小分子干扰RNA分子化学修饰研究进展

RNA干扰是指转录后的基因沉默现象,可使基因沉默的小分子干扰RNA（siRNA）为基因治疗提供了又一个选择。为了实现其基因治疗价值,根据siRNA的作用机制和反义核酸修饰所取得的经验,为优化其药学性质和有效转运,进行了各种改进。其中,载体修饰和化学方法修饰siRNA是优化其性质的重要方法,本文对两种方法进行了简要的综述。     

RNA干扰在肿瘤治疗上的研究进展

肿瘤是多基因、多因素相互作用的网络调控的结果.目前,肿瘤的发病率及死亡率均居高不下,而传统的治疗技术(如手术、放疗、化疗)又难以完全抑制或逆转肿瘤细胞的生长,因此,有待发展新的、更有效的治疗方法.文中对近年来RNA干扰(RNAi)技术在肿瘤基因靶向治疗上的进展作一综述.     

靶向心肌细胞TLR4基因小干扰RNA载体构建

目的:设计合成有效靶向Toll样受体4(TLR4)基因小干扰RNA(siRNA)表达载体,且挑选TLR4基因稳定沉默心肌细胞。方法:依据RNA干扰(RNAi)序列设计原则,以TLR4基因为靶基因,合成3对小发夹RNA(shRNA)寡核苷酸链,经退火、与线性化pSilence 2.1-U6neo质粒连接、酶切、测序并鉴定。脂质体法转染心肌细胞,新霉素(G418)加压筛选并收集稳定表达质粒的心肌细胞,并观察光镜下心肌细胞形态。RT-PCR及Western Blot法检测收集的心肌细胞TLR4mRNA和蛋白的表达,确定siRNA对TLR4的抑制效率。结果:测序鉴定插入发夹样序列正确,成功构建了TLR4基因siRNA表达载体;并获得了稳定沉默TLR4的心肌细胞。未见细胞毒性形态学改变。多种方法均证实siRNA作用于TLR4基因后,心肌细胞TLR4 mRNA和蛋白表达均被抑制,其中pSilence2.1-siTLR4-1抑制作用最强。结论:成功构建了靶向TLR4基因siRNA表达载体,并有效抑制心肌细胞TLR4表达。     

核素显像评价心功能的应用研究进展

心脏病是危害人民健康的主要疾病之一,对心功能都有不同程度的损害。监测这些改变,及时了解患者的病情,对治疗决策、疗效和预后的判断均十分重要。核素显像测定心功能是一种成熟可靠的无创性方法,能够提供心室大小、心肌灌注、心脏收缩和舒张功能等多方面的信息,有助于对心功能异常做出早期诊断和治疗。随着正电子发射计算机体层显像技术(PET)和高分辨力PET/CT在临床应用逐渐增多,核素显像测定心功能的结果将更为准确、可靠。     

RNA干扰在抗肿瘤中的作用研究进展

癌症是当前危害人类健康的最主要杀手。临床上常用的手术治疗、放射治疗和化学治疗无法完全根除或彻底杀灭肿瘤细胞,常出现肿瘤转移或复发现象。而肿瘤的生物治疗具有安全、有效、毒副作用低等特点,基因治疗是生物治疗的一种,其主要是抑制肿瘤细胞中过度表达的基因。RNA干扰(RNAi)是一种利用双链RNA(dsRNA)特异性沉默某一特定基因转录后翻译的过程。RNAi已成为用于研究基因功能的重要工具,其不仅能敲除某些基因的表达,防御dsRNA病毒,还能作用于整个基因组,观察基因之间的协调合作,可以利用它进行基因治疗。本文主要介绍了RNAi技术的发现、作用机制及其在抗肿瘤方面的应用,并总结了该技术在抗肿瘤过程中存在的问题。     

RNA干扰与鼻咽癌的研究进展

RNA干扰(RNAi)是利用双链小片段RNA高效、特异性地降解细胞内同源mRNA,阻断体内基因表达,使细胞出现靶基因缺失的表型[1]。近几年,RNA干扰研究在国内外迅速开展,并且扩大到许多方面,如抑制病毒的研究、抑制多药耐药基因的表达、在人体寄生虫研究中的应用、基因治疗、肿瘤研究等。而鼻咽癌的发病机制与许多致病因素有关,实验研究表明RNAi可以通过多种途径影响鼻咽癌细胞的生长,因此RNAi可能为鼻咽癌治疗提供新的方法。     

RNA干扰与药物的研究进展

RNA干扰是由双链RNA诱导的序列特异性的基因沉默,目前被广泛用于药物研究,特别是针对肿瘤、病毒感染性疾病、血液病及神经退行性疾病等的治疗药物。随着核酸药物在体内靶向转运技术的不断发展,RNA干扰有可能成为一种新型的治疗途径。     

RNA干扰技术的研究进展

自1998年2月Fire等[1]首次在Nature上发表了将双链RNA(double stranded RNA, dsRNA)注入一种秀丽线虫(caenorhabditis elegans)体内,dsRNA诱导了靶向基因专一性的基因表达沉默(gene silencing),由此,一门新技术--RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术逐渐发展起来.随后许多研究人员先后运用RNAi技术在线虫、果蝇、植物及动物细胞中进行了大量研究,采用不同长度的dsRNA 可使不同类型细胞的靶向基因表达明显降低.近年来研究表明,在哺乳动物以及人类细胞中转染21～23个核苷酸(nucleotide, nt)的小干扰性RNA(small interfering RNA, SiRNA)可使同源基因表达产生特异性强抑制效应[2].SiRNA和RNAi技术的研究和运用,具有极其重要的理论意义和实践意义,它将对医学生物学的发展产生深远的影响.杂志将这一新发现评为2002年度世界十大科学成就之首.本文就RNAi的作用机制、SiRNA合成以及RNAi技术运用等方面的研究进展综述如下.     

冠心病核素心肌显像的临床意义

冠心病核素心肌显像的临床意义Ｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆ~（９９ｍ）Ｔｃ－ＭＩＢＩｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｔｏｍｏｇｒａｐｈｌｙｏｆｃｏｒｏｎａｒｙｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ￥／／王敏中，张顺超，兰智（第三军医大学西南医院心血管内?..     

活体核素示踪神经受体研究进展

受体研究在脑功能研究中占据重要地位,其中核医学神经受体显像能对活体脑内受体的分布、密度以及生理病理条件下不同活动状态等进行可视化研究已成为当今热门的研究课题,其方法学上的应用与研究成果促进了脑科学的发展与进步.     

放射性核素骨显像在临床骨科的应用

放射性核素显像广泛应用于骨骼系统的诊断和治疗,对转移性骨肿瘤,骨髓炎及股骨头无菌性坏死具有早期诊断价值,能够早期判断移植骨是否成活,同时对原发性骨肿瘤和转移性骨肿瘤引起的骨痛具有较好的镇痛效果。     

活细胞RNA成像技术及其在生物医学中应用研究进展

RNA可与各种核酸及蛋白质相互作用,在多种生理和病理过程中发挥重要的调控作用,其生物学过程高度动态。追踪活细胞中的RNA动态对理解基因表达的时空调控以及RNA的调控功能至关重要。基于荧光蛋白的RNA标记系统包括MS2/MCP系统、PP7/PCP系统、boxB/λN22和CRISPR-Cas系统等,其中MS2/MCP系统目前应用最为广泛,其具有结合稳定、信噪比高等优点,局限性是RNA成像的实现需要对靶RNA进行基因编辑,这可能导致靶RNA特性的潜在改变。近期开发的CRISPR-dCas13系统不需要对RNA进行改造,但其局限性在于CRISPR RNA效率的不确定性,且信噪比较低。基于荧光染料的RNA标记系统包括分子信标和荧光基团-适体对,其中分子信标具有高特异性和较高信噪比,而荧光基团–适体对Pepper系统和Mango系统在RNA成像的信噪比上更具有优势,但也需要对靶RNA进行基因编辑。活细胞RNA成像技术可应用于观察并研究RNA转录、剪接、转运、翻译（特指信使RNA）和亚细胞定位,有助于研究细胞分化等生物学过程以及细胞适应外界环境时的转录调控机制,有利于理解RNA行为异常导致的各种疾...     

RNA干扰（RNAi）技术及其在功能基因组学研究中的应用

近年来的研究表明 ,一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内某些基因致使mRNA降解 ,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型 ,称为RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)。由于可以作为代替基因敲除的遗传工具 ,RNAi技术正在改变着功能基因组学 (functionalgenomics)领域的研究步伐。《科学》杂志和美国科学促进会将RNAi技术评选为2 0 0 2年十大重大科学成就之首。1　RNAi及其作用机制1.1　RNAi回顾首次发现双链RNA (doublestrandRNA ,dsR NA)能够导致基因沉默的现象来源于对线虫Caenorhabditiselegans的研究。1995年 ,康乃尔大学的…     

RNA干扰及其在肿瘤研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是近年发展起来的一种阻抑基因表达的新方法,该技术通过双链RNA的介导,可以特异性地阻断或降低相应基因的表达。在肿瘤研究中,通过RNAi技术可以选择性地抑制人类肿瘤相关基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的生长。该技术的应用为癌症的基因治疗提供了新的方法。本文综述了小干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)的生成和作用机制以及RNAi在肿瘤研究中的应用。     

RNA interference and its current application in mammals

Objective The aim of this review was to assess RNA interference (RNAi) and its possibility as a potential and powerful tool to develop highly specific double-stranded RNA (dsRNA) or small interfering RNA (siRNA) based gene-silencing therapeutics. Data sources The data used in this review were obtained from the current RNAi-related research reports. Study selection dsRNA-mediated RNAi has recently emerged as a powerful reverse genetic tool to silence gene expression in multiple organisms. The discovery that synthetic duplexes of 21 nucleotides siRNAs trigger gene-specific silencing in mammalian cells has further expanded the utility of RNAi in to the mammalian system. Data extraction The currently published papers reporting the discovery and mechanism of RNAi phenomena and application of RNAi on gene function in mammalian cells were included. Data synthesis Since the recent development of RNAi technology in the mammalian system, investigators have used RNAi to elucidate gene function, and to develop gene-based therapeutics by delivery exogenous siRNA or siRNA expressing vector. The general and sequence-specific inhibitory effects of RNAi that will be selective, long-term, and systemic to modulate gene targets mentioned in similar reports have caused much concern about its effectiveness in mammals and its eventual use as a therapeutic mordality. Conclusions It is certain that the ability of RNAi in mammals to silence specific genes, either when transfected directly as siRNAs or when generated from DNA vectors, will undoubtedly accelerate the study of gene function and might also be used as a potentially useful method to develop highly genespecific therapeutic methods. It is also expected that RNAi might one day be used to treat human diseases.     

可递送siRNA的非病毒纳米载体的设计

RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术可让不同水平的基因沉默,主要是通过双链RNA（dsRNA）在体内诱导靶基因mRNA产生特异性降解而实现的。小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）是RNAi的效应分子,需要借助递送载体进入细胞内发挥治疗作用。纳米载体具有很多优势：增加生物膜通透性、控制药物释放速度、改变体内分布、提高生物利用度等。本文综述了siRNA非病毒递送载体的相关研究,重点阐述了其结构和生物学特征。     

趋化因子受体CXCR4小分子干扰RNA表达载体的构建及表达

目的： 构建趋化因子受体CXCR4小分子干扰RNA（siRNA）表达载体，研究其对CXCR4基因表达的沉默效果，探索抗人免疫缺陷病毒-1 （HIV-1）治疗的新途径。方法： 根据软件设计针对CXCR4基因的siRNA序列，经退火成互补双链，克隆到Psilencer^M3.1-H1 neo载体中，经测序鉴定插入序列的正确性。转染MT₄细胞后，采用RT-PCR及流式细胞仪方法检测转染siRNA质粒的实验组、转染空载体的阴性对照组和空白细胞对照组间抑制基因表达情况。结果： PCR及琼脂糖凝胶电泳检测重组质粒Psilencer^M 3.1-H1- siRNA neo，有正确的特异性片段，DNA测序也证明具有正确序列；该载体转染MT₄细胞48 h后，能明显抑制CXCR4基因表达，其表达抑制率为70%，与空白对照组和阴性组比较差异有显著性（P<0.05）。结论： 成功构建趋化因子受体CXCR4的siRNA表达载体。     

RNA干扰假基因Cripto-3表达对大肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的：探讨RNA干扰下调假基因Cripto-3（Cr-3）对人大肠癌细胞SW480增殖和侵袭的影响。方法：将大肠癌细胞随机分为5组：空白对照组,空载对照组,siRNA转染组（5 nmol/L组、10 nmol/L和20 nmol/L组）。将Cr-3小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染人大肠癌SW480细胞后,采用实时荧光定量PCR检测Cr-3表达水平;分别采用平板克隆形成实验和Transwell法检测大肠癌细胞的增殖和侵袭能力。结果：与空白对照组和空载对照组比较,siRNA转染组Cr-3表达水平均明显下降,且呈浓度依赖性（P〈0.05）,癌细胞克隆形成和穿过滤膜的细胞均明显减少,且与浓度相关（P〈0.05）。结论：假基因Cr-3在大肠癌细胞增殖侵袭中起着重要的作用,可能是大肠癌诊疗中的一个重要靶点。