人血小板冻干前预处理技术的实验研究

目的研究人血小板冻干保存前胞内海藻糖负载技术,筛选出最佳负载海藻糖实验条件。方法绘制血小板胞内海藻糖负载效率及浓度随温度、时间、胞外海藻糖浓度变化曲线,筛选合适负载条件。结果海藻糖负载效率与孵育时间(2 h后)、温度(30~40℃)呈良好线性关系。在37℃经4 h孵育后负载效率可达60%,载入到胞内海藻糖浓度随胞外海藻糖浓度(<50mM?的升高而递增。结论37℃、4 h为合适负载条件。胞外海藻糖浓度应<50 mM。     

二甲基亚砜在人血小板冻干前预处理期间的作用

目的 研究二甲基亚砜（Me2SO）在人血小板冻干保存前负载海藻糖过程对血小板的影响，优化血小板孵育液配方。方法 实验设对照组（血小板孵育液中未添加2％Me2SO溶液）和实验组（血小板孵育液中添加2％Me2SO溶液），2组的血小板负载海藻糖和LYCH4h后，使用流式细胞仪检测2组血小板膜表面糖蛋白分子CD62p,PAC—1的表达率，通过激光共聚焦荧光显微镜观察2组血小板胞内LYCH的分布，用硫酸-蒽酮法检测两组血小板胞内海藻糖浓度。结果 实验组CD62p的表达低于对照组（P〈0．01）。实验组LYCH均匀分布在血小板胞质中，对照组LYCH主要分布在几个有限细胞器内。实验组血小板胞内海藻糖浓度高于对照组血小板胞内海藻糖浓度（P〈0．01）。结论 Me2SO在人血小板冻干前负载海藻糖过程中可有效抑制血小板体外激活，并使胞质内海藻糖均匀分布，有效促进血小板吸收海藻糖，胞内高浓度海藻糖对血小板的冻干保护作用增强。     

冻干前负载海藻糖对血小板体外激活和聚集反应的影响

目的 研究血小板在温度37℃条件下，负载海藻糖4h后，其体外激活程度和聚集反应性的变化。方法分别以凝血酶、ADP、胶原、瑞斯托霉素4种物质作为血小板激活诱导剂，用APACT2型血小板聚集仪分别检测血小板负载海藻糖前后的聚集反应性。用流式细胞术检测分析血小板负载海藻糖前后其膜表面糖蛋白分子CD62p、PAC-1的表达率，加可逆性激活抑制剂PGE-1、腺苷后血小板激活被抑制的程度。结果同负载前相比较，血小板平均体积（MPV）、血小板对四种激活诱导剂的最大聚集率均无显著性差别（P〉0．01），经4h负载海藻糖后，血小板膜表面CD62p表达率升高，但联合添加可逆性激活抑制剂PGE-1、腺苷后，CD62p表达率显著下降，PAC-1表达率始终维持恒定。结论加可逆性激活抑制剂后，冻干前预处理血小板过程对血小板的功能活性没有显著影响。     

冰冻血小板的运输及其在野战医院应用的可行性研究

目的建立和测试低温冷冻血小板无电源运输保存技术。方法采用高效发泡材料为主要隔热材料，以食品级干冰砖为冷源，低温冷冻血小板与干冰砖体积比为2：1，共同置于箱内保存。记录温度变化曲线和箱温分别在-70℃，-40℃，-20℃以下的维持时间；60袋-80℃冰箱保存低温冷冻血小板按上述方法保存至-40℃后重新放回-80℃冰箱保存。随机取始终保存于-80℃冰箱冷冻血小板为对照组，取测试冷冻血小板其中20袋为测试组，比较两组血小板计数、血小板平均体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、血浆乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸、磷脂酰丝氨酸(PS)阳性率和CD62p再表达率。结果在23℃-26℃环境无电条件下将低温冷冻血小板的保存温度在-70℃以下可维持95h；-40℃以下可维持113h；-20℃以下可维持118h。测试组和对照组血小板计数、MPV、PDW、LDH、乳酸、pH、PS阳性率和CD62p再表达率差异无显著性。结论无电源条件下低温冷冻血小板和新鲜冰冻血浆储存运输技术，满足在低温冷冻血小板和新鲜冰冻血浆在野战医院的应用所需的基本条件。     

不同温度和时间对血浆钾测定结果的影响与临床检验学研究

目的：探讨不同放置温度和不同放置时间条件对血浆钾测定结果的影响。方法：采用MedicaEasylyteNa／K／C1分析仪,测定70例门诊患者不同放置温度和不同放置时间的肝素钠抗凝血浆钾浓度。结果：血浆钾在不同放置温度和不同放置时间条件下存在差异;在室温（20—25℃）4h内、冰箱（4～10℃）6h内、水浴箱（37℃）4h内血浆钾浓度无明显变化（P〉0．05）,不同温度、同一时间3h内血浆钾浓度无明显变化（P〉0．05）。结论：肝素抗凝血可快速分离、及时测定,在3h内不受温度变化而影响血钾检测结果,能满足急诊与临床常规检测要求。     

抗凝血保存温度和时间对血液分析仪测定结果的影响

目的:探讨不同条件下保存的血标本对XS-800i血液分析仪测定结果的影响.方法:观察不同温度、不同时间保存的血标本白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT),平均红细胞体积(MCV)、血小板(PLT)和平均血小板体积(MPV)的变化.结果:4℃条件下保存的血标本,WBC、RBC、HGB、HCT、MCV和PLT的测定值在24h内无明显变化; MPV 8h内无明显变化,8h后升高.22℃和32℃条件下保存的血标本,WBC、RBC、HGB、HCT、MCV和PLT的测定值在12h(22℃)和6 h(32℃)内无明显变化; MPV的测定值在6 h(22℃)和4 h(32℃)内无明显变化,6h后(22℃)和4h后(32℃)明显升高,尤以32℃显著.白细胞散点图和白细胞分类在12 h时(4℃)、8 h时(22℃)和4 h时(32℃)开始发生变化.结论:抗凝血标本保存的最佳温度为4℃,22℃(室温)保存的标本应在8 h内完成检测;如果室温大于32℃,血标本采集后应在4h内完成检测.     

影响水样菌落总数的多因素研究

目的探讨影响水样菌落总数结果的主要因素。方法观察培养时间（24、48、72h）；培养温度（35℃、37℃、40℃）；样品接种时间（0、20、40、60、90、120min）；营养琼脂倾注时的温度（45℃、48℃、50℃、55℃）；分别对水样菌落总数进行测定，并进行统计学分析。结果培养24h与48h菌落总数结果之间存在显著性差异，培养48h与72h菌落总数结果之间无显著性差异；培养温度37℃时，水样菌落总数检出率略高，不同培养温度之间结果无显著性差异；立即接种与20min接种，两者之间结果无显著性差异，40min后接种均存在显著性差异；45℃与48℃之间结果无显著性差异，50℃后结果之间均存在显著性差异。结论菌落总数的培养时间以48h为宜；培养温度37℃时检出率略高；样品接种时间应控制在20min之内为宜；营养琼脂倾注时的温度应为45℃左右，不能超过50℃。     

紫虹消毒剂的实验室杀菌作用和稳定性试验

目的 在实验室中观察紫虹消毒剂不同浓度水溶液对金黄色葡萄球菌，大肠埃杀菌、枯草杆菌黑色变种芽胞、乙型肝炎病毒杀灭作用时间和紫虹水溶液在不同温度时间存放的残留浓度。方法 在20－22℃以（1000－125）mg/L分别观察对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌黑色变种芽孢、乙型肝炎表面抗原的杀灭时间，并利用经 典恒温加速法和初匀速法了解在不同温度下溶液存放时间的浓度稳定性。结果 紫虹消毒剂溶液125mg/L 10 min对金黄色葡萄球菌、大肠埃杀菌的杀灭率100％；250mg/L对枯草杆菌30min杀灭率100％；1000mg/L 20min对乙型肝炎表面抗原杀灭率1000％；紫虹消毒剂溶液在0℃保存247h、10℃保存89h、20℃保存33h、30℃保存13h，其溶液仍可达90％。结论 紫虹消毒剂是三氰异氯尿酸和苯酚（石碳酸）等复合消毒液，在实验中其杀菌效果随溶液浓度增加和时间延长而增强，溶液稳定性随温度升高和时间延长而下降。     

动式吸入染毒装置在评价液体化学物毒性检测中的应用

目的用动式吸入染毒装置检测化学物的吸入毒性。方法以某液体化学物(农药)为受试毒物,经雾化瓶向染毒柜内连续输送受试毒物空气,对大鼠进行吸入染毒,观察柜内毒物和温度、湿度的均衡性及毒物浓度上升时间；用该实验装置,采取一次最大剂量限度法进行4种农药的吸入毒性测定。结果实验数据经F检验,动物呼吸带对角线4位点毒气浓度均值差异无统计学意义(P＞0．05)；0、10 min与其后各时点毒气浓度差异有统计学意义(P＜0．01,P＜0．05),20 min后各时点毒气浓度差异无统计学意义(P＞0．05)；柜内温度、湿度有随染毒时间延长而升高的趋势,但变化在21℃±2℃,50％±3％范围内,其升高幅度未能影响毒物浓度的改变；4种农药的吸入毒性均为低毒,柜内受试物浓度恒定。结论在室温19℃～22℃、毒气流量1．0m~3/h条件下,柜内温度、湿度基本恒定,对毒物浓度无明显影响；柜内毒物浓度上升迅速,20min内即趋于平衡；柜内毒物浓度分布均匀且变化小,2h内基本稳定,能满足液体毒物的吸入毒性检测。     

铜绿假单胞菌临床分离与耐药性监测

目的 了解我院住院病人铜绿假单胞菌耐药性与耐药趋势。方法 分析我院2003年1月至2005年12月住院病人所分离的该菌，并监测抗菌药物的耐药性变化。结果 3年间分离出37株铜绿假单胞菌，该菌在临床各病区的分布情况：重症监护室（ICU）32．4％（12／37）、感染科（呼吸科）18．9％（7／37）、骨科16．2％（6／37）、普外科16．2％（6／37）、内-科（神经、消化、血液、肿瘤、综合）10．8％（4／37）、其他科5．4％（2／37）。其中痰标本51．4％（19／37）、咽拭子21．6％（8／37）、分泌物16．2％（6／37）、血液5．4％（2／37）、其他5．4％（2／37）。该菌对抗菌药物活性较好的是庆大霉素、氧氟沙星、阿米卡星、哌拉西林／他唑巴坦，耐药率分别为2．7％、16．2％、32．4％、32．4％。耐药率较高的是头孢他啶、头孢噻肟、哌拉西林，分别为56．8％、51．4％、51．4％。结论我院住院病人该菌监测结果显示对喹诺酮类、氨基糖甙类、β-内酰胺酶抑制剂复合药物保持较好的的敏感性，β-内酰胺酶类头孢抗生素耐药性呈升高的趋势，需加强对铜绿假单胞菌耐药率的连续监测。     

新型抗冻剂海藻糖对皮肤组织β1整合素及活力影响的研究

目的比较海藻糖与传统低温保护剂对皮肤组织β1整合素低温保存后表达的影响,进一步揭示海藻糖的低温抗冻机制。方法新鲜成人皮肤组织分为2组,分别予以海藻糖/二甲基亚砜(T/D)、二甲基亚砜/丙二醇(D/P)作为低温保护剂保存,-196℃液氮冻存7d、14d复温,设新鲜组为对照组,免疫组织化学染色对各组间皮肤进行比较。并在此基础上,进一步采用RT-PCR方法对不同低温保护剂保存后皮肤的β1整合素(integrin)基因水平进行了深入的研究。同时对各组皮片进行氧耗量测定。结果通过光镜图像观察和基因水平分析结果说明,T/D能够很好保护皮肤组织,T/D-7d组β1integrin的基因表达量(0.769±0.052)与新鲜皮肤组(0.789±0.082)相似。T/D-7d组氧耗量(11.150±0.981)与新鲜组(12.017±1.259)差异无统计学意义。结论海藻糖对β1integrin的保护作用在海藻糖的低温抗冻机制中发挥重要作用。     

两种海藻多糖对大鼠脂质代谢和血小板功能的比较

为了研究可溶性海藻多糖的营养作用，以含１％胆固醇和０．２％胆盐的高胆固醇饲料分别加入海藻酸钠和卡拉胶两种可溶性海藻多糖，作为海藻酸钠与卡拉胶两个试验组动物饲料；不加海藻多糖的饲料用于对照组，喂养ＳＤ大鼠８周。实验表明，５％的海藻酸钠可使血脂、肝脂质和血小板聚集性下降，且不影响大鼠摄食和生长。添加５％或１０％的卡拉胶对降血脂和肝脂没有显著效果，不能降低肝／体重量比，对血小板聚集性的降低作用也不稳定（或不肯定）。１０％的卡拉胶使大鼠的平均体重增重减少了１２．１７％（Ｐ＞０．０５），少数动物出现轻度腹泻迹象     

海藻糖用于玻璃化冷冻卵母细胞的研究

海藻糖的发现为低温保存卵母细胞提供可利用的价值,其作为冷冻保护剂对卵母细胞进行玻璃化冷冻成为新的冷冻技术方法。海藻糖的作用原理包括:"水替代"假说、"玻璃态"假说、"优先排阻"假说。在高温、高寒、高渗透压及干燥、脱水、冷冻时等恶劣环境条件下,海藻糖在细胞表面能形成独特的保护膜,有效地保护蛋白质分子不变性失活,从而维持生命体的生命过程和生物特征。目前海藻糖已用于多种生物细胞研究,如:红细胞、血小板及生殖细胞等的离体长期保存,且均表现出独特的功能。     

LIQUID STORAGE (50C) OF RAM SEMEN IN DIFFERENT DILUENTS

This study examined the effects of three diluents - skim milk (M), TesT (TE) and Tris-trehalose (TR) - on quality of ram semen stored at 5⁰C over a long term. Percentage of motile spermatozoa (PM), motility score (MS), percentage of intact acrosomes (PIA), and percentage of swollen spermatozoa under hypoosmotic conditions (PS) were assessed after cooling and every 24 h up to day 16. There was a significant effect (p&lt;.01) of diluent type in the conservation rates after cooling for PM. The TR diluent achieved greater values (94.7+/-1.36%) than TE(82.4+/-3.08%), while M showed an intermediate value (89.3+/-2.17%). In relation to time of storage, TR diluent showed the highest PM values up to day 12, but differed (p&lt;.05) from TE medium only until day 4. The TR extender maintained a PM&gt; 50% up to day 8, while TE and M were greater than 50% up to day 5. Skim milk maintained progressive movement of sperm cells for longer (MS=3 until day 5) than the other diluents. There were no significant differences in PIA among the 3 media during the first 6 days of storage (except in day 2), and M showed the lowest value afterward. There was no significant extender effect on PS for the first 3 days, but after day 6 diluent M also showed the lowest values of this variable.     

海藻糖在生育力保存中的应用

肿瘤诊疗技术的进步显著提高了患者的生存率,但放化疗可能造成人类生育力的下降乃至丧失。如何有效保存生育力已成为近年来研究的热点。海藻糖属于非渗透性冷冻保护剂,是一种具有特殊生物学性能的双糖,能够在干燥、脱水、冷冻等恶劣条件下有效保护蛋白质等大分子不变性失活。随着研究的逐步深入,海藻糖已被广泛应用于生育力保存等医学领域中,有学者将其用于保存精子、精原干细胞、卵母细胞、胚胎、卵巢组织和睾丸组织并取得了显著成果。综述海藻糖的生物学性质、作用机制假说以及在生育力保存中的应用研究现状和最新进展。     

α-海藻糖对自制人血清生化质控品的保护作用

目的 研究液态冷藏条件（4±1℃）下,海藻糖保护剂对谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、Y-谷氨酰转肽酶（GGT）、血清乳酸脱氢酶（LDH）、α-L-岩藻糖苷酶（AFU）等酶活性及其他生化指标的保护作用,并探讨海藻糖对酶等的最佳保护浓度,以提供一种人血清基质生化质控品的良好稳定剂。方法 用惰性分离胶管（SSTII管）收集混合血清,加入保护剂;采用酶动力学方法分别在当天、第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个月分别测定5种酶活力及其他生化指标,并计算酶活力及其他生化指标保护率（%）。结果 在10个月时,0.20mol/L海藻糖保护组的11种血清酶的平均保护率为92.6%,而无海藻糖保护组的11种血清酶的平均保护率为69.7%,海藻糖组的保护是无海藻糖组的1.32倍,海藻糖对酶等的最佳保护浓度为0.20mol/L。结论 通过实验研究证实了海藻糖对人血清基质生化质控品液态冷藏状态下具有保护作用,是一种多酶等复合质控品的良好稳定剂。     

Trehalose prevents adipocyte hypertrophy and mitigates insulin resistance

Trehalose has been shown to evoke lower insulin secretion than glucose in oral saccharide tolerance tests in humans. Given this hypoinsulinemic effect of trehalose, we hypothesized that trehalose suppresses adipocyte hypertrophy by reducing storage of triglyceride and mitigates insulin resistance in mice fed a high-fat diet (HFD). Mice were fed an HFD and given drinking water containing 2.5% saccharide (glucose [Glc], trehalose [Tre], maltose [Mal], high-fructose corn syrup, or fructose [Fru]) ad libitum. After 7 weeks of HFD and saccharide intake, fasting serum insulin levels in the Tre/HFD group were significantly lower than in the Mal/HFD and Glc/HFD groups (P < .05). Furthermore, the Tre/HFD group showed a significantly suppressed elevation of homeostasis model assessment–insulin resistance compared with the Mal/HFD group (P < .05) and showed a trend toward lower homeostasis model assessment–insulin resistance than the Glc/HFD group. After 8 weeks of feeding, mesenteric adipocyte size in the Tre/HFD group showed significantly less hypertrophy than the Glc/HFD, Mal/HFD, high-fructose corn syrup/HFD, or Fru/HFD group. Analysis of gene expression in mesenteric adipocytes showed that no statistically significant difference in the expression of monocyte chemoattractant protein–1 (MCP-1) messenger RNA (mRNA) was observed between the Tre/HFD group and the distilled water/standard diet group, whereas a significant increase in the MCP-1 mRNA expression was observed in the Glc/HFD, Mal/HFD, Fru/HFD, and distilled water/HFD groups. Thus, our data indicate that trehalose prevents adipocyte hypertrophy and mitigates insulin resistance in HFD-fed mice by reducing insulin secretion and down-regulating mRNA expression of MCP-1. These findings further suggest that trehalose is a functional saccharide that mitigates insulin resistance.     

Improved storage of influenza HA-VLPs using a trehalose-glycerol natural deep eutectic solvent system

Vaccines are typically stored under refrigerated conditions (2–8 °C) to limit potency and efficacy loss. Maintaining the cold chain is costly and prone to vaccine wastage due to unexpected changes in the storage conditions. The development of formulations conferring enhanced stability can extend vaccine shelf-life and facilitate storage under non-refrigerated conditions, thus simplifying the distribution process and reducing vaccine wastage. In this study, the suitability of a natural deep eutectic system (NADES) consisting of trehalose and glycerol (TGly) for storage of influenza hemagglutinin (HA)-displaying virus-like particles (VLPs) was successfully demonstrated. TGly was efficient in maintaining the activity and physical integrity of HA-VLPs for up to 4 h at 50 °C (accelerated stability study), with half-life values ≈ 20–34 h for the best TGly formulations. Importantly, improved storage is achieved at increasingly higher TGly concentrations, hence confirming the importance of TGly content in its protective capacity. In addition, HA-VLPs were stable in TGly for over one month at room temperature (short-term stability study), with no impact on HA titer or particle size distribution. This work highlights the potential of NADES to improve stability of VLP-based vaccines, showing promising protective capacity under non-refrigerated conditions and short-term thermal stress, and thus having a notable impact on vaccine’s cold chain.