CCL4损伤原代培养大鼠肝细胞模型的实验研究

1材料和方法 1.1材料 1.1.1实验动物:清洁级SD大白鼠,体重150克左右,雌雄不限,由江汉大学医学院动物室提供. 1.1.2试剂:1640液与胎牛血清(Gibco公司),胶原酶Ⅱ(Boehringer mannheim公司)、CCL4(中国医药上海化学试剂公司),MTT与DMSO(Sigma公司),MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所).其他试剂均为分析纯试剂.     

二苯硫酰卡巴腙胰岛染色法

胰岛移植是治疗Ⅰ型糖尿病的有效方法,获得大量纯净的胰岛是移植成功的前提。因成人胰腺来源困难,故多采用胚胎胰岛。我们参阅有关文献,将胰腺组织的胶原酶消化液,用二苯硫酰卡巴腙做胰岛染色,显微镜下分离胰岛,效果良好,报告如下。1 材料和方法1.1 材料二苯硫酰卡巴腙(DTZ)、胶原酶V型、RPMI1640培养液均为Sigma公司产。人水囊     

犬胆囊上皮细胞的分离及培养

目的　探讨胆囊上皮细胞的分离方法和生长条件 ,为研究胆囊的生理功能和相关疾病奠定基础。方法　采有Ⅳ型胶原酶分离细胞 ,Ⅳ型胶原和小牛血清包被培养皿 ,DMEM/HamF12培养基联合培养 ,观察细胞形态和生长曲线 ,并用胆囊上皮细胞特异性标记物角蛋白CK19鉴定细胞。结果　每个犬胆囊可分离得到 5 10× 10 6个胆囊上皮细胞 ,接种一周内生长旺盛 ,第 3 ,4d达到峰值 ,呈现扁平多角形成片贴壁状态。结论　Ⅳ型胶原酶消化法能成功分离家兔胆囊上皮细胞 ,Ⅳ型胶原 /小牛血清可促进细胞贴附 ,DMEM /HamF12培养基可提供较为满意的生长条件。     

大鼠肾小球系膜细胞体外培养及鉴定的实验研究

目的:探索一种重复性好、传代次数多的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)体外培养和鉴定的方法.方法:麻醉状态、无菌条件下取得大鼠的肾脏,用3种不同目数的不锈钢筛网提取肾小球,搜集到的肾小球分别加入2.5 g/L、0.5异/LⅣ型胶原酶及2 g/L Ⅱ型胶原酶各5 mL,分别在37 ℃水浴箱中振荡消化20 min、30 min、25min,然后接种肾小球,比较不同培养条件下肾小球系膜细胞的生长状况.结果:Ⅱ型、Ⅳ型胶原酶3种不同浓度作用不同的消化时间,细胞的生长速度及生长状况不同,Ⅳ型胶原酶(2.5 g/L)消化20 min的为最佳.结论:培养的细胞为肾小球系膜细胞,用Ⅳ型胶原酶(2.5 g/L)消化20 min的肾小球系膜细胞生长状态最佳.     

白细胞介素-1β诱导人椎间盘髓核细胞凋亡

目的：探讨人正常椎间盘髓核细胞的培养方法以及白细胞介素-1β（IL-1β）对人椎间盘髓核细胞凋亡的作用。方法：取特发性脊柱侧弯患者腰椎间盘髓核组织,用胰酶、胶原酶序贯消化法消化细胞,并用甲苯胺蓝、番红-O染色和Ⅱ型胶原免疫组化分别检测糖胺多糖、蛋白多糖和Ⅱ型胶原表达,分别用20μg/L和200μg/L重组人IL-1β刺激髓核细胞24 h,检测其凋亡率。结果：用酶消化法可成功分离培养人椎间盘髓核细胞,检测所培养细胞可表达糖胺多糖、蛋白多糖和Ⅱ型胶原,IL-1β20μg/L组中细胞凋亡率（8.46%）和IL-1β200μg/L组（19.00%）分别为空白对照组（2.86%）的2.95倍和6.63倍（P〈0.05）,IL-1β200μg/L组是IL-1β20μg/L组的2.24倍（P〈0.05）。结论：用酶消化法可成功培养人椎间盘髓核细胞,IL-1β可以诱导椎间盘髓核细胞凋亡,并且随着浓度升高凋亡率增加,提示炎症因子IL-1β在退变椎间盘细胞凋亡中起了重要的作用。     

白介素1β与地塞米松联合应用对人成骨细胞芳香化酶活性的影响

目的:探讨白介素1(βIL-1)β与地塞米松联合应用对人成骨细胞(HOS)芳香化酶活性的影响。方法:体外培养HOS。分别加入IL-1β浓度1,10,50μg/L(实验Ⅰ～Ⅲ组);地塞米松0.1,1,10μmol/(L实验Ⅳ～Ⅵ组);地塞米松0.1μmol/L和IL-1β1μg/L(实验Ⅶ组),IL-1β10μg/L和IL-1受体拮抗剂IL-1ra 500μg/(L实验Ⅷ组),对照组加培养液,采用氚水法检测芳香化酶活性。结果:实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组氚水(3H2O)放射强度分别为(4211.2±347.9)(、4958.0±231.3)(、4818.1±515.5)pmol(/106cell.h),比对照组(3381.2±259.5)pmol(/106cell.h)的放射强度明显增加(P<0.05)。实验Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组放射强度为(4495.1±462.3)(、5125.1±120.7)、(5347.7±146.3)pmol(/106cell.h),与对照组比较差异非常显著(P<0.01)。实验Ⅶ组(7005.7±258.8)pmol(/106cell.h)与对照组间差异非常显著(P<0.01)。实验Ⅷ组(3652.3±203.4)pmol(/106cell.h)放射强度低于实验组Ⅰ和Ⅳ,差异非常显著(P<0.01)。结论:IL-1β、地塞米松可增加HOS芳香化酶的活性。IL-1β是通过与成骨细胞的IL-1受体相结合而起作用。地塞米松和IL-1β联合应用使芳香化酶活性叠加。     

血清转化生长因子-β1水平与糖尿病肾病关系的探讨

目的通过检测2型糖尿病患者血清转化生长因子-β1(TGF-β1)及Ⅳ型胶原(Ⅳ-C),探讨其在糖尿病肾病(DN)中的临床意义.方法根据尿白蛋白排泄率(UAER),将64例2型糖尿病患者分为正常白蛋白尿组(NA)、微量白蛋白尿组(MA)及临床糖尿病肾病组(ODN).分别检测各组的TGF-β1及Ⅳ-C,并与正常对照组进行比较.结果NA组TGF-β1含量为(20.90±5.15)g/L,MA组为(128.09±7.01)g/L,ODN组为(30.83±10.31)g/L,均显著高于正常对照组的(9.04±2.80)g/L(P＜0.01).血清Ⅳ-C在NC、NA及MA组分别为(44.2±22.4)g/L、(71.3±26.6)g/L及(96.1±54.4)g/L,无显著性差异,而在ODN组为(244.1±189.4)g/L,明显高于其他三组(P＜0.01).结论血清TGFβ-1在DN的不同阶段有不同的改变,其意义尚待进一步研究.     

明胶酶检测方法研究进展

明胶酶,亦称Ⅳ型胶原酶[1]、基底膜性胶原酶[2]等,属于基质金属蛋白酶(Matrix metalloprotein-ases,MMPs)范畴,包括明胶酶A(MMP-2或称72kDaⅣ型胶原酶)和明胶酶B(MMP-9或称92kDaⅣ型胶原酶),可降解Ⅳ型胶原、明胶和V型胶原等基底膜成分,在组织炎症[3]、纤维化[4,5]、免疫[6]与     

微囊化成人胰岛细胞治疗大鼠糖尿病

1 临床资料成人胰岛采用传统的胰腺导管内注射胶原酶消化方法,应用新型胶原酶-Liberase酶分离胰岛,Ficoll纯化胰岛. 用静电微囊发生器进行海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊成囊,并用APA微囊包裹成人胰岛细胞. 健康SD大鼠按65 mg/kg剂量肌肉注射链脲菌素(美国Sigma公司),以尿糖强阳性、非禁食血糖>16.5 mmol/L且病程>14 d者作为糖尿病动物模型. 将合格糖尿病大鼠模型27只随机分成3组(空囊组、游离胰岛组、微囊组),每组各9只,以体质量及血糖作为观察指标.     

人胆囊上皮细胞的分离、培养及鉴定

目的　探索人胆囊上皮细胞的较佳分离方法和合适的生长条件 ,为研究胆囊的生理功能和相关疾病打下基础。方法采用IV型胶原酶及钝性擦刮法分离细胞 ,IV型胶原包被培养皿 ,DMEM/HamF12培养基联合培养。结果　每个胆囊可分离得到( 5～ 10 )× 10 7个胆囊上皮细胞 ,接种 1周内生长旺盛 ,第 3、4天达到峰值 ,呈现扁平多角形成片贴壁状态。结论　IV型胶原酶消化法可成功分离人胆囊上皮细胞 ,DMEM/HamF12培养基可提供较为满意的生长条件。