熟地等4味中药的植物雌激素作用的实验研究

目的:观察熟地黄、白芍、当归、川芎等中药对性未成熟SD大鼠子宫系数的影响,以及含药血清对人乳腺癌MCF7细胞体外增殖的影响,评价其植物雌激素样作用.方法:正常雌性性未成熟SD大鼠,体重(70±5)g,按体重均衡和随机的原则分为7组(正常对照、己烯雌酚、熟地黄、白芍、当归、川芎和四物汤组),分别每天分早、晚2次灌胃,给药均持续4 d,第5天腹主动脉取血,分离血清,分离子宫并称重,免疫组化法测定子宫组织雌激素受体表达量;药物血清用于MCF7细胞体外增殖,细胞周期和雌激素受体ERα蛋白表达的测定.结果:熟地黄、白芍和当归组的幼鼠子宫系数均高于正常对照组(P＜0.05);川芎组幼鼠子宫系数与正常对照组相比,差异无统计学意义;白芍、当归、川芎的含药血清均可显著促进MCF7细胞MTT体外增殖(P＜0.05),并且4味中药的药物血清均能使MCF7细胞S期细胞数和细胞增殖指数PI增加(P＜0.01),当归和川芎可提高MCF7细胞ERα蛋白的表达水平(P＜0.05),熟地黄和白芍的药物血清对MCF7细胞的ERα蛋白表达水平,与正常对照组相比,差异无统计学意义.结论:熟地黄、白芍和当归等中药的免煎剂有植物雌激素样作用,川芎组整体实验和体外细胞培养结果不完全一致,已烯雌酚在本实验剂量时有使幼鼠体重增长减缓的作用,而实验剂量的中药未表现出此样作用.     

胶艾汤及参芪胶艾汤的雌激素样作用及可能机制

目的:观察胶艾汤及其加味方参芪胶艾汤的植物雌激素样作用,并利用雌激素受体(ER)(+)MCF7细胞探讨其发挥雌激素样作用的可能靶点和机制.方法:正常昆明种性未成熟雌性小鼠60只,体重9～12 g,按体重均衡和随机的原则分为6组:正常组给予等体积蒸馏水,阳性药己烯雌酚组按0.35 mg·kg~(-1)·d~(-1)给予己烯雌酚,胶艾汤和参芪胶艾汤低,高剂量组分别按2.5,5.0 g·kg~(-1)·d~(-1)给予中药方剂,给药持续4 d.第5天眼眶取血,分离血清,称取子宫并计算子宫系数.通过MTT细胞增殖实验观察2个方剂含药血清对MCF7细胞增殖的影响;运用实时荧光定量RT-PCR技术检测含药血清对雌激素效应基因pS_2及ERα,ERβ泶锏牡骺刈饔茫徊⒁源萍に厥芴遛卓辜罥CI182,780干预,探讨其发挥雌激素样作用的可能机制.结果:高剂量胶艾汤及参芪胶艾汤能够明显提高性未成熟小鼠的子宫系数(P<0.05);其含药血清能够显著促进MCF7细胞增殖(P<0.05或0.01),加入ER拮抗剂ICI182,780可抑制其促增殖作用(P<0.05或0.01).与已烯雌酚组一致,2个方剂含药血清也可提高靶细胞pS_2表达水平(P<0.01),加入ICI182,780可抑制ps_2表达水平的提高(P<0.01);2个方剂含药血清还可明显提高ERα(P<0.05)和ERβ(P<0.01)的表达水平.结论:胶艾汤及参芪胶艾汤均具有一定的通过ER介导的雌激素样作用,并可提高靶细胞ER亚型(特别是ERβ）mRNA的表达水平.     

四物汤治疗更年期综合征的作用机制研究

目的观察四物汤对更年期模型SD大鼠的作用并探讨发挥作用的可能靶点和机制。方法将正常SD雌性大鼠40只按体质量均衡和随机的原则分为正常组、模型组、四物汤低剂量组、四物汤中剂量组、四物汤高剂量组。除正常组外,其余组均切除两侧卵巢造模。手术2周后,正常组和模型组给予等量蒸馏水灌胃,四物汤低剂量组、四物汤中剂量组、四物汤高剂量组分别给予3,6,9 g/(kg·d)四物汤灌胃,均1次/d,持续6 d。第7天腹主动脉取血并分离血清,分离子宫并称质量,免疫组化法测定子宫组织雌激素受体ERα表达量;蛋白质免疫印记技术检测药物血清对T47D细胞雌激素受体ERα表达的影响。结果正常组大鼠的子宫系数与模型组比较差异有统计学意义(P0.01),四物汤低剂量组、四物汤中剂量组、四物汤高剂量组的子宫系数与模型组比较差异均有统计学意义,且随着四物汤方剂浓度的升高,子宫系数有增大的趋势;大鼠子宫组织ERα表达模型组与正常组比较差异有统计学意义(P0.01),四物汤中剂量组和高剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P0.01);四物汤低、中剂量组的含药血清能够明显提高T47D细胞ERα的表达水平(P均0.01)。结论四物汤对更年期综合征有很好的治疗作用,并可提高靶细胞ERα的表达水平。     

二至丸对未成熟小鼠雌激素样作用分析

目的:观察二至丸对未成熟小鼠子宫系数、血清中雌二醇(estrodiol,E_2),子宫阴道形态学变化及雌激素受体(estrogen receptor,ER)α和ERβ表达的影响,探讨其发挥雌激素样作用机制。方法:取健康,出生21 d的昆明种雌性小鼠40只,随机分成4组,分别为空白组,阳性药戊酸雌二醇(EV)组(0.154 mg·kg~(-1)),二至丸1.365,2.73 g·kg~(-1)组,每组10只,连续给药7 d后观察小鼠子宫系数;分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中E_2的水平;苏木素-伊红(HE)染色法观察未成熟小鼠子宫阴道形态改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测子宫、阴道ERα和ERβ的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,二至丸1.365 g·kg~(-1)组能使未成熟小鼠子宫系数显著增加(P0.05),血清中E_2含量明显升高(P0.05),能明显促进靶器官子宫、阴道的生长发育,还能显著上调阴道ERα和ERβ表达(P0.05),与EV作用相似。结论:二至丸通过上调血中雌二醇含量和靶器官雌激素受体表达发挥雌激素样作用。     

鼠尾草酚抗乳腺癌细胞增殖活性及其雌激素受体亚型介导和调节机制的研究

既往研究已经表明,鼠尾草酚（carnoso1）具有一定的抗乳腺癌效应,但其ER亚型特异性调节和介导机制与该物质抑制细胞增殖效应的相关性尚不清楚。该研究利用雌激素受体（ER）阳性乳腺癌T47D细胞观察鼠尾草酚对细胞增殖活性的影响及其雌激素受体α,卢亚型特异性介导和调节机制。以ERα和ERβ特异性拮抗剂MPP,PHTPP为工具药,采用MTT细胞增殖实验观察鼠尾草酚对T47D细胞增殖的影响;检测T47D细胞增殖周期的变化。利用Western blot方法检测鼠尾草酚对T47D细胞ERα和ERβ表达情况的影响。研究发现,1×10^-51×10^-7mol·L^-1鼠尾草酚能够显著抑制T47D细胞增殖,该抑制作用可被ERα拮抗剂MPP增强、被ERβ拮抗剂PHTPP减弱;1×10^-1,1×10^-6mol·L^-1鼠尾草酚可使T47D细胞增殖指数显著下降。Western blot检测结果显示1×10^-5,1×10^-6mol·L^-1鼠尾草酚可使T47D细胞ERα和ERβ蛋白表达显著增加,并可明显提高ERα/ERβ。结果表明鼠尾草酚具有抑制ER阳性乳腺癌细胞增殖的作用,其效应是通过靶细胞雌激素受体,特别是ERβ途径实现的;同时,鼠尾草酚对靶细胞雌激素受体ERα和ERβ亚型的表达及其比例具有调节功能。     

泡桐花提取物的雌激素活性筛选及其对OVA致过敏性哮喘小鼠的保护作用

目的:探讨泡桐花提取物雌激素活性及其对卵清白蛋白(OVA)致过敏性哮喘小鼠的保护作用。方法:体外采用MCF-7细胞模型筛选出泡桐花提取物具有雌激素样活性，采用雌激素受体拮抗剂(ICI182,780)、雌激素受体α拮抗剂(MPP)、雌激素受体β拮抗剂(THC)与雌激素膜受体GPR30拮抗剂(G15)干预雌激素活性有效剂量下的MCF-7细胞增殖，探讨其雌激素受体作用途径;采用小鼠子宫增重试验，计算性未成熟小鼠的子宫指数，以ELISA法检测血清雌二醇(E₂)、促卵泡生成素(FSH)与黄体生成素(LH)含量;采用Westren blot法测定小鼠子宫中雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)和雌激素膜受体(GPR30)表达水平，进一步体内验证泡桐花提取物雌激素活性;OVA致过敏性哮喘小鼠模型，分为正常对照组、模型对照组、地塞米松0.5 mg/kg组、泡桐花提取物155、310、620 mg/kg组，每组8只，同时设置雌激素受体拮抗剂ICI182,780组，雾化激发前30 min共同作用小鼠，连续7 d，末次给药24 h后，小鼠脱颈处死，计算免疫器官脾脏和胸腺指数，E...     

忍冬木层孔菌醇提物雌激素样作用研究

目的:研究忍冬木层孔菌醇提物的雌激素样作用,为寻找安全有效的雌激素替代药物提供依据。方法:采用细胞增殖实验评价忍冬木层孔菌醇提物的体外雌激素样作用和抗雌激素作用;检测忍冬木层孔菌提取物对雌性幼鼠、去势雌性大鼠血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)含量及成年雌性大鼠子宫雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)表达,并考察其对成年雌性大鼠子宫、卵巢及乳腺组织病理学的影响。结果:细胞增殖实验显示,忍冬木层孔菌醇提物在5~50μg/m L时能刺激MCF-7细胞增殖,具有雌激素样作用;在10~100μg/m L时能降低E2诱导的MCF-7细胞增殖,具有抗雌激素作用。体内实验表明300 mg/kg忍冬木层孔菌醇提物能增加雌性幼鼠血清E2含量,促进初生雌性幼鼠子宫发育;忍冬木层孔菌醇提物240 mg/kg可增加去势雌鼠血清E2、P含量,改善因雌激素缺乏而导致的子宫萎缩。120 mg/kg忍冬木层孔菌醇提物可增加正常成年雌性大鼠血清P含量,120、240 mg/kg忍冬木层孔菌醇提物可以增加正常雌性成年大鼠血清E2含量并能调节成年雌性大鼠子宫ERα、ERβ表达。病理检查显示,忍冬木层孔菌醇提物对大鼠子宫、卵巢、乳腺等组织病理学无明显影响。结论:忍冬木层孔菌具有雌激素样作用,无明显不良反应,具有替代雌激素应用的前景。     

熊果酸通过调控雌激素受体抑制甲状腺癌BCPAP 细胞增殖、迁徙、侵袭的机制研究

目的：观察熊果酸对雌激素受体ERα、ERβ表达的影响,研究熊果酸抑制甲状腺癌BCPAP细胞增 殖、迁徙、侵袭的机制。方法：Western blot 实验检测人正常甲状腺细胞（Nthy-ori3-1 细胞） 与甲状腺癌 BCPAP细胞中ERα、ERβ的蛋白表达,CCK-8实验检测熊果酸对甲状腺癌BCPAP细胞增殖的影响,细胞划痕 实验、Transwell实验检测熊果酸对甲状腺癌BCPAP细胞迁徙、侵袭能力的影响。Western blot实验检测熊果酸 对甲状腺癌BCPAP细胞雌激素受体ERα、ERβ表达的影响。结果：Nthy-ori3-1细胞与BCPAP细胞比较,ERα 的表达水平较低（P＜0.05）,ERβ的表达水平较高（P＜0.05）。不同浓度的熊果酸（4、8、16、32、64 μmol/L） 对BCPAP 细胞增殖具有抑制作用,呈时间和浓度依赖性（P＜0.05）。同时间点,B4 组（4 μmol/L）、B8 组（8 μmol/L） BCPAP细胞迁移力低于B0组（0 μmol/L）（P＜0.05）。与B0组比较,B4组、B8组BCPAP细胞 侵袭数明显降低（P＜0.05）。熊果酸作用24 h后,B4组、B8组ERα表达水平低于B0组（P＜0.05）,ERβ表达 水平高于B0组（P＜0.05）。结论：熊果酸可能通过雌激素受体ERα、ERβ降低甲状腺癌BCPAP细胞增殖、迁 徙、侵袭的能力。     

中药对方对雌激素负荷去势大鼠E2、ER、ERα、ERβ表达的影响

目的:研究中药方对去势雌激素负荷大鼠子宫内膜增生症模型雌激素、雌激素受体及雌激素受体亚型的影响.方法:放射免疫法测定大鼠血清雌激素(E2)水平,免疫组化法观察大鼠子宫内膜腺上皮雌激素受体(ER)及雌激素受体亚型(ERα、ERβ)的表达.结果:与模型组相比,给予药物干预的小组血清雌激素(E2)水平降低,本方可降低大鼠子宫内膜腺上皮细胞ERα、ERβ的表达.结论:实验表明造模大鼠体内存在高雌激素,高雌激素受体及其亚型的病理状态,而本实验对方能有效拮抗其体内雌激素、雌激素受体,雌激素受体亚型水平的提高.本实验成功的利用靶向给药方法祛除增生的子宫内膜,为临床治疗功血提供了新的思路和方法.     

葛根素对去卵巢大鼠子宫雌激素受体α表达的影响

目的:探讨葛根素对去卵巢大鼠子宫雌激素受体(ER)α表达的影响。方法:大鼠去势后灌服不同剂量葛根素、倍美力溶液30d后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)观察血清雌二醇(E2)水平,免疫组织化学法观察子宫ERα的表达。结果:大鼠去势后血清E2下降(P<0.01),给药30d后,给药各组血清E2水平及子宫ERα阳性表达明显上升,与模型组比较,有显著性差异(P<0.01)。结论:葛根素具有雌激素样作用,通过影响ERα的表达调节去卵巢大鼠生殖内分泌的功能。