Evaluate of qnr Genes in Enterobacter cloacae isolates and resistance

目的 了解阴沟肠杆菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS的流行现状及耐药性检测.方法 PCR法对57株环丙沙星耐药的阴沟肠杆菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因检测,并用琼脂稀释法对11种抗菌药物的耐药性测定.结果 57株阴沟肠杆菌中阴沟肠杆菌对5种喹诺酮类药物的耐药率高达89.5％ ～ 100％,对氨苄西林、四环素、头孢曲松、头孢美唑、庆大霉素、亚胺培南的耐药率分别为100％、64.9％、87.7％、93％、49.1％和100％.qnrA基因阳性19株(33.3％),qnrB基因阳性15株(26.3％),qnrS基因阳性2株(3.5％),qnrA基因和qnrB基因同时阳性8株,qnrA基因和qnrS基因同时阳性1株,qnrB基因和qnrS基因同时阳性1株.结论 我院阴沟肠杆菌临床分离株中存在qnr基因的流行,qnr阳性菌株呈多重耐药,应加强对该类基因的监测及临床用药监管.     

广州地区阴沟肠杆菌Qnr基因流行调查

目的了解阴沟肠杆菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS基因流行情况。方法以PCR法对62株环丙沙星耐药的阴沟肠杆菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因检测,并结合试验了解喹诺酮耐药的可转移性。结果 62株阴沟肠杆菌中,qnrA基因阳性30株（48.6%）,qnrB基因阳性41株（66.1%）,qnrS基因阳性7株（11.3%）,qnrA基因和qnrB基因同时阳性16株,qnrA基因和qnrS基因同时阳性1株,qnrB基因和qnrS基因同时阳性2株。结论广州地区阴沟肠杆菌存在qnr基因,应加强qnr基因监测。     

质粒介导喹诺酮类qnr基因在肠杆菌科细菌中的流行及耐药特性研究

目的 了解质粒介导喹诺酮耐药qnr基因在临床分离的三种常见肠杆菌科细菌中的分布,研究qnr阳性株的质粒特性和流行播散情况.方法 VITEK-60全自动微生物分析仪检测大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药性,琼脂稀释法检测环丙沙星、诺氟沙星和左氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC);PCR扩增质粒介导的喹诺酮类耐药基因 (qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS),阳性产物进行DNA测序比对以确定基因型;.对qnr基因阳性菌株进行接合转移试验,探讨qnr基因的可转移性;脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)分析同源性及流行播散情况.结果 301株大肠埃希菌中共检出qnr阳性菌株14株,其中2株同时携带两种基因,qnrA、qnrB、qnrS基因分别检出5、2、9株;145株肺炎克雷伯菌中共检出qnr阳性菌株17株,其中1株同时携带两种基因,qnrA、qnrB、qnrS基因分别检出1、11、6株;173株阴沟肠杆菌中共检出qnr阳性菌株57株,其中3株同时携带两种基因,qnrA、qnrB、qnrS基因分别检出14、36、10株;所有菌株中均未检出qnrC和qnrD基因;接合转移试验结果显示,14株qnr基因阳性的大肠埃希菌、17株qnr阳性肺炎克雷伯菌和57株qnr阳性阴沟肠杆菌中分别有4、3和26株体外接合成功,qnrB阳性阴沟肠杆菌中少数菌株存在同源性,大多呈散发流行趋势.结论 临床肠杆科细菌中存在qnr阳性菌株的流行,总体以qnrB为主;qnr基因在喹诺酮类耐药和敏感菌株中均存在,喹诺酮类药物敏感菌株中qnr基因的检出值得关注;qnr基因可通过其所在质粒进行水平转移;携带qnrB基因的阴沟肠杆菌大多无同源性,呈散发流行趋势.     

阴沟肠杆菌的耐药性及对喹诺酮类耐药基因的检测

目的研究临床分离的阴沟肠杆菌的耐药性和其对喹诺酮类抗生素耐药的分子机制。方法采用VITEK2型全自动微生物检测系统鉴定临床分离的细菌,用K—B法测定阴沟肠杆菌对25种抗生素的敏感性,用聚合酶链反应检测耐环丙沙星的阴沟肠杆菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因,包括qnrS、qnrA、qnrB、qepA和aac（6’）-Ib,并对阳性的aac（6’）-Ib结果进行测序分析。结果71株阴沟肠杆菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为46．5％和40．8％,对第一、二、三代头孢菌素类药物的耐药率在50％以上,对青霉素类药物的耐药率在70％以上,对含β－内酰胺酶抑制剂复合物的耐药率在50％以上,对氨基糖苷类药物（庆大霉素、妥布霉素）的耐药率在46．5％以上,对碳青霉烯类药物的敏感性最好,对亚胺培南、美罗培南的耐药率为0。37株耐环丙沙星的阴沟肠杆菌中1株检出qnrA基因（2．7％）,4株检出qnrS基因（10．8％）,qnrB基因全阴性,qnr基因的总阳性率为13．5％。2株检出qepA基因（5．4％）。25株捡出aac（6’）－Ib基因（67．6％）,经测序证实其中5株为aac（6’）－Ib—cr（13．5％）。1株菌同时携带qnrs和aac（6’）－Ib—cr基因。质粒介导的喹诺酮类耐药基因的总携带率为29．7％。结论临床分离的耐喹诺酮类药物的阴沟肠杆菌携带qnrA、qnrS、qepA和aac（6’）-Ib—cr基因,未检出qnrB。qnr、qepA和aac（6’）－Ib—cr基因引起质粒介导的阴沟肠杆菌对喹诺酮类抗生素的耐药。     

肺炎克雷伯杆菌质粒介导喹诺酮耐药基因qnr的研究

目的 了解质粒介导喹诺酮耐药基因qnr在肺炎克雷伯杆菌中的流行情况并探讨其相关耐药机制.方法 纸片法和E-test法检测肺炎克雷伯杆菌对抗菌药物的敏感性;多重PCR方法检测菌株中qnr的携带情况;接合实验证实qnr的可转移性;肠道细菌基因间重复序列PCR(ERIC-PCR)分型检测qnr阳性菌株的同源性;变性高效液相色谱技术(DHPLC)检测qnr阳性菌株染色体旋转酶GyrA和拓扑异构酶ParC变异位点.结果 2006年首都医科大学附属北京朝阳医院临床分离的160株肺炎克雷伯杆菌中检出48株qnr阳性菌株,分别为1株qnrA阳性菌,21株qnrB阳性菌,22株qnrS阳性菌,4株同时携带qnrB和qnrS.25株qnrB阳性菌和7株qnrS阳性菌接合实验成功.同源性分析未发现qnr基因在院内有暴发流行.检测到GyrA亚基存在4种氨基酸突变类型,ParC亚基存在2种氨基酸突变类型.结论 本研究分离的肺炎克雷伯杆菌中qnrB和qnrS为流行亚型.qnr基因在不同菌株中可水平转移,与编码GyrA和ParC氨基酸位点突变同时存在时可导致高水平耐药.     

临床分离枸橼酸杆菌qnr基因型检测

目的 探讨临床分离的多重耐药枸橼酸杆菌qnr基因的存在情况.方法 聚合酶链反应(PCR)法扩增各组qnr基因,对扩增产物进行基因测序和同源性比较,质粒结合试验,琼脂稀释法测定17种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC).结果 52株枸橼酸杆菌中有22株细菌检出qnr基因,其中5株菌携带qnrA基因,11株菌携带qnrB2基因,1株菌携带qnrB4基因.挑选2株qnrA基因测序与阴沟肠杆菌qnrA基因(GenBank登录号:DQ983226)的同源性为100%;3株qnrB2基因测序与弗劳地枸橼酸杆菌qnrB2基因(GenBank登录号:AB281054)的同源性均为97%,17个碱基突变,其中2个氨基酸发生改变(GenBank注册号:EF526508);1株qnrB4基因(GenBank注册号:EF543140)测序与大肠埃希菌qnrB4基因(GenBank臀录号:DQ303921)的同源性为100%.只有1株细菌qnrA基因结合试验成功.52株枸橼酸杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药率达到70%以上.结论 枸橼酸杆菌临床分离株中qnr基因检出率较高,应引起高度重视.     

铜绿假单胞菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因的研究

目的了解广州地区质粒介导喹诺酮类耐药（PMQR）基因在铜绿假单胞菌中的流行状况并分析其与耐药之间的关系。方法收集2005-2007年临床分离到的212株铜绿假单胞菌,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,通过PCR检测质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、qnrC、qnrD、aac（6’）-Ib-cr和qepA,并对阳性扩增产物进行DNA测序分析。结果 212株铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为10.8%（23/212）和19.3%（41/212）。qnrB、qnrS和aac（6’）-Ib-cr的阳性率分别为0.9%（2/212）、0.5%（1/212）和0.9%（2/212）,qnrA、qnrC、qnrD、qepA未检出。4株PMQR基因阳性菌株中,仅1株对左氧氟沙星表现为耐药,其余对环丙沙星和左氧氟沙星均表现为敏感。结论 2005-2007年间广州地区铜绿假单胞菌耐药现象严重,该地区铜绿假单胞菌中已携带有PMQR基因,且敏感菌株中也有该类基因存在。     

大肠埃希氏菌的qnrB基因检测与耐药机制研究

目的探索本地区医院大肠埃希氏菌喹诺酮耐药基因的分布及耐药机制。方法采用PCR扩增与测序、基因初步定位、质粒接合转移实验等方法确定喹诺酮耐药的大肠埃希氏菌qnr的基因类型,以分析研究有关的耐药特点与机制。结果各大肠埃希氏菌株中仅qnrB基因阳性,qnrA、qnrS、qnrC、qnrD、qepA、aac(6’)-Ib-cr基因均阴性;并且qnrB基因包括qnrB2、qnrB5、qnrB9、qnrB16、qnrB18、qnrB19和qnrB31等位基因;在这些qnrB等位基因中,qnrB31与qnrB16、qnrB2与qnrB9同源性较高;各qnrB等位基因分别位于约21.0 kb至28.0 kb长的质粒上。结论在本地区医院存在不同的qnrB等位基因流行;实验菌株的喹诺酮耐药与qnrB等位基因结构中LexA-蛋白结合位点共有序列缺失有关。     

肺炎克雷伯菌新的qnrB31和qnrB32基因的特性

目的研究肺炎克雷伯菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因的分布和特性。方法 PCR检测qnr、qepA、aac(6’)-Ib-cr基因,阳性产物进行DNA测序以确定其基因型,接合转移试验探讨质粒介导的喹诺酮类耐药基因的体外转移性,稀释法测定试验菌株的MIC,用切胶回收的方法初步定位耐药基因。结果我们在肺炎克雷伯菌KP3606株发现新的基因亚型qnrB31,GenBank登录号为HQ418999,肺炎克雷伯菌KP4047株发现新的基因亚型qnrB32,GenBank登录号为HQ704413;体外接合转移试验获得成功,各菌株和各接合子对喹诺酮类药物敏感试验有不同的结果,未检出qnrA、qnrS、qnrC、qnrD、qepA、aac(6’)-Ib-cr基因;经基因定位,qnrB31和qnrB32基因位于约23kb的质粒上。结论在喹诺酮类耐药的各种基因中,qnrB是最有可能发生变异的基因,应引起足够的重视。     

肺炎克雷伯菌对喹诺酮类耐药基因检测及耐药机制分析

目的:本研究对肺炎克雷伯菌对喹诺酮类耐药基因进行检测,并对其相关的耐药机制分析.方法:对本院经Vitek2compact系统鉴定分离得到的40株多耐药肺炎克雷伯菌株进行耐药相关基因gyrA、gyrB、qnrA1、qnrB、qnrS1、qepA及aac(6)Ib-Cr的检测和分析.结果:研究发现40株多耐药肺炎克雷伯菌株中发生gyrA基因突变的有32株(80.o％),gyrB基因突变的有16株(40.0％),发生qnrA1、qnrB、qnrS1、qepA及aac(6 ')Ib-Cr基因突变的分别有4株(10.0％)、6株(15.0％)、4株(10.0％)、4株(10.0％)、和6株(15.0％).结论:肺炎克雷伯菌对喹诺酮类耐药与多种基因突变相关,但最主要的原因是gyrA基因突变.     

临床分离阴沟肠杆菌中新型氨基糖苷类乙酰转移酶基因的检测

目的 了解临床分离阴沟肠杆菌中新型氨基糖苷类乙酰转移酶基因[aac(6')-Ib-cr基因]的分布.方法 PCR检测aac(6')-Ib-cr基因并将阳性扩增产物进行测序分析;纸片扩散法测定aac(6')-Ib-cr基因阳性菌株对13种抗菌药物的敏感性;改良三维试验检测高产AmpC酶和ESBLs; ERIC-PCR法进行aac(6')-Ib-cr基因阳性菌株同源性检测.结果 81株阴沟肠杆菌中,3株aac(6')-Ib-cr基因阳性(3.7%); aac(6')-Ib-cr基因阳性菌株对氟喹诺酮类,氨基糖苷类,氯霉素,氨苄西林,头孢西丁,第2、3代头孢菌素等显示多重耐药2株产ESBLs和AmpC,1株产ESBLs;ERIC-PCR电泳图谱型显示,3株aac(6')-Ib-cr基因阳性细菌均不属于同一型别.结论 临床分离阴沟肠杆菌中存在aac(6')-Ib-cr基因阳性菌株,为多重耐药、非克隆传播菌株,临床应加强检测和监测.     

多重耐药德尔卑沙门菌临床株耐药基因的研究

目的检测临床分离的多重耐药德尔卑沙门菌对抗菌药物的敏感性及其耐药机制。方法选取8株多重耐药的德尔卑沙门菌,用微量肉汤稀释法检测对12种抗菌药物的敏感性。质粒指纹图谱分析耐药质粒分布。聚合酶链反应(PCR)检测TEM、CTX-M型β内酰胺酶基因、I型整合子相关的整合酶intI基因和qacEΔ12sul1耐消毒剂和磺胺基因,染色体和质粒介导喹诺酮耐药基因gyrA,parC,qnrA/qnrB/qnrC/qnrS,aac(6')-Ⅰb-cr,oqxAB等12种耐药基因。结果8株多重耐药菌对氨苄西林、哌拉西林、头孢呋辛、头孢西丁、卡那霉素、庆大霉素、复方磺胺甲唑、四环素及氯霉素等9种抗菌药物全部耐药,2株对头孢曲松耐药。所有菌株对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟敏感。质粒电泳显示,8株菌均携带1~4种大小不等质粒,其中约182kb大小质粒可发现于3株菌中。所有8株菌都携带TEM编码基因,intI和qacEΔ12sul1、aac(6')-Ⅰb-cr基因。有2株菌携CTX-M-14型耐药基因。在喹诺酮耐药相关基因中,5株菌的GyrA发生了D87S的氨基酸突变,5株菌的ParC发生了T57S的氨基酸突变。5株菌携带oqxAB基因,4株菌携带qnrS基因。所有菌株都未携带qnrA/qnrB/qnrC耐药基因。结论多重耐药沙门菌同时存在多种耐药基因,耐药质粒与I型整合子系统共存是导致菌株同时对多种结构各异的抗菌药物耐药的原因。     

阴沟肠杆菌耐药性与AMEs及BLa基因研究

目的了解分离的阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶、β-内酰胺酶相关基因存在状况，给防治提供参考。方法采用MicroScan微生物鉴定系统Neg Combo Panel Type 21阴性复合板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应方法分析氨基糖苷类修饰酶及β-内酰胺酶编码基因。结果20株菌均呈严重多重耐药，仅对亚胺培南高度敏感（耐药率5.0％），哌拉西林／他唑巴坦耐药率50．0％，对包括3、4代头孢在内的其他β-内酰胺类及氨基糖苷类抗生素耐药率90．0％～100．0％，对复方新诺明耐药率100％；20株菌均检出氨基糖苷类修饰酶基因，未检出aac（3）-Ⅲ和aac（3）-Ⅳ基因；19株（95．0％）菌检出β-内酰胺酶相关基因，TEM和DHA基因阳性率均为70％，9株菌（45．0％）同时检出TEM和DHA基因，未检出SHV、OXA、PER、VEB和GES基因。结论广州地区医院感染阴沟肠杆菌多重耐药严重，氨基糖苷类修饰酶基因、DHA型质粒AmpC酶基因和TEM型β-内酰胺酶基因携带率高，在介导细菌耐药方面起重要作用。     

大肠埃希菌临床分离菌株喹诺酮类抗生素耐药机制研究

目的探讨我院临床分离的大肠埃希菌株耐药基因的分布及其在耐药中的作用机制。方法选择我院临床分离的大肠埃希菌菌株,采用纸片扩散法进行喹诺酮类药物药敏试验,筛选耐药菌株并测定环丙沙星MIC,对喹诺酮耐药菌株进行qnrA、qnrB、aac-（6’）-Ib-cr、GyrA及ParC检测,并进行基因扩增测序。结果 84株临床分离的大肠埃希菌菌株中有24株对喹诺酮类药物耐药,耐药率为28.4%。其中对2种药物耐药4株,对3种药物耐药6株,对5种药物耐药14株。耐药菌株MIC值为对照菌株148～596倍,24株耐药菌中检出qnrA质粒基因12株、qnrB质粒基因4株、aac-（6’）-Ib-cr基因4株、GyrA基因喹诺酮决定区突变11株、ParC基因决定区突变4株。结论我院存在大肠埃希菌喹诺酮耐药菌株,且耐药菌株耐药机制复杂,耐药基因的产生及酶类耐药突变是主要原因,临床要加强对耐药菌株的检测。     

我院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌感染特点及碳青霉烯酶基因型分析

目的 研究丽水市中心医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的感染特点、药物敏感性和碳青霉烯酶基因携带情况。 方法 收集2011年3月—2015年12月期间丽水市中心医院共140株CRE的临床资料并分析,Vitek 2-Compact鉴定细菌,K-B纸片法进行药物敏感性试验,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型,PCR扩增常见的碳青霉烯酶基因KPC、IMP、VIM、NDM和OXA-48。 结果 140株CRE以肺炎克雷伯菌为主(占70.71%),其次为产气肠杆菌(占6.44%)和阴沟肠杆菌(占5.71%)。标本来源以痰液为主(占69.29%),其次为尿液(占12.86%)、分泌物和血液(均各占4.29%)。临床科室分布以重症监护室为主(占44.29%),其次为神经外科(占18.57%)和血液内科(占5.00%)。药敏结果提示CRE对大部分β内酰胺类药物高度耐药,耐药率>80%,对米诺环素、阿米卡星的耐药率分别为14.78%和35.43%。改良Hodge试验有127株阳性(阳性率为90.71%)。PCR扩增及基因测序比对结果提示99株携带KPC-2基因,14株携带IMP-4基因,2株携带IMP-1基因,13株携带NDM-1基因。 结论 CRE对多种抗菌药物高度耐药,耐药基因以KPC为主,其次为IMP和NDM,临床应根据药物敏感性结果合理选用抗菌药物,做好院感监测及防护,以防止耐药菌株的传播和流行。      

2240株临床分离茵耐药性分析

目的了解临床分离病原菌的分布特点及耐药性,为临床合理使用抗生素提供参考。方法用法国生物梅里埃公司生产的VITEK2compact仪器对我院住院、门诊患者临床标本做菌株鉴定和药物敏感性测定。结果2012年5～8月间,7865份临床标本中共分离出病原菌2240株,其中主要有鲍曼不动杆菌493株,大肠埃希菌356株,肺炎克雷伯菌333株,铜绿假单胞菌304株,阴沟肠杆菌118株。阴沟肠杆菌对丁胺卡那霉素、亚胺培南和头孢吡肟敏感率为t00％,大肠埃希菌对厄他培南和亚胺培南敏感率较高分别为94．1％和96．91％。结论临床病原菌的检出率较低,细菌的耐药性日趋严重,临床治疗应依据药敏试验结果合理选用抗菌药物,降低病原菌耐药性,提高治愈率。