咖啡酸衍生物WSY6对黑素细胞氧化应激损伤的保护作用及机制研究

目的 探讨咖啡酸衍生物WSY6对过氧化氢（H2O2）诱导的黑素细胞氧化损伤的保护作用和潜在分子机制。方法 体外培养原代人表皮黑素细胞,分为对照组（不做任何处理）、H2O2组（1 mmol/L H2O2处理）和6.25、12.5、25 μmol/LWSY6组（分别用6.25、12.5、25 μmol/L WSY6预处理1 h后再用1 mmol/L H2O2处理1 h）。继续培养24 h后,用MTS法测定黑素细胞存活率,乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测LDH释放量。部分黑素细胞分为抑制剂组（用p38抑制剂预处理1 h,再用1 mmol/L H2O2处理1 h）和H2O2组（直接用1 mmol/L H2O2处理1 h）,处理完成后继续培养24 h,用试剂盒检测LDH的释放量。部分黑素细胞用25 μmol/L WSY6预处理1、2、4 h后,再用H2O2处理1 h,流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平;部分黑素细胞用6.25、12.5、25 μmol/L WSY6处理1 h后,再用H2O2处理1 h,Western印迹法检测细胞色素C（cyto?c）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase?3）、caspase?9和磷酸化丝裂原活化的蛋白激酶（p?p38 MAPK）、细胞外调节蛋白激酶（p?ERK）及c?Jun氨基末端激酶（p?JNK）的表达。结果 与对照组相比,H2O2组黑素细胞存活率明显降低（29.22% ± 1.31%,P < 0.05）,细胞内LDH释放量增加（47.19% ± 4.85%,P < 0.05）,ROS水平明显升高（18.37 ± 1.59,P < 0.05）,caspase?3和caspase?9的表达亦均升高。与H2O2组相比,6.25、12.5、25 μmol/L WSY6组细胞存活率明显增加（52.48% ± 1.17%、60.21% ± 0.25%、78.32% ± 1.73%,P < 0.05）,LDH释放量明显下降（21.99% ± 0.22%、15.38% ± 0.45%、13.18% ± 0.38%,均P < 0.05）,25 μmol/L WSY6处理1、2、4 h组细胞内ROS显著下降（7.59 ± 1.00、6.22 ± 0.52、5.15 ± 0.48,均P < 0.05）。同时p38抑制剂组黑素细胞LDH释放量较H2O2组显著下降（P < 0.05）。Western印迹法显示,WSY6预处理后,与H2O2组相比,caspase?3和caspase?9表达明显降低,p?p38表达下降,但p?ERK和p?JNK表达无明显变化;同时WSY6组p38 MAPK下游产物p?p53表达也下降,且WSY6浓度越高,下降越明显。结论 WSY6对H2O2诱导的黑素细胞氧化应激损伤有显著的保护作用,可能通过p38 MAPK途径发挥作用。     

扁平苔藓皮损中钙激活蛋白酶Ⅰ和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨凋亡相关蛋白钙激活蛋白酶Ⅰ（Calpain Ⅰ）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）在扁平苔藓皮损中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法 分别采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记（TUNEL）法和免疫组化法对20例扁平苔藓患者皮损组织和10例健康人皮肤组织中细胞凋亡和Calpain Ⅰ、Caspase-3表达进行检测。采用SPSS 13. 0软件,两组凋亡指数比较采用t检验,两组Calpain Ⅰ和Caspase-3表达量比较采用秩和检验,Calpain Ⅰ和Caspase-3表达量与凋亡指数相关性分析采用 Spearman 等级相关分析。结果 扁平苔藓组表皮层角质形成细胞的凋亡指数（67.59 ± 13.50）显著高于健康对照组（28.26 ± 7.56）,两组比较,差异有统计学意义（t = 8.52,P < 0.01）;Calpain Ⅰ和Caspase-3表达均高于健康对照组（T = 78.00 和77.00,P < 0.01）。扁平苔藓皮损中Calpain Ⅰ和Caspase-3阳性表达强度均与其自身角质形成细胞的凋亡指数呈正相关（r = 0.71和0.74,P < 0.01）。结论 扁平苔藓皮损中Calpain Ⅰ和Caspase-3表达上调,且与角质形成细胞凋亡亢进关系密切。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在血卟啉单甲醚光动力学疗法中对瘢痕成纤维细胞的作用

目的 探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase 3）在增生性瘢痕成纤维细胞（HSF）经光敏剂血卟啉单甲醚（HMME）诱导的凋亡效应中的作用。方法 将原代培养的HSF分为对照组、HMME-光动力疗法（PDT）组和caspase 3抑制剂（Z-DEVD-FMK）组,经caspase 3-异硫氰酸荧光素（FITC）-碘化丙啶（PI）染色后在荧光显微镜下观察各组细胞内caspase 3的荧光强度。收集各组细胞,在活性caspase 3-FITC单染后,经流式细胞术检测活性caspase 3阳性细胞百分率;在PI单染后,经流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 对照组和caspase 3抑制剂组HSF胞质中caspase 3-FITC荧光微弱,PDT组荧光显著增强;对照组活性caspase 3阳性细胞百分率低,HMME-PDT组（30.86% ± 1.21%）上升,caspase 3抑制剂组（2.46% ± 0.18%）降低,后两组间比较,t = 21.76,P < 0.05。PI染色分析表明,对照组凋亡率（2.45% ± 0.22%）低,PDT组（30.54% ± 3.78%）显著升高,两组比较,t = 35.90,P < 0.05;caspase 3抑制剂组凋亡率（10.46% ± 2.15%）低于PDT组,但显著高于对照组（t = 27.97,P < 0.05）。结论 HMME-PDT诱导HSF发生的凋亡效应与caspase 3的激活密切相关,但该凋亡效应并不依赖于caspase 3。     

人参皂苷Rb1对人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的 探讨人参皂苷Rb1对体外培养的人黑素细胞黑素生成的影响及其作用机制。方法 人表皮黑素细胞取自小儿包皮环切术标本,取第2 ～ 5代细胞进行实验。采用MTT法测定体外培养的人黑素细胞增殖情况,分光光度计法测定酪氨酸酶的多巴氧化酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫蛋白印记法测定黑素细胞酪氨酸酶、小眼畸形相关转录因子（MITF）的表达及cAMP应答元件结合蛋白（CREB）的磷酸化。结果 体外培养的人黑素细胞分别加入25、50、100 μmol/L人参皂苷Rb1 作用72 h后,黑素细胞存活率3组间差异无统计学意义（P ＞ 0.05）,黑素含量呈浓度依赖性增加（与溶剂对照组相比的相对黑素含量分别为112.4% ± 5.7%、155.7% ± 6.3%、217.2% ± 11.7%）,酪氨酸酶活性增加（相对酪氨酸酶活性分别为117.9% ± 5.7%、158.2% ± 9.6%、182.6% ± 10.0%）。100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h,黑素细胞酪氨酸酶（225.4 %± 12.8%）、MITF（313.5% ± 16.7%）蛋白表达明显升高（与溶剂对照组相比,P值均 < 0.01）,CREB磷酸化明显增加（322.5% ± 21.1%）（与溶剂对照组相比,P < 0.01）。100 μmol/L人参皂苷Rb1 作用黑素细胞8 h,MITF蛋白表达无明显变化;作用24 h后,MITF表达明显增加,与0时间点相比,P < 0.01。10 μmol/L的蛋白激酶A（PKA）抑制剂H-89预处理细胞,可明显抑制100 μmol/L人参皂苷Rb1引起的CREB激活、酪氨酸酶及MITF蛋白表达的增加,与100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h比较,P值均 < 0.01,进而抑制人参皂苷Rb1引起的酪氨酸酶活性作用增强及黑素合成增加。 结论 人参皂苷Rb1可促进正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性。PKA/CREB/MITF/酪氨酸酶信号通路可能参与了人参皂苷Rb1的促黑素生成机制。     

京尼平苷通过P13K-Akt途径拮抗黑素细胞氧化损伤北大核心CSCD

目的 探讨京尼平苷对体外培养的人黑素细胞氧化损伤的拮抗作用,以及PI3K-Akt途径在其中的作用。方法 取健康青少年环切术后包皮,分离并培养表皮黑素细胞。取第2 ～ 3代黑素细胞,分为对照组（不做任何处理）、京尼平苷组（125 μmol/L京尼平苷处理）、LY294002组（5 μmol/L LY294002处理）、H2O2组（250 μmol/L H2O2处理）、京尼平苷 ＋ H2O2组（125 μmol/L京尼平苷处理24 h后,加入250 μmol/L H2O2作用4 h）、京尼平苷 ＋ LY294002 ＋ H2O2组（125 μmol/L京尼平苷处理24 h后,加入5 μmol/L LY294002作用1 h,然后用 250 μmol/L H2O2作用4 h）。作用完成后,用噻唑蓝（MTT）法检测黑素细胞增殖活性,Western印迹检测Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、血红素加氧酶1（HO-1）、谷胱甘肽过氧化物酶1（GPx-1）蛋白的表达,生物化学方法检测超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性,流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）含量。通过单因素方差分析（ANOVA）对各组间数据进行比较,采用SNK-q检验进行组间两两比较。结果 H2O2组细胞增殖率较对照组明显降低（P 〈 0.01）,p-Akt（P 〈 0.01）、HO-1（P 〈 0.01）、GPx-1（P 〈 0.05）蛋白表达水平下降,SOD活性、CAT活性降低（均P 〈 0.01）,ROS含量显著升高（P 〈 0.01）。与H2O2组相比,京尼平苷＋ H2O2组黑素细胞增殖率上升（72.98% ± 8.92%比50.53% ± 10.85%,P 〈 0.05）,p-Akt（P 〈 0.05）、HO-1（P 〈 0.01）、GPx-1（P 〈 0.01）蛋白表达上调,SOD［（6.82 ± 1.03） U/mg比（1.29 ± 0.43 ） U/mg,P 〈 0.05］和CAT［（46.08 ± 4.16） U/mg比（18.71 ± 3.09） U/mg,P 〈 0.05］酶活性增高,ROS含量（1 284.33 ± 110.64比2 158 ± 222.75,P 〈 0.01）减少;京尼平苷 ＋ LY294002 ＋ H2O2组黑素细胞增殖率（44.35% ± 14.85%）较京尼平苷 ＋ H2O2组降低（P 〈 0.05）,p-Akt（P 〈 0.01）、HO-1（P 〈 0.05）、GPx-1（P 〈 0.01）蛋白表达下调,SOD活性［（1.31 ± 0.65） U/mg,P 〈 0.05］和CAT活性［（23.25 ± 5.56） U/mg,P 〈 0.05］减弱,ROS含量增加（1 668 ± 62.03,P 〈 0.05）。结论 京尼平苷可通过PI3K-Akt途径促进黑素细胞HO-1和GPx-1表达,增强SOD和CAT活性,拮抗黑素细胞氧化应激损伤。     

热处理对UVB辐射后体外培养人黑素细胞活性的影响

目的 探讨热处理与窄谱中波紫外线（NB-UVB）联合作用对正常人黑素细胞活性的影响。 方法 分别以20、30、50、70、90、120、180 mJ/cm2 NB-UVB辐射体外培养的正常人黑素细胞,采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测细胞增殖活性并选择最佳照射剂量;以42 ℃,1 h为热处理干预剂量,将黑素细胞分为4组：正常对照组、UVB组、加热组、UVB + 加热组,连续干预3 d,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素含量,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 NB-UVB照射呈剂量依赖性减少黑素细胞存活率,选择50 mJ/cm2作为最佳照射剂量;黑素细胞经不同干预后,UVB组、UVB+加热组的酪氨酸酶活性分别为0.244 ± 0.018、0.310 ± 0.015,较对照组（0.235 ± 0.018）分别增长3.8%和31.9%（P < 0.05）,两组黑素含量分别为0.201 ± 0.016、0.286 ± 0.019,较对照组（0.171 ± 0.016）分别增长17.5%和67.3%（P < 0.05）;UVB组和UVB+加热组处于G1期的黑素细胞较对照组分别减少23.94%和33.51%（P < 0.05）,S期细胞分别增加15.35%（P < 0.05）和17.76%（P > 0.05）,G2期分别增加11.93%（P < 0.05）和16.08%（P > 0.05）。 结论 热处理与NB-UVB可以协同增加黑素细胞的酪氨酸酶活性,促进黑素合成及细胞的增殖分化。     

核因子E2p45相关因子2核转位对黑素细胞生物学活性的影响

【摘要】 目的 探讨核因子E2p45相关因子2（Nrf2）核转位对永生化黑素细胞株B10BR细胞生物学活性的影响。方法 构建电转染野生型和nls缺失型nrf2质粒载体至B10BR细胞,结合叔丁基氢醌（TBHQ）和（或）H2O2处理,Western印迹检测Nrf2,his标签蛋白表达,MTT法测定细胞活性,多巴氧化法检测酪氨酸酶活性,Transwell法测定转染细胞的迁移。结果 TBHQ处理的转染组细胞核中Nrf2表达均显著高于TBHQ未处理组（P < 0.01）。转染质粒组间及其与未处理组间细胞酪氨酸酶活性差异均无统计学意义（P > 0.05）,H2O2处理使2个质粒转染组酪氨酸酶活性较单独质粒转染组显著下降（pcDNA-nrf2,P < 0.05;pcDNA-nrf2?驻nls,P < 0.05）。相对于TBHQ未添加H2O2处理的nrf2组,TBHQ显著增强H2O2处理的野生型nrf2质粒转染细胞酪氨酸酶活性（P < 0.05）;相对于TBHQ未添加H2O2处理的nls组,nls缺失型nrf2质粒转染组细胞酪氨酸酶活性差异无统计学意义（P > 0.05）。相对于nrf2未转染组,H2O2对野生型nrf2质粒转染组细胞活性的影响无统计学意义（P > 0.05）;相对于两组的未处理组,H2O2引起未转染组及nls缺失型质粒转染组细胞活性显著下降（未处理组,P < 0.05;pcDNA-nrf2?驻nls,P < 0.01）。TBHQ可以保护野生型nrf2质粒转染细胞免受H2O2引起的氧化损伤,对nls缺失型质粒转染组细胞无明显保护作用。各处理组黑素细胞迁移差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 Nrf2核转位异常影响黑素细胞的抗氧化能力、黑素细胞活性及酪氨酸酶活性。TBHQ可以激活野生型Nrf2在细胞核中表达水平,增强酪氨酸酶和黑素细胞活性,进而提高细胞的抗氧化水平。 【关键词】 黑素细胞; 核因子E2p45相关因子2; 核转位; 一元酚单氧酶     

InnVit基因对B10BR细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 分析InnVit基因的抑制和过表达对永生化黑素细胞株B10BR细胞增殖、周期及凋亡的影响,探讨InnVit基因的生物学功能及其对白癜风中黑素细胞缺失的影响。方法 化学合成InnVit基因特异性siRNA片段以及构建过表达质粒载体P3XF-P120,lipofectamineTM 2000脂质体方法转染B10BR细胞。半定量RT-PCR法检测InnVit基因mRNA水平;Western印迹检测该蛋白水平变化;MTT法测定细胞增殖情况;流式细胞技术分析细胞周期和凋亡的变化。结果 InnVit基因抑制后mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组,InnVit基因过表达质粒组mRNA和蛋白表达水平显著高于对照组;转染后24、48、72 h抑制组的细胞存活量极显著下降（P < 0.01）,过表达质粒组的细胞存活量在48和72 h极显著增加（P < 0.01）。转染后48 h基因抑制组的早期凋亡率从（10.24 ± 1.00）%升至（37.34 ± 3.26）%,过表达质粒组早期凋亡率从（14.58 ± 1.49）%降至（8.43 ± 0.86）%,与对照组比较,差异均有统计学意义（P < 0.01）;转染48 h基因抑制组的G1期细胞由（56.11 ± 5.46）%增至（69.76 ± 6.08）%（P < 0.05）,过表达质粒组的G1期细胞由（55.14 ± 5.65 ）%降至（29.33 ± 3.01）%（P < 0.01）。结论 InnVit基因抑制使细胞增殖能力下降,促进细胞凋亡;InnVit基因的过表达增强了细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡。其增殖能力的改变可能是通过细胞周期的调控调节的。     

乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制剂2在恶性黑素瘤的表达

【摘要】 目的 探讨乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶2（MMP2）和金属蛋白酶组织抑制剂2（TIMP2）蛋白在恶性黑素瘤皮损中的表达及意义。方法 选择恶性黑素瘤30例、黑素细胞痣30例、正常皮肤组织15例,分别采用免疫组化SP法检测皮损中乙酰肝素酶、MMP2和TIMP2蛋白的表达。结果 恶性黑素瘤皮损乙酰肝素酶蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常皮肤组织相比,差异均有统计学意义（χ21 = 21.172,P < 0.01;χ22 = 27.805,P < 0.01）。恶性黑素瘤皮损MMP2蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常皮肤组织相比,差异均有统计学意义（χ21 = 19.817,P < 0.01;χ22 = 19.866,P < 0.01）。恶性黑素瘤皮损TIMP2蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常皮肤组织相比,差异均有统计学意义（χ21 = 19.200,P < 0.01;χ22 = 15.000,P < 0.01）。结论 乙酰肝素酶、MMP2和TIMP2蛋白在恶性黑素瘤中的表达水平明显高于其在黑素细胞痣和正常皮肤中的表达水平。     

粒细胞集落刺激因子及其受体对人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

目的 探讨粒细胞集落刺激因子受体（G-CSFR）在人黑素细胞中的表达及重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）对人黑素细胞生物学作用的影响。方法 分别用普通的合成培养基与添加一定浓度rhG-CSF的合成培养基培养健康人的黑素细胞,并对黑素细胞的生长情况及形态进行观察。应用流式细胞仪检测人黑素细胞、中性粒细胞及红白血病细胞（HEL 92.1.7）中G-CSFR的表达率。Western印迹、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法分别检测黑素细胞、中性粒细胞及HEL 92.1.7中G-CSFR蛋白及G-CSFR mRNA的表达情况;噻唑蓝比色法（MTT法）检测不同浓度rhG-CSF（200、400、600、800 μg/L）对黑素细胞增殖作用。多巴氧化法检测黑素细胞的酪氨酸酶活性。 结果 黑素细胞G-CSFR的表达率（76.81% ± 10.70%）较HEL92.1.7（2.53% ± 1.54%） 明显升高（P < 0.01）,略低于中性粒细胞（85.76% ± 15.71%,P < 0.05）;黑素细胞可表达G-CSFR蛋白和mRNA,不同浓度rhG-CSF处理组间比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。黑素细胞G-CSFR蛋白和mRNA的表达水平明显高于HEL 92.1.7 （P < 0.01）,低于中性粒细胞（P < 0.05或P < 0.01）。rhG-CSF在200 ～ 800 μg/L时均有促黑素细胞增殖的能力,与空白对照组相比,差异有统计学意义（P < 0.01或P < 0.05）;在200 ～ 600 μg/L范围内呈浓度依赖性（P < 0.01）,600 μg/L时的效应（164.04% ± 13.0%）与20 μg/L的TPA作用（165.62% ± 10.6%）相当（P > 0.05）;200 ～ 800 μg/L的rhG-CSF对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响与空白对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 人黑素细胞可表达G-CSFR;rhG-CSF具有促进黑素细胞增殖的作用,但对酪氨酸酶活性无影响。     

姜黄素对人表皮黑素细胞活性、迁移及c-kit mRNA表达量的影响

目的 探讨姜黄素对人表皮黑素细胞活性、黑素细胞迁移及c-kit mRNA相对表达量的影响。方法 不同浓度（5、10、20、30 μmol/L）姜黄素对人表皮黑素细胞活性影响实验,分为阴性对照组（添加MelM-2完全培养基 + 细胞）、药物对照组（MelM-2完全培养基 + 姜黄素）、空白对照组（仅添加MelM-2完全培养基）及实验组（MelM-2完全培养基 + 姜黄素 + 细胞）,用MTS法分别检测培养24 h、48 h后细胞活性。划痕实验检测黑素细胞迁移的情况,实时荧光定量PCR检测黑素细胞c-kit mRNA相对表达量。实验分为对照组（仅添加MelM-2完全培养基 + 细胞）及3个浓度（5、10、20 μmol/L）实验组。 结果 不同浓度（5、10、20、30 μmol/L）姜黄素培养基培养黑素细胞24 h、48 h时,与对照组相比,30 μmol/L组均可明显抑制黑素细胞的增殖（P < 0.05）,其他浓度差异无统计学意义（均P > 0.05）。划痕实验结果显示,与对照组相比,在培养48 h时,5、10、20 μmol/L姜黄素均能显著抑制黑素细胞迁移（均P < 0.05）。实时荧光定量PCR检测结果显示,与对照组相比,经各浓度（5、10、20 μmol/L）姜黄素作用48 h后,均可明显抑制黑素细胞c-kit mRNA相对表达量（均P < 0.05）。 结论 低浓度的姜黄素（≤ 20 μmol/L）对黑素细胞无明显细胞毒性,30 μmol/L的姜黄素能够促进黑素细胞的凋亡。姜黄素（≤ 20 μmol/L）可抑制黑素细胞的迁移,并下调人表皮黑素细胞c-kit mRNA的相对表达量。     

绿原酸抗人皮肤成纤维细胞衰老的研究

目的 探讨绿原酸在乙二醛诱导的人皮肤成纤维细胞衰老中的保护作用。 方法 使用1 mmol/L乙二醛处理体外培养的人皮肤成纤维细胞,构建细胞衰老模型。用5、10、20、40、80 μmol/L绿原酸和乙二醛共同处理人皮肤成纤维细胞,MTT法检测细胞增殖活性,筛选出绿原酸的有效浓度。1 mmol/L乙二醛分别与有效浓度的绿原酸（10、20、40 μmol/L）共同作用于成纤维细胞,细胞衰老β半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色法及实时荧光定量PCR法检测衰老细胞比例和衰老基因p16INK4a mRNA的表达情况。统计分析采用单因素方差分析和LSD法。 结果 与空白对照组人皮肤成纤维细胞增殖（100% ± 6.90%）相比,乙二醛可明显抑制细胞增殖（55.65% ± 2.00%）,两组差异有统计学意义（P < 0.01）。与乙二醛组细胞增殖相比,除乙二醛 + 5 μmol/L绿原酸组（55.36% ± 2.58%）外,乙二醛 + 10、20、40、80 μmol/L绿原酸组对细胞增殖均有不同程度地保护作用（细胞增殖率分别为60.75% ± 1.32%、67.65% ± 1.90%、75.71% ± 3.25%、75.69% ± 2.38%）,呈剂量依赖性,40 μmol/L绿原酸达高峰,80 μmol/L绿原酸与40 μmol/L组相比,细胞活力的差异无统计学意义（P > 0.05）,因此筛选出绿原酸的有效浓度为10 ~ 40 μmol/L。与空白对照组衰老细胞比例（13.00% ± 2.22%）比较,加入乙二醛后,衰老细胞明显增多（35.65% ± 2.24%）,差异有统计学意义（P < 0.01）。与乙二醛组细胞SA-β-gal染色阳性率相比,分别加入10、20、40 μmol/L绿原酸与乙二醛共培养后,细胞SA-β-gal染色阳性率呈剂量依赖性减少（31.50% ± 2.13%、22.31% ± 3.11%、19.32% ± 3.01%）,差异均有统计学意义（P < 0.05）。与空白对照组衰老基因p16INK4a mRNA的表达比较,乙二醛组明显增高（2-ΔΔCt：1.00 ± 0.06比0.26 ± 0.05,P < 0.01）,分别加入10、20、40 μmol/L绿原酸与乙二醛共培养后表达下降（0.88 ± 0.08、0.73 ± 0.06、0.68 ± 0.04,P < 0.05）。 结论 绿原酸在乙二醛致人皮肤成纤维细胞衰老中具有潜在的保护作用。     

β联蛋白对过氧化氢诱导人皮肤成纤维细胞增殖活性及凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响

目的 观察高表达的β联蛋白对过氧化氢（H2O2）诱导衰老人皮肤成纤维细胞（HSF）增殖活性以及凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响。 方法 实验分3组。HSF细胞分别转染pcDNA3.1-β联蛋白或空载体pcDNA3.1,然后150 μmol/L H2O2处理2 h。噻唑蓝检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,RT-PCR和Western印迹分析凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。 结果 HSF + 空载体组、HSF + 空载体 + H2O2组、HSF + β联蛋白 + H2O2组细胞增殖活性分别为0.792 ± 0.012、0.462 ± 0.012、0.521 ± 0.015,细胞凋亡率分别为（3.407 ± 0.217）%、（24.555 ± 1.793）%、（15.360 ± 0.755）%,各组比较,差异有统计学意义（均P ＜ 0.01）。HSF + 空载体 + H2O2组Bcl-2 mRNA和蛋白水平（与GAPDH mRNA和蛋白的比值分别为0.333 ± 0.003和0.336 ± 0.004）明显低于HSF + 空载体组（分别为0.507 ± 0.013和0.514 ± 0.021）,两组比较,均P ＜ 0.01。HSF + β联蛋白 + H2O2组Bcl-2 mRNA和蛋白水平分别为0.404 ± 0.006和0.411 ± 0.005明显高于HSF + 空载体 + H2O2组,两组比较,均P ＜ 0.01。HSF + 空载体 + H2O2组Bax mRNA和蛋白水平（与GAPDH mRNA和蛋白的比值分别为0.451 ± 0.002和0.460 ± 0.008）明显高于HSF + 空载体组,两组比较,均P ＜ 0.01。HSF + β联蛋白 + H2O2组Bax mRNA和蛋白水平（分别为0.339 ± 0.012和0.346 ± 0.013）明显低于HSF + 空载体 + H2O2组,两组比较,均P ＜ 0.01。 结论 高表达的β联蛋白能够提高衰老人皮肤成纤维细胞增殖活性。     

硒代蛋氨酸对中波紫外线致HaCaT细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究硒代蛋氨酸对中波紫外线（UVB）致HaCaT细胞氧化损伤的影响及其可能机制。方法 培养HaCaT细胞,分为4组：①正常对照组,不做任何处理;②硒代蛋氨酸组：分别加入1、10、50、100、200 nmol/L和1 μmol/L 硒代蛋氨酸预孵育24 h;③UVB组：30、60、90 mJ/cm2 UVB照射;④硒代蛋氨酸 + UVB组：不同浓度硒代蛋氨酸预孵育24 h后进行不同剂量UVB照射。采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）水平。采用析因设计方差分析、单因素方差分析对数据进行统计学分析,多重比较采用LSD法。 结果 析因设计方差分析结果显示,UVB照射对细胞增殖活性有抑制作用（F = 128.04,P < 0.05）,且随UVB强度增加,细胞增殖活性逐渐下降,组间差异有统计学意义（P < 0.05）;硒代蛋氨酸预孵育对细胞增殖活性也有影响（F = 5.95,P < 0.05）,其中10 nmol/L ~ 1 μmol/L硒代蛋氨酸 + UVB组与UVB组比较,细胞增殖活性显著升高（P < 0.05）;UVB照射和硒代蛋氨酸对细胞增殖活性无明显交互作用（F = 1.65,P > 0.05）。30 mJ/cm2 UVB 照射后,UVB组凋亡率（31.9% ± 2.67%）较正常对照组（4.1% ± 0.67%）显著升高（P < 0.05）;而10、50、100、200 nmol/L和1 μmol/L硒代蛋氨酸 + 30 mJ/cm2 UVB组凋亡率［依次为：（21.9 ± 3.72）%、（17.2 ± 1.67）%、（4.6 ± 0.85）%、（7.5 ± 1.86）%、（13.5 ± 1.95）%］均较30 mJ/cm2 UVB组凋亡率显著下降（P < 0.05）。30 mJ/cm2 UVB组与正常对照组相比,SOD和GSH-Px活性降低,MDA含量升高（P < 0.05）;10 nmol/L ~ 1 μmol/L硒代蛋氨酸 + 30 mJ/cm2 UVB组与30 mJ/cm2 UVB组比较,SOD和GSH-Px活性增高,MDA含量下降（P < 0.05）。 结论 硒代蛋氨酸可以减轻UVB诱导HaCaT细胞氧化损伤,其机制与增强抗氧化酶活性、减少氧自由基有关。     

热处理、UVB辐射及两者联合作用对人表皮黑素细胞合成热休克蛋白72的影响

目的 探讨热处理、中波紫外线（UVB）辐射及两者联合作用下,体外培养的人表皮黑素细胞热休克蛋白72（heat shock protein 72,HSP72）的变化。 方法 热处理（42 ℃,1 h/d,连续3 d）、UVB辐射（50 mJ/cm2,连续3 d）及两者联合（首先42 ℃,加热1 h,然后 50 mJ/cm2 UVB照射,连续3 d）处理正常人表皮（包皮）黑素细胞2 h、6 h后收集细胞,用实时荧光定量PCR技术和 Western 印迹技术分别检测不同组别间HSP72 mRNA及蛋白表达水平的差异。结果 热处理组（6.584 ± 0.871）及联合作用组（7.269 ± 0.454）与对照组（0.975 ± 0.089）相比,mRNA 表达水平明显增加（P < 0.001）;UVB辐射组（0.832 ± 0.084）与对照组相比,mRNA表达水平差异无统计学意义（P > 0.05）。Western 印迹结果显示,热处理组（2.022 ± 0.058）及联合作用组（2.080 ± 0.045）HSP72蛋白表达水平明显高于对照组（0.532 ± 0.033,P < 0.001）;UVB组（0.546 ± 0.021）与对照组相比,表达水平差异无统计学意义（P > 0.05）。析因设计方差分析结果显示,热处理与UVB辐射对HSP72 mRNA和蛋白表达均无交互作用（F = 2.106,1.399,P < 0.05）。结论 热处理引起HSP72表达显著增多,可能与热处理引起黑素细胞功能增强及UVB辐射后的损伤保护作用有关。