藏药兔耳草常用基原的ITS2序列鉴定研究

目的 利用DNA条形码内转录间隔区2（internal transcribed spacer 2,ITS2）序列针对自采及流通使用环节的不同基原兔耳草进行分析,建立一种快速鉴定常用兔耳草的方法,并分析市场流通的主流品种。方法 采用试剂盒提取101份兔耳草样品的DNA,针对其ITS2片段进行PCR扩增并双向测序,获取ITS2序列信息;并从GenBank上下载相关序列28条。运用MEGA6.0对129条ITS2序列进行比对分析,计算种内和种间K2P遗传距离,构建邻接法（neighbor-joining,NJ）系统进化树,并预测ITS2二级结构。采用BLAST法及NJ聚类分析法分析市场流通兔耳草基原。结果 除四川部分区域所产全缘兔耳草Lagotis integra与革叶兔耳草L.alutacea种间亲缘关系近外,短筒兔耳草L.brevituba、全缘兔耳草、圆穗兔耳草L.ramalana、革叶兔耳草、短穗兔耳草L.brachystachya及紫叶兔耳草L.praecox的种内最大遗传距离均小于种间最小遗传距离,具有明显的条形码间距。系统进化树显示短筒兔耳草、圆穗兔耳草、短穗兔耳草及紫叶兔耳草单独聚为一支,四川部分区域所产全缘兔耳草与革叶兔耳草聚为一支,其余全缘兔耳草聚为一支。通过ITS2二级结构发现,各基原兔耳草在茎环数目、大小及位置均有一定差异,可区分亲缘关系近的全缘兔耳草与革叶兔耳草。市场分析显示,市面上流通的兔耳草有6种基原,以全缘兔耳草使用占比最高,短筒兔耳草次之,短穗兔耳草及圆穗兔耳草较低,紫叶兔耳草及革叶兔耳草最低。结论 ITS2序列可以作为DNA条形码用来鉴别常用藏药兔耳草的基原,市场主流兔耳草品种为全缘兔耳草、短筒兔耳草及短穗兔耳草。     

兔耳草有效部位的筛选

目的:筛选兔耳草发挥保肝、镇痛、抗炎作用的有效部位.方法:用系统溶剂分离法将兔耳草分离成极性不同的组分,通过兔耳草不同组分对D-半乳糖胺致肝损伤小鼠的保护作用对热板法引起小鼠疼痛的影响以及对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响,筛选免耳草发挥保肝、镇痛以及抗炎作用的有效部位.结果:兔耳草氯仿提取物和正丁醇提取物为兔耳草发挥保肝作用的物质基础,同时氯仿提取物为兔耳草发挥镇痛抗炎作用的有效部位.     

多基原兔耳草HPLC指纹图谱对比研究

目的建立现有国家药品标准收载的兔耳草基原全缘兔耳草Lagotis integra(药材名为兔耳草)及短管兔耳草L. brevituba(药材名为洪连)的HPLC指纹图谱方法,并通过所建立的方法对市场上其他3种较为常见的兔耳草(圆穗兔耳草L.ramalana、革叶兔耳草L. alutacea及短穗兔耳草L. brachystachya)进行对比研究。方法全缘兔耳草与短管兔耳草的HPLC指纹图谱相似度低,故分别建立二者HPLC指纹图谱方法;采用Waters X-Bridge C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.2%甲酸水溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长328 nm;柱温35℃(全缘兔耳草)及25℃(短管兔耳草)。结果建立的全缘兔耳草HPLC对照指纹图谱指认了14个共有峰,并标定了大车前苷、鞭打绣球苷B、10-O-trans-p-methoxycinnamoyl-catalpol及10-O-[(E)-3,4-dimethoxycinnamoyl]catalpol峰;所建立的短管兔耳草HPLC对照指纹图谱存在13个共有峰,并标定松果菊苷、大车前苷及毛蕊花糖苷峰;建立的全缘兔耳草HPLC对照指纹图谱与所有批次全缘兔耳草及革叶兔耳草的相似度均大于0.9,与其他3种兔耳草相似度低;建立的短管兔耳草HPLC对照指纹图谱与所有批次短管兔耳草及圆穗兔耳草的相似度均大于0.9,与其他3种兔耳草相似度低。结论已建立的方法能有效地对各基原兔耳草进行鉴别,建议革叶兔耳草与全缘兔耳草同时收载于《卫生部药品标准(藏药第一册)》,圆穗兔耳草可作为《中国药典》2015年版一部收载的"洪连"的新基原。     

藏族药兔耳草属药用植物化学成分与药理作用研究进展

藏族药兔耳草属药用植物资源充足,品种丰富,具有行血解毒,清热调经的功效,在藏族医药体系中应用广泛,是藏族药中常用的上品药材,在多种方剂中作为主药。但目前兔耳草属药用植物的研究报道较少,其研究成果主要集中在革叶兔耳草Lagotis alutacea,短穗兔耳草L.brachystachya,短管兔耳草L.brevituba,圆穗兔耳草L.ramalana,云南兔耳草L.yunnanensis这几个种的兔耳草属植物的药理和化学成分的研究,其他种的兔耳草属植物罕见报道。目前研究表明,兔耳草属药用植物含有黄酮类、环烯醚萜苷类、苯丙素苷类、甾体类、三萜类等多种化学成分。现代药理研究表明其具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤、抗肝损伤、抗炎、抗痛风等多种药理活性。兔耳草属药用植物应用前景非常广阔,但对其的研究开发较少。本文搜集了对近年来兔耳草属植物的资源分布、化学成分、药理作用及其在藏族医药体系的应用进行系统的文献综述,以期为其临床合理应用和深入开发提供科学参考。     

兔耳草有效部位的筛选

目的：筛选兔耳草发挥保肝、镇痛、抗炎作用的有效部位。方法：用系统溶剂分离法将兔耳草分离成极性不同的组分,通过兔耳草不同组分对D-半乳糖胺致肝损伤小鼠的保护作用对热板法引起小鼠疼痛的影响以及对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响,筛选兔耳草发挥保肝、镇痛以及抗炎作用的有效部位。结果：兔耳草氯仿提取物和正丁醇提取物为兔耳草发挥保肝作用的物质基础,同时氯仿提取物为兔耳草发挥镇痛抗炎作用的有效部位。     

短筒兔耳草化学成分的研究

短筒兔耳草为一种传统常用藏药,是玄参科兔耳草属植物Lagotisbrevituba Maxim.的干燥全草,藏药名洪连,又名藏黄连,主要分布在甘肃西南部、青海东部及西藏等地。始载于藏医古籍《月王药诊》( 71 0年)中,后载于藏医的《四部医典》( 748年)以及《晶珠本草》( 1 840年)。《四部医典》列本品为草药类之首。本品味苦,性寒。有清热凉血,解毒的功能[1] 。用于五脏有热,血分热毒,体虚潮热,高血压,急、慢性肝炎,痔疮。据记载,各地作为洪连入药的兔耳草属植物主要有短筒兔耳草L.brevituba、大萼兔耳草L.clarkei、全缘兔耳草L.integra、园穗兔耳草L.r…     

基于环烯醚萜苷成分的不同基原兔耳草及药用部位差异性研究

目的建立藏药兔耳草环烯醚萜苷类主要成分（梓醇、桃叶珊瑚苷）的含量测定方法,并对不同基原兔耳 草及不同药用部位进行对比研究。方法 采用 Waters Atlantis T3 C1（8 4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱;流动相： 乙腈-0.1%磷酸水（1∶99）;检测波长：210 nm;流速：1 mL·min-1。采用单因素方差分析方法进行数据分析。 结果所建立的梓醇、桃叶珊瑚苷含量测定方法分离度高,在测定的浓度范围内线性关系好,精密度、重复 性、稳定性的RSD 均小于2.0%。梓醇、桃叶珊瑚苷平均加样回收率分别为102.94%、100.85%。各基原兔耳 草环烯醚萜苷类主要成分（梓醇、桃叶珊瑚苷）比较：全缘兔耳草>紫叶兔耳草>短穗兔耳草>圆穗兔耳草>革叶 兔耳草>短筒兔耳草。同一基原不同药用部位比较：梓醇含量地下部位优于地上部位,而桃叶珊瑚苷含量地上 部位优于地下部位。结论所建立的方法快速、简便、重复性好,可用于藏药兔耳草梓醇、桃叶珊瑚苷的含量 测定,为兔耳草的质量控制提供参考。短筒兔耳草环烯醚萜苷类成分含量低于其他5 种基原。建议将各基原兔 耳草均作为藏药兔耳草使用。     

短穗兔耳草和短管兔耳草抗急性酒精肝损伤及其作用机制

目的 研究短穗兔耳草和短管兔耳草对急性酒精肝损伤的保护作用及其作用机制。方法 将小鼠随机分为9组,每组10只,分别为正常组、模型组、联苯双酯组（阳性对照组）、短穗兔耳草低、中、高剂量组、短管兔耳草低、中、高剂量组。采用灌胃50%乙醇的方法制备急性酒精肝损伤模型,连续灌胃给药7d,于造模后16h各组取血、取肝脏,测定血清中ALT、AST、TC、TG、TNF-α、NF-κB各项指标,测定肝组织匀浆中SOD、MDA、GSH、蛋白的含量,PCR检测肝组织中TNF-α相对表达量。结果 与模型组比较,短穗兔耳草和短管兔耳草高剂量组可显著降低血清中ALT、AST、TC、TG含量（P＜0.01或P＜0.05）,短穗兔耳草和短管兔耳草高剂量组可显著升高肝匀浆中SOD、GSH含量,降低MDA含量,具有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）。短穗兔耳草各剂量组和短管兔耳草高剂量组可显著降低TNF-α、NF-κB的含量,具有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）。短穗兔耳草提取物和短管兔耳草提取物给药组小鼠肝组织中TNF-α mRNA的相对表达量均显著降低（P＜0.01）。结论 短穗兔耳草和短管兔耳草乙醇提取物均具有抗急性酒精肝损伤作用,其作用与氧化应激及对炎症因子的调控相关。     

常用兔耳草类药材的6种有效成分含量对比研究

目的 建立测定兔耳草类药材主要有效成分苯丙素苷类（毛蕊花糖苷、松果菊苷、大车前苷及鞭打绣球苷B）及环烯醚萜苷类（10-O-trans-p-methoxycinnamoyl-catalpol及10-O-[(E)-3,4-dimethoxycinnamoyl]-catalpol）的HPLC-PDA含量测定方法,并比较不同基原兔耳草的含量差异,为其质量控制方法及临床有效性提供依据。方法 采用资生堂SPOLARC18(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.4%甲酸溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长为325 nm;柱温为30℃;进样量为10μL。依据测定结果使用聚类分析法和偏最小二乘法判别分析（orthogonal partial least squares discrimination analysis,OPLS-DA）法进行分析。结果 在此条件下,34批全缘兔耳草Lagotis integra、21批短筒兔耳草L. brevituba、10批圆穗兔耳草L. ramalana、6批革叶兔耳草L. alutacea、5批短穗兔耳草L. brachystachya...     

藏药短管兔耳草中1个新苯乙醇苷类化合物

目的:对藏药短管兔耳草的化学成分进行研究.方法:用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱和半制备HPLC分离纯化化合物,并用波谱学方法进行结构鉴定.结果:从藏药短管兔耳草的醋酸乙酯提取物中分离得到2个化合物,经鉴定均为苯乙醇苷类化合物.结论:化合物1为新化合物,命名为兔耳草苷A(lagotiside A),化合物2为毛蕊花糖苷.     

兔耳草的化学成分研究

圆穗兔耳草 Lagotis ramalana Batalin是玄参科兔耳草属植物。生于海拨 530 0 m高山、草地、冰河、水坡。分布于青海、甘肃及四川西北部。兔耳草为常用藏药 [1] ,藏名洪连。商品有 4种兔耳草 ,圆穗兔耳草是其中之一。洪连味苦、性寒 ,有清热、凉血、解毒功能 ,用于五脏有热、血分热毒、体虚潮热、高血压、急慢性肝炎、痔疮 ,有体外抑菌、抗炎和降血糖的药理作用。为探讨圆穗兔耳草的化学成分。我们对其进行了化学成分的研究。首次从中分离得到 4个化合物。经理化常数和光谱分析 ,鉴定为葫芦素 B(cucurbitacin B, )、葫芦素 D(cucurbitacin…     

两种兔耳草对四氯化碳致肝损伤小鼠保护作用的比较研究

目的比较短管兔耳草和短穗兔耳草对四氯化碳(CCl_4)所致肝损伤小鼠的保护作用。方法采用腹腔注射含0.2%CCl_4的花生油溶液造成小鼠急性肝损伤模型,连续给药7d,末次给药1h后取血、取肝脏,检测血清中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转移酶(AST)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;检测肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量;部分肝脏甲醛固定、HE染色后显微镜下观察肝组织形态学变化。结果与模型组比较,短穗兔耳草2.0,4.0,8.0 g·kg~(-1)均能显著降低肝损伤小鼠血清ALT、AST和TNF-α的水平,同时显著升高小鼠肝匀浆中SOD和GSH的含量,并降低肝匀浆中MDA含量,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);短管兔耳草8.0 g·kg~(-1)可显著降低肝损伤小鼠血清ALT、AST和TNF-α的水平(P0.05,P0.01),短管兔耳草2.0,4.0,8.0 g·kg~(-1)均可显著升高小鼠肝匀浆中SOD和GSH的含量(P0.01),但MDA含量无显著变化(P0.05)。病理切片显示短穗兔耳草各剂量组和短管兔耳草8.0 g·kg~(-1)给药组能显著改善肝组织的病理变化。结论短管兔耳草与短穗兔耳草均对CCl_4所致小鼠肝损伤有保护作用,短穗兔耳草效果较优。     

短穗兔耳草和短管兔耳草抗急性酒精肝损伤小鼠作用机制的研究

目的研究短穗兔耳草和短管兔耳草对急性酒精肝损伤的保护作用及其作用机制。方法将小鼠随机分为9组,每组10只,分别为正常组,模型组,联苯双酯组(150 mg·kg~(-1)),短穗兔耳草低、中、高剂量组(1.0,2.0,4.0 g·kg~(-1)),短管兔耳草低、中、高剂量组(1.0,2.0,4.0 g·kg~(-1))。采用灌胃50%乙醇的方法制备急性酒精肝损伤模型,连续灌胃给药7 d,于造模后16 h各组取血、取肝脏,测定血清中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转移酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核转录因子kappa B(NF-κB)各项指标,测定肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)的含量,PCR检测肝组织中TNF-α相对表达量。结果与模型组比较,短穗兔耳草和短管兔耳草高剂量组可显著降低血清中ALT、AST、TC、TG含量可显著升高肝匀浆中SOD、GSH含量,并降低MDA含量,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);短穗兔耳草各剂量组和短管兔耳草高剂量组可显著降低TNF-α、NF-κB的含量,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);短穗兔耳草和短管兔耳草高、中剂量组小鼠肝组织中TNF-α mRNA的相对表达量均显著降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论短穗兔耳草和短管兔耳草均具有抗急性酒精肝损伤作用,其作用与氧化应激及对炎症因子的调控相关。     

短管兔耳草的研究进展

短管兔耳草具有多种主治功能,广泛应用于中藏药制剂中。该文综述了近二十几年来短管兔耳草的研究状况,包括化学成分研究、提取工艺研究、药理作用研究、生理活性研究及临床应用。     

藏药直打萨曾药材显微特征研究

<正>藏药直打萨曾为玄参科兔耳草属植物短穗兔耳草LagotisbrachystachyaMaxim.的干燥带根全草,生于海拔2300-4100m的河滩草地、沟边、树林空地。分布于我国青海、甘肃、西藏等省区。为常用藏药的上品,性平,味苦。可止血排脓,治肺胃瘀血、子宫出血、肺结核、胸腔脓血、培根与赤巴合并症、血热性化脓症、黄水症等。短穗兔耳草的显微特征在《藏药志》中有一定描述,但未见其生药学方面研究     

藏药短穗兔耳草化学成分研究

短穗兔耳草为玄参科兔耳草属植物LagotisbrachystachyMaxim的全草,产于海拔2 30 0～4 10 0m的河滩草地、沟边、林间空地。分布于我国西北青海、甘肃、西藏等省区。作为藏药常用的上品药物。短穗兔耳草味苦、平,能清肺胃瘀血,排脓,治疗肺痈咳逆、胸满吐脓血等症[1 3] 。陈耀祖、张惠迪等人曾从短穗兔耳草中分离得到7种化合物[4 ] ,为了进一步探讨该植物的主要药用成分,作者从中分出了6个化合物,根据理化数据及波谱数据分别鉴定为....     

云南兔耳草中的黄酮类化合物

云南兔耳草Lagotis yunnanensis W．W．Smith系玄参科兔耳草属植物，为多年生草木，分布于云南西北部、西藏、四川西北部等海拔3350～4700m的高山草地。该植物味苦、性寒，清热解毒、行血调经、平逆降压。用于治疗肝胆病、高热、烦渴、肠痧、炭疽、疮毒、伤筋等症。目前，藏医用云南兔耳草主治     

藏药短管兔耳草质量控制方法研究

目的建立短管兔耳草的质量控制方法,为短管兔耳草的合理开发提供科学依据。方法参照《中国药典》2010年版附录相关方法,对短管兔耳草的水分、酸不溶性灰分、浸出物进行测定;以梓醇作为对照品建立短管兔耳草药材的薄层鉴别方法;以松果菊苷、大车前苷和毛蕊花糖苷作为指标性成分建立高效液相色谱含量测定方法。结果薄层色谱斑点清晰,特征性强,重复性好;高效液相色谱定量分析中,松果菊苷、大车前苷和毛蕊花糖苷线性范围分别为0.11~37.67μg/μl、0.12~31.33μg/μl、0.15~28.65μg/μl;平均加样回收率分别为99.7%、98.9%、98.5%。结论该文建立的实验检测方法科学合理,操作简便,稳定可靠,重复性好,可作为藏药短管兔耳草的质量控制方法。     

基于靶细胞捕集与分子对接的藏族药短管兔耳草调控URAT1活性成分筛选

目的:集成靶细胞捕集、液-质联用及分子对接技术研究藏药短管兔耳草调控尿酸转运体1(URAT1)成分及其与URAT1的结合机制,为基于藏族药短管兔耳草的降尿酸新药开发奠定物质与理论基础。方法:以可表达URAT1的HK-2细胞为靶细胞捕集藏族药短管兔耳草成分,运用超高压液相色谱飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术对捕集成分进行鉴定,基于分子对接技术研究捕集成分与URAT1的结合机制。结果:HK-2细胞共捕集了短管兔耳草8个成分,经UPLC-Q-TOF-MS鉴定,分别为金丝桃甘、大车前苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、黄大花洋地黄苷、假荆芥属苷、异黄大花洋地黄苷、高车前苷和木犀草素。分子对接结果显示这些成分可与URAT1通过氢键,范德华力,pi-pi作用和疏水作用等方式进行结合,但化合物与URAT1的结合机制和强弱,与化合物结构和类型密切相关。结论:靶细胞捕集,UPLC-Q-TOF-MS与分子对接集成技术可成功阐明藏族药短管兔耳草调控URAT1成分及成分与URAT1的结合机制,研究结果为基于藏族药短管兔耳草的降尿酸新药开发奠定一定的物质与理论基础。     

跌打镇痛液对家兔耳微循环的影响

目的:通过观察跌打镇痛液对家兔耳微循环的影响,对跌打镇痛液活血化瘀作用作初步探讨和研究。方法:用微循环观测仪观测耳廓微血管管径、血流速度、血流量等指标,观察跌打镇痛液对家兔耳微血管血流量变化。结果:缺三角草的跌打镇痛液用药前后血流量无明显差异,麝香舒活精组、三角草组及跌打镇痛液高、低剂量组用药前后血流量有显著性差异。结论:跌打镇痛液对家兔耳微循环具有明显的促进作用,其主药三角草起着重要作用。