西安地区人芽囊原虫感染状况调查

目的了解西安市人芽囊原虫的感染状况。方法采集西安市社区居民、中学生、动物饲养人员、腹泻病人共781名受检者粪便标本,采用生理盐水直接涂片法及碘液染色法,典型形态使用数码显微镜摄像。结果健康人群和腹泻人群人芽囊原虫的感染率分别为1.99%(11/554)和7.05%(16/227),差异具有统计学意义(χ2=12.367,P<0.05);社区居民、中学生、动物饲养人员的感染率分别为2.20%(6/273)、1.20%(3/250)、6.45%(2/31),差异无统计学意义(χ2=4.033,P>0.05);粘液脓血便人群的感染率为12.16%(9/74),其他腹泻人群(水样便、糊便及脂肪泻)为7%(7/153),两者差异有统计学意义(χ2=4.382,P<0.05)。各年龄组间感染率差异有统计学意义(χ2=18.632,P<0.05)。观察到空泡型、颗粒型和包囊型虫体,可见出芽生殖、二分裂生殖和复分裂繁殖三种繁殖方式。结论人芽囊原虫在不同年龄、不同健康状况(健康和腹泻)及不同腹泻性状人群中的分布存在差异。空泡型、颗粒型多见,多以二分裂、出芽生殖方式繁殖。     

人芽囊原虫体外培养研究进展

人芽囊原虫（Blastocystis hominis）呈世界性分布,是一种常见的人和动物肠道内寄生原虫,与多种胃肠道疾病（如腹痛、腹泻、肠黏膜损伤）密切相关。体外培养人芽囊原虫对于临床诊断人芽囊原虫感染、建立人芽囊原虫动物模型、进行基因型和致病机制等研究具有重要意义;选择高效经济的培养基为人芽囊原虫的生活史、形态分类、感染免疫等后续研究奠定基础。培养基的状态、种类、血清浓度和培养条件等是影响人芽囊原虫体外培养的重要因素。本综述总结了人芽囊原虫体外培养的研究进展及不同物理状态下适合人芽囊原虫快速生长繁殖的培养条件,阐述了不同培养基之间的差异及影响人芽囊原虫体外培养的因素,旨在为临床和科研工作者选择合适的培养基及培养条件提供参考。     

人芽囊原虫滋养体和包囊的形态学观察

用普通光学显微镜和荧光显微镜对人芽囊原虫的三株滋养体和二株包囊进行了形状、大小和结构的观察。滋养体为生长在ＬＡＳ双相培养基内４～５天的培养物;包囊为带虫者粪便经蒸馏水反复３次洗涤的沉淀物,均作涂片,分别以不染色、碘染色和１：１０＾４吖啶橙染色,镜下识别和鉴定,滋养体以空泡型（包括二分裂状态的）占多数,其次为变形型,颗粒型及其它类型少见,颗粒型为多分裂繁殖体,人芽囊原虫包囊形状较单一,都是圆形或卵圆     

人芽囊原虫的体外培养

目的：建立人芽囊原虫（Blastocystis hominis,B.h)的连续培养方法,并研究影响其生长的因素,为进一步研究其生活史、致病机理奠定基础。方法：比较不同血清种类、血清量、温度、pH值等条件下虫体生长繁殖情况。结果：B.h在Locke-egg-serum(LES)培养基中生长良好,其最适培养条件为：LES培养基中加含20%小牛血清的Locke液,青霉素、链霉素和两性霉素B,37℃培养,pH6.8-7.0,第5、9天虫体繁殖达高峰;pH7.2-7.8时,第3、6、9天虫体繁殖达高峰。结论：B.h在LES培养基中生长良好,的合适的温度、血清、pH值等条件下,第3、6天或第5天为转种时间,可达到长期培养的目的。     

人芽囊原虫粪便检查与形态观察

目的了解人芽囊原虫的粪便检查方法和光镜下的形态特点.方法对就诊病人新鲜粪便,用生理盐水涂片、碘染色和吉氏染色三种方法制作玻片标本,光镜下观察人芽囊原虫的形态特征. 结果1495例就诊病人,查出162例人芽囊原虫感染,感染率为10.84%;三种方法可查见人芽囊原虫滋养体期的空泡型和颗粒型,检出率相近,生理盐水涂片偶见阿米巴样型,碘液染色可见包囊期.结论广西人芽囊原虫感染较高,生理盐水涂片和碘染色方法适用于人芽囊原虫的粪便检查,本观察图片可为临床检验提供参考.     

人芽囊原虫的研究

常见于人和高等灵长类粪便中的人芽囊原虫[Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｓｈｏｍｉｎｉｓ (Ｂｒｕｍｐｔ 1912 ) ],长期以来被误认为是一种无害的人酵母菌。究其原因 ,在于当时人们并不了解它存在着变形型 (似阿米巴型 ) [1] ,只知道其空泡型在湿涂片中有一个圆球形、闪亮不透明、不产生运动的极似酵母菌的外貌 ;同时其二分裂的两个子细胞往往不等大而被解释为出芽生殖之故。对其致病性的认识也因病例不足 ,很少报道。现在知道 ,人芽囊原虫是一种人类常见的肠道致病原虫。1　分类学地位随着对人芽囊原虫 (Ｂｈ)形态结构和生理的深入研究 ,它的原…     

人芽囊原虫致小儿腹泻病的研究

对确诊为腹泻病患儿２１４例进行粪便中人芽囊原虫的检测，阳性患儿３１例，总检出率１４％。对检出虫体进行体外培养，在光镜、电镜下观察其生活史，培养后虫体为空泡和阿米巴２型，并以二分裂繁殖。证实该虫体是导致本地区婴幼儿感染性腹泻肠道内病原之一。     

人芽囊原虫致小儿腹泻病的研究

对确诊对腹泻病患儿２１４例进行粪便中人芽囊原虫的检测，阳性患儿３１例，总检出率１４％，对检出虫体进行体外培养，在光镜，电镜下观察其生活只，培养后虫体为空泡和阿米巴２型，并以二分裂繁殖，证实该虫体是导致本地区婴幼儿感染性腹泻肠道内病原之一。     

人芽囊原虫在RPMI1640培养基中培养条件的优化

目的优化人芽囊原虫(Blastocystishominis)在RPMI1640培养基中的培养条件。方法将B.hominis接种至RPMI1640培养基中,观察酸碱度、接种量、血清种类、浓度、温度、空气中氧与粪便标本的选择对B.hominis生长的影响。结果在RPMI1640培养基中,pH7.5、接种量200000细胞/管、20%小牛血清,37℃,加入青霉素、链霉素为最佳培养条件。结论在RPMI1640中,接种以B.hominis阳性(颗粒型为主)的血粘液便,加入20%小牛血清,青霉素、链霉素,在pH7.5于37℃条件下厌氧培养,每6d转种一次,可达到长期培养B.hominis的目的。     

1354例门诊腹泻病人人芽囊原虫感染情况调查

目的了解消化门诊腹泻就诊者中人芽囊原虫感染情况及其特征。方法询问腹泻患者的病史、卫生习惯及生活环境等状况。收集患者当日新鲜大便，用生理盐水直接涂片和碘液染色镜检初筛后，将疑似阳性的标本制片及三色染色法染色，在油镜下观察形态并测量大小。结果共查粪便l354份，人芽囊原虫检出率为18．54％，男女腹泻者检出率分别为18．12％和19．18％，差异无显著性（P〉0、05）。在人芽囊原虫混合其他寄生虫感染中，以肝吸虫占绝大多数（73．08％）。粪检所见的原虫以空泡型为主，感染高峰在夏秋季节，高发年龄是2l～50岁。结论广西地区人芽囊原虫是引起腹泻的常见肠道寄生虫，其致病作用不容忽视。感染后可引发腹痛、腹泻等消化道症状。人芽囊原虫混合肝吸虫感染为广西地区人芽囊原虫感染的一个显著特点。     

两种不同培养基体外培养阴道毛滴虫的增殖效果比较

目的 筛选阴道毛滴虫体外生长的适宜培养基.方法 分别配制RPMI-1640和半胱氨酸-肝-胨-麦芽糖(肝浸汤)培养基培养基,并接种阴道毛滴虫,接种密度为12.5×104个/mL,pH值为5.8,置37 ℃恒温箱培养.血球计数板计数阴道毛滴虫增殖密度并计算增殖倍数,光镜观察虫体形态.结果 阴道毛滴虫在pH 5.8的环境中...     

Enrichment of breast cancer stem cells using a keratinocyte serum-free medium

Background  Keratinocyte serum-free medium (K-SFM) is a defined medium used to support the growth of primary keratinocytes and embryonic stem cell. The aim of this research was to optimize enrichment of breast cancer stem cells (CSCs) using K-SFM.

Methods  A K-SFM was used to enrich CSCs from two breast cancer cell lines and a primary culture of breast cancer. RPMI-1640 supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) was used as a control. CSCs were identified with flow cytometry using CD44⁺/CD24^– as molecular markers. The expression of a variety of CSC markers (Oct-4, ABCG2, Nanog, N-cadherin, and E-cadherin) was analyzed with real-time PCR.

Results  Much higher percentage of CSCs was achieved with K-SFM: 17.3% for MCF-7 cells, 17.4% for SKBR-3, and 20.0% for primary breast cancer culture. Less than 1% CSC was achieved using RPMI-1640 supplemented with 10% FCS. In comparison to the CSCs obtained with RPMI-1640, CSCs in the K-SFM expressed higher levels of Oct-4, ABCG2, Nanog and N-cadherin, and lower level of E-cadherin.

Conclusion  K-SFM is an optimal culture medium to maintain and to enrich breast CSCs.

     

不同培养基对人脐静脉内皮细胞体外培养效果的影响

目的研究不同培养基对人脐静脉内皮细胞体外培养生长的影响,探讨内皮细胞的最佳体外扩增培养条件。方法取健康产妇分娩后脐带,用胶原酶Ⅰ消化后得脐静脉内皮细胞,进行原代培养,并用免疫荧光染色的方法对细胞进行鉴定,传代培养时则分别采用RPMI-1640培养基和EGM-2培养基,倒置显微镜观察两种培养条件下细胞的生长状态,同时利用流式细胞仪检测其生长周期,对比培养效果。结果 EGM-2组内皮细胞生长良好,2d后贴壁生长的细胞可达90%。EGM-2组S期细胞比例为(29.07±1.48)%,RPMI-1640培养基组S期细胞为(17.58±3.49)%,二者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 EGM-2培养基更适合人脐静脉内皮细胞的体外传代扩增培养。     

温阳利水方水提物缓解脾肾阳虚特发性膜性肾病患者血清致小鼠足细胞损伤的机制研究

目的　探索温阳利水方水提物对脾肾阳虚特发性膜性肾病（IMN）患者血清致小鼠足细胞损伤的保护作用机制。方法　2015年2—3月,选取在广州中医药大学第一附属医院肾病科住院,首次肾穿刺活检确诊为IMN、血清抗M型磷脂酶A2受体（anti-PLA2R）阳性、脾肾阳虚的患者28例,采集清晨空腹静脉血。同时间段,采集健康志愿者30例清晨空腹静脉血。CCK-8试剂盒检测不同浓度（5%、7.5%、10%）脾肾阳虚IMN患者血清对体外培养小鼠永生化足细胞增殖能力的影响,构建脾肾阳虚IMN血清损伤足细胞体外模型。根据CCK-8检测结果,设置正常对照组、模型组、2 mg/ml温阳利水方水提物组、4 mg/ml温阳利水方水提物组和8 mg/ml温阳利水方水提物组共5组,依次予10%健康志愿者血清+RPMI-1640培养基、10%脾肾阳虚IMN患者血清+RPMI-1640培养基、10%脾肾阳虚IMN患者血清+RPMI-1640培养基+2 mg/ml温阳利水方水提物、10%脾肾阳虚IMN患者血清+RPMI-1640培养基+4 mg/ml温阳利水方水提物、10%脾肾阳虚IMN患者血清+RPMI-1640培养基+8 mg/ml温阳利水方水提物,分别孵育24 h和48 h。通过细胞免疫荧光观察足细胞骨架蛋白F-actin、qRT-PCR检测Caspase-3 mRNA。结果　RPMI-1640培养基组和RPMI-1640培养基加温阳利水方水提物组OD值比较,差异无统计学意义（t=1.937,P>0.05）。20、40、60、80、100 mg/ml温阳利水方水提物组OD值低于0 mg/ml温阳利水方水提物组（P<0.05）。10% IMN血清组OD值低于对照组、5% IMN血清组、7.5% IMN血清组（P<0.05）。10% IMN患者血清,可破坏足细胞骨架蛋白结构,F-actin表达减少,与细胞轴方向不一致,部分断裂,排列紊乱,细胞回缩。孵育24 h和48 h后,与模型组相比,温阳利水方水提物组F-actin表达增多,纤维断裂和排列紊乱情况均有所改善。孵育24 h,模型组Caspase-3 mRNA高于正常对照组（P<0.05）。孵育48 h,模型组Caspase-3 mRNA高于正常对照组、2 mg/ml温阳利水方水提物组、8 mg/ml温阳利水方水提物组（P<0.05）;孵育48 h,8 mg/ml温阳利水方水提物组Caspase-3 mRNA低于2、4 mg/ml温阳利水方水提物组（P<0.05）。结论　温阳利水方水提物可改善脾肾阳虚IMN患者血清致小鼠足细胞骨架蛋白F-actin重排,可能通过抑制Caspase-3 mRNA的表达,发挥抗凋亡效应。     

益肝康药物血清对大鼠肝星状细胞胞浆游离钙效应的抑制作用

目的研究益肝康药物血清是否具有抑制肝星状细胞(HSCs)胞浆游离钙([Ca2 ]i)增高的作用。方法将32只健康雄性SD大鼠按随机数字表分为4组:肝纤维化模型益肝康组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40?L4溶液9周,然后灌服益肝康6d;肝纤维化模型对照组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40?L4溶液9周,然后灌服0·9%氯化钠溶液6d;正常大鼠益肝康组(8只)皮下注射等量精制橄榄油9周,然后灌服益肝康6d;正常对照组(8只)皮下注射等量精制橄榄油9周,然后灌服0·9%氯化钠溶液6d。结束后经下腔静脉取血并分离血清。用盲法,采用上述10%血清培养HSCs24h并负载好Fluo-3/AM后,使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测HSCs[Ca2 ]i。结果(1)经正常大鼠益肝康组及肝纤维化模型益肝康组大鼠血清预处理的HSCs,其[Ca2 ]i荧光强度相对值均明显低于肝纤维化模型对照组(P<0·05);且两者与正常对照组间差别均有显著性意义(P<0·05)。结论益肝康能抑制肝星状细胞[Ca2 ]i的升高,这可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一。     

RPMI 1640、漏出液培养人外周血淋巴细胞的比较研究

目的:筛选一种适宜人淋巴细胞生长的天然培养基。方法:在冰冻漏出液中添加不同浓度的小牛血清为实验组的培养液,以培养基RPMI 1640作为对照组,体外常规培养25例人外周血淋巴细胞。结果:与对照组比较,实验组的淋巴细胞转化率、分裂相质量、有丝分裂指数等指标无显著差异;不含血清的漏出液与含血清的漏出液比较,淋巴细胞转化率、分裂相质量、有丝分裂指数等指标无显著差异。结论:不添加血清的漏出液更适宜淋巴细胞生长。     

三种药物对体外人芽囊原虫的作用效果观察

目的了解甲硝唑、替硝唑和阿奇霉素对人芽囊原虫的作用效果。方法从门诊病人阳性粪便中分离出人芽囊原虫，接种到96孔无菌培养板中，实验组加入不同药物浓度的甲硝唑、替硝唑和阿奇霉素，对照组加入无菌生理盐水，应用细胞增殖实验方法检测三种药物对人芽囊原虫的抑制和杀灭作用。结果药物作用72h后，甲硝唑、替硝唑和阿奇霉素药物浓度为5μg／ml时相对抑制率分别为5．45％、16．13％和11．23％，光镜下原虫形态发生了改变。结论甲硝唑、替硝唑和阿奇霉素对体外人芽囊原虫的生长具有抑制和杀灭作用，替硝唑的作用效果最好     

猪蛔虫幼虫体外培养的初步研究

目的研究适合猪蛔虫幼虫体外培养的最佳条件。方法将猪蛔虫幼虫在不同培养液（KW-2、RPMI-1640、DMEM（含酚红）、DMEM（不含酚红））中进行培养,并观察其存活、生长以及发育情况。结果幼虫在KW-2培养液中生长情况最好,虫体活力很强,3d后成活率最高达87.67%,其次是在RPMI-1640培养液中。在培养液DMEM（含酚红）、DMEM（不含酚红）中生长情况较差,存活不超过7d。其中KW-2培养液中在4～5d出现虫体头端有松动的鞘出现,在RPMI-1640培养液中7～8d出现鞘松动,DMEM（含酚红）、DMEM（不含酚红）中未发现有脱鞘现象出现。结论猪蛔虫的体外培养的最佳条件还需要进一步探索,从而为研究寄生线虫的发育生物学以及特异性发育的功能基因组学奠定基础。     

RPMI1640培养液在阴道滴虫培养中的应用

目的：评价１６４０培养液在阴道滴虫体外培养中的应用效果。方法；在ＲＰＭＩ１６４０培养液中加入其它在份，配制成新的阴道滴虫培养基。观察其对阴道滴虫的培养效果，并与ＣＰＬＭ培养基作比较。结果：滴虫在两种培养基中的增殖倍数有显著性差异。在临床标本中分离方面与ＣＰＬＭ培养基无明显差异，但在保种时间上比ＣＰＬＭ培养基较长。结论：ＲＰＭＩ１６４０培养液应用于阴道滴虫培养中效果良好。     

肾上腺髓质素对自发性高血压大鼠胰岛分泌功能影响的体外实验

目的　探讨肾上腺髓质素 (AM)对自发性高血压大鼠 (SHR)和 Wistar- Kyoto(WKY)鼠胰岛分泌功能的影响。方法　分别在含 2 .8mm ol/ L 及 11.1mm ol/ L 葡萄糖的 RPMI16 4 0培养基中加不同浓度 AM(0、10 - 8、10 - 7和 10 - 6 m ol/ L )培养 SHR和 WKY大鼠胰岛 ,用放射免疫分析 (RIA )法测定两次培养液的胰岛素及胰升糖素含量。结果　加入不同浓度 AM培养 WKY鼠胰岛 2 4 h后 ,培养液中胰岛素含量呈剂量依赖性降低 ;高浓度 AM(10 - 6 mol/ L )使 SHR和胰岛培养液中胰岛素含量明显降低 (P<0 .0 5 )。SHR、WKY鼠的各组培养液中胰升糖素含量无明显差异 ,SHR与 WKY鼠相比亦无差异。结论　 AM对 WKY鼠的胰岛β细胞的分泌功能具有剂量依赖性抑制作用 ,高浓度 AM对 SHR胰岛β细胞的分泌功能具有抑制作用。 AM对胰岛α细胞分泌功能无影响