表没食子儿茶素没食子酸酯对泡沫细胞中胆固醇流出的影响及机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对泡沫细胞中胆固醇流出的影响及其机制。方法人单核细胞白血病细胞诱导分化为巨噬细胞再转化为泡沫细胞,将细胞分为对照组,低、中和高剂量组,每组1.5×10~6个细胞,分别用0,10,30,100μmol/L EGCG干预后,胆固醇检测试剂盒检测细胞中胆固醇含量,液体闪烁计数仪检测载脂蛋白A-Ⅰ介导的泡沫细胞胆固醇流出,蛋白质印迹检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette A1,ABCA1)蛋白质表达,实时荧光定量PCR检测ABCA1mRNA的表达。结果与对照组比较,低、中和高剂量组泡沫细胞ABCA1mRNA和蛋白表达明显升高(P0.01),胆固醇流出率升高[(7.04±0.21)%、(7.75±0.17)%、(8.53±0.18)%vs(3.37±0.16)%,P0.01],胆固醇含量降低[(419.33±19.75)mg/g、(352.58±14.23)mg/g、(312.62±17.45)mg/g vs(520.51±20.62)mg/g,P0.01],且中剂量组和高剂量组胆固醇流出率、胆固醇含量和ABCA1蛋白表达均较低剂量组变化明显(P0.05)。结论 EGCG通过上调ABCA1的转录与表达,促进胆固醇流出,减轻细胞中胆固醇负荷。     

睾酮抑制大鼠血管平滑肌细胞泡沫化及机制研究

目的研究睾酮对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)转化为泡沫细胞的抑制作用,并探讨其可能机制。方法培养大鼠VSMC,分为对照组、ox-LDL组、低(1nmol/L)、中(10nmol/L)、高(100nmol/L)浓度睾酮组。另外,设置睾酮组(100nmol/L)、氟他胺组(1μmol/L)、睾酮与氟他胺合用组,并与ox-LDL共培养建立泡沫细胞模型。利用油红O染色及酶荧光法检测不同浓度睾酮及氟他胺预处理对VSMC内脂质含量的影响,免疫印迹法检测各组细胞内线粒体融合素2(Mfn2)、清道夫受体CD36和ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)的表达变化。结果与ox-LDL组比较,不同浓度睾酮组VSMC脂质蓄积减少,总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量均降低(P<0.05),Mfn2和ABCA1表达增加(P<0.05),CD36表达降低(P<0.05)。与睾酮组比较,睾酮与氟他胺合用组VSMC脂质蓄积增加,总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量均增加(P<0.05),Mfn2和ABCA1表达降低(P<0.05),CD36表达增加(P<0.05)。结论睾酮以雄激素受体依赖的方式,抑制ox-LDL诱导的VSMC泡沫化过程,其作用与睾酮上调Mfn2表达进而调节CD36和ABCA1表达有关。     

荷脂细胞与胆固醇逆转运的研究进展

正动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)性心脑血管疾病是导致人类死亡的主要原因。动脉血管壁的粥样斑块是AS性疾病主要的病理表现。斑块部位泡沫细胞的逐渐增多导致斑块扩大及不稳定,进而促进了AS的发展。细胞内胆固醇摄取和流出的失衡是导致泡沫细胞形成的主要原因,促进细胞内胆固醇转运到细胞外,减轻粥样斑块负荷是近年国内外抗AS研究的热点。我们就近年来荷脂细胞的形成、胆固     

激动β_3肾上腺素能受体上调载脂蛋白A-Ⅰ促进泡沫细胞胆固醇流出的研究

目的 通过激动或抑制HepG2细胞的β3肾上腺素能受体(β3-AR),探讨β3-AR调节胆固醇逆转运过程的可能机制。方法 将培养的HepG2细胞随机分为对照组、β3-AR激动剂组(激动剂组)和β3-AR拮抗剂组(拮抗剂组),ELISA法检测上清液载脂蛋白(apo)A-Ⅰ、apoA-Ⅱ及β3-AR水平;测定细胞内胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯水平,3 H标记的胆固醇测定胆固醇流出率,实时定量PCR和蛋白印迹法分别检测细胞中三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和肝X受体α亚型(LXRα)的表达。结果 与对照组比较,激动剂组apoA-Ⅰ、游离胆固醇、胆固醇流出率显著增加,胆固醇、胆固醇酯显著降低,ABCA1和LXRαmRNA及ABCA1和LXRα蛋白显著增加;拮抗剂组胆固醇、胆固醇酯显著升高,apoA-Ⅰ、胆固醇流出率显著减少,ABCA1和LXRαmRNA及ABCA1和LXRα蛋白显著降低。与激动剂组比较,拮抗剂组ABCA1和LXRαmRNA及ABCA1和LXRα蛋白显著降低(0.49±0.10 vs1.24±0.02,0.85±0.05 vs 1.32±0.05,0.38±0.01 vs 1.45±0.20,0.08±0.01 vs 0.76±0.02,P0.01)。结论激动HepG2细胞的β3-AR,可上调apoA-Ⅰ表达,促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇逆转运相关蛋白的表达。     

血管内皮细胞中三磷酸腺苷-结合盒转运子A1对炎性细胞因子表达的影响

目的研究在公认的ATP-结合盒转运子A1(ABCA1)诱导因素8-溴-环磷酸腺苷(8-Br-cAMP)刺激下,人血管内皮细胞ECV304中ABCA1基因对炎性细胞因子细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞化学趋向蛋白-1(MCP-1)及白介素-1β(IL-1β)的调节作用。以阐明ABCA1基因在动脉粥样硬化(AS)发生中的作用机制。方法培养人血管内皮细胞株ECV304,加入8-Br-cAMP(0.5 mmol/L)刺激3、6、12及24 h,以荧光定量逆转录聚合酶链式反应检测ABCA1、ICAM-1及MCP-1 mRNA表达量,Western blot蛋白印迹法和酶联免疫吸附测定法检测ABCA1I、CAM-1、MCP-1及IL-1β蛋白质表达量;ABCA1的反义寡核苷酸(100 nmol/L)转染人血管内皮细胞,给予上述的8-Br-cAMP,同样的方法测定上述指标的改变。结果人血管内皮细胞ECV304在给予8-Br-cAMP刺激6、12 h后,ABCA1I、CAM-1、MCP-1的mR-NA和蛋白质水平及IL-1β蛋白质水平均增高;给予反义寡核苷酸转染后,8-Br-cAMP刺激后36、h ABCA1I、CAM-1、MCP-1mRNA的表达降低,122、4 h ABCA1I、CAM-1、MCP-1及IL-1β蛋白质的表达水平降低。结论在8-Br-cAMP作用下,血管内皮细胞中ABCA1可增加炎性因子的表达,从而在AS早期的发生中发挥作用。     

NgBR对巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇逆转运的影响

目的通过转染小干扰RNA(siRNA)沉默RAW264.7细胞源性泡沫细胞神经轴突生长抑制因子B受体(Ng BR)表达,研究Ng BR对泡沫细胞胆固醇逆转运(RCT)的影响,探索从RCT途径抗动脉粥样硬化(As)的新方法,为冠心病的临床防治提供新思路。方法利用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导RAW264.7细胞形成泡沫细胞,油红O染色进行鉴定。将泡沫细胞分为四组:空白对照组、siRNA阴性对照组、Ng BR-siRNA1转染组(si Ng BR-1组)、Ng BR-siRNA2转染组(si Ng BR-2组)。利用siRNA沉默泡沫细胞Ng BR基因表达,并利用real-time PCR和Western blot对其进行干扰效率鉴定。随后采用real-time PCR检测各组细胞肝X受体α(LXRα)、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)及三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)mRNA表达,Western blot检测各组细胞相应蛋白含量,液闪计数仪检测胆固醇流出率。结果 ox-LDL成功诱导泡沫细胞形成;si Ng BR-1组和si Ng BR-2组Ng BR mRNA及其蛋白明显下调(P0.05);si Ng BR-1组和si Ng BR-2组LXRα、ABCA1和ABCG1的mRNA及其蛋白表达显著降低(P0.05),胆固醇流出显著减少(P0.05)。结论 Ng BR可以增加巨噬细胞源性泡沫细胞RCT的调控基因LXRα及其下游基因ABCA1、ABCG1的表达,从而减弱或者避免As的发生和发展,为冠心病的临床防治提供理论依据。     

罗格列酮对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及机制探讨

目的 观察罗格列酮对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞凋亡及磷酸化Smad2/3表达的影响.方法 高脂饮食复制SD大鼠高脂血症模型,酶消化法原代提取SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞进行体外培养,取5～8代细胞进行实验.无血清培养24 h后:实验一分为4组:①对照组,②罗格列酮组(本实验所用罗格列酮均为100 μmol/L),③罗格列酮+过氧化物酶体增生激活受体γ(PPAR-γ)阻断剂GW9662组,④罗格列酮+抗转化生长因子β1(anti-TGF-β1)组,分别用Western blot于1 h检测磷酸化Smad2/3水平,24 h后流式细胞学检测细胞凋亡;实验二分2组:①对照组,②100 μmol/L罗格列酮组,分别于0、0.5、1、2,6、12和24 h,用Western-blot检测磷酸化Smad2/3水平.结果 24 h后罗格列酮组细胞凋亡率较对照组明显升高(P<0.05),罗格列酮+GW9662组和罗格列酮+抗转化生长因子β1组细胞凋亡率较罗格列酮组明显降低(P<0.05);罗格列酮处理后0.5 hVSMC p-Smad2/3表达水平明显高于对照组(P<0.05),且1 h迭高峰(P<0.05),p-Smad2/3水平达到高峰后又较快下降(P<0.05);罗格列酮+GW9662组和罗格列酮+anti-TGF-β1组p-Smad2/3表达水平较罗格列酮组低(P<0.05).结论 罗格列酮可能通过激活过氧化物酶体增生激活受体γ,诱导血管平滑肌细胞磷酸化Smad2/3表达水平上调从而诱导血管平滑肌细胞凋亡.     

肿瘤坏死因子-α对泡沫细胞胆固醇流出及ATP结合盒转运子A1表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对泡沫细胞胆固醇流出途径的影响及可能作用机制.方法采用人组织瘤细胞-1（THP-1）细胞诱导分化形成的泡沫细胞,测定TNF-α与细胞胆固醇流出的时间、浓度关系.然后给予饱和浓度的TNF-α刺激,随机将泡沫细胞分成对照组、TNF-α组、对甲苯磺酰L-苯丙氨酸甲基甲酮（N-α-tosyl-L-phenylalanine chloromethy ketone,TPCK）组及TPCK＋TNF-α组,以RT-PCR法、Western blot法测定细胞ATP结合盒转运子A1（ABCA1）的表达.结果TNF-α抑制细胞胆固醇流出呈时间、浓度效应,在10.0 ng/ml时,TNF-α抑制胆固醇流出达到饱和效应.10.0 ng/ml TNF-α刺激后以时间依赖方式下调ABCA1表达.TPCK预孵育后可部分逆转TNF-α对ABCA1表达的下调.结论炎症因子TNF-α可通过抑制ABCA1的表达而减少细胞胆固醇的流出,核因子κB（NF-κB）激活抑制剂TPCK可逆转TNF-α的上述影响,提示TNF-α抑制ABCA1表达与NF-κB激活有关.TNF α/NF-κB信号途径可抑制泡沫细胞的胆固醇流出,从而加重细胞内胆固醇的蓄积。     

烟酸对高脂血症兔动脉粥样硬化斑块与胆固醇逆转运相关基因表达的影响

目的探讨烟酸对高脂血症兔动脉粥样硬化斑块和TC逆转运相关基因表达的影响。方法 24只兔分为对照组、高脂组和烟酸组,每组8只。实验前后检测血脂水平;14周末行主动脉病理学检测;采用实时荧光定量PCR检测ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ)和小凹蛋白1(Cav-1)mRNA表达。体外观察不同浓度烟酸(0⁵.0mmol/L)对Filipin阻断后ABCA1、SR-BⅠ和Cav-1表达的影响。结果与对照组比较,高脂组8周时TC、TG和LDL-C、主动脉内膜厚度和斑块面积明显增加,ABCA1、SR-BⅠ和Cav-1mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。与高脂组比较,烟酸组14周时TC、TG和LDL-C明显降低,HDL-C、ABCA1和Cav-1mRNA表达明显升高,主动脉内膜厚度和斑块面积明显缩小(P<0.01)。1.0mmol/L烟酸可明显改善Cav-1与ABCA1mRNA表达(P<0.05)。结论烟酸可明显改善血脂谱及稳定动脉粥样硬化斑块,上调ABCA1与Cav-1mRNA表达水平,但对SR-BⅠ表达无明显影响。     

脂联素对泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达及细胞内胆固醇含量的影响

目的通过研究脂联素对细胞内胆固醇外流的影响以及三磷酸腺苷结合盒转运子A1的功能变化,探讨其抗动脉粥样硬化作用的可能机制。方法以THP-1来源的泡沫细胞模型为研究对象,用脂联素进行体外干预;采用逆转录聚合酶链反应、酶联免疫吸附试验和高效液相色谱等方法测定干预前后三磷酸腺苷结合盒转运子A1表达和细胞内胆固醇含量的变化。结果脂联素在体外上调泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运子A1mRNA和蛋白的表达,与载脂蛋白A1联合作用还能进一步增加细胞内胆固醇的流出。脂联素单独作用促进细胞内胆固醇酯转化为游离胆固醇。结论脂联素上调泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运子A1表达,并促进其介导的细胞内游离胆固醇的外流;脂联素还能促进细胞内胆固醇酯的水解。     

普罗布考对小鼠体内巨噬细胞胆固醇逆转运的影响及其作用机制

目的探讨普罗布考对小鼠体内巨噬细胞TC逆转运的影响及其作用机制。方法选择C57BL/6小鼠36只随机分为4组,给予不同剂量普罗布考(0,0.1%,0.5%,1.0%,分别为对照组,0.1%干预组,0.5%干预组,1.0%干预组),各组9只。添加饲料喂养6周后,腹腔注射乙酰化LDL与氚(3 H)-TC标记的RAW264.7小鼠巨噬细胞悬液,酶法测定血脂,用液闪计数仪测定血清、肝脏及粪便中3 H-TC占经腹腔注射3 H-TC的百分比。结果普罗布考干预6周后,与对照组比较,各干预组小鼠TC、HDL-C、LDL-C明显降低(P<0.05,P<0.01),肝脏和粪便中3 H-TC含量明显升高(P<0.05),血清3 H-TC含量明显降低(P<0.05)。各干预组HDL-C水平与3 H-TC排泄量呈负相关(r=-0.532,P<0.05)。结论普罗布考干预了小鼠体内巨噬细胞TC逆转运,加速了TC经粪便的清除,有利于动脉粥样硬化的防治。     

泡沫细胞胆固醇逆向转运机制及药物干预研究

目的 人THP-1单核/巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,探讨罗格列酮、洛伐他汀对三磷酸腺苷结合盒转运蛋白(ABC)A1表达和细胞内胆固醇含量的影响.方法 低密度脂蛋白(LDL)提取,Cu2+氧化法获得氧化型LDL(ox-LDL).建立泡沫细胞模型.Western blot检测洛伐他汀、罗格列酮对THP-1单核/巨噬细胞ABCA1蛋白表达的影响.泡沫细胞分9组,分别给予相应的干预因子,培养24 h,检测各组细胞内胆固醇含量.结果 与对照组比较,洛伐他汀组、罗格列酮组、各ABCA1单克隆抗体预处理组细胞内胆固醇含量无明显变化(P>0.05);而载脂蛋白(Apo)A-I组、洛伐他汀+ApoA-I组、罗格列酮+ApoA-I组显著降低(P<0.05).结论 胆固醇逆向转运需在ApoA-I和ABCA1蛋白共同参与下完成,并能降低细胞内胆固醇含量.罗格列酮能通过促进ABCA1蛋白表达介导胆固醇向胞外转运,使细胞内胆固醇含量进一步降低.     

小分子药物调控胆固醇逆向转运机制的研究进展

本文从小分子药物调控胆固醇逆向转运机制的视角,介绍胆固醇逆向转运关键蛋白参与小分子药物调控胆固醇外流和脂质代谢机制的最新研究进展,探讨不同化学结构类型小分子药物对介导胆固醇逆向转运不同药靶蛋白表达的影响,从药理学的研究角度提供开展胆固醇逆向转运相关研究新的思维模式。     

同型半胱氨酸对高密度脂蛋白逆转运和抗氧化功能的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对HDL逆转运和抗炎抗氧化功能的影响。方法选择顺德第一人民医院住院患者120例,根据血Hcy水平,将患者分为正常对照组60例和高Hcy组60例,记录患者的人口学特点和检测血液生化指标,同时测定患者血卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)和胆固醇酯转运蛋白(CETP)水平,患者HDL颗粒中的对氧磷酶1(PON1)、髓过氧化物酶(MPO)活性以及脂质过氧化物(LPO)含量。结果与正常对照组比较,高Hcy组患者血LCAT[(925.6±127.0)U/mg vs(1015.3±131.1)U/mg,P=0.000]、CETP[(26.3±4.1)μg/mg vs(34.6±5.0)μg/mg,P=0.000]和PON1[(213.4±71.4)U/ml vs(416.5±85.1)U/ml,P=0.000]活性显著降低,MPO[(4.8±1.9)U/L vs(3.3±1.5)U/L,P=0.000]活性和LPO[(0.93±0.08)U/L vs(0.83±0.09)U/L,P=0.000]含量显著升高。结论高Hcy通过降低血LCAT、CETP浓度,降低HDL胆固醇逆转运功能,并通过降低HDL颗粒中PON1活性,升高HDL颗粒中MPO活性,导致HDL颗粒中LPO含量升高,从而降低HDL的抗炎抗氧化功能。     

罗格列酮对大鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响

目的探讨罗格列酮对大鼠动脉粥样硬化(AS)斑块的作用及可能机制。方法12周龄雄性Wistar大鼠55只,随机分为对照组20只、模型组20只、治疗组15只。对照组大鼠喂食基础饲料;模型组和治疗组在喂食开始时一次性腹腔注射维生素D_3 40万IU/kg,喂食高脂饲料。6周后,处死对照组和模型组大鼠各5只,提取全长主动脉,油红O染色进行病变分级评分;HE染色观察斑块的病理形态改变;免疫组化法测定过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白表达;并测空腹血糖、空腹胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。剩余大鼠继续喂养至12周,模型组和治疗组同时分别给予生理盐水(10 m1·kg~(-1)·d~(-1))和罗格列酮(3 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃治疗。6周后,各组大鼠处死后按前述方法再次检测各指标。结果造模6周后,模型组大鼠空腹血糖、FINS、HOMA-IR升高(P＜0．05);主动脉病变评分明显增高(P＜0．01);光镜下可见典型的AS斑块;免疫组化染色显示PPARγ蛋白平均吸光度值明显增强(P＜0．01)。治疗6周后,治疗组与模型组比较,空腹血糖[(5．28±1．44)mmol/L和(8．90±2．60)mmol/L]、FISN[(31．04±24．20)mU/L和(48．38±27．62)mU/L]及HOMA-IR[(7．78±2．61)mmol/L和(12．42±4．13)mmol/L]水平降低(P＜0．05或P＜0．01),但与对照组[(6．01±0．89)mmol/L、(32．15±25．28)mU/L、7．79±2．58]比较,差异无统计学意义;治疗组主动脉斑块评分明显低于模型组(P＜0．01),但略高于对照组(P＜0．05)。光镜下可见治疗组AS病变较模型组明显减轻,且PPARγ蛋白平均吸光度值降低(P＜0．01)。结论罗格列酮治疗6周后,大鼠AS斑块明显消退,激活PPARγ和改善胰岛素抵抗可能是其作用机制之一。     

罗格列酮对大鼠血管再狭窄的作用及其发生机制

目的探讨罗格列酮在体内对斯普拉-道来(Sprague-Dawley,SD)大鼠血管再狭窄的影响及其发生机制。方法 40只SD大鼠随机分为2组:治疗组喂罗格列酮[(5mg·kg-1·d-1)溶于饮水中]4周;对照组喂等量的0.9%氯化钠溶液4周。4周后建立大鼠颈总动脉再狭窄模型,继续上述喂养2周后取材,免疫组织化学法检测核因子-кB(nuclearfactor-кB,NF-кB),TUNEL法检测细胞凋亡率;用形态测量法检测血管内膜厚度和面积。结果术后2周,与对照组比较,治疗组内膜厚度变薄,内膜面积减少,差异有统计学意义[(12.451±4.593)μmvs.(32.455±9.092)μm,P0.05;(0.017±0.005)mm2vs.(0.052±0.013)mm2,P0.05]。与对照组比较,治疗组NF-кB的水平明显受抑制,细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义(0.0814±0.0021vs.0.1015±0.0038,P0.01;32.58%±1.75%vs.24.36%±2.46%,P0.01)。结论罗格列酮可阻止大鼠血管平滑肌细胞增殖及内膜增生。     

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导高血压大鼠的血压影响及其机制

目的：探讨罗格列酮（RSG）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导高血压大鼠血压的影响及机制。方法：选择24只SD大鼠随机分为4组：正常对照组、RSG组、AngⅡ组及AngⅡ＋RSG组。每组6只大鼠（n=6）。采用alzet渗透泵持续皮下泵入AngⅡ[300ng／（kg·min）×7d]建立高血压大鼠模型,RSG组和AngⅡ＋RSG组给予RSG灌胃[5mg／（kg·d）]7d,7d后观察各组大鼠的血压、心脏质量指数、空腹血糖变化,测定大鼠主动脉NADPH氧化酶的活性及超氧阴离子的含量。结果：与AngⅡ组对比,AngⅡ＋RSG组血压下降[（136±6）mmHgw．（166±6）mmHg,P〈0．01]及心脏质量指数下降[（3．54±0．04）mg,／kg绑．（3．85±0．08）mg／kg,P〈0．01];NADPH氧化酶活性及血管超氧阴离子含量下降[（288．49±36．19）cpm／μg vs．（584．04±69．67）cpm／μg,P〈0．01;（2792．82．7±726．76）cpm／mg vs．（4765．50±597．34）cpm/mg,P〈0．01]。结论：RSG抑制NADPH氧化酶的活性,降低血管超氧阴离子的含量,拮抗血管AngⅡ诱导的血压升高及心肌肥厚,发挥保护心血管的作用。