布模式,蛋白、mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,肝气逆组大鼠下丘脑GABAARβ2亚基主要分布在下丘脑组织的边缘,蛋白、mRNA表达水平显著升高;造模同时给予白香丹胶囊后,受体蛋白在下丘脑中均匀分布而趋于正常,蛋白、mRNA表达水平有不同程度的降低。结论:GABAARβ2亚基蛋白分布异常,蛋白、mRNA表达上调可能是PMS肝气逆证发病中枢机制之一,白香丹胶囊可以对上述异常变化起纠正作用。     

补肾与健脾方对骨质疏松症大鼠干预作用及下丘脑PKC蛋白表达的影响

目的:探索骨质疏松症的病理机制,比较补肾与健脾中药干预骨质疏松症的作用。方法:摘除大鼠卵巢建立骨质疏松症模型,给予补肾、健脾中药灌胃3个月,Western blotting法检测指标。结果:与正常组比较,骨质疏松症模型空白组骨密度明显下降(P0.01),下丘脑中PKCα与PKCβ2蛋白表达显著增加(P0.01)。与模型空白组比较,补肾中药高剂量组骨密度显著增加(P0.01);补肾、健脾中药均可下调模型大鼠下丘脑中PKCα与PKCβ2蛋白表达(P0.01)。结论:补肾中药防治骨质疏松症的作用优于健脾中药;骨质疏松的发生可能与脑PKC的变化有关,补肾中药对其有调节作用优于健脾中药。     

丹酚酸B对脓毒症大鼠心肌损伤的保护作用

目的:探讨丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal-B)对脓毒症大鼠心肌损伤的作用及机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组(行盲肠结扎穿孔术复制脓毒症动物模型),Sal-B组低、中、高剂量组(在模型基础上,经尾静脉注射Sal-B 6,12,24 mg·kg~(-1))。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌坏死标志物和炎症因子,包括血清肌钙蛋白T(Tn T),肌酸激酶同工酶(CK-MB),心肌肌钙蛋白I(c Tn I)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素(IL)-1β,IL-6水平;比色法检测心肌中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量;采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组心肌组织病理变化;采用原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织中凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和自噬微管相关蛋白轻链3(LC3),Beclin-1表达水平。结果:与假手术组比较,模型组Tn T,CK-MB和c Tn I水平显著升高(P 0. 01);心肌组织TNF-α,IL-1β,IL-6水平显著升高(P 0. 01);心肌组织MDA含量显著升高(P 0. 01),SOD的活力显著降低(P 0. 01),TUNEL阳性心肌细胞比率显著升高(P 0. 01),Bax和Caspase-3蛋白表达水平升高,而Bcl-2表达显著降低(P 0. 01),自噬相关蛋白LC3,Beclin-1表达水平显著升高(P 0. 01);与模型组比较,Sal-B中、高剂量组Tn T,CK-MB和c Tn I水平均显著降低(P 0. 01),心肌组织TNF-α,IL-1β,IL-6水平显著降低(P 0. 01),心肌组织MDA含量明显降低(P 0. 05,P 0. 01),同时,心肌组织SOD的活性明显升高(P 0. 05,P 0. 01); TUNEL阳性心肌细胞比率明显降低(P 0. 05),Bax和Caspase-3蛋白表达下降,Bcl-2表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01);同时增强自噬反应,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ增加,Beclin-1表达水平明显上调(P 0. 05,P 0. 01)。结论:Sal-B通过影响自噬蛋白,降低脓毒症大鼠心肌炎症反应和氧化应激,抑制心肌细胞凋亡,从而减轻脓毒症大鼠心肌的损伤。     

白香丹胶囊对经前期综合征肝气逆证模型猕猴表情行为及性激素的影响

目的:研究白香丹胶囊(白芍、香附)对经前期综合征(PMS)肝气逆证模型猕猴表情行为及性激素指标的影响。方法:选择24只高地位处在排卵期猕猴,放入挤压笼中,每天挤压7h,连续挤压造模5d,造模同时口服给药,对照组服用经前平颗粒;采用《雌性实验猕猴情绪评价量表》评定猕猴表情行为的变化,采用放射免疫法测定血清中泌乳素(PRL)、雌二醇(E2)、孕酮(P)含量。结果:造模后猕猴愤怒因子积分显著增加,血清中E2、P含量显著降低,PRL含量明显升高。与对照组相比,白香丹胶囊可明显降低造模猕猴愤怒因子积分,增加血清中P与E2含量,降低PRL含量。结论:白香丹胶囊对PMS肝气逆证猕猴情绪及性激素异常具有较好的调节作用,能够使其恢复或接近正常水平。     

三七皂苷对TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞EMT的影响

目的:研究三七皂苷(PNS)对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的大鼠肾小管细胞上皮-间充质转化(EMT)的干预作用,并从沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/TGF-β_1/Smad通路分析其可能机制。方法:在DMEM培养基中,用10%胎牛血清培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),分为正常组,TGF-β_1组(5μg·L~(-1)),白藜芦醇组(50 mg·L~(-1)),SIRT1阻断剂EX527组(10μmol·L~(-1)),PNS组(100 mg·L~(-1)),EX527+PNS组(EX527 10μmol·L~(-1),PNS 100 mg·L~(-1)),48 h后收集细胞;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测SIRT1,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),E-钙黏附蛋白(E-cadherin),TGF-β_1,Smad3,Smad4 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SIRT1,α-SMA,E-cadherin,TGF-β_1蛋白表达。结果:与正常组比较,TGF-β_1组α-SMA mRNA及蛋白表达明显增多(P 0. 05),E-cadherin表达显著减少(P 0. 01);与TGF-β_1组比较,PNS,白藜芦醇组,E-cadherin mRNA及蛋白表达均显著增加(P 0. 01),α-SMA表达显著减少(P 0. 01),EMT发生被抑制,同时,SIRT1表达显著增加(P 0. 01),TGF-β_1,Smad3,Smad4表达显著降低(P 0. 01)。在SIRT1阻断剂EX527的干预下,PNS则不能发挥明显抑制作用。结论:PNS可以阻止TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞EMT的发生,其机制可能是通过激活SIRT1进而抑制TGF-β_1/Smad通路实现的。