同种异体脱钙骨基质复合自体骨髓基质干细胞修复兔关节软骨缺损

背景:脱钙骨基质具有良好的生物相容性,是临床常用的骨缺损修复材料.骨髓基质干细胞具有向骨及软骨细胞分化的潜能,适合骨软骨缺损修复.目的:观察同种异体脱钙骨基质复合自体骨髓基质干细胞修复兔关节软骨缺损的效果.方法:27只兔均建立骨软骨缺损模型,造模后随机分为3组:复合材料组钻孔植入复合自体骨髓基质干细胞培养8 d的脱钙骨基质块,单纯脱钙骨基质组钻孔单纯植入脱钙骨基质块,模型对照组钻孔后不植入任何材料.取材后对修复组织进行大体观察、组织学观察及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定,并参照Wakitani评分标准对修复组织进行评分.结果与结论:植入后12周,复合材料组修复组织呈透明软骨样,表面光滑平坦,与周围软骨及软骨下骨结合良好;单纯脱钙骨基质组有部分软骨样修复;而模型对照组仅有少量纤维性修复.植入后12周,复合材料组、单纯脱钙骨基质组修复组织Ⅱ型胶原免疫组化染色均呈阳性,修复细胞表达Ⅱ型胶原,为软骨细胞;模型对照组呈阴性表达.植入后4,8,12周,复合材料组修复效果评分均显著优于单纯脱钙骨基质组、模型对照组(P<0.01).说明自体骨髓基质干细胞复合同种异体脱钙骨基质支架材料修复兔全层关节软骨缺损的效果良好.     

同种异体脱钙松质骨基质材料复合自体骨髓间充质干细胞修复全层关节软骨缺损

背景：到目前为止，还没有一种十分有效的方法治疗关节软骨缺损。许多治疗方法都只能缓解临床症状，而不能有效促进软骨的再生，也不能恢复软骨表面的承重功能。目的：观察脱钙骨基质复合骨髓间充质干细胞修复兔膝关节全层软骨缺损的疗效。设计、时间及地点：随机对照动物实验，分别于2005—01／03在兰州大学第二医院骨科研究所和2008-05／08在桂林医学院中心实验室完成。材料：取新西兰兔四肢骨干骺端及椎体松质骨，脱钙制备脱钙松质骨基质材料；体外分离培养同种新西兰兔骨髓间充质干细胞种植于脱钙骨基质支架上体外培养。36只新西兰兔随机分成骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨填充组（简称复合组）、同种异体脱钙骨填充组及空白对照组，每组12只。方法：在髁间窝髌面上用直径4mm的钻头钻孔深约3mm造成膝关节全层软骨缺损模型。复合组双侧股骨髁间窝软骨缺损处植入脱钙骨基质吸附体外分离培养的自体骨髓间充质干细胞复合物；同种异体脱钙骨填充组单纯植入脱钙骨基质；空白对照组不作任何植入。主要观察指标：分别于植入后4，8，12周取材进行组织学及免疫组化染色观察，根据关节软骨组织学计分标准进行评分。结果：36只新西兰兔均进入结果分析。复合组所修复组织为透明软骨样修复：而同种异体脱钙骨填充组和空白对照组为纤维性修复。植入后12周复合组大体评分及组织学评分明显低于同种异体脱钙骨填充组和空白对照组（P〈0．05）；同种异体脱钙骨填充组低于空白对照组（P〈0．05）。结论：运用软骨组织工程的原理，以脱钙骨基质为支架材料的自体骨髓间充质干细胞移植是一种修复软骨缺损的行之有效的方法。     

骨髓基质细胞修复关节软骨缺损的实验研究

目的研究骨髓基质细胞对关节软骨缺损的修复效果。方法抽取兔骨髓基质细胞在体外扩增,将其混合于Ⅱ型胶原凝胶内,再植入体内,观察其对兔膝关节软骨缺损的修复效果。结果软骨缺损由类似于透明软骨的组织修复,３个月后未见软骨退变。结论骨髓基质细胞对关节软骨具有修复能力,可望成为临床上修复关节软骨的新方法。     

自体骨髓间充质干细胞修复兔关节软骨缺损的实验研究

目的 通过对受损关节软骨进行未经诱导的兔自体骨髓间质干细胞移植，探讨组织工程移植修复兔关节软骨缺损的效果。方法 取青紫蓝兔股骨骨髓分离间充质干细胞进行培养，采用变性处理及透明质酸盐修饰后的吸收性明胶海绵为载体，实验组用骨髓间充质干细胞修复自体股骨保关节软骨缺损。对照组进行单纯吸收性明胶海绵移植。结果 移植24周后，肉眼下实验组移植物与正常软骨组织难以区分，软骨表面光滑，对照组移植物为白色的疏松组织。光镜下修复组织类似周围正常软骨组织结构，甲苯胺蓝异染与正常软骨组织无区别，为透明软骨组织。对照组24周关节软骨缺损区被纤维软骨样组织修复。结论 自体骨髓间质干细胞移植于受损关节软骨处，可促进关节缺损的修复，恢复软骨组织的结构功能。     

脱细胞异体真皮基质与自体薄皮片复合移植修复皮肤缺损

脱细胞异体真皮基质(ADM)与自体薄皮片复合移植15例2l处修复皮肤缺损。结果显示植皮区光滑平整，瘢痕增生不明显；病理学检测提示复合皮血管化明显，胶原排列有序，表皮与真皮连接结构重建充分，未见急性免疫排斥反应。表明ADM与自体薄皮片复合移植是一种修复皮肤缺损的良好方法。     

同种异体脂肪干细胞复合脱钙骨支架材料修复兔胫骨缺损的实验研究

目的探讨同种异体脂肪干细胞复合脱钙骨支架材料修复兔胫骨缺损的实验研究。方法购自北京生物有限公司(动物实验中心)新西兰大白兔8对,其中2对白兔进行脂肪干细胞分离培养,并采用反复滴加方法将细胞均匀分布于支架材料上,获取脂肪干细胞复合脱钙骨材料。其中6对构建兔胫骨骨缺损模型,造模后即刻将单纯脱钙骨材料植入右侧缺损区设为对照组,将诱导后的兔脂肪干细胞-脱钙骨支架复合物植入左侧缺损区设为实验组。于术后12周采用空气栓塞处死大白兔,获取大白兔双侧后肢胫骨修复骨及其周围软组织,行Micro-CT和组织学检测,了解实验组和对照组白兔骨组织生长情况,兔脂肪干细胞-脱钙骨材料成骨表型测定体内降解情况和组织学检测结果。结果大体观察显示实验组白兔后肢骨缺损区可见骨样组织修复,对照组白兔为纤维样组织充填未见骨样组织覆盖;三维CT影像学显示实验组白兔骨缺损断端和材料接合部已充分融合且骨轮廓、光滑的骨塑形清晰可见,对照组白兔骨缺损处多为纤维性连接;HE染色下可见实验组白兔有典型再生骨组织、大量骨陷窝、骨细胞及部分骨小梁结构,对照组白兔为胶原纤维样组织和残留脱钙骨基质、无大片再生骨样组织。两组白兔Ⅱ型胶原免疫组织化学染色均呈阳性,细胞胞浆及胞外基质呈棕黄色,胞核呈蓝色,证实修复细胞表达Ⅱ型胶原,为软骨细胞。实验组和对照组白兔修复组织评分分别为(2.41±0.40)、(2.70±0.45)分,实验组白兔组织修复得分高于对照组白兔,差异有显著性(P<0.05)。结论兔脂肪干细胞接种于脱钙骨材料,经成骨诱导后具有较强成骨分化能力,能较好地修复兔胫骨骨缺损,具有较高临床疗效。     

同种异体脂肪干细胞复合脱钙骨基质在桡骨临界骨缺损兔模型中的价值

目的探讨同种异体脂肪干细胞复合脱钙骨基质对桡骨临界骨缺损兔模型的价值。方法纳入18只成年雄性大白兔,切取双上肢桡骨干中段部分骨质,制备双侧上肢桡骨临界骨缺损模型。将18只兔子随机分为对照组、实验组1和实验组2。对照组未予任何干预,实验组1在骨缺损部位植入脱钙骨基质,实验组2在骨缺损部位植入同种异体脂肪干细胞复合脱钙骨基质。第8、12周时行X线、病理切片和解剖学检查,明确骨缺损的修复效果。结果骨缺损修复后,8、12周时对桡骨行X线检查,对照组骨缺损修复差; 8周时实验组1部分修复,12周时大部分修复,但仍有1只兔子存在小块骨缺损;8周时实验组2大部分修复,12周时全部修复,实验组2可见髓腔通畅。8、12周时,实验组1和实验组2的Lane-Sandhu组织学评分均显著高于对照组,实验组2的Lane-Sandhu组织学评分均显著高于实验组1(P 0. 05)。造模12周后,对照组骨缺损区多为纤维组织,实验组1有编织骨形成,但骨小梁紊乱;实验组2有板成骨形成,骨小梁排列紧密有序。结论同种异体脂肪干细胞复合脱钙骨基质对桡骨临界骨缺损兔模型有一定的价值。     

同种异体骨软骨移植修复关节软骨缺损的实验与应用

目的：关节软骨多处于人体骨骼的重要功能部位，在临床上由于各种原因所导致的关市软骨缺损或变性坏死很常见。日前，使损伤的骨软骨修复至正常骨软骨，许多学者进行了有益的探索：将国内外同种异体骨软骨移植的研究和应用进展，从关节软骨的基础研究、同种异体骨软骨移植的发展概况、取材制备、保存、免疫原性、临床应用等方面做以分析。资料来源：应用计算机检索Medline1980—01／2004—05关于同种异体骨软骨移植的文章，检索词为“Osteochondral allograft”，限定文章语言种类为“English”：同时计算机检索CNK1 1994-01／2004—05关于异体骨软骨移植的文章，检索词为“骨软骨，移植，软骨缺损”，限定文章语言种类为中文。资料选择：对资料进行初审，纳入标准：①有关骨软骨保存方法的实验研究。②有关同种异体骨软骨移植的基础及临床研究。排除标准：文献中重复研究。未排除非随机、对照、盲法文章。资料提炼：共收集到59篇相关文献，追朔法查找文献12篇，29篇符合纳入标准，排除30篇文献，其中8篇重复研究，22篇为异体骨软骨移植在口腔颌面部整容中的应用。资料综合：29篇文章中6篇通过实验方法进行异体骨软骨保存方法的比较研究。10篇通过动物实验或临床研究，以对照研究方法证实同种异体骨软骨移植修复关节软骨缺损的可行性，与自体骨软骨移植相比较的优越性。13篇通过基础或临床研究，证实软骨自身修复能力有限，异体骨软骨移植后的免疫排斥反映对移植的影响。结论：在探索应用何种材料能更有效地治疗关节软骨缺损的过程中，人们一直把希望寄托在比自体骨软骨更理想的替代材料上，在众多的替代材料中，同种异体骨软骨有其独特的优势和应用价值，尤其对大块及特定形态结构部位缺损的替代作用。随着同种异体骨软骨移植的免疫排斥、软骨保存、软骨退变等问题的进一步解决，必将使关节软骨缺损的治疗学产生革命性的发展。     

骨髓基质细胞修复关节软骨缺损的实验研究

目的研究骨髓基质细胞对关节软骨缺损的修复效果。方法抽取兔骨髓基质细胞在体外扩增,将其混合于ＩＩ型胶原凝胶内,再植入体内,观察其对兔膝关节软骨缺损的修复效果。结果软骨缺损由类似于透明软骨的组织修复,３个月后未见软骨退变。结论骨髓基质细胞对关节软骨具有修复能力,可望成为临床上修复关节软骨的新方法。     

兔骨髓基质干细胞在不同脱钙程度骨基质材料上的增殖

背景:脱钙骨基质具有天然网状孔隙结构,有较好的可塑性和生物相容性,但目前报道对制备脱钙骨基质所用的脱钙时间各异.目的:比较不同脱钙时间的脱钙骨基质对兔骨髓基质干细胞增殖的影响,为组织工程软骨筛选最佳支架材料.方法:取兔髂骨制成条块状,经反复脱脂后,分别脱钙处理6,12,24 h,乙醇浸泡2 d制得脱钙骨基质,置于24孔培养板中.取浓度为5×10~9L~(-1)的第3代兔骨髓基质干细胞悬液40 μL,接种于上述培养板不同脱钙时间的预湿材料上.扫描电镜下观察脱钙骨基质形态及其孔隙率、孔径,MTT法测定骨髓基质干细胞在脱钙骨基质上的增殖情况,扫描电镜下观察骨髓基质干细胞在脱钙骨基质上的黏附情况.结果与结论:脱钙骨基质呈天然的高密度孔隙网架结构,骨小梁、小梁间隙和骨内管腔系统同时存在,脱钙6,12,24 h的脱钙骨基质其孔隙率、孔径大小无明显差异(P>0.05).与脱钙12,24 h的脱钙骨基质比较,骨髓基质干细胞与脱钙6 h的脱钙骨基质复合更为紧密,细胞相容性最好.扫描电镜下,脱钙6 h的脱钙骨基质上生长的骨髓基质干细胞培养8 d后增殖稳定,适合移植,且细胞数量明显多于脱钙12,24 h的脱钙骨基质(P<0.01).     

自体骨软骨镶嵌移植复合因子凝胶修复兔软骨缺损的实验研究

目的探讨自体骨软骨镶嵌移植复合因子凝胶修复家兔软骨缺损的效果和可行性。方法将36只健康家兔膝关节造成实验性缺损，随机将动物分成自体骨软骨镶嵌移植联合凝胶生长因子复合体组、自体骨软骨镶嵌移植组、骨膜移植组和空白对照组。4、8、12周后对修复组织进行形态学观察及组织学检查。结果术后12周，实验组的缺损由透明软骨样组织充填，软骨及软骨下骨组织基本修复，修复的软骨组织在组织形态学上优于对照组。结论自体骨软骨镶嵌移植复合纤维蛋白凝胶、TGF—B和IGF—I修复家兔膝关节软骨缺损，具有移植软骨固定可靠、软骨细胞存活率高等优点。     

同种异体颗粒骨对骨髓基质细胞影响的实验研究

目的 探讨同种异体颗粒骨对骨髓基质细胞粘附及分化的影响。方法 本实验取同种异体白兔皮质骨造成骨颗粒(直径100μ-500μ)，经低温冷冻(-70℃)一周后，与骨髓基质细胞(第二代)相结合进行体外培养(设为实验组)；另取未复合骨颗粒的骨髓基质细胞行体外培养(设为对照组)。两周后，倒置显微镜观察、光镜、四环素荧光标记、扫描电镜、透射电镜、碱性磷酸酶染色等方法观测骨髓基质细胞的粘附及分化情况。结果 实验：光镜及电镜观察，细胞紧密贴附于骨颗粒表面，细胞体积较大，胞浆丰富，内含丰富的核糖体、粗面内质网、高尔基复合体和线粒体，部分线粒体基质内有致密的颗粒状沉积：四环素荧光染色后，有金黄色荧光结节出现；碱性磷酸酶染色显示，阳性率大于百分之七十。对照组：电镜观察，细胞多呈长梭型，核大，可见核仁，胞浆内有核糖体、线粒体、内质网；四环素染色呈阴性；碱性磷酸酶染色率为百分之四十。结论 同种异体颗粒骨可诱导骨髓基质细胞向成骨细胞转化；同种异体颗粒骨与骨髓基质细胞之间有较强的粘附作用；同种异体颗粒骨可用作骨组织工程细胞外基质替代物。     

脱细胞血管基质材料同种异体移植10个月研究

背景：异体血管移植之所以至今未能在临床应用,关键是异体组织抗原性排斥反应的难题未能得到解决。目的：制备动脉脱细胞血管基质,探讨脱细胞血管异体移植的可行性。方法：采用不同去垢剂（1%TritonX-100、1%SDS）多步骤对犬血管进行脱细胞处理,通过组织学和力学观测,建立犬动脉血管脱细胞的方法;并进行脱细胞血管的异体移植。结果与结论：经胰蛋白酶、低渗溶液和去垢剂TritonX-100、SDS等多步骤处理,犬颈总动脉血管的细胞基本脱除,细胞外基质保持完好,血管的弹性、韧性保存较好;用该法制备的犬颈总动脉（直径约4.0mm）进行异体移植,经10个月观察,4/5通畅。提示经去垢剂TritonX-100、SDS加低渗溶液、胰蛋白酶和蛋白酶抑制剂处理的多步法,可以脱除血管的细胞成分,细胞外基质和力学特性保持完好,是一种较好的方法;用该法制备的犬颈总动脉可以直接进行异体移植,是一可选择的血管移植材料。     

异体脱钙骨基质颗粒复合骨水泥修复兔股骨粉碎性骨折

目的：探讨异体脱钙骨基质颗粒复合骨水泥修复严重粉碎性骨折的效果。方法：制造兔石股骨粉碎性骨折的动物模型，a组用异体脱钙骨基质颗粒复合骨折泥并表面贴附自体骨渣进行修复；b组用异体脱钙骨基质颗粒复合骨水泥进行修复；c组单纯植入骨水泥进行修复作为对照组。分别于术后不同时间行X射线照相、^99mTc-MDP骨扫描和组织学观察。结果：a组和b组4周开始形成骨痂，12周骨痂最丰富，24周复合材料与宿主骨边缘模糊，边缘部分的异体脱钙骨基质颗粒被新生骨替代，并与宿主骨融合。a组较b组骨痂形成快。^99mTc-MDP骨扫描计数a组大于b组，b组大于c组（P＜0．01）。结论：异体脱钙骨基质颗粒复合骨水泥易塑形，并具有生物学活性，能修复粉碎性骨折，表面贴附自体骨渣进行修复效果更为理想。     

家兔不同部位自体游离骨膜移植修复关节软骨缺损的实验比较

目的：探讨不同部位自体游离骨膜修复关节软骨缺损的能力。方法：用大耳兔32只，在股骨关节面造成5mm&;#215;8mm全层软骨缺损，分别行自体髂骨骨膜和胫骨骨膜游离移植术，术后4及8周取材傲组织学观察比较。结果：术后8周自体髂骨骨膜移植侧、胫骨骨膜移植侧的优势组织性质分别为类透明软骨、幼稚软骨，前者形成软骨的质量优于后者。结论：自体髂骨骨膜游离移植的成软骨能力优于自体胫骨骨膜，是较理想的自体骨膜游离移植取材部位     

脱细胞真皮基质修复口腔组织缺损

国外从1979年开始研究脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM),ADM包括有同种异体和异种异体两类,作为皮肤替代物早期主要应用于烧伤患者的创面覆盖,近些年开始在烧伤整形、头颈外科、牙周病学等领域进行广泛的实验研究和临床应用.本文主要对ADM的研究进展并主要对其在口腔颌面外科的研究应用作一综述.     

同种异体神经修复面神经缺损的实验研究

目的：探索修复面神经缺损的新的有效替代材料。方法：20只大鼠随机分成实验组(化学萃取同种异体胫神经移植组。10只)和对照组(自体新鲜胫神经移植组，10只)。大鼠一侧面神经下颌支缺损6mm的模型，以上述两种移植物桥接修复。术后5个月，HRP逆行示踪观察神经通路，以及用苏木精-伊红染色、Luxol Fast Blue染色和透射电镜等观察神经再生的组织学情况。结果：两组均在术侧面神经核发现被标记的神经元细胞，移植段内有大量的新生有髓神经纤维和新生血管等。两组结果相似。结论：化学萃取同种异体神经极有可能成为自体神经的替代材料，应用于面神经缺损的修复。     

脱钙骨支架与诱导培养的脂肪基质细胞复合修复免胫骨缺损

背景:脂肪基质细胞经诱导后具备成骨活性已被实验证实,因此,脂肪基质细胞修复骨缺损的研究已成为目前的热点,但脂肪基质细胞修复负重骨缺损修复的相关实验报道较少.目的:通过兔脂肪基质细胞诱导培养为成骨细胞,并与牛脱钙骨复合培养,对兔胫骨骨缺损修复情况的观察,探讨脂肪基质细胞修复骨缺损的可行性.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-01/09在天津市第三中心医院动物实验室完成.材料:取新生小牛四肢长骨干干骺端的松质骨置于脱钙液中脱钙、脱脂、去细胞、去抗原和去蛋白等程序处理制备成脱钙骨支架.方法:选取健康成年新西兰大白兔12只,随机选取1只提取腹腔内脂肪组织15 mL,体外分离培养脂肪摹质细胞并行诱导培养证实为成骨细胞后,以1×109L-1浓度种植于脱钙骨支架上,继续培养1周,制成组织工程骨.将12只新西兰大白兔手术制成双侧胫骨骨缺损模型,左下肢植入单纯脱钙骨作为对照组,右下肢植入组织工程骨作为实验组.主要观察指标:X射线、CT检查观察骨缺损处骨痂形成情况,取材后行大体、组织学观察骨缺损处修复情况.结果:大体观察及X射线显示实验组术后12周骨缺损区缺损消失,已骨性愈合,对照组术后12周骨缺损区缺损仍存在,未见完全愈合.组织学观察显示实验组术后12周可见新生骨小梁形成,对照组术后12周未见新生骨小粱形成.测量CT值行配对t检验显示实验组明显优于对照组(P<0.05).结论:脂肪基质细胞经诱导培养具备成骨活性,与细胞支架复合具备修复骨缺损的能力.