血管软化丸调控PI3K/Akt/mTOR通路影响细胞自噬及抗动脉粥样硬化的作用机制研究

目的通过观察血管软化丸对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控,研究血管软化丸抗动脉粥样硬化的作用机制。方法动物实验,观察各组小鼠主动脉横截面病理损伤程度,观察血管软化丸对小鼠主动脉组织Akt、mTOR mRNA和蛋白质表达。体外实验,观察血管软化丸含药血清、Akt抑制剂康士得、mTOR抑制剂雷帕霉素及mTOR-siRNA对小鼠RAW264.7巨噬细胞的影响,观察巨噬细胞自噬体的变化,观察含药血清对巨噬细胞微管相关蛋白LC3-II表达的影响,观察含药血清对巨噬细胞Akt、mTOR、微管相关蛋白LC3-II及自噬相关蛋白Beclin 1的表达的影响,观察含药血清对巨噬细胞分泌炎症因子水平的影响。结果动物实验显示:血管软化丸组动脉粥样硬化病变程度明显较轻。与对照组比较,血管软化丸组小鼠主动脉组织Akt和mTOR表达水平明显较低(均P<0.05)。体外实验发现,与对照组相比,血管软化丸含药血清组和各抑制剂组透射电镜下观察到自噬体数量明显较大(均P<0.05),巨噬细胞微管相关蛋白LC3-II和Beclin1表达明显升高(均P<0.05),而Akt及mTOR的mRNA及蛋白表达水平明显较低(均P<0.05),巨噬细胞分泌的炎症因子IL-10水平明显高低(P<0.05),而炎症因子IFN-γ水平明显较高(P<0.05)。结论血管软化丸通过抑制炎症反应治疗动脉粥样硬化的分子机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,调节巨噬细胞自噬,减少斑块巨噬细胞浸润有关。     

基于TLR9介导巨噬细胞极化效应探讨血管软化丸抗动脉粥样硬化的作用机制

目的:观察血管软化丸通过对TLR9调控,影响其TLR9下游信号NF-κB和IRF7水平,以及对巨噬细胞(M2/M1)极化平衡状态的影响,研究血管软化丸抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:体外实验将巨噬细胞随机分为5组,即对照组(空白血清),血管软化丸中剂量组,血管软化丸高剂量组,IRS组(TLR9拮抗剂:IRS869),ODN组(激动剂:ODN1826)。体内实验将Apo E-/-小鼠分为5组,即对照组(生理盐水,灌胃),IRS组(IRS869,腹腔注射),ODN组(ODN1826,腹腔注射),血管软化丸中剂量组(浓度为1.728 g/m L),血管软化丸高剂量组(浓度为3.456 g/m L)。腹腔注射每周2次,灌胃每日1次,连续给药8周后取材进行检测。采用Western Blot法检测各组细胞TLR9的蛋白含量,主动脉TLR9及其下游分子My D88,p-NF-κB和IRF7的蛋白含量;采用流式细胞术和免疫化学荧光检测各组细胞M1型和M2型的比例;采用RT-PCR和ELISA法检测各组细胞TNF-α的表达;采用RT-PCR法和免疫荧光检测RAW264.7细胞和动脉斑块的M1型和M2型巨噬细胞的相关标志性因子和炎症因子;病理学检测验证血管软化丸抗动脉粥样硬化的疗效。结果:与对照组RAW264.7细胞相比,各中药组和IRS组TLR9蛋白表达量明显下降(P0.05),ODN组TLR9蛋白表达量明显升高(P0.05)。与对照组相比,各中药组和IRS组动脉斑块的TLR9、My D88、p-NF-κB和IRF7蛋白表达水平均明显较低(P0.05)。与对照组相比,ODN组M1型巨噬细胞比例相对增加,各中药组和IRS组M2型比例相对增加,差异均具有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,各中药组和IRS组动脉斑块中i NOS的荧光密度低表达,而CD206的荧光密度为高表达。与对照组相比,各中药组和IRS组斑块形成和面积相对较少(P0.05)。在RAW264.7细胞实验中,中药组和IRS可逆转ODN1826引起的TNF-α的升高,使其降低(P0.05)。与对照组比较,各中药组和IRS组斑块形成和面积相对较少(P0.05)。结论:血管软化丸和TLR9的拮抗剂IRS869可抑制TLR9的表达,阻止其下游NF-κB和IRF7信号途径的激活,同时改变巨噬细胞极化状态(M2/M1)的平衡使其向M2型方向倾斜,能够使Apo E-/-小鼠斑块面积及其斑块易损性减小。     

巨噬细胞自噬在动脉粥样硬化发病中作用的研究进展

<正>自噬是真核细胞利用溶酶体降解细胞内受损的细胞器及蛋白等大分子物质的过程,在营养缺乏、组织缺氧、氧化应激、DNA损伤等环境压力下被激活。机体可通过自噬回收利用内源性细胞成分(氨基酸、游离脂肪酸、核苷酸)以维持细胞稳态~([1])。动脉粥样硬化(AS)是以脂质积累、炎症细胞浸润为特征的慢性炎症过程。巨噬细胞能够摄取脂蛋白,使脂质积聚,形成泡沫细胞,并释放多种酶和炎性介质,影响AS斑块进展。斑块中巨噬细胞凋亡以及胞葬作用缺陷,也会促进斑块坏死,从而导致斑块的不稳     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路调控巨噬细胞自噬探讨黄芪甲苷抗动脉粥样硬化的作用机制

目的观察黄芪甲苷对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控,研究黄芪甲苷抗动脉粥样硬化的作用机制。方法体外细胞实验中,将小鼠巨噬细胞RAW264.7随机分为5组,即对照组、黄芪甲苷组、康士得组、雷帕霉素组以及si RNA组。分别用黄芪甲苷含药血清、Akt抑制剂康士得、mTOR抑制剂雷帕霉素及mTOR-si RNA体外处理RAW264.7细胞48 h,透射电镜观察巨噬细胞自噬体的变化,免疫荧光法及Western blotting法检测微管相关蛋白LC3-II表达,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western blotting法检测Akt、mTOR及自噬相关蛋白Beclin 1的表达,ELISA检测RAW264.7细胞分泌炎症因子白细胞介素-4(IL-4)、IL-10、IL-2和γ-干扰素(IFN-γ)水平。体内实验采用HE染色检测各组小鼠主动脉横截面病理损伤程度;q RT-PCR和Western blotting法分别检测小鼠主动脉组织中Akt、mTOR的mRNA和蛋白表达。结果体外实验结果显示,与对照组比较,黄芪甲苷含药血清组和各抑制剂组细胞透射电镜下观察到自噬体明显增多(P0.05),LC3-II和Beclin1蛋白的表达水平明显上调(P0.05),而Akt及mTOR的mRNA及蛋白表达水平明显减少(P0.05),巨噬细胞分泌的IL-10明显降低,而分泌的IFN-γ显著增加(P0.05)。小鼠主动脉HE染色结果显示,与模型组比较,黄芪甲苷组小鼠血管各层结构正常,排列整齐,局部有小灶性的钙化颗粒物沉积,病变轻、斑块小,泡沫细胞和脂质减少,弹力板基本完整,病变程度明显较轻,并较各抑制剂组轻。黄芪甲苷组小鼠主动脉组织Akt、mTOR的mRNA和蛋白表达均较低(P0.05)。结论黄芪甲苷抑制动脉粥样硬化斑块的形成机制与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路、抑制炎症反应有关。     

基于miR-33a调控ABCA1表达探讨血管软化丸抗动脉粥样硬化的作用机制

目的:通过观察血管软化丸是否通过调控miR-33a,进而影响下游信号ABCA1的表达,促进巨噬细胞内胆固醇流出,研究血管软化丸抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:通过病理学检测观察血管软化丸对动脉粥样硬化的影响,通过体外实验建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞,然后用血管软化丸含药血清处理,Real-Time PCR技术检测细胞miR-33a表达。细胞随机分为空白对照组、血管软化丸含药血清处理组、血管软化丸含药血清+miR-33a mimic处理组,RT-PCR和Western blotting法检测细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达,油红O染色和高效液相色谱法检测细胞内脂质含量,[3H]法检测细胞内胆固醇流出。结果:体内实验显示,各中药组血管各层结构正常,排列整齐,局部有小灶性的钙化颗粒物沉积,病变轻,斑块小,泡沫细胞和脂质减少,弹力板基本完整,病变程度明显低于空白对照组。与空白对照组相比,血管软化丸高、中、低三个剂量组小鼠主动脉的miR-33a表达量降低、ABCA1基因和蛋白相对表达量均升高,差异有统计学意义(P0.05)。体外实验显示,在不影响细胞活性状况下,血管软化丸含药血清呈浓度和时间依赖性下调miRNA33a表达;血管软化丸含药血清能明显上调ABCA1 mRNA和蛋白的表达,但能被转染miRNA33mimic抑制;血管软化丸含药血清可减少THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞中的脂质蓄积,但能被细胞中转染miRNA33 mimic所弱化;EGCG减少细胞内胆固醇蓄积是与其促进细胞内胆固醇流出有关,细胞中转入过量miRNA33a可以抑制胆固醇流出。结论:血管软化丸可通过减少miRNA33a的生成,进而上调ABCA1表达,促进巨噬细胞中胆固醇流出,这可能是血管软化丸抗动脉粥样硬化作用的分子机制之一。     

基于PI3K/Akt/mTOR通路探讨补肾抗衰片介导自噬调控动脉粥样硬化的机制

目的观察补肾抗衰片对动脉粥样硬化(AS)和巨噬细胞自噬的影响并探讨其分子机制。方法采用单纯高脂饮食喂养法建立AS兔模型。于4周末,24只兔随机分为对照组、模型组、补肾抗衰片[1g/(kg·d)]组及阿托伐他汀[5mg/(kg·d)]组,每组6只,干预8周。检测血清TC、TG、LDL-C和HDL-C的水平;油红O染色观察动脉粥样硬化斑块形成情况,HE染色观察血管内膜病理变化,计算内膜增生面积与中膜面积的比值;检测LC3Ⅱ蛋白、Beclin-1蛋白表达水平。建立氧化低密度脂蛋白(100μg/mL)诱导的巨噬细胞株RAW264.7自噬模型,分为模型组、补肾抗衰片组(10%含药血清)和雷帕霉素(10nmol/L)组,另设正常对照组。Western blot技术检测各组细胞LC3Ⅱ、p62、PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达水平。结果在体研究结果显示,与模型组比较,阿托伐他汀组血清TC、TG、LDL-C水平降低(P0.01),HDL-C水平升高(P0.01);阿托伐他汀组和补肾抗衰片组主动脉内中膜面积比值降低(P0.05,P0.01),主动脉LC3Ⅱ阳性面积百分比、Beclin-1蛋白的表达升高(P0.05,P0.01)。体外研究结果显示,与模型组比较,补肾抗衰片组和雷帕霉素组细胞LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平升高(P0.01),p62、PI3K、p-Akt、p-mTOR表达降低(P0.01)。结论补肾抗衰片能减轻AS病变程度,上调自噬水平,其机制可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,促进巨噬细胞自噬相关。     

基于TRPV1对动脉血管平滑肌的自噬作用探讨人参汤治疗AS的作用机制

目的 基于香草酸受体亚型1（TRPV1）对动脉血管平滑肌的自噬作用探讨《金匮要略》人参汤治疗动脉粥样硬化（AS）的作用机制。方法 SPF级8周龄雄性C57BL/6J小鼠14只作为正常组,8周龄载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠70只作为模型组。模型组采用高脂饲料喂食8周制备AS小鼠模型,随后随机分为模型组、人参汤低、中、高剂量（2.715、5.43、10.68 g·kg^-1·d^-1）组和辛伐他汀（0.02 g·kg^-1·d^-1）组,连续给药8周。8周后,取血清,采用检测试剂盒测定血清总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平,观察小鼠血脂水平的变化;取主动脉,采用苏木素-伊红（HE）染色观察主动脉根部整体的病理情况,采用油红O染色检测主动脉斑块内脂质沉积情况,并计算主动脉根部面积占管腔面积百分比;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠主动脉组织中TRPV1、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）及自噬效应蛋白-1（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、微管相关蛋白1轻链Ⅰ（LC3Ⅰ）的表达情况。结果 与正常组比较,模型组小鼠血清中CHO、TG、LDL-C水平显著升高,HDL-C水平显著降低,主动脉根部斑块面积显著增多（P<0.01）;与模型组比较,人参汤各剂量组可明显降低AS模型小鼠血清中CHO、TG、LDL-C水平（P<0.05,P<0.01）,人参汤低、中剂量组最为显著（P<0.01）。与正常组比较,辛伐他汀组、人参汤低、中、高剂量组均能明显减少主动脉根部斑块面积（P<0.05,P<0.01）,其中人参汤高剂量组效果减轻斑块效果最为显著（P<0.01）。与正常组比较,模型组小鼠的TRPV1、p-AMPK/AMPK、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的相对表达量明显降低（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,人参汤中、高剂量组TRPV1、p-AMPK/AMPK、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的相对表达量均明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 《金匮要略》人参汤具有抗AS作用,其作用机制可能是通过调节TRPV1的表达上升,进而恢复了由AMPK介导的自噬水平实现的。     

基于血管平滑肌自噬探讨瓜蒌-薤白对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响

目的:探究瓜蒌-薤白药对ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)主动脉斑块血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及自噬水平的影响。方法:高脂饲料饲养ApoE^-/-小鼠40只复制AS动物模型,随机分为模型组、瓜蒌-薤白组、雷帕霉素组、阿伐托他汀组,以普通饮食C57BL/6J小鼠10只为正常组。正常组及模型组给予生理盐水灌胃,瓜蒌-薤白组、雷帕霉素组及阿伐托他汀组每日给予相应药物灌胃,共8周。实验结束后处死小鼠,酶标仪检测小鼠血清,总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平;主动脉油红O染色观察并测量主动脉斑块面积占总面积之比。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测主动脉中膜VSMCs增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平。透射电镜观察VSMCs自噬小体并检测VSMCs自噬相关蛋白酵母ATG6同源物(Beclin-1),酶联相关轻链蛋白Ⅱ(LC3Ⅱ),p62蛋白表达。结果:与模型组比较,瓜蒌-薤白组可显著减少AS小鼠主动脉脂质积累及斑块面积,降低TC,TG,LDL-C水平(P<0.01),升高HDL-C(P<0.05)。瓜蒌-薤白显著降低主动脉VSMCs内增殖相关抗原PCNA及α-SMA水平(P<0.01),抑制VSMCs过度增殖;瓜蒌-薤白显著上调主动脉VSMCs内Beclin-1及LC3Ⅱ蛋白表达,降低p62积累(P<0.01),增加VSMCs自噬小体的表达,上调VSMCs自噬水平。结论:瓜蒌-薤白调节AS小鼠体内血脂水平,抑制主动脉VSMCs过度增殖抑制AS小鼠主动脉的斑块形成,其机制可能与其上调VSMCs自噬活性有关。     

血管软化丸调控CD40-CD40L系统及抗动脉粥样硬化的作用机制研究

目的:观察血管软化丸对CD40-CD40L系统血小板活化标志物的影响,研究血管软化丸抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:40只雄性ApoE~(-/-)小鼠分为4组(模型组、氯吡格雷组、血管软化丸高剂量组、血管软化丸低剂量组),另选10只C57BL/6小鼠作为对照组。干预12周后检测血脂、外周血小板表面PAC-1、CD40L表达,观察主动脉组织病理形态学改变;检测主动脉组织CD40L表达水平。结果:与模型组相比,血管软化丸高剂量组和血管软化丸低剂量组血清血脂TC、TAG和LDL-C水平均明显降低(均P0.05),HDL-C水平明显升高(P0.05);血管软化丸高剂量组和血管软化丸低剂量组血动脉粥样硬化病变程度明显较模型组和氯吡格雷组轻,血管软化丸两个剂量组血小板活化标志物水平均较模型组明显降低(均P0.05);模型组动脉组织CD40L表达光密度值明显高于正常组(P0.05)。结论:血管软化丸抗动脉粥样硬化的作用机制可能与血管软化丸能够调节血脂,调控CD40-CD40L系统抑制血小板活化作用有关。     

艾灸对小鼠活性巨噬细胞自噬作用的影响研究

研究表明,艾灸对于机体免疫系统具有双向良性调整作用,既能发挥抗感染作用也能防止炎症过当［1-2］。观察艾灸时主要淋巴细胞的信号转导有助于揭示艾灸作用机制。巨噬细胞对抗感染抗炎免疫类型和强度具有重要意义,其极化状态和吞噬能力是可变的,自噬可能是影响巨噬细胞功能状态的因素之一。自噬是真核细胞内一种广泛的蛋白和细胞器的自我清除过程。研究表明,温和、持续的高温刺激可能激活细胞自噬反应［3］。本研究通过对艾灸后自噬标志物［4］和相关信号通路［5-6］的检测,分析艾灸与自噬之间的关系,揭示艾灸调节细胞免疫的分子基础和途径,为艾灸用于感染与炎症的治疗提供理论依据。     

蛭龙活血通瘀胶囊通过NLRP3炎症小体抗动脉粥样硬化的机制研究

目的:探究蛭龙活血通瘀胶囊通过NLRP3信号途径抗动脉粥样硬化的分子机制。方法:将45只新西兰大白兔随机分为正常对照组、模型对照组、蛭龙活血通瘀胶囊3.12 g/kg组、阿托伐他汀钙0.51 mg/kg组、蛭龙活血通瘀胶囊3.12 g/kg+阿托伐他汀钙组0.51 mg/kg,每组9只,适应性喂养一周后除正常对照组外其余行颈动脉空气干燥术,并予高脂饲料饲喂养,正常对照组予普通饲料喂养。在实验的第2 w、4 w行颈动脉彩超;第4 w末处死家兔取血清及颈动脉组织进行血脂、HE染色、油红染色、免疫组化、免疫印迹、ELISA实验检测相关指标并进行统计分析。结果:与正常对照组比较,模型对照组血脂各项指标、颈动脉内中膜厚度、颈动脉斑块数量均显著增高(P<0.05或P<0.01),表明造模成功;与模型对照组比较,各用药组的血脂各项指标(TC、TG、LDL-C含量)、颈动脉内中膜厚度、颈动脉斑块数量均明显改善(P<0.01);HE染色提示颈动脉细胞显著增生,可见由大量泡沫细胞构成的脂质斑块,斑块内有炎症细胞浸润,治疗后炎症细胞明显减少,其中蛭龙活血通瘀胶囊3.12 g/kg+阿托伐他汀钙0.51 mg/kg组效果最佳。NLRP3免疫组化提示模型对照组颈动脉病变组织中有大量NLRP3阳性表达,比正常对照组中显著增多(P<0.01);经治疗后,蛭龙活血通瘀胶囊3.12 g/kg组、阿托伐他汀钙0.51 mg/kg组和蛭龙活血通瘀胶囊3.12 g/kg+阿托伐他汀钙0.51 mg/kg组NLRP3阳性表达明显减少,其中蛭龙活血通瘀胶囊3.12 g/kg+阿托伐他汀钙0.51 mg/kg组NLRP3阳性表达最少(P<0.01)。免疫印迹实验结果显示,与模型对照组比较,蛭龙活血通瘀胶囊3.12 g/kg、阿托伐他汀钙0.51 mg/kg组和蛭龙活血通瘀胶囊3.12 g/kg+阿托伐他汀钙0.51 mg/kg组中p-NF-κB、NLRP3、Caspase-1、pro-IL-1β、IL-1β、pro-IL-18和IL-18蛋白水平均明显下调(P<0.05或P<0.01);ELISA实验结果显示,与模型对照组比较,各用药组在血清IL-1β、 NF-κB及IL-18含量均明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论:蛭龙活血通瘀胶囊能够改善高脂血症颈动脉粥样硬化家兔血脂及减少颈动脉斑块生成,且与阿托伐他汀钙联用效果更佳,其机制与通过抑制NF-κB的磷酸化进而抑制NLRP3炎症小体活化及其下游炎症因子的释放有关。     

冠心康对microRNA-126和VEC的调控及抗动脉粥样硬化的作用机制研究

目的:观察冠心康对小鼠主动脉及血管内皮细胞miRNA-126及其下游相关信号GRS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1表达的调控,探索中医药抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:体外细胞实验中,将小鼠血管内皮细胞随机分为5组,即对照组、模型组、中药高剂量含药血清组、中药低剂量含药血清组。不同组别VEC分别经不同含药血清干预后,观察细胞增殖和凋亡情况,采用qRT-PCR和Western-blot检测VEC中pri-miR-126、RGS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1 mRNA和蛋白表达;体内实验采用HE染色检测各组小鼠主动脉横截面病理损伤程度,采用qRT-PCR和Western-blot检测主动脉pri-miR-126、RGS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1 mRNA和蛋白表达。结果:体外实验结果显示,与对照组相比,中药高低剂量组的VEC凋亡率和增殖率明显优于模型组(P均0.05),中药高剂量组和中药低剂量组VEC增殖率比较差异不明显(P0.05);与对照组相比,中药高低剂量组VEC中miR-126、RGS16、CXCL12、CXCR4和VCAM-1 mRNA表达明显优于模型组(P0.05),中药高剂量组和中药低剂量组间比较差异不明显(P0.05);与对照组相比,中药高低剂量组VEC中RGS16、CXCL12、CXCR4和VCAM-1蛋白表达明显优于模型组(P0.05),中药高剂量组和中药低剂量组间比较差异不明显(P0.05)。体内实验结果显示,小鼠主动脉HE染色结果,对照组小鼠主动脉血管管径厚薄均匀,内膜光滑平整,无动脉粥样硬化病灶,模型组小鼠血管管径厚薄不均匀,斑块形成明显,血管管壁厚度、AS斑块截面积显著大于其他各组。中药高低剂量组小鼠主动脉各层结构正常,炎性细胞浸润较轻,病变轻,AS斑块较小,病变程度明显轻于模型组。与对照组相比,中药高低剂量组主动脉miR-126、RGS16、CXCL12、CXCR4和VCAM-1 mRNA表达明显优于模型组(P0.05),中药高剂量组和中药低剂量组间比较差异不明显(P0.05);与对照组相比,中药高低剂量组主动脉RGS16、CXCL12、CXCR4和VCAM-1蛋白表达明显优于模型组(P0.05),中药高剂量组和中药低剂量组间比较差异不明显(P0.05)。结论:冠心康抑制动脉粥样硬化斑块的形成的作用机制可能与调控miRNA-126及其下游相关信号GRS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1表达有关。     

基于网络药理学探讨金银花抗动脉粥样硬化的作用机制

目的 运用网络药理学方法探究金银花治疗动脉粥样硬化的分子作用机制。方法 通过多个数据库查找并筛选金银花的活性成分、作用靶点和动脉粥样硬化基因。通过Cytoscape 3.7.2软件构建“药物-活性成分-靶点-疾病”网络。运用R4.0.4软件进行GO功能分析及KEGG通路分析。结果 筛选出17个活性成分,196个靶标蛋白,2419个疾病基因,129个药物-疾病交集基因。GO功能富集分析得到GO条目2584个,包括生物过程2328个,分子功能172个和细胞组分84个。KEGG通路富集筛选得到信号通路162条,主要涉及血脂和动脉粥样硬化、流体剪切应力和动脉粥样硬化等。结论 金银花可能主要通过β-胡萝卜素、木樨草素、山柰酚和槲皮素等多种活性成分作用于JUN、RELA、IL1B、IL6和MAPK1等基因,直接调控血脂和动脉粥样硬化以及流体剪切应力和动脉粥样硬化通路起到抗动脉粥样硬化作用。     

基于脑出血后小胶质细胞极化及细胞自噬活动探讨中医药干预发挥的抗损伤-促修复双重作用机制的研究进展

脑出血是神经内科常见的急危重症，发病后形成初级损伤和继发性损伤，造成严重的神经功能缺损和脑损伤。为了应对这种损伤，大脑启动了如小胶质细胞极化及细胞自噬活动等自我修复机制，旨在通过抑制损伤、促进修复以维持中枢神经系统内环境的稳态。然而这种内源性修复具有一定的局限。因此，外源性干预以促进机体抑制损伤、促进修复显得尤为重要。近年来，中医药治疗脑出血因其多靶点、多途径、多环节作用特点，得到广泛关注。探讨脑出血后中医药干预发挥的促进机体抑制损伤、促进修复双重作用机制，有助于进一步阐明和提高中医药治疗脑出血的临床疗效。     

基于JAK2/STAT3的龙胆苦苷通路调控溃疡性结肠炎小鼠巨噬细胞极化机制研究

目的 基于酪氨酸激酶2/信号转导及转录激活因子3（JAK2/STAT3）通路,探讨龙胆苦苷对硫酸葡聚糖（DSS）诱导的溃疡性结肠炎小鼠的保护作用及对巨噬细胞极化的调控。方法 BALB/c雄性小鼠按体质量随机分成对照组、模型组及龙胆苦苷低、中、高剂量（25、50、100 mg·kg^–1）组,每组各12只。采用DSS诱导结肠炎小鼠模型;检测并记录给予龙胆苦苷后小鼠体质量、稀便、血便、结肠长度、结肠厚度和小鼠死亡情况;通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠结肠中炎症因子白细胞介素-4（IL-4）、IL-10、IL-6、IL-12水平;流式细胞术分析小鼠结肠中M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的比例;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、巨噬细胞甘露糖受体CD206蛋白及巨噬细胞极化上游通路JAK2、3STAT3等蛋白的表达。结果 DSS诱导的溃疡性结肠炎模型小鼠出现严重的体质量下降和稀便、血便现象,疾病活动指数（DAI）评分明显升高（P<0.05）。与对照组比较,模型组小鼠结肠发生明显的缩短和肿胀（P<0.05）,IL-4、IL-10、iNOS、CD206、p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3表达水平明显上调（P<0.05）,IL-6和IL-12表达水平明显下调（P<0.05）。与模型组比较,龙胆苦苷给药组小鼠DAI评分显著降低（P<0.05）,结肠缩短和肿胀得到明显的改善（P<0.05）,IL-4、IL-10、CD206表达水平显著升高（P<0.05）,IL-6、IL-12、iNOS、p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3表达显著降低（P<0.05）。结论 龙胆苦苷能通过下调JAK2/STAT3通路的磷酸化表达,调节结肠巨噬细胞极化趋向于M2型巨噬细胞,从而改善DSS诱导急性结肠炎小鼠的结肠损伤。     

基于AMPK/mTOR自噬通路探讨芍药苷保护溃疡性结肠炎小鼠的作用机制

目的 探讨芍药苷通过腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）自噬通路对溃疡性结肠炎（UC）小鼠的保护作用机制研究。方法 自由饮用4%葡聚糖硫酸钠（DSS）建立UC小鼠模型，56只BALB/c雄性小鼠，随机分为模型组、AMPK抑制剂组（20 mg·kg^-1）、芍药苷（50 mg·kg^-1）+抑制剂（20 mg·kg^-1）组、芍药苷高剂量组（50 mg·kg^-1）、中剂量组（25 mg·kg^-1）、低剂量组（12.5 mg·kg^-1）药物干预7 d后，通过比较小鼠体质量、疾病活动指数（DAI）变化和苏木素-伊红（HE）染色结果判断芍药苷对UC的保护作用。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的水平，免疫荧光检测结肠中微管相关蛋白1轻链3（LC3）的含量，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织中AMPK、mTOR蛋白及其磷酸化蛋白p-AMPK、p-mTOR，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测AMPK、mTOR、Beclin1、LC3和p62的mRNA表达水平。结果 与空白组比较，模型组小鼠体质量下降、DAI评分升高、结肠出现严重的病理学损伤，炎症因子TNF-α、IL-6在血清中含量上升（P<0.01），LC3和p-AMPK/AMPK在结肠组织中蛋白水平下调，p-mTOR/mTOR蛋白水平上调（P<0.01）；AMPK、LC3的mRNA表达水平下调，mTOR、p62的mRNA表达上调（P<0.01）。与模型组和芍药苷+抑制剂组比较，经芍药苷治疗后小鼠体质量上升、DAI评分降低、结肠组织病理损伤减轻，炎症因子TNF-α、IL-6在血清中含量下降（P<0.05），LC3和p-AMPK/AMPK在结肠组织中蛋白水平上调，p-mTOR/mTOR蛋白水平下调（P<0.01），AMPK、Beclin1、LC3的mRNA表达水平上调，mTOR、p62的mRNA表达下调（P<0.01），抑制剂组小鼠结肠组织病理损伤严重，各项指标趋势与芍药苷高剂量组完全相反。结论 芍药苷可通过激活AMPK/mTOR信号通路，增强自噬，减轻UC小鼠的炎症损伤，从而起到保护作用。     

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??OBJECTIVE To analyze active ingredients,targets,pathways and biological processes of xianglian pills by means of network pharmacology and explore its pharmacodynamics material base and mechanism of action.METHODS Active ingredients and corresponding targets of xianglian pills were obtained by using TCMSP database and BATMAN-TCM analytical platform,the network of xianglian pills active ingredients-targets was constructed by using Cytoscape 3.5.1 software, using the STRING platform to build protein-protein interaction; GO bioprocess enrichment and clustering analysis of target genes were finished by using BINGO and MCODE plug-ins; KEGG signaling pathways of target genes were analyzed by means of DAVID database.RESULTS Eleven active ingredients in xianglian pills act on 291 potential targets. these targets participate in eighteen major GO biological process adjustment sub-clusters of the inflammatory response, leukotriene metabolism, lipid metabolism, apoptosis, smooth muscle contraction and platelet activation etc. involve in thirty-three signal pathways of seven categories: inflammation, metabolism,signal transduction, cancer, secretion of digestive juices, ardiovascular system etc.CONCLUSION The different therapeutic value, pharmacodynamic substances and molecular mechanism of Xianglian pills in the treatment of inflammation,diabetes,cancer and cardiovascular diseases have been preliminarily elucidated, which provides new clues for the development of its clinical application.     

基于OPG/RANKL信号轴探讨二至丸治疗绝经后骨质疏松的作用机制

目的:探讨二至丸治疗绝经后骨质疏松模型鼠的作用机制.方法:将108只雌性SD鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(PMOP)组、雌激素治疗(E2)组、二至丸低剂量治疗(EZW-L)组、二至丸中剂量治疗(EZW-M)组、二至丸高剂量治疗(EZW-H)组,每组18只.E2组接受E2针剂皮下注射,EZW-L组、EZW-M组、...