透明细胞肾细胞癌组织中DNMT3B异构体表达及其整体甲基化的分析

目的检测透明细胞肾细胞癌组织中DNA甲基转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)异构体表达及其整体甲基化的变化,探讨这些变化与透明细胞肾细胞癌的关系。方法选取15例透明细胞肾细胞癌及其癌旁组织,应用Real-time PCR技术检测DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3B六种主要异构体的mRNA表达,应用Western blot法检验DNMT3B4蛋白表达;应用联合亚硫酸氢钠的限制性内切酶分析法(COBRA)分析重复序列Alu和LINE-1的甲基化水平。结果透明细胞肾细胞癌组织中DNMT3B4 mRNA和蛋白表达水平比癌旁组织高;重复序列Alu和LINE-1的甲基化水平在透明细胞肾细胞癌组织中比癌旁组织低。结论 DNMT3B4表达增加可能与整体甲基化降低及透明细胞肾细胞癌的发生有密切关系。     

肺癌患者RASSF1A启动子甲基化状态及其基因表达水平

目的探讨肺癌RAS相关区域家族1A(RASSF1A)启动子CpG岛甲基化状态和基因表达水平与肺癌发生的关系。方法用甲基化特异性PCR检测RASSF1A启动子CpG岛甲基化状态,实时定量PCR检测RASSF1A mRNA的表达水平。结果在肺癌组织中RASSF1A启动子甲基化频率为53.33%(24/45),在正常肺组织中发生甲基化的频率为13.04%(3/23)(P<0.05)。正常肺组织中RASSF1A mRNA全部表达,肺癌组织中表达缺失率为28.89%(13/45),且表达量低于正常肺组织(P<0.05);不同年龄、性别、肿瘤大小、恶性程度、肿瘤分类中其表达量无显著差异;RASSF1A甲基化与其mRNA表达水平下降密切相关。结论肺癌中RASSF1A基因启动子甲基化频率明显升高,其表达普遍下调或缺失,提示RASSF1A启动子甲基化在肺癌发生、发展中起一定作用。     

乳腺癌发生过程中NOEY2基因启动子区甲基化及mRNA表达

目的 探讨乳腺癌发生过程中抑癌基因NOEY2启动子区甲基化状态及其对mRNA表达的影响。方法 应用甲基化特异性PCR及双亚硫酸钠基因测序技术检测MCF10模型中乳腺增生细胞系MCF10A、癌前细胞系MCF10AT、导管内癌细胞系MCFIODCIS．com、浸润癌细胞系MCF10CA1a、MCF10CA1d、MCF10CA1h及正常乳腺组织中NOEY2基因启动子区CpG岛Ⅰ甲基化状态,然后用RT-PCR和实时PCR技术检测上述样品的mRNA表达水平。结果 MCF10模型的增生细胞系、癌前细胞系、导管内癌细胞系、浸润癌细胞系均发生该基因启动子区CpG岛Ⅰ高度甲基化;与正常乳腺组织相比,上述细胞系mRNA表达显著减少。结论 NOEY2基因启动子区高度甲基化及相应的mRNA表达减少是乳腺癌发生过程中的早期事件,与乳腺癌发生有关,可能成为早期诊断乳腺癌的潜在分子生物学标记。     

急性白血病细胞系中SFRP基因启动子甲基化及去甲基化诱导表达的研究

 目的：探讨分泌型卷曲相关蛋白（SFRP）基因家族启动子CpG岛异常甲基化状态与急性白血病（AL）发生发展的关系,以及DNA甲基转移酶（DNMT）抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷酸（5-Aza-CdR）去甲基化诱导SFRP基因表达作用的可能机制。方法：采用甲基化特异性PCR检测不同AL细胞系（Molt-4、Jurkat、HL-60和NB4）和不同浓度5-Aza-CdR作用下Jurkat细胞系中SFRP1、SFRP2、SFRP4和SFRP5基因启动子区的甲基化状态,采用实时荧光定量RT-PCR检测SFRP1、SFRP2、SFRP4和SFRP5 mRNA表达,采用半定量RT-PCR检测DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA表达。结果：在正常人细胞中不存在SFRP基因的甲基化。SFRP1、SFRP2和SFRP5基因在HL-60、NB4、Molt-4和Jurkat细胞系中均呈完全甲基化状态;SFRP4基因在NB4、Molt-4和Jurkat细胞系中完全甲基化,在HL-60细胞系中则部分甲基化。5-Aza-CdR可逆转SFRP1、SFRP2、SFRP4和SFRP5基因的高甲基化状态,并能够下调DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA水平,诱导SFRP基因恢复表达。结论：在AL细胞系中,SFRP1、SFRP2、SFRP4和SFRP5基因出现高甲基化,与AL的发生密切相关,可能成为AL新的基因标志物。5-Aza-CdR通过抑制DNMT表达,逆转SFRP基因的甲基化状态,恢复其表达。     

DNA甲基转移酶1、3A和3B在低氧预适应小鼠大脑中的表达简

 目的 研究DNA甲基转移酶（DNMT）1、3A和3B在低氧预适应小鼠大脑中的变化,探讨低氧预适应形成过程中DNMTs的变化与脑保护作用的关系。方法 小鼠随机分成常氧组（H0）、低氧1次组（H1）或4次（H4）后取大脑皮质组织,应用实时定量PCR 技术、免疫印迹技术和DNA甲基转移酶活性检测DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA和蛋白质及DNMT活性。结果H1组和H4组DNMT3A和DNMT3B的mRNA和蛋白质水平较H0组显著降低（p<0.05）,H4组DNMT活性较H0组降低（p<0.05）。结论DNMT3A和3B水平及DNMT活力的变化可能与低氧预适应小鼠获得脑保护的关系密切。     

DNA甲基转移酶1、3A和3B在低氧预适应小鼠大脑中的表达

目的研究DNA甲基转移酶(DNMT)1、3A和3B在低氧预适应小鼠大脑中的变化,探讨低氧预适应形成过程中DNMTs的变化与脑保护作用的关系。方法小鼠随机分成常氧组(H0)、低氧1次组(H1)或4次组(H4),取大脑皮质组织,应用实时定量PCR技术、免疫印迹技术和DNA甲基转移酶活性检测DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA和蛋白质及DNMT活性。结果 H1组和H4组DNMT3A和DNMT3B的mRNA和蛋白质水平较H0组显著降低(P0.05),H4组DNMT活性较H0组降低(P0.05)。结论 DNMT3A和3B水平及DNMT活力的变化可能与低氧预适应小鼠获得脑保护的关系密切。     

乳腺癌发生模型MCF10各细胞系中APC基因启动子区甲基化及mRNA表达检测

目的探讨乳腺癌发生模型MCF10中抑癌基因APC启动子区甲基化状态及其对mRNA表达的影响。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）及双亚硫酸钠基因测序技术检测MCF10模型的乳腺增生细胞系MCF10A、癌前细胞系MCF10AT、导管内癌细胞系MCF10DCIS.com、浸润癌细胞系MCF10CA1a、MCF10CA1d、MCF10CA1h及经典乳腺癌细胞系MCF-7和正常乳腺组织中APC基因启动子1A甲基化状态,然后用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和实时PCR技术检测上述样品的mRNA表达水平。结果在MCF10模型的增生细胞系、癌前细胞系、导管内癌细胞系、浸润癌细胞系中,APC基因启动子1A处于低甲基化状态;与正常乳腺组织相比,各细胞系APC基因mRNA表达无明显减少,MCF10AT、MCF10CA1d、MCF10CA1h、MCF10DCIS．com的mRNA表达分别减少0．27、0．96、1．78、2．70、2．03倍,MCF10A和MCF-7分别增加0．02和0．33倍）。结论MCF10模型中乳腺癌的发生发展过程与APC基因启动子区异常甲基化无关。     

PIK3CA基因对人非小细胞肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响

目的探讨PIK3CA基因对非小细胞肺癌侵袭及迁移能力的影响及可能机制。方法实时荧光定量PCR检测非小细胞肺癌组织、癌旁组织、非小细胞肺癌A549细胞与人支气管上皮细胞PIK3CA mRNA的表达,构建靶向PIK3CA基因的si RNA质粒,并转染至非小细胞肺癌A549细胞,实时荧光定量PCR技术与Westem blot方法分别检测PIK3CA mRNA与蛋白表达的变化,利用Transwell实验检测转染后细胞侵袭和转移能力的变化,Westem blot方法检测转染后A549细胞p-Akt蛋白表达变化。结果与癌旁正常组织比较,PIK3CA mRNA和蛋白表达水平在非小细胞肺癌组织显著上升(P0.05),A549细胞中PIK3CA mRNA和蛋白表达水平明显高于人支气管上皮细胞(P0.05)。PIK3CA基因沉默6h,A549细胞PIK3CA mRNA和蛋白表达水明显下降(P0.05);PIK3CA基因沉默48h,A549细胞侵袭和转移能力显著降低,p-Akt蛋白表达显著降低(P0.05)。结论 PIK3CA基因能够降低非小细胞肺癌侵袭及迁移能力,其作用机制可能与调控p-Akt蛋白表达有关。     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对肝癌DNA甲基转移酶1及上皮钙黏附素表达的影响

目的:研究5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肝癌细胞中DNA甲基转移酶1(DNMT1)及上皮钙黏附素(E-cadherin)表达的影响.方法:免疫组织化学检测上皮钙黏附素在肝癌(26例)及癌旁组织(20例)中的表达.用终浓度10μmol/L的5-Aza-CdR处理培养的肝癌细胞株GQY-7703作为实验组,未处理细胞为对照组;DNMT1基因和上皮钙黏附素基因(CDH1)的转录产物及表达蛋白分别使用半定量RT-PCR和免疫印迹法检测;CDH1的甲基化状态使用甲基化特异性PCR(MSP)检测.结果:相比较癌旁组织,肝癌组织中上皮钙黏附素表达显著下调.5-Aza-CdR降低了GQY-7703细胞中DNMT1在转录水平和翻译水平的表达CDH1 CpG岛的甲基化水平降低;上皮钙黏附素mRNA和蛋白表达量明显增高,对电泳条带的半定量分析显示实验组和对照组之间的差异具有统计学意义.结论:5-Aza-CdR通过抑制DNMT1的表达,改变了CDH1基因的异常甲基化状态,进而恢复上皮钙黏附素的表达.     

不明原因复发性流产患者绒毛组织中DNA低甲基化及机制

目的探究不明原因复发性流产(URSA)患者绒毛组织全基因组甲基化水平和甲基化相关酶基因表达情况。方法选取URSA患者31例(URSA组)及同期正常早孕放弃妊娠行人工流产的妇女30例(对照组)。取绒毛组织,采用ELISA测定绒毛组织中总DNA的甲基化水平,实时定量PCR检测DNA甲基化转移酶1(DNMT1)、 DNMT3a、 DNMT3b、去甲基化酶10-11转位酶1(TET1)、 TET2、 TET3的mRNA水平, Western blot法检测DNMT1、 DNMT2、 DNMT3、 TET1、 TET2、 TET3蛋白水平。免疫化学染色检测绒毛组织中DNMT1、 DNMT3a、 DNMT3b、 TET1、 TET2、 TET3的表达和分布。结果与对照组相比, URSA组的全基因组甲基化水平显著降低, URSA组绒毛组织中DNMT1、 DNMT3b的mRNA和蛋白水平显著降低, TET1、 TET2的mRNA和蛋白水平显著增加。结论 URSA妇女的流产绒毛组织呈现出低甲基化水平的状态,可能与DNMT1、 DNMT3b上调,TET1、 TET2下调有关。     

肾细胞癌RASSF1A基因启动子区甲基化状况与表达水平研究

目的检测19例肾细胞癌患者癌组织及癌旁组织Ras相关区域家族蛋白1A（RASSFlA）基因启动子区甲基化情况并检测其mRNA表达水平，探索两者之间的联系。方法收集肾细胞癌患者癌组织及相应癌旁组织19份，分别提取其基因组DNA，以甲基化特异性PCR（Methylation special PCR，MSP）法检测RASSFlA基因启动子区甲基化情况。并以QPCR法检测了RASSFlA基因的mRNA表达水平。结果19例中有lO例肾细胞癌患者癌组织存在高甲基化，mRNA表达水平表达降低，二者之间存在显著负相关性（r=-0．8734，P〈0．01）。结论肾细胞癌中RASSFlA基因启动子区存在高甲基化，并抑制该基因的表达。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对小鼠海马神经元细胞系HT22细胞DNA甲基转移酶表达和细胞周期的影响

目的:探究5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对小鼠海马神经元细胞系HT22细胞增殖及其对DNA甲基化转移酶(DNMT)表达的影响。方法:5-Aza-CdR处理HT22细胞,采用Real-time PCR和免疫印迹检测DNMT1、DNMT3A、DNMT3BmRNA及蛋白的表达;甲基转移酶活性试剂盒检测DNMTs活性;流式细胞仪对其细胞周期及凋亡进行检测。结果:5-Aza-CdR处理HT22细胞24h后,不同浓度5-Aza-CdR均显著抑制HT22细胞增殖,且使胞质空泡化。5-Aza-CdR降低了HT22细胞早期凋亡,但促进晚期凋亡,并诱导细胞周期发生S期阻滞。DNMT1和DNMT3A的mRNA和蛋白表达下降,但DNMT3B表达未发生明显变化。DNMT1和DNMT3B活性降低。结论:5-Aza-CdR可降低DNMT1和DNMT3A mRNA和蛋白表达以及DNMT1和DNMT3B活性,影响HT22细胞周期及凋亡。     

乳腺癌发生模型MCF10各细胞系中WT1基因启动子区甲基化及mRNA表达研究

目的通过观察乳腺癌发生模型MCF10中WT1基因启动子区甲基化状态和mRNA表达水平,探讨该基因在乳腺癌发生中的作用。方法应用甲基化特异性PCR及双亚硫酸钠基因测序技术检测MCF10模型的乳腺增生细胞系MCF10A、癌前细胞系MCF10AT、导管内癌细胞系MCF10DCIS．com、浸润癌细胞系（MCF10CAla、MCF10CA1d、MCF10CA1h）、经典乳腺癌细胞系MCF7及正常乳腺组织中WT1基因启动子区甲基化状态,然后用逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）和即时定量PCR技术检测上述样品的mRNA表达水平。结果在MCF10模型的增生细胞系MCF10A、癌前细胞系MCF10AT、导管内癌细胞系MCF10DCIS．com、浸润癌细胞系（MCF10CAla、MCF10CA1d、MCF10CA1h）、经典乳腺癌细胞系MCF7中,WT1基因启动子均处于高度甲基化状态。与正常乳腺组织相比,WT1基因mRNA在MCFl0模型的增生细胞系、癌前细胞系、导管内癌细胞系、浸润癌细胞系和经典乳腺癌细胞系MCF7中的表达均有不同程度的增加（MCF10A、MCF10AT、MCF10CAla、MCF10CA1d、MCF10CA1h、MCF10DCIS、MCF7的WT1基因mRNA表达量分别是正常乳腺组织3．23、1．94、4．20、1．53、4．20、4．35、28．69倍）。结论乳腺癌发生过程中WnmRNA的表达不被启动子甲基化所抑制;可WT1mRNA过表达出现于乳腺癌发生的早期阶段,提示该基因在乳腺癌发生中起作用。     

DAPK和DNMT1在宫颈癌中的相关性研究

目的 探讨宫颈癌中DAPK(Death-associated protein kinase)启动子甲基化与DNMT1 mRNA的表达及两者之间的关系.方法 应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术检测52例宫颈癌、60例CIN(cervical intraepithelialneoplasia)和20例正常宫颈组织中DAPK启动子甲基化状况;应用原位杂交方法检测DNMT1 mRNA的表达.结果 正常宫颈鳞状上皮不存在DAPK基因启动子CpG岛甲基化,而在CIN和宫颈癌中的甲基化率分别为18.3%(11160)、65.4%(34152),差异有统计学意义(x2=39.639,P＜0.001).正常宫颈鳞状上皮、CIN和宫颈癌DNMT1 mRNA阳性率分别为10%、63.3%和78.8%,差异有统计学意义(x2=29.057,P＜0.001).DAPK异常甲基化和DNMT1 mRNA表达成正相关,r=0.308,P＜0.001.结论 DAPK异常甲基化和DNMT1 mRNA过表达参与了宫颈癌的发生;DAPK基因启动子的甲基化过程可能是在DNMT1的催化作用下完成的.     

p16、RASSF1A在肝细胞性肝癌患者肿瘤组织及血浆中异常甲基化的检测及临床意义

目的探讨原发性肝细胞性肝癌(HCC)患者肿瘤组织及血浆中p16及RASSF1A启动子区的甲基化状态及其在HCC早期无创诊断中的意义。方法采用甲基化特异性PCR技术检测60例HCC患者肿瘤组织、癌旁组织、血浆及60例正常肝脏患者肝组织及血浆中p16、RASSF1A基因启动子区域的甲基化状态,分析其与肝癌患者临床病理参数之间的关系。结果 60例HCC患者血浆、肿瘤组织及癌旁中p16基因甲基化率分别为68.3%(41/60)、63.3%(38/60)和41.7%(25/60);RASSF1A基因异常甲基化检出率分别为73.3%(44/60)、70.0%(42/60)和36.7%(22/60);60例正常肝脏患者肝组织及血浆p16、RASSF1A未检测到基因启动子区域的甲基化,差异有统计学意义(P=0.000)。HCC患者外周血浆和癌组织中p16、RASSF1A基因的甲基化率与患者年龄、性别、AFP、有无肝炎病毒感染(HBV)、有无肝硬化、Child分级、肿瘤个数、包膜完整与否、有无癌栓、是否复发、病理分级、肿瘤分期无统计学相关性。结论 HCC患者肿瘤组织及血浆DNA中可检测到RASSF1A基因和p16基因的甲基化,外周血p16基因和RASSF1A基因的甲基化检测对肝癌筛查有重要意义,可能成为HCC新的肿瘤分子标记物。     

RASSF1基因转录本A和C的表达与卵巢癌关系的研究

目的探讨RASSF1基因转录本A和C在多个卵巢癌细胞系和卵巢癌组织中所起的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和激光捕获显微切割技术检测3个卵巢癌细胞系和80例人原发卵巢上皮性恶性肿瘤组织中RASSF1A和RASSF1CmRNA的表达。结果RASSF1A mRNA在卵巢癌SK OV3细胞中表达缺失;RASSF1A和RASSF1C在人卵巢癌组织中的表达率分别为40.0%(32/80)和91.3%(73/80)。RASSF1AmRNA的表达在浆液性癌、黏液性癌和内膜样癌组织中分别是41.2%(20/48),38.1%(8/21)和36.4%(4/11),P>0.05;临床Ⅰ期和Ⅱ期分别为71.4%和75.0%(10/14,9/12),明显高于临床Ⅲ期和Ⅳ期(26.7%、12/45和14.1%,1/9),P<0.05;高和中分化组分别为58.6%和50.0%(17/29,10/20),明显高于低分化组(16.1%,5/31),P<0.05。结论卵巢癌细胞和人原发卵巢癌组织中存在RASSF1AmRNA表达的缺失,RASSF1A的表达与卵巢癌的临床分期和组织学分级有关,可能作为一种新的抑癌基因在卵巢癌的发生和发展过程中起重要作用,RASSF1AmRNA的缺失提示预后不良。     

香烟烟雾暴露对幼年大鼠海马DNA甲基化的影响

目的:探讨香烟烟雾暴露对新生大鼠海马细胞DNA甲基化的水平的影响。方法:18只的SD幼年大鼠随机分为对照组(control)、香烟烟雾暴露组(cigarette smoke),香烟烟雾暴露组大鼠进行香烟烟雾暴露30 d,利用商品化试剂盒检测各组大鼠海马组织5'甲基胞嘧啶(5-mC)的变化,real time RT-PCR检测各组大鼠海马DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)及DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)mRNA表达水平,Western Blot检测各组大鼠海马DNMT1、DNMT3a及DNMT3b蛋白水平表达。结果:与对照组相比,香烟烟雾暴露可导致大鼠海马5-mC水平增加,海马DNMT1 mRNA和蛋白表达增加。结论:幼年大鼠香烟烟雾暴露会上调海马组织DNMT1的表达,进而增加DNA甲基化水平。     

孕妇外周血中RASSF1A基因甲基化状态研究

目的探讨RASSF1A基因作为孕妇外周血中胎儿特异性标记物的可行性。方法随机选取43例的外周血样本,其中妊娠晚期孕妇标本40例、健康未妊娠女性标本3例,以及早期妊娠行流产的绒毛组织样本5例。利用甲基化敏感限制性内切酶PCR(MSRE-PCR)及荧光定量PCR的方法,检测血细胞、绒毛和血浆DNA的RASSF1A基因甲基化状态。结果健康未妊娠妇女血浆及孕妇血细胞中均未检出甲基化RASSF1A基因;绒毛组织中甲基化RASSF1A基因检出率为100%;孕妇血浆中甲基化RASSF1A基因检出率为92.5%。妊娠晚期孕妇血浆RASSF1A基因含量Ct平均值为30.43±2.37。结论在母体和胎儿DNA中,RASSF1A基因甲基化状态有明显差异,用实时荧光定量PCR可对孕妇血浆RASSF1A基因进行定量,提示了RASSF1A基因是无创产前诊断的一个潜在标记物。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷通过反转原钙黏蛋白10表达抑制人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的侵袭和迁移

目的 探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）诱导抑癌基因原钙黏蛋白10（PCDH10）重新表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231体外侵袭迁移能力的影响并初步探讨其机制。 方法 体外培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231,设置对照组和5-Aza-CdR药物处理组,分别采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测PCDH10 mRNA 的表达水平;Transwell法和划痕实验检测细胞的侵袭迁移能力;Western blotting检测PCDH10、DNA甲基转移酶（DNMT）3A、DNMT3B、核因子（NF）-κB p65和基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9蛋白表达的变化。 结果 5-Aza-CdR能够反转PCDH10的mRNA和蛋白表达;PCDH10表达恢复后MDA-MB-231细胞的侵袭迁移能力受到抑制;Western blotting检测发现,MDA-MB-231细胞经5-Aza-CdR处理后DNMT3A、DNMT3B、NF-κB p65、MMP-2和MMP-9的表达下调。 结论 5-Aza-CdR可抑制MDA-MB-231细胞DNMT3A和DNMT3B的表达,使抑癌基因PCDH10表达恢复,从而通过阻滞NF-κB p65的活化,下调MMP-2和MMP-9表达而抑制乳腺癌细胞的侵袭转移。     

RNAi沉默DNMT1基因对胰腺癌细胞ppENK甲基化状态的影响

目的观察RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默DNMT1基因的表达对胰腺癌Panc-1细胞的前脑啡肽原(preproen-kephalin,ppENK)基因甲基化状态的影响。方法采用针对DNMT1的Stealth核糖核苷酸干扰(siRNA)胰腺癌细胞,观察DN-MT1信使核糖核酸(mRNA)及DNMT1蛋白的表达;甲基化特异性PCR反应(MSP)检测不同处理组ppENK的甲基化状态。结果 Stealth RNAi转染到胰腺癌细胞Panc-1中48 h后,siRNA-3转染组的mRNA相对表达量和比率分别为0.116和32.9%,与空白对照组(0.352,100%)、脂质体对照组(0.346,98.2%)、RNAi阴性对照组(0.339,96.3%)相比差异有统计学意义(F=2.107 E4,P=0.000 1),转染组的mRNA相对抑制率为67.1%。siRNA-3转染组DNMT1蛋白相对表达量和比率分别为0.179和32.9%,与空白对照组(0.547,100%)、脂质体对照组(0.520,95%)、RNAi阴性对照组(0.535,97%)相比差异有统计学意义(F=2.195 E5,P=0.000 1)。于100 bp和96 bp处可见ppENK基因特异性条带,呈现部分去甲基化状态的特点。结论 DNMT1靶向的Stealth RNA瞬时转染到胰腺癌细胞Panc-1中可明显沉默DNMT1的基因和蛋白的表达,逆转抑癌基因ppENK的高甲基化状态,为胰腺癌的基因治疗提供相关的理论依据。