西红花苷对低密度脂蛋白所致鹌鹑内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨西红花苷对低密度脂蛋白(LDL)所致内皮细胞损伤的保护作用。方法在体外培养牛主动脉内皮细胞中,加入不同剂量的西红花苷培养12 h后,再加入50μg.ml-1的LDL继续培养24 h,测定培养液中NO含量,测定细胞中一氧化氮合酶(NOS)的活性。在鹌鹑饮食性动脉粥样硬化模型上,观察西红花苷连续9周预防性给药对血清LDL和血清NO的影响。结果西红花苷可浓度依赖性地提高细胞内NOS的活性(P<0.01),使细胞合成分泌的NO含量升高(P<0.01)。西红花苷能显著降低血清LDL水平,使血清NO含量提高。结论西红花苷对LDL所致内皮细胞损伤有保护作用。     

脂联素对人脐静脉内皮细胞保护作用的实验研究

目的体外培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）,加入低密度脂蛋白（LDL）建立细胞损伤模型,观察脂联素（APN）对模型细胞结构和功能的影响。方法观察对照组、LDL损伤组、APN预处理组和APN干预组内皮细胞（EC）的形态改变,测定细胞活性,测定细胞培养上清中一氧化氮（NO）、乳酸脱氢酶（LDH）和6-酮前列腺（6-keto-PGF1）的含量变化,测定细胞中一氧化氮合酶（NOS）的含量。结果与正常细胞对照组比较,LDL损伤组的细胞形态明显改变,细胞存活率明显降低,LDH释放明显增高,NO、NOS和6-keto-PGF1合成明显降低（P〈0.01）;而APN预处理组和干预组能明显降低LDH释放,促进NO、NOS和6-keto-PGF1合成（P〈0.01）。结论 APN对EC有一定的保护作用,能拮抗LDL对EC的损伤。     

高甘油三酯血清对人脐静脉内皮细胞的损伤作用

目的:研究单纯高甘油三酯血清(HTGBS)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的损伤作用。方法:体外培养HUVEC,观察不同浓度的HTGBS对血管内皮细胞活力(MTT法测吸光度A值)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活性,丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量的影响。运用WesternBlot和酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测各组细胞中血红素氧化酶-1(HO-1)蛋白的表达和细胞培养上清液中碳氧血红蛋白(COHb)的含量。结果:5%浓度的HTGBS对血管内皮细胞有明显的损伤作用,显著降低细胞活力、NO含量和SOD、NOS活性(P<0.01),显著升高血管内皮细胞中LDH、iNOS活性和MDA含量(P<0.01),并且5%HTGBS显著诱导细胞HO-1蛋白的表达并增加细胞培养液中CO的生成量(P<0.01)。结论:HTGBS体外诱导HUVEC氧化损伤,使细胞活力和抗氧化能力显著降低,增加其通透性及脂质过氧化程度,影响内皮细胞分泌功能并能诱导HO-1蛋白表达代偿性升高。     

阿司匹林对人主动脉血管内皮细胞炎性损伤的保护作用

目的：研究阿司匹林（aspirin,Asp）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells,HAECs）损伤的保护作用,并进一步阐明其对一氧化氮合酶（NOS）及血管内皮生长因子（VEGF）及其相关受体信号的调控。方法：LPS建立HAECs损伤模型。苏木精-伊红（HE）染色观察细胞形态;MTT法、划痕实验分析HAECs损伤修复能力;ELISA测定一氧化氮（NO）含量;Western blot检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、VEGF和血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）蛋白表达。结果：给药12 h后Asp明显改善LPS（5 mg·L^-1）导致的细胞损伤、提高修复能力（P<0.05）,并上调NO分泌量及VEGF、VEGFR-2的蛋白表达（P<0.01）;升高eNOS蛋白的表达（P<0.01）。而给药24 h后阿司匹林显著下调LPS导致的NO分泌量及iNOS、VEGF、VEGFR-2的蛋白表达升高,同时升高eNOS蛋白的表达（P<0.01）。结论：阿司匹林对LPS诱导的血管内皮细胞炎性损伤的保护作用与调节NOS/NO和VEGF及其受体的动态平衡密切相关。     

不同配比人参总皂苷、丹皮总苷、丹皮酚含药血清对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的改善作用研究

目的:研究不同配比的人参总皂苷(TGG)、丹皮总苷(TGM)、丹皮酚含药血清对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的改善作用,筛选最优配比并探讨其作用机制。方法:将大鼠随机分为空白组(蒸馏水)、TGG组(TGG,2.025 g/kg)、TGM组(TGM,4.05 g/kg)、丹皮酚组(丹皮酚,1.08 g/kg),每组12只,每天灌胃相应药物2次,连续7 d,末次给药后1 h,腹主动脉取血,制备含药血清。以HUVEC细胞存活率为评价指标,人参总皂苷、丹皮总苷、丹皮酚含药血清不同配比为考察因素设计L_9(3~4)正交试验,优选3种含药血清的最优配比;将HUVEC细胞分为空白组、模型组、TGG组、TGM组、丹皮酚组、最优配比组,除空白组细胞加入相应培养基外,其余各组均采用1.2 mmol/L H_2O_2诱导HUVEC损伤,然后TGG组(含药血清体积分数为0.000 5%)、TGM组(含药血清体积分数为0.000 5%)、丹皮酚组(含药血清体积分数为1%)、最优配比组再加入相应药物含药血清进行干预。采用微板法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)的水平。结果:含药血清最优配比为TGG 0.000 5%、TGM 0.000 5%、丹皮酚1%。与空白组比较,模型组细胞LDH、ET-1水平更高(P<0.01),NO水平更低(P<0.05);与模型组比较,TGG、TGM、最优配比组细胞NO水平更高(P<0.01),LDH、ET-1水平更低(P<0.05或P<0.01);与TGG组、TGM组、丹皮酚组比较,最优配比组细胞LDH水平更低(P<0.05或P<0.01),NO水平更高(P<0.05或P<0.01)。结论:TGG、TGM、丹皮酚联合应用对H_2O_2诱导的HUVEC损伤具有良好的改善作用,其作用机制与降低LDH、ET-1水平和升高NO水平有关。     

丹皮酚对麻醉犬冠脉结扎致心肌梗死的保护作用

目的观察丹皮酚对冠脉结扎致实验性心肌梗死犬的影响。方法结扎犬左冠状动脉前降支造成急性心肌梗死模型,观察丹皮酚对心肌梗死面积、梗死程度、磷酸肌酸激酶同工酶及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的影响。结果丹皮酚能够明显减小心肌梗死面积、降低心肌梗死程度、减少心肌酶的释放,同时可以提高血清中SOD的活力,增强清除自由基能力,降低血清中MDA的含量,减轻脂质过氧化损伤的程度。结论丹皮酚具有明显的抗心肌缺血作用,其作用机制可能是通过稳定细胞膜,抑制缺血心肌的膜损伤,增加自由基清除,降低脂质过氧化等发挥作用。     

丹皮酚片剂中丹皮酚含量的测定

目的建立丹皮酚片剂中丹皮酚含量的测定方法。方法用高效液相色谱法测定丹皮酚片剂中丹皮酚的含量。结果5次测定丹皮酚片A,其含量分别为39.87mg、39.36mg、39.33mg、39.86mg、39.86mg,平均含量为39.66mg;5次测定丹皮酚片B,其含量分别为39.98mg、39.86mg、39.55mg、39.86mg、39.32mg,平均含量为39.71mg;与丹皮酚片剂的标示含量40.00mg基本吻合。结论高效液相色谱法简便、快速、灵敏、准确,重现性好。     

丹皮酚磺酸钠制备的研究

目的:建立一种合成丹皮酚磺酸钠的新方法.方法:以间苯二酚为原料,经过缩合、甲基化、磺化等反应制备丹皮酚磺酸钠.结果:结果:采用ZnCl2为缩合剂,在碱性水溶液中甲基化,总收得率约为40%.结论:本合成方法简单可行,收得率高,成本低,值得推广.     

丹皮酚对急性微循环障碍大鼠血管内皮细胞分泌的ET-1和NO的调控

目的研究丹皮酚对血管内皮的保护作用及机制。方法主要通过体内实验研究,用肾上腺素和冰水复制大鼠的血管内皮损伤模型,用CD34标记血管内皮细胞,观察丹皮酚对血管内皮形态学的影响,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)。结果肾上腺素和冰水造成大鼠血管内皮损伤,主要表现为管腔扩张,血栓形成,内皮细胞收缩,脱落,而丹皮酚给予组能够明显抑制血栓形成,防止内皮细胞脱落。造模后血清中ET-1分泌增加,而NO分泌明显减少。丹皮酚能够抑制ET-1的分泌而促进NO的分泌。结论丹皮酚具有血管内皮保护作用,可以预防物理造成的血管内皮的损伤,主要通过调节ET-1和NO的平衡。     

齐墩果酸对氧化损伤人脐静脉内皮细胞线粒体中一氧化氮合酶的调控作用

目的:研究齐墩果酸对氧化损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)线粒体中一氧化氮合酶(mtNOS)的调控作用。方法:将对数生长期HUVECs细胞分为正常组、模型组和齐墩果酸低、中、高浓度(5、20、35μmol/L)组,药物作用24h后,除正常组外均加入含100μg/ml氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的培养液复制氧化损伤,CCK-8法检测细胞存活率。提取细胞线粒体,酶化学法检测mtNOS的活性和线粒体一氧化氮(mtNO)的含量,荧光酶标仪法检测活性氧(ROS)荧光强度,Westernblot法检测细胞色素C(Cyto-C)的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率降低,mtNOS活性、mtNO含量、ROS荧光强度和Cyto-C蛋白表达均增加,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,齐墩果酸低、中、高浓度组细胞存活率增加,mtNOS活性、mtNO含量、ROS荧光强度和Cyto-C蛋白表达均降低,差异具有统计学意义(P<0.05),且与浓度呈正相关。结论:齐墩果酸能降低HUVECs细胞mtNOS活性,减少mtNO和Cyto-C的产生,其机制可能与下调ROS表达有关。     

阿托伐他汀对缺氧致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的观察阿托伐他汀对缺氧导致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法体外培养HUVECs,建立缺氧模型,采用MTT法测定细胞增殖,透射电子显微镜技术观察细胞的微观结构;检测细胞培养液中LDH、NO、ET-1、Ang-Ⅱ及6-keto-PGF1α水平。结果阿托伐他汀能够促进缺氧HUVECs的增殖,稳定细胞的微观结构,显著降低细胞内LDH的释放及ET-1的分泌(P<0.01),提高NO、PGI2的分泌(P<0.01)。结论阿托伐他汀对缺氧导致HUVECs损伤具有明显的保护作用。     

红霉素对人脐静脉内皮细胞一氧化氮及钙离子水平的影响

目的　探讨红霉素对人脐静脉内皮细胞一氧化氮通路及钙离子的影响。方法　应用一氧化氮及一氧化氮合酶试剂盒测定内皮细胞NO的含量及NOS的活性 ,采用Fura 2负载荧光技术检测胞内游离钙水平。结果　红霉素能明显增加内皮细胞NO的产生和胞内游离钙水平 ,并能明显增强NOS的活性 ,具有浓度和时间效应。结论　红霉素对人脐静脉内皮细胞一氧化氮通路的影响可能通过胞内游离钙而起作用。     

有机磷诱导HUVEC-12损伤的实验研究

目的观察有机磷农药敌百虫对人脐静脉内皮细胞（HUVEC-12）损伤的时相特征,探讨敌百虫诱导内皮细胞损伤的作用机制。方法将HUVEC-12与含不同浓度敌百虫的DMEM培养基孵24h后,MTT法检测细胞的活性;以IC50浓度的敌百虫处理细胞一定时间后（0、4、6、8、12、24、48h）,观察敌百虫诱导内皮细胞损伤的时相特征;硫代巴比妥法检测细胞上清液中丙二醛（MDA）浓度。结果敌百虫呈时间依赖性地促进内皮细胞凋亡及细胞上清液MDA产生。结论敌百虫刺激HUVEC-12氧化应激,致细胞损伤。     

淫羊藿苷对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

探讨淫羊藿苷对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导损伤人脐静脉内皮细胞株（ECV-304）的影响。培养内皮细胞，淫羊藿苷作用24h后，采用AngII诱导制备内皮细胞损伤模型，测定细胞存活率（MTT法）、培养液中乳酸脱氢酶（LDH）释放量、NO值、清除超氧阴离子自由基（O2^-）和羟自由基（·OH）的能力，测定胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性、T-NOS、iNOS以及eNOS的含量。与AngⅡ单独处理组相比，淫羊藿苷能明显提高细胞存活率，提高SOD、T-NOS和cNOS活力，提高NO含量，增强清除O2^-和·OH的能力，降低LDH和iNOS的量。结果表明淫羊藿苷对AngⅡ损伤的内皮细胞有一定的保护作用。     

芍药内酯苷对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究芍药内酯苷对高糖损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的保护作用及机制.方法 采用33mmol·L-1的高糖培养基建立HUVECs损伤模型,并在造模前给予不同浓度的芍药内酯苷进行预保护,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,采用试剂盒检测细胞中内源性一氧化氮合酶（eNOS）和半胱天冬酶-3（Caspase-3）活性以及培养液中一氧化氮（NO）和乳酸脱氢酶（LDH）含量.结果 芍药内酯苷能够剂量依赖性增强细胞活力,降低Caspase-3活性和细胞凋亡率（P＜0.05）,并能增强eNOS的活性和NO的释放量（P＜0.05）.结论 芍药内酯苷对高糖诱导的HUVEs损伤具有保护作用,其机制可能与促进eNOS活性提高、NO释放量增加和抑制Caspase-3活性有关.     

Mechanisms underlying nebivolol-induced endothelial nitric oxide synthase activation in human umbilical vein endothelial cells

1. Nebivolol (NEB) has been shown to be a selective blocker of beta1-adrenoceptors with additional vasodilating properties that are mediated, at least in part, by an endothelial-dependent liberation of nitric oxide (NO). In the present study, we investigated the underlying mechanisms of NEB-induced vasodilation. 2. Immunohistochemical staining of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) was performed in the absence and presence of NEB in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). In addition, we measured the release of nitric oxide (NO) using diaminofluorescein. Metoprolol (MET) was used for comparison. 3. Nebivolol, but not MET (each at 10 micromol/L), caused a time-dependent increase in NO release from HUVEC, as demonstrated by an increase in DAF fluorescence at 0 versus 10 min (+234 +/- 7 and 55 +/- 22% basal, respectively). Blockade of beta3-adrenoceptors by SR 59230A (1 micromol/L) partially reduced the NEB-induced increase in DAF fluorescence. Complete inhibition of NEB-induced NO liberation was achieved by the simultaneous blockade of beta3-adrenoceptors and oestrogen receptors (with 1 micromol/L ICI 182,780). 4. Application of NEB significantly increased eNOS translocation and serine 1177 phosphorylation of eNOS. However, NEB did not alter eNOS-phosphorylation at threonine 495 and at serine 114. 5. In conclusion, the endothelium-dependent NO liberation induced by NEB is due to stimulation of beta3-adrenoceptors and oestrogen receptors and coincides with eNOS translocation and a phosphorylation at eNOS-serine 1177. These characteristics of NEB may be beneficial not only when treating patients suffering from cardiovascular disease, but may also prevent further deterioration of endothelial dysfunction.     

脉络宁注射液对人血管内皮细胞缺氧损伤的保护作用

目的:研究脉络宁注射液对人脐静脉血管内皮细胞缺氧损伤的保护作用及其机制。方法:常规进行人血管内皮细胞(HUVECs)培养,将细胞随机分为正常对照组、缺氧组和脉络宁20 mg.L-1组。采用CCK-8法检测细胞存活率;Hochest33258荧光染料检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测各组细胞中血管内皮生长因子(VEGF),血管生成素-2(Ang-2)mRNA表达水平。结果:脉络宁注射液可显著提高缺氧损伤细胞的存活率(P<0.05);与正常对照组比较,缺氧组细胞内VEGF和Ang-2 mRNA表达水平明显增高。与缺氧组比较,脉络宁组VEGF和Ang-2的表达进一步增强,各组间比较均有差异(P<0.05)。结论:脉络宁注射液可减轻血管内皮细胞缺氧损伤,上调缺氧血管内皮细胞中VEGF和Ang-2的表达,对血管内皮细胞缺氧损伤有一定的保护作用。     

蓬子菜总黄酮对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:探讨蓬子菜总黄酮对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HU-VECs)的保护及损伤修复的作用。方法:采用台盼蓝染色法,观察不同剂量蓬子菜总黄酮(12.5～400μg.mL-1)对HUVECs生长的影响;建立过氧化氢(H2O2)诱导HUVECs氧化损伤模型,采用MTT比色法检测细胞增殖,酶联免疫分析方法检测内皮素-1(endothelin,ET-1)和降钙素基因相关肽(calcitonin generelated peptide,CGRP)的分泌水平。AO/EB双染色法观察HUVECs的凋亡。结果:与模型组比较,蓬子菜总黄酮能减轻H2O2对HUVECs增殖抑制作用,促进CGRP的分泌,降低ET-1的分泌水平,抑制HUVECs的凋亡。结论:蓬子菜总黄酮对氧化损伤的HUVECs具有保护及修复作用,其机制与调节ET-1和CGRP的分泌有关。     

血管紧张素-(1-7)对血管紧张素II致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究

目的 :观察血管紧张素 (1 7) [Ang (1 7) ]对血管紧张素II(AngII)致人脐静脉内皮细胞 (HU VECs)损伤的保护作用。方法 :体外培养的HUVECs随机分为 4组 :对照组 ,AngII组 ,Ang (1 7)组 ,AngII Ang (1 7)组。采用分光光度计测定培养的HU VECs乳酸脱氢酶 (LDH)漏出 ;流式细胞仪检测细胞凋亡 ;硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定HUVECs上清液中一氧化氮 (NO)和内皮素 1(ET 1)的含量。结果 :与对照组比较 ,AngII(0 .1μmol·L-1)显著增加HUVECsLDH漏出 (P <0 .0 1)、ET 1分泌(P <0 .0 1)和HUVECs凋亡率 (P <0 .0 1) ,显著减少NO的含量 (P <0 .0 5 ) ;Ang (1 7)呈剂量依赖性抑制了AngII的促LDH漏出、ET 1分泌、增加细胞凋亡等作用 ,同时明显促进HUVECs的NO释放 ;单用Ang (1 7)对HUVECs无明显影响。结论 :Ang (1 7)可抑制AngII所致的体外培养HUVECs损伤 ,对内皮细胞具有保护作用。