红细胞生成素对人单核细胞前炎症因子的影响及机理

红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是治疗慢性病贫血(anemia of chronic disease,ACD)的主要药物,通过刺激造血、抑制hepcidin和前炎症因子而改善贫血。近来发现单核细胞是hepcidin的另一来源,EPO能降低IL-6诱导的hepcidin,推测EPO可能通过降低IL-6进而抑制hepcidin的间接途径。然而,EPO降低单核细胞IL-6相应的分子生物学机制还不清楚。本研究探讨EPO对单核细胞前炎症因子的作用及其分子学机制。采用实时定量PCR检测IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达,Western blot方法检测PARP-1信号分子的蛋白水平。采用1μg/ml脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激THP-1单核细胞,观察EPO不同浓度(0.5,1,2,5,10 U/ml)和作用时间(0,3,6,12,24小时)对THP-1单核细胞IL-6 mRNA、TNF-αmRNA以及PARP-1蛋白的抑制作用。加用1μg/ml或5μg/mlEPO受体(EPOR)抗体和/或3-氨基苯甲酰胺(3AB,PARP-1抑制剂),观察其对EPO的拮抗作用以及...     

过表达锌指蛋白A20可抑制肺泡巨噬细胞炎症反应

目的:通过建立A20过表达肺泡巨噬细胞株,研究A20对肺泡巨噬细胞炎症反应的影响及调控机制。方法:构建携带A20基因的慢病毒载体,转染大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383),筛选出稳定过表达A20基因的细胞株并行体外培养。向培养基中加入脂多糖(LPS,1μg/mL)进行干预,并于刺激后0.5、1、2、4h收集上清液及细胞。ELISA法测定上清液中细胞因子(TNF-α、IL-1β)及核因子κB(NF-κB)活性。Western印迹方法检测A20蛋白及核内p65含量。实时荧光定量PCR法测定A20mRNA含量。结果:LPS刺激后,A20过表达组(A20组)及正常对照组(VEC组)A20蛋白及mRNA含量都升高,并于1h达高峰,之后逐渐下降;且A20组较VEC组A20水平明显升高(P0.05)。与VEC组相比,A20组培养上清液中细胞因子(TNF-α、IL-1β)水平明显降低(P0.05);NF-κB DNA结合活性及核内p65含量也降低(P0.05)。结论:A20能够抑制肺泡巨噬细胞NF-κB活性及TNF-α、IL-1β分泌,进而抑制肺泡巨噬细胞炎症反应活性。     

抗β2GPI/β2GPI复合物激活THP-1细胞表达炎性相关因子

目的探讨抗β2糖蛋白I(抗β2GPI)自身抗体与β2糖蛋白I(β2GPI)复合物刺激单核细胞株THP-1表达炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α及可能机制。方法用荧光定量PCR法检测抗β2GPI/β2GPI复合物刺激THP-1细胞不同时间(0.5、1、1.5、2、6 h)后IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达,用免疫荧光染色法及western blot观察THP-1细胞表达IL-6、IL-8、TNF-α蛋白的情况。荧光定量PCR及western blot观察Toll样受体4(TLR4)途径抑制物(TAK-242)干预抗β2GPI/β2GPI复合物对THP-1细胞的刺激作用。结果抗β2GPI/β2GPI复合物(100μg/mL)刺激THP-1细胞不同时间,可使细胞表达IL-6、IL-8及TNF-αmRNA水平逐渐上升,于刺激2 h时IL-6、IL-8及TNF-α达到峰值(P<0.01),免疫荧光染色及western blot证实细胞表达IL-6、IL-8及TNF-α蛋白水平也明显增加。TAK-242(5μmol/L)可显著抑制抗β2GPI/β2GPI复合物诱导的细胞IL-6、IL-8及TNF-α表达。结论抗β2GPI/β2GPI复合物通过TLR4途径,激活THP-1细胞表达炎性细胞因子IL-6、IL-8及TNF-α,参与抗磷脂综合征的病理机制。     

丙酮酸乙酯对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织巨噬细胞炎症蛋白-2表达的影响

目的 观察丙酮酸乙酯(EP)预先给药对内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织巨噬细胞炎症蛋白-2表达的影响,探讨丙酮酸乙酯可能的保护机制.方法 静脉注射脂多糖(LPS)5 mg/kg,复制大鼠ALI模型.雄性SD大鼠30只随机分为三组:A组为对照组,B组为LPS组,C组为EP+LPS组,于静脉注射LPS前1 h腹腔内注射EP(40 mg/kg).所有动物于注射LPS或生理盐水后6 h颈动脉放血处死,RT-PCR法测定肺组织巨噬细胞炎症蛋白-2 mRNA的表达;酶联免疫吸附法测定肺组织TNF-α和IL-1B的含量.结果 与A组相比,B组、C组肺组织巨噬细胞炎症蛋白-2 mRNA表达增加,肺组织TNF-α和IL-1B含量上升(P<0.05);与B组相比,C组肺组织巨噬细胞炎症蛋白-2 mRNA表达降低,肺组织TNF-α和IL-1B含量降低(P<0.05).结论 丙酮酸乙酯通过下调大鼠LPS诱导的肺组织巨噬细胞炎症蛋白-2表达,降低了TNF-α和IL-1B的释放,减轻ALI大鼠肺部的炎症反应.     

iPSC-MSC来源的外泌体对LPS刺激肺泡巨噬细胞产生炎性因子的影响

目的探讨i PSC-MSC来源的外泌体(exosome,Exo)对LPS刺激的肺泡巨噬细胞释放炎性因子的作用。方法采用旋转超滤法提纯i PSC-MSC外泌体,以无外泌体培养基培养肺泡巨噬细胞NR8383,分别给予Exo(50μg/ml)、LPS(50ng/ml)、LPS(50ng/ml)+Exo(50μg/ml)培养24h,以不含Exo和LPS培养为对照组,利用酶联免疫标记法(ELISA)检测各组上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白浓度。结果提取物经透射电镜观察为圆形或半圆形囊泡,直径40~100nm,表达Exo标志物CD9和CD63;LPS组上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度(435.38±36.31pg/ml、319.76±39.14pg/ml和408.33±43.44pg/ml)与空白对照组(37.48±8.75pg/ml、33.51±7.88pg/ml和37.73±8.46pg/ml)和Exo组(38.71±9.14pg/ml、32.05±6.81pg/ml和42.84±6.54pg/ml)比较显著上调(P0.01);LPS+Exo组TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度(369.30±32.74pg/ml、249.23±36.77pg/ml和328.91±46.45pg/ml)与LPS组相比,明显减少(P0.05);空白对照组与Exo组的TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度无显著性差异。结论成功富集Exo;i PSC-MSC来源的Exo可抑制LPS诱导的肺泡巨噬细胞表达炎性因子。     

COX2抑制剂对大鼠肺泡巨噬细胞生长及炎症反应的影响及机制研究

目的探讨环氧合酶2(COX2)抑制剂塞来昔布对肺泡巨噬细胞凋亡、炎症反应及吞噬能力的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测0. 1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L塞来昔布对大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383的细胞毒性,选择合适的塞来昔布浓度。将NR8383细胞随机分为3组,即对照组、LPS组和LPS+塞来昔布组。对照组:细胞培养板加等体积磷酸盐缓冲液(PBS); LPS处理组:细胞用终浓度为1μg/ml的脂多糖(LPS)处理; LPS+塞来昔布组:10μmol/L的塞来昔布处理细胞1 h后,加1μg/ml的LPS处理细胞24 h。流式细胞术检测细胞凋亡率; Western blotting检测NF-κBp65、IκBα、Bax和Bcl-2蛋白表达; qRT-PCR检测炎症因子TNF-αmRNA表达;激光共聚焦技术检测巨噬细胞的吞噬能力。结果 0. 1～10μmol/L塞来昔布处理对NR8383细胞无细胞毒性,20μmol/L塞来昔布处理可抑制NR8383细胞活力。LPS组与对照组比较,细胞凋亡率升高,NF-κBp65和Bax蛋白表达升高,IκBα和Bcl-2蛋白表达降低,TNF-αmRNA表达升高,细胞吞噬能力降低(P 0. 05),LPS+塞来昔布组与LPS组比较,细胞凋亡率降低,NF-κBp65和Bax蛋白表达降低,IκBα和Bcl-2蛋白表达升高,TNF-αmRNA表达降低,细胞吞噬能力升高(P 0. 05)。结论塞来昔布可通过下调NF-κB信号抑制LPS诱导的NR8383细胞凋亡及炎症反应,并维持吞噬功能,从而对肺损伤起保护作用。     

lncRNA PACER在脓毒症急性肺损伤中的表达水平及相关作用机制研究

目的研究长链非编码RNA PACER(lncRNA PACER)在脓毒症急性肺损伤中的表达水平及相关作用机制。方法分离并培养脓毒症急性肺损伤和无吸烟史的健康人员肺泡巨噬细胞;经腹腔注射脂多糖诱导脓毒症小鼠模型,取其肺组织标本,通过实时荧光定量聚合酶链式反应测定人体和小鼠肺组织中lncRNA PACER相对表达量。分别在细胞过表达、敲低PACER后,采用酶联免疫吸附试验法分别测定小鼠巨噬细胞RAW264. 7和人体单核细胞THP-1炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。成功制备脂多糖诱导急性肺损伤小鼠模型后,经小鼠尾静脉注射慢病毒PACER-siRNA,另以阴性对照siRNA为对照组。采用酶联免疫吸附试验法测定小鼠血清中炎症因子IL-6和TNF-α的表达水平。行苏木精-伊红染色,观察小鼠肺组织病理学改变。结果相比健康人员,脓毒症急性肺损伤患者肺组织肺泡巨噬细胞中lncRNA PACER的相对表达量明显上调(P 0. 01)。脓毒症急性肺损伤小鼠肺组织中lncRNA PACER的相对表达量明显高于正常小鼠(P 0. 01)。过表达PACER慢病毒感染后,人单核细胞THP-1和小鼠巨噬细胞RAW264. 7炎症因子IL-6和TNF-α的水平均明显升高(P 0. 01),其靶基因环氧合酶2(COX-2)相对表达量亦明显上调(P 0. 01)。转染PACER-siRNA后,炎症因子IL-6和TNF-α的表达水平明显下降,COX-2的相对表达量平亦明显下调(P 0. 01)。脂多糖诱导小鼠急性肺损伤后,经尾静脉注射PACER-siRNA慢病毒敲低PACER表达后,小鼠血清中炎症因子IL-6和TNF-α的水平明显下降(P 0. 01),肺组织损伤程度明显减轻。结论 lncRNA PACER高表达于脓毒症急性肺损伤人体和小鼠肺组织,lncRNA PACER可诱导脓毒症急性肺损伤炎症反应的发生,通过敲低PACER表达可明显减轻肺组织损伤程度,提示lncRNA PACER有望成为临床防治脓毒症急性肺损伤的潜在靶点。     

口腔颌面部细菌感染体外模型的建立

目的利用细菌脂多糖(LPS)刺激小鼠结缔组织成纤维细胞L929及小鼠巨噬细胞RAW264.7,建立体外口腔颌面部细菌感染及免疫应答模型,检测不同时间点炎症因子的表达情况。方法利用LPS刺激L929及RAW264.7细胞,采用CCK-8法测定LPS对细胞增殖的影响。QPCR检测肿瘤坏死因子TNF-α、细胞炎症因子、趋化因子等相关基因的表达变化情况。ELISA检测细胞上清液中IL-6水平变化。结果 CCK-8结果显示,LPS能够引起细胞增殖变化。QPCR实验结果显示TNF-α,IL-1,IL-5,IL-6,IL-8,IL-33的mRNA表达明显升高,而IL-10,IL-13,IL-23表达明显下降。CXCL2,CXCL10,FOXO3,GDF15表达量显著增加。ELISA结果显示50μg/mL LPS刺激24h、48h,L929细胞分泌IL-6含量分别为42.04pg/ml、45.52pg/mL;RAW264.7细胞分泌IL-6含量为25.90pg/ml,28.92pg/ml。100μg/ml LPS刺激24h、48h,L929细胞分泌IL-6的含量为18.97pg/ml、21.29pg/ml;RAW264.7细胞分泌IL-6含量为16.90pg/ml,18.21pg/ml。结论 LPS刺激L929及RAW264.7细胞能够引起细胞发生炎症反应,相关炎症因子及趋化因子的表达增加,证明成功建立了口腔颌面部感染体外模型。     

氨溴索对急性肺损伤的保护作用

目的 通过建立急性肺损伤大鼠模型和体外肺泡巨噬细胞培养体系,观察急性肺损伤中,肺泡巨噬细胞在氨溴索干预前后细胞因子表达的情况,探讨氨溴索可能的肺损伤保护机制.方法 一、体内实验:大鼠24只,随机分成3组,每组8只:(1)正常对照组;(2)急性肺损伤组:采用腹腔注射酵母悬液方法复制大鼠急性肺损伤模型;(3)氨溴索治疗组:建立ALI大鼠模型后用氨溴索干预.观察指标主要有:肺部病理学改变、测量大鼠肺系数、血氧分压,肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-10、IL-24 mRNA的表达则采用通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测.二、体外实验:收集肺泡巨噬细胞后分3组:(1)正常对照组:肺泡巨噬细胞中加无菌生理盐水;(2)LPS组:予LPS 10 mg/L刺激肺泡巨噬细胞;(3)LPS+氨溴索组:予LPS10 mg/L和氨溴索180 μmol/L刺激肺泡巨噬细胞.分别于刺激前(0 h),刺激后(6、12、24 h)留取细胞.通过RT-PCR技术检测肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-10、IL-24 mRNA的表达变化.结果 氨溴索治疗组在病理改变,肺系数,动脉血氧分压等各项指标均优于急性肺损伤组,氨溴索干预治疗组,TNF-α、IL-10、IL-24 mRNA表达水平均明显下降,与急性肺损伤组比较差异有统计学意义(P＜0.05),但仍高于正常对照组.体外实验也得出了相同的结论.结论 氨溴索可抑制急性肺损伤或LPS刺激的肺泡巨噬细胞TNF=α、IL-10、IL-24细胞因子mRNA的表达水平.     

内毒素致伤大鼠肺组织促炎与抗炎细胞因子mRNA表达的时相性研究

目的 研究不同剂量内毒素致伤大鼠肺组织促炎和抗炎细胞因子mRNA表达的时相性,并探讨这些细胞因子在全身炎症反应失控和急性肺损伤中的可能作用。方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同剂量脂多糖(LPS)致伤大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-4、IL-10和IL-13的mRNA表达。结果 随着LPS剂量增加,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10和IL-13的mRNA表达均增强(与生理盐水对照组比较,P均<0.01);LPS≥6 mg/kg组上述细胞因子表达显著高于此剂量以下组(P均<0.01)。表达峰值时间:TNF-α为1 h,IL-6为4 h,其他均在2 h。结论 内毒素致急性肺损伤中,TNF-α是早期表达的促炎细胞因子,而IL-6在炎症进一步发展中发挥作用;抗炎细胞因子IL-4、IL-10、IL-13高表达亦可能促进炎症的放大而不是起保护作用。     

青蒿琥酯通过诱导HO-1产生对结核分枝杆菌诱导的THP-1细胞TNF-α分泌的影响

目的探讨青蒿琥酯(ASN)诱导HO-1产生对结核分枝杆菌(Mtb)诱导的THP-1细胞分泌细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响并探讨其可能的作用机制。方法体外培养THP-1细胞,将细胞分为对照组、ASN组、Mtb组、ASN预处理组及Zn PP预处理组。ASN预处理组为浓度0～20μg/ml ASN预处理THP-1细胞4 h,随后加入Mtb(感染复数MOI=10)刺激24 h。锌原卟啉(Zn PP)预处理组为10μmol/L Zn PP抑制剂与THP-1预处理4 h,随后加入Mtb(MOI=10)刺激24 h。MTT法检测ASN对细胞的活性影响。RT-q PCR检测细胞因子TNF-α、核因子E2相关因子2(Nrf2)及血红素氧合酶1(HO-1) mRNA表达; ELISA检测TNF-α蛋白分泌。结果 MTT法检测ASN浓度在0～20μg/ml范围内对细胞无毒性;与对照组相比,Mtb显著增加TNF-αmRNA及蛋白表达,而5～20μg/ml ASN组呈浓度依赖性抑制TNF-αmRNA及蛋白表达(P 0. 05)。此外,ASN能上调Nrf2及HO-1mRNA表达,HO-1竞争性抑制剂Zn PP能增加TNF-α蛋白分泌。结论 ASN通过诱导HO-1产生抑制Mtb诱导的炎症反应。     

咯利普兰对佐剂关节炎大鼠腹腔巨噬细胞体外释放炎性细胞因子的影响

目的探讨选择性磷酸二酯酶(PDE)4抑制剂咯利普兰对脂多糖(LPS)诱导的佐剂关节炎(AA)大鼠腹腔巨噬细胞(PM)体外释放促炎细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的影响,为选择性PDE4抑制剂治疗类风湿关节炎(RA)提供理论依据。方法制备AA大鼠模型,收集PM,体外给予LPS及不同浓度咯利普兰共同孵育,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞培养上清中TNF-α、IL-1β水平,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定细胞内TNF-αmRNA、IL-1βmRNA的表达,并与正常对照相比较。结果 AA大鼠PM培养上清中TNF-α、IL-1β、细胞内TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达均高于对照组大鼠,分别为(386.80±63.24)ng/L vs(48.53±6.47)ng/L(P<0.01)、(317.77±29.33)ng/L vs(77.75±11.60)ng/L(P<0.01)、77.92±12.55vs 15.97±4.37(P<0.01)、49.30±10.06vs 10.15±1.34(P<0.01)。咯利普兰能够剂量依赖性地抑制LPS刺激的AA大鼠PM体外表达TNF-αmRNA、IL-1βmRNA,并抑制TNF-α、IL-1β产生。结论咯利普兰能抑制LPS诱导的AA大鼠PM体外释放促炎性细胞因子,提示其可能通过抑制炎症反应用于RA的治疗。     

Toll样受体4在抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物诱导小鼠腹腔巨噬细胞表达炎症因子中的作用

目的观察抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物刺激小鼠腹腔巨噬细胞表达TNF-α、IL-1β、IL-6的效果,探讨Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法对C3H/He N(TLR4正常)小鼠、C3H/He J(TLR4缺陷)小鼠腹腔注射非特异性兔Ig G(R-Ig G)、抗β2GPⅠ抗体,72 h后用细胞免疫荧光法检测小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6的表达水平;抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物对小鼠腹腔巨噬细胞进行体外刺激,荧光定量PCR法检测细胞表达上述因子的mRNA水平,western blot法检测其蛋白质分泌水平。结果抗β2GPⅠ抗体刺激的C3H/He N小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β、IL-6的水平明显高于C3H/He J小鼠,并经细胞免疫荧光法验证;经体外刺激后,荧光定量PCR法结果显示抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物诱导C3H/He N小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平高于空白组或C3H/He J刺激组(P均0.01);western blot结果显示C3H/He N来源细胞TNF-α、IL-1β、IL-6分泌均显著高于C3H/He J来源细胞(P均0.01)。结论抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物能够促进小鼠腹腔巨噬细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,TLR4为介导此过程的受体之一。     

脓毒症患者血清来源外泌体对巨噬细胞向M1型极化的影响

目的研究脓毒症患者血清来源的外泌体对巨噬细胞极化的影响。方法人单核细胞系的U937细胞经佛波酯(PMA)刺激12h后,分别用脂多糖(LPS)、白细胞介素(IL)-4、健康者血清来源外泌体和脓毒症患者血清来源外泌体刺激48h,然后收集U937细胞并离心取上清液,用实时荧光定量PCR(qPCR)检测趋化因子(c-x-c模体)配体(CXCL)10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞分化抗原(CD)206、肿瘤生长因子-β(TGF-β)和IL-1β的表达,用ELISA法检测培养上清液中CXCL10、TNF-α、IL-1β、和TGF-β的水平。结果 PMA诱导U937细胞向巨噬细胞样细胞转化。这些巨噬细胞样细胞经LPS刺激后有明显较长的突起生成,而且XCL10、TNF-α、IL-1β表达水平增高,而IL-4刺激后细胞形态无明显变化,CD206和TGF-β表达水平增加。脓毒症患者血清来源外泌体刺激后细胞有明显较长的突起生成,而且CXCL10、TNF-α、IL-1β表达水平增高;健康者血清来源外泌体未明显影响细胞形态和CXCL10、TNF-α、IL-1β的表达。结论脓毒症患者血清来源外泌体促进巨噬细胞向M1型极化。     

单核细胞Toll样受体4信号通路在不稳定型心绞痛炎症反应中的作用探讨

目的:探讨单核细胞Toll样受体4(TLR4)信号通路在不稳定型心绞痛炎症反应中的作用.方法:以TLR4配体LPS刺激不稳定型心绞痛患者及对照者单核细胞,应用实时定量RT-PCR检测单核细胞TLR4 mRNA、A20 mRNA的变化,ELISA法检测培养上清TNF-α、IL-10 浓度.结果:不稳定型心绞痛患者单核细胞TLR4 mRNA、A20 mRNA相对表达量高于对照组.受LPS刺激后A20 mRNA 无明显上调.不稳定型心绞痛患者单核细胞LPS刺激后与对照组单核细胞LPS刺激后相比,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)产生更多,白介素-10(IL-10)产生较少.结论:单核细胞TLR4信号通路参与不稳定型心绞痛的炎症反应.TLR4表达上调、A20上调不足与炎症反应有关.     

大黄对急性肺损伤大鼠血浆和支气管肺泡灌洗液中炎症细胞因子表达的影响

目的:探讨大黄对实验性急性肺损伤(ALI)大鼠炎症细胞因子在血浆和肺泡灌洗液中表达的影响.方法:用舌下静脉注射内毒素(LPS)的方法复制ALI模型,将145只雄性Wistar大鼠随机分成LPS组、对照组、大黄治疗组和地塞米松治疗组;分别测定大鼠血浆和支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-8含量.结果:与对照组相比,LPS组血浆和支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β和IL-8均明显升高(P均<0.05),而地塞米松治疗组和大黄治疗组则均明显下降(P<0.05或P<0.01).结论:LPS诱导的大鼠ALI表现为肺和全身炎症反应;大黄和地塞米松能减轻肺和全身炎症反应,其机制可能是通过抑制TNF-α、IL-1β和IL-8活性来实现的.     

脂多糖对人近曲肾小管上皮细胞表面活性蛋白D及肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的:探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)表面活性蛋白D(suffactant protein D,SP-D)及肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响.方法:将体外培养HK-2细胞分为5组,分别给与0、0.1…1、5、10μg/mL LPS刺激8 h.免疫印迹和RT-PCR观察SP-D蛋白及mRNA表达变化,ELISA和RT-PCR观察TNF-α蛋白和mRNA表达变化.结果:1、5、10μg/mL LPS刺激8 h可引起HK-2细胞SP-D蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.05),1、5、10μg/mL LPS刺激8 h可引起HK-2细胞TNF-α蛋白及mRNA表达显著增加(P<0.05).SP-D与TNF-α的表达呈负相关.结论:LPS刺激下TNF-α表达增加与SP-D的表达降低有关.SP-D可能在肾脏炎症反应中发挥重要作用.     

二烯丙基三硫对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞因子生成的影响

目的 探讨二烯丙基三硫（DATS）对脂多糖（LPS）诱导小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞因子生成的影响。方法 体外培养MH-S细胞，用DATS和（或）LPS进行干预。酶联免疫吸附法测定细胞上清液中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）浓度。反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1β mRNA表迭。结果 LPS（1mg／L）孵育细胞1、2、3、6h，TNF-α、IL-1β的蛋白生成及其mRNA表达均较对照组明显增加（P〈0．01），呈时间依赖性。用DATS（0．1、0．5、2．5、5．0ms／L）预处理细胞30min后再给予LPS刺激3h，可使TNF-α、IL-1β含量及其mRNA表达明显降低，并呈剂量依赖性，其中TNF-α含量仍高于对照组（P〈0．05），但IL-1β含量在2．5、5mg／LDATS作用下可降至对照组水平。单独DATS对TNF-α及IL-1β的生成及其mRNA表达无明显影响（P〉0．05）。结论 DATS通过抑制LPS诱导的小鼠MH-S细胞TNF-α、IL-1β mR-NA表达而减少其蛋白生成，具有直接的抗炎效应，这是DATS预防ALI发生、减轻肺组织损伤的重要机制。     

五味子乙素对巨噬细胞炎症相关介质表达的影响

目的 探讨五味子乙素（Schisandrin B）的抗炎作用及其机制,为指导治疗妇科炎症提供理论依据.方法 分离和培养小鼠腹腔内的巨噬细胞,随机分为Normal组（DMSO）、DEX组（地塞米松1×10-7mmol/ L）、LPS组（1.1×10-2 mmol/L）和Schisandrin＋LPS组,Schisandrin＋LPS组根据给剂量分为4个亚组（4×10-5mmol/L、4×10-6mmol/L、4×10-7mmol/L、4×10-8mmol/L）.利用ELISA法检测培基上清中IL-6、TNF-α、NO的含量,RT-PCR法检测巨噬细胞炎症模型中IL-1β的表达.结果 Schisandrin＋LPS组和DEX组的巨噬细胞IL-1β的表达量明显低于Normal组（P〈0.05）,且Schisandrin＋LPS组的巨噬细胞IL-1β的表达低于DEX组（P〈0.05）;Schisandrin＋LPS组的上清液中TNF-α、IL-6及NO含量低于Normal组且呈剂量依赖性.结论 Schisandrin B可通过对TNF-α、IL-1β、IL-6、NO表达的抑制来实现抗炎作用.     

热休克反应和热休克转录因子1对LPS诱导的TNF-α和IL-15表达的影响

【目的】观察热休克反应(HSR)以及热休克转录因子1(HSFl)对LPS诱导的TNF-α和IL-15表达的影响。【方法】用200ng／ml LPS处理热休克或未热休克的小鼠RAW264．7巨噬细胞,抽提细胞的总RNA进行RT-PCR实验,观察TNF-α和IL-15 mRNA表达的情况;采用HSF1基因敲除小鼠经腹腔内注射LPS复制内毒素血症模型,抽提HSF1基因敲除小鼠(HSF1^--)和野生型小鼠(HSF1^ )肺组织的总RNA进行RT-PCR实验,观察TNF-α和IL-15 mRNA表达的情况。用TESS分析IL-15的启动子,寻找热休克元件(Heat shock element,HSE)。【结果】小鼠RAW264．7巨噬细胞受LPS刺激后,TNF-α和IL-15 mRNA的水平明显增加,而热休克抑制了LPS诱导的TNF-α和Il-15 mRNA的表达;腹腔注射LPS后,HSF1^--小鼠和HSF1^ 小鼠的肺组织中TNF-α和Il-15 mRNA的水平明显增加,HSF1^--小鼠的肺组织中TNF-α和IL-15 mRNA水平的增加明显高于HSF1^ 小鼠。经TESS软件分析发现IL-15的启动子区含有2个HSE。【结论】HSR、HSF1抑制了LPS诱导的TNF-α和IL-15的表达;HSF1可能通过与IL-15启动子区的HSE结合抑制LPS诱导的IL-15的表达。