烟碱对白细胞介素-1β诱导的培养牛脑微血管内皮细胞表达αvβ3整合素的增强作用

目的观察烟碱对牛脑微血管内皮细胞(Bovine cerebral microvascular endothelial cells, BCMEC)表达αvβ3整合素的影响。方法离体培养新生牛脑微血管内皮细胞;血细胞计数仪测定BCMEC粘附大鼠血单核细胞(MN)的数目;应用ELISA法检测BCMEC对αvβ3整合素的表达量。结果高浓度烟碱(10-5mol/L)单独作用于BCMEC 2 h 后,使BCMEC对MN的粘附率从(12.9+0.4)% 增至(15.7+0.6)%, 且BCMEC也可表达少量的αvβ3整合素; 而当烟碱与BCMEC作用2 h后,再经白细胞介素-1β (IL-1β) 诱导4 h,烟碱可浓度依赖性(10-7~10-5 mol/L)地增强IL-1β的诱导作用,增加BCMEC对MN的粘附率以及E-选择素的表达量; 抗αvβ3整合素抗体(αβAIAb)能显著阻断IL-1β诱导BCMEC后对MN的粘附率。结论烟碱具有增强IL-1β诱导的脑微血管内皮细胞表达αvβ3整合素的作用。     

整合素αvβ3、组织因子及血管内皮细胞生长因子在实验性脉络膜新生血管中的表达

目的：探讨整合素αvβ3、组织因子(tissue factor, TF)及血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）在激光诱导的大鼠脉络膜新生血管（choroidal neovascularization, CNV）组织中的表达。方法：随机选取成年雄性棕色挪威大鼠25只,一眼为实验组,经氩激光（波长532 nm）光凝诱导CNV形成,另一眼为正常对照。分别于光凝后第3,7,14,21及28天随机取5只大鼠,行眼底照相、眼底荧光血管造影（fluorescence fundus angiography, FFA）检查,并取出视网膜,通过免疫组织化学方法检测整合素αvβ3,TF及VEGF在CNV中的表达及相互关系。结果：正常对照组无新生血管生成,无整合素αvβ3和TF的表达,但视网膜神经节细胞层、内核层、色素上皮层、视网膜及脉络膜血管内皮细胞中均有少量VEGF的表达。光凝7 d后, FFA检查发现实验眼光凝区有圆盘状荧光渗漏,表明有新生血管生成。光凝后3 d,光凝区视网膜神经节细胞层、内核层、外核层缺损区、视网膜及脉络膜血管内皮细胞均表达少量的VEGF、整合素αvβ3及TF,随着时间的延长,CNV逐渐形成,VEGF、整合素αvβ3及TF表达水平也逐渐增加(P<0.01),其中整合素αvβ3的表达于第7天达高峰;VEGF的表达于第14天达高峰;TF的表达于第21天达高峰。结论：整合素αvβ3,VEGF及TF分别表达于实验性大鼠CNV形成初期、中期及晚期,其在CNV中表达的顺序对临床选择抗新生血管药物的治疗时间具有十分重要的意义。     

烟碱对白细胞介素—1β诱导的培养牛脑微血管内皮细胞表达αvβ3整合素的增强作用

目的：观察烟碱对牛脑微血管内皮细胞（Bovine cereral microvascular endothelial cells,BCMEC)表达αvβ3整合素的影响。方法：离体培养新生牛脑微血管内皮细胞;血细胞计数仪测定BCMEC粘附大鼠血单核细胞（MN）的数目;应用ELISA法检测BCMEC对αvβ3整合素的表达量。结果：高浓度烟碱（10^-5mol/L)单独作用于BCMEC2h后,使BCMEC对MN的粘附率从（12.9 0.4)%增至（15.7 0.6)%,且BCMEC也可表达少量的αvβ3整合素;而当烟碱与BCMEC作用2h后,再经白细胞介素-1β（IL-1β）诱导4h,烟碱可浓度依赖性（10^-7～10^-5mol/L)地增强IL-1β的诱导作用,增加BCMEC对MN的粘附率以及E-选择素的表达量;抗αvβ3整合素抗体（αβAIAb)能显著阻断IL-1β诱导BCMEC后对MN的粘附率。结论：烟碱具有增强IL-1β诱导的脑微血管内皮细胞表达αvβ3整合素的作用。     

整合素αvβ3对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖影响的实验研究

目的 研究整合素αvβ3对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的影响,为以整合素αvβ3为靶点治疗脑胶质瘤提供实验依据.方法 采用MTT比色法和SABC免疫组化检测法,观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用和对增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果 整合素αvβ3抗体对体外培养的大鼠C6脑胶质瘤细胞的增殖和PCNA表达有明显的抑制作用,其作用表现出明显的量效关系(P＜0.05).结论 整合素αvβ3对脑胶质瘤细胞的恶性增殖具有促进作用,而整合素αvβ3抗体对其有明显抑制作用,为抗整合素αvβ3治疗脑胶质瘤提供了实验依据和理论依据.     

整合素αvβ3在乳腺癌中的表达及与骨髓微转移的关系

目的：研究整合素αvβ3在乳腺癌中的表达及抗整合素αvβ3抗体LM 609在乳腺癌骨髓微转移中的作用.方法：免疫组织化学SABC法检测69例女性乳腺癌患者肿瘤组织整合素αvβ3表达及RT-PCR法检测乳腺癌骨髓微转移状况.流式细胞仪检测人乳腺癌细胞株MCF7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s整合素αvβ3的表达.建立BALB/c裸鼠乳腺癌骨髓微转移模型.实时荧光定量RT-PCR检测抗整合素αvβ3抗体LM609对裸鼠乳腺癌骨髓微转移模型的影响.结果：乳腺癌标本免疫组化结果,整合素αvβ3阳性患者30例,占43.5%;阴性患者39例,占56.5%.乳腺癌骨髓微转移RT-PCR检测阳性患者22例,占31.9%,阴性患者占68.1%.卡方检验,χ^2=9.564,P＜0.05.两者有显著相关关系.MCF-7细胞膜上整合素αvβ3受体为阴性,MDA-MB-231、MDA-MB-435s细胞膜上整合素αvβ3受体阳性.在由整合素αvβ3受体阳性细胞制作的裸鼠乳腺癌骨髓微转移模型中,经LM609处理后,可显著减少乳腺癌骨髓微转移的肿瘤细胞（P＜0.05）.结论：整合素αvβ3在乳腺癌中高表达与骨髓微转移有显著相关关系,用抗整合素αvβ3抗体可抑制乳腺癌的骨髓微转移.     

细胞色素P450表氧化酶抑制肿瘤坏死因子诱导内皮细胞凋亡的研究

目的:研究细胞色素P450表氧化酶对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡可能的机制。方法:原代培养的牛主动脉内皮细胞分为4组,分别转染细胞色素P450表氧化酶基因rAAV-GFP、rAAV-2J2、rAAV-2C11、rAAV-F87V病毒液,2周后用肿瘤坏死因子?α(TNF?α)(10ng/mL)和放线菌素D(ActD)(5ng/mL)诱导凋亡,GFP组不加TNF?α和ActD作为对照,另设空白对照组,用Western blot法检测Bcl-2和Bax的表达,并用酶标法检测Caspase-3的活性。结果:Western blot结果表明转染CYP P450表氧化酶的各组后Bcl-2表达升高,Bax表达下降,Caspase-3的活性下降,较空白对照组及GFP对照组差异有统计学意义(P均<0.01)。结论:细胞色素P450抗内皮细胞凋亡的机制可能与上调Bcl-2表达,下调Bax表达及抑制Caspase-3活性有关。     

西红花苷对3β,5α,6β-三羟胆甾烷致内皮细胞凋亡和相关基因表达的影响

目的:研究西红花苷(crocin)对3β,5α,6β-三羟胆甾烷(cholestane-3β,5α,6β-triol,Triol)致血管内皮细胞凋亡和相关基因表达的影响.方法:将内皮细胞分成正常对照组、模型组(25 μmol/L Triol)、西红花苷 (10-6 mol/L,10-7mol/L,10-8mol/L) 25 μmol/L Triol组.采用诱导内皮细胞凋亡的模型,用比色法测定丙二醛含量.光学显微镜、电子显微镜观察细胞形态和超微结构的变化,电泳法检测DNA 梯形条带、流式细胞仪分析法检测细胞凋亡率,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Bcl-2和Bax mRNA表达,免疫细胞化学方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达.结果:用Triol处理后,培养液中MDA含量增加(P<0.01 vs control),细胞收缩,核浓缩,深染,线粒体肿胀空化,出现凋亡小体、DNA 梯形条带和亚二倍体峰,细胞凋亡率为30.62%,Bax mRNA、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达明显高于正常对照组(P<0.01);Bcl-2 mRNA和蛋白表达低于正常对照组(P<0.01);西红花苷(10-7mol/L、10-6mol/L) Triol组,MDA含量减少,内皮细胞形态结构完整,细胞凋亡率分别为24.4%、6.3%,细胞Bax和Caspase-3基因表达明显下调,Bcl-2基因表达上调(P<0.05 or P<0.01 vs Triol).结论:西红花苷可能是通过调节Bcl-2,Bax 和Caspase-3基因表达抑制Triol诱导的内皮细胞凋亡.     

整合素αvβ_3抗体对C_6胶质瘤细胞增殖和侵袭力的影响

目的:研究整合素αvβ3在胶质瘤细胞增殖和侵袭性生长中的作用,为以整合素αvβ3为靶点治疗脑胶质瘤提供更充分的实验依据。方法:采用MTT比色法和PCNA免疫组化检测法,观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的C6胶质瘤细胞增殖的影响;建立Boyden小室细胞侵袭模型,观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的C6胶质瘤细胞侵袭能力的影响。结果:整合素αvβ3抗体对体外培养的C6胶质瘤细胞的增殖有明显的抑制作用,其作用表现出明显的量效关系(P<0.05);整合素αvβ3抗体显著降低体外培养的C6胶质瘤细胞的侵袭能力,其作用亦表现出明显的量效关系(P<0.05)。结论:整合素αvβ3对胶质瘤的细胞增殖和侵袭性生长具有促进作用,抗整合素αvβ3有望成为人脑恶性胶质瘤治疗的一种新的有效方法。     

整合素αvβ3小分子拮抗药的二维定量构效关系

整合素αvβ3在肿瘤组织中的新生血管内皮细胞膜有高度特异性表达,在静息期的内皮细胞以及大部分正常器官系统缺失表达,当其功能受到抑制时,血管内皮细胞凋亡,肿瘤生长受到抑制。通过对20个非肽类整合素αvβ3小分子拮抗药进行二维定量构效关系研究,发现整合素αvβ3小分子拮抗药的活性与零阶价分子连接性指数、偶极矩、最大正电荷、最大负电荷存在良好的线性关系（r=0.91）,获得较好的定量构效关系方程,并经分子对接验证,为进一步设计合成新的非肽类小分子提供理论指导。     

抗整合素αⅤβ3单抗抑制上皮性卵巢癌血管及肿瘤生成的实验研究

目的探讨抗整合素αⅤβ3单抗诱导血管内皮细胞凋亡,抑制上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)血管及肿瘤生长的作用效应.方法将EOC细胞株TYK细胞接种于鸡胚尿囊膜(chickchorioallantcic member,CAM)建立EOC CAM模型,细胞接种后12 h,分别加入抗整合素αⅤβ3抗体(实验组)和生理盐水(对照组).5 d后,应用图像分析系统检测2组CAM血管数目(number,N)、血管面积(area,A)、血管面积比(vessel area,VA/A)及肿瘤组织面积(tissue,T).脐静脉内皮细胞株(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)ECV304接种于玻连蛋白(vitronectin,Vn)表面,2 h后加入抗αⅤβ3抗体,计数0、12 h、24 h、48 h、72 h细胞凋亡率.结果实验组N、A、VA/A及T分别为(16.80±0.71)根;(10.02±4.48)mm2;25.50±11.41;(8.25±4.15)mm2,显著小于对照组的(42.20±15.32)根;(26.15±8.35)mm2;66.62±17.64;(34.26±15.83)mm2(P<0.05).抗αⅤβ3单克隆抗体诱导HUVEC时间依赖性细胞凋亡,其24 h、48h和72 h的凋亡率显著高于IgG对照组.结论抗整合素αⅤβ3单抗通过诱导血管内皮细胞凋亡而抑制卵巢癌血管及肿瘤生长,整合素αⅤβ3可作为卵巢癌治疗的一个有效靶点.     

整合素αvβ3在前列腺癌的表达及临床意义

目的 探讨整合素αvβ3在前列腺癌(Pca)中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学链酶抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(S-P法)检测整合素αvβ3在41例前列腺癌中的表达,另20例正常前列腺组织作对照.结果 免疫组织化学发现:在前列腺癌组织中整合素αvβ3表达上调, 正常组织与肿瘤组织表达差异有统计学意义(P＜0.01).整合素αvβ3在前列腺癌组织的表达随着Pca的病理分级、临床分期增加其表达上调(P＜0.05),与Pca的病理分化程度呈负相关(P＜0.01).在各术前血清PSA值组中,整合素αvβ3的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 整合素αvβ3可能在前列腺癌的发生、发展及恶性进展过程中起重要作用,检测整合素αvβ3有助于对Pca的恶性程度、转移潜能和预后的判断.     

血管紧张素Ⅱ上调BaX表达诱导人内皮细胞凋亡

为了研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导凋亡的机制,将人脐静脉内皮细胞培养至第3代,用不同浓度Ang Ⅱ培养不同时间,用TUNEL检测细胞凋亡.Bax和Bcl-2蛋白表达用Western Blot和图像分析法测定.结果发现Ang Ⅱ组的凋亡阳性率极显著高于对照组;Bax的表达极显著地升高且具有时间和剂量依赖性,Bcl-2无显著变化,Bax/Bcl-2比值极显著地增加.提示AngⅡ通过诱导Bax的高表达,致Bax/Bcl-2比值极显著地增加而诱发凋亡.     

苯扎贝特对ox-LDL诱导内皮细胞凋亡基因Bcl-2/Bax的影响

目的 观察苯扎贝特对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡基因Bcl-2/Bax的影响. 方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),根据实验要求分为正常对照组、ox-LDL组、低浓度苯扎贝特(50μmol/L)组、中浓度苯扎贝特(100 μmol/L)组、高浓度苯扎贝特(200μmol/L)组.RT-PCR观察各组凋亡基因Bcl-2、Bax及Bd-2/BaxmRNA的变化. 结果 与正常对照组比较,ox-LDL组凋亡基因Bcl-2表达下降(P<0.05),凋亡基因Bax表达增加(P<0.05),Bcl-2/Bax比值下降(P<0.05);不同浓度苯扎贝特组与ox-LDL组比较,Bcl-2表达增加(P<0.05),Bax表达降低(P<0.05),Bcl-2/Bax上调(P<0.05),且呈浓度效应依赖关系. 结论 ox-LDL可引起内皮细胞抗凋亡基因Bcl-2表达下调,凋亡基因Bax表达上调,Bcl-2和Bax比值下降,从而引起内皮细胞凋亡增加;苯扎贝特可通过上调Bcl-2与Bax的比值抑制ox-LDL引起的内皮细胞凋亡,起到抗动脉粥样硬化作用.     

肝细胞生长因子抗糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡及分子机制

目的：探讨肝细胞生长因子抑制糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡的作用及其相关分子机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞，分为实验对照组、糖基化终产物及糖基化终产物＋肝细胞生长因子组，采用MTT法测定各组血管内皮细胞生长抑制率；瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化、流式细胞术测定细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法分析各组凋亡基因Ban、Bcl-2蛋白的表达及酶联反应法测定caspase-3活性。结果：糖基化终产物诱导培养的内皮细胞出现明显的凋亡形态学改变，内皮细胞凋亡率与糖基化终产物的浓度和作用时间呈依赖关系，肝细胞生长因子干预后可显著降低不同时间的内皮细胞凋亡率；肝细胞生长因子作用内皮细胞抗凋亡基因Bcl-2表达明显升高，而促凋亡基因Bax表达无明显变化；caspase-3活性显著降低。结论：肝细胞生长因子抑制糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡，其作用机制可能是上调抗凋亡基因Bcl-2水平、抑制caspase-3的激活．     

巨噬细胞对血管内皮细胞增殖、Hoxb2、血管内皮生长因子受体和整合素αvβ3表达的影响

目的建立人巨噬细胞系U937与人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304体外共培养模型,以刀豆蛋白A(ConA)作为U937激活剂,研究巨噬细胞调节血管生成的机制.方法实验分4组ECV-304、ConA+ECV-304、U937+ECV-304和ConA+U937+ECV-304.将ECV-304细胞接种,待60%融合时按照不同的分组进行共培养48 h后,流式细胞仪检测细胞周期的变化采用3H-TdR掺入试验检测内皮细胞DNA合成变化;RT-PCR技术检测内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR和同源盒(homebox)Hoxb2基因mRNA表达水平的变化;免疫荧光在流式细胞仪上检测整合素受体αvβ3表达的变化.结果ConA激活的U937细胞可使内皮细胞S期、DNA合成明显增加(P＜0.01);ConA刺激的U937细胞使内皮细胞VEGF受体KDR(0.879±0.003)、Hoxb2基因mRNA的表达水平(0.947±0.003)和整合素受体αvβ3的表达水平(10.26±1.73)明显上调(P＜0.01).结论ConA活化的巨噬细胞可通过影响内皮细胞的细胞周期、DNA合成、VEGF受体KDR、Hoxb2及整合素受体αvβ3的表达来促进内皮细胞的增殖、迁移及与基质的黏附,从而调节血管的生成.     

牛体内胚胎体外诱导其子宫内膜 上皮细胞整合素αvβ3基因差异表达的研究

【摘要】 目的 通过利用牛体内胚胎与其子宫内膜上皮细胞体外共培养的方式，探究共培养前、后子宫内膜上皮细胞中整合素αv，β3基因差异表达的变化,为今后建立快捷有效的牛子宫容受态预判方法提供参考。方法 将体内冲出的牛囊胚与原代培养并传代纯化至第5代的牛子宫内膜上皮细胞进行24h体外共培养，利用RT-PCR技术对共培养前、后的子宫内膜上皮细胞进行αvβ3基因的表达检测。结果 RT-PCR检测结果显示，共培养前、后均有整合素αv，β3的表达；共培养I组(未孵化囊胚组)，其共培养后整合素αv，β3的表达变化与未共培养对照组二者之间差异不显著（P＞0.05）；共培养II,III组为孵化囊胚，其共培养后整合素αv，β3的表达显著高于未共培养组和共培养I组（P < 0.05）。结论 牛体内孵化囊胚体外诱导其子宫内膜上皮细胞表达整合素的效果明显优于早期囊胚；整合素αvβ3具有作为牛子宫容受态体外检测标志的潜力。     

血管紧张素Ⅱ上调Bax表达诱导人内皮细胞凋亡

为了研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导凋亡的机制,将人脐静脉内皮细胞培养至第3代,用不同浓度Ang Ⅱ培养不同时间,用TUNEL检测细胞凋亡。Bax和Bcl-2蛋白表达用Western Blot和图像分析法测定。结果发现：Ang Ⅱ组的凋亡阳性率极显著高于对照组;Bax的表达极显著地升高且具有时间和剂量依赖性,Bcl-2无显著变化,Bax/Bcl-2比值极显著地增加。提示：Ang Ⅱ通过诱导Bax的高表达,致Bax/Bcl-2比值极显著地增加而诱发凋亡。     

牛体内囊胚经体外共培养诱导子宫内膜上皮细胞整合素αv,β3基因差异的表达

目的 利用牛体内胚胎与其子宫内膜上皮细胞体外共培养的方式,探究共培养前、后子宫内膜上皮细胞中整合素αv,β3基因差异表达的变化,为今后建立快捷有效的牛子宫容受态预判方法提供参考。方法 将体内冲出的牛囊胚与原代培养并传代纯化至第5代的牛子宫内膜上皮细胞进行24 h体外共培养,利用RT-PCR技术对共培养前、后的子宫内膜上皮细胞进行αv,β3基因的表达检测。结果 RT-PCR检测结果显示,共培养前、后均有整合素αv,β3的表达;共培养I组(囊胚组),其共培养后诱导整合素αv,β3基因的表达与未共培养对照组二者之间差异无显著性(P > 0.05);共培养Ⅱ组(孵化囊胚组),其共培养后整合素αv,β3基因的表达显著高于对照组和共培养I组(P < 0.05)。结论 牛体内孵化囊胚经体外共培养诱导牛子宫内膜上皮细胞表达整合素αv,β3的效果,明显优于早期囊胚;整合素αv,β3基因具有作为牛子宫容受态体外检测标志的潜力。     

整合素αv和β3在小鼠胚胎着床中的作用

目的观察整合素亚单位αv和β3在小鼠不同时期子宫内膜和孕早期人子宫内膜中的表达,探讨整合素αv和β3在胚胎着床中的作用。方法取小鼠月经周期和妊娠1～4.5 d的子宫及孕早期经人工流产得到的人子宫内膜,用免疫组化ABC法检测整合素αv、β3的表达。在小鼠妊娠第4天,经子宫角注射5μL整合素αv和β3抗体原液(每侧),第16天处死小鼠,统计子宫中胚胎数和卵巢中黄体数,计算着床率。结果整合素αv、β3在小鼠子宫和人孕早期的子宫中均有表达,在小鼠其表达主要分布在子宫内膜上皮和子宫腺上皮,表达强弱不等;而在人子宫中期表达主要分布在蜕膜细胞上;整合素αv和β3抗体子宫角注射后小鼠胚胎着床率明显下降。结论整合素αv和β3可能与受精卵在输卵管中的趋化运动有关,推测其参与胚卵对母体子宫内膜的识别以及胚卵在输卵管中向子宫运动以及维持胚胎的着床状态。     

大鼠提睾肌神经损伤后Bcl-2、Bax和P53在血管平滑肌细胞和内皮细胞的表达

目的 研究大鼠提睾肌神经损伤后血管平滑肌细胞和内皮细胞的Bcl-2、Bax及P53表达和意义。方法 以免疫组织化学SP法,对大鼠提睾肌神经损伤后的血管平滑肌细胞和内皮细胞的Bcl-2、Bax及P53表达进行研究。结果 支配提睾肌的神经损伤后,Bcl-2、Bax和P53均有表达。在平滑肌细胞中,Bcl-2的表达明显强于Bax和P53,而在内皮细胞Bax和P53的表达强于Bel-2。结论 大鼠提睾肌损伤后平滑肌细胞有增殖现象,而内皮细胞则可能出现过度凋亡,上述改变可能对微循环产生不利影响。