外周血造血干细胞动员后采集时机的快速动态监测

目的 探讨一种简单、快速判断外周血造血干/祖细胞最佳采集时机的方法.方法 利用Sysmex XT 2000I多通道血细胞分析仪的VCS和化学染色技术,对9例异基因外周血造血干细胞(Allo-PBSCT)的健康供者和5例自体外周血造血干细胞(auto-PBSCT)患者,在动员过程中采集外周血进行外周血循环幼稚细胞(PBCIC)检测.同时应用流式细胞术(FCM)和集落培养法分别对上述外周血中的CD34 细胞、粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)进行检测,观察三者之间的相关性.结果 PBCIC与CD34 细胞及CFU-GM呈良好的正相关,相关系数分别为0.789和0.877.健康供者干细胞动员后PBCIC的峰值出现于使用G-CSF后的第5～6天,PBCIC的变化幅度较CD34 和CFU-GM的变化幅度大.结论 利用Sysmex XT 2000I多通道血细胞分析仪检测PBCIC数能快速简便地监测外周血造血干/祖细胞的变化,为判断最佳采集时机提供了一种快捷简便的参考方法.     

COM.TEC型血细胞分离机采集外周血干细胞效果观察

目的 观察COM.TEC型血细胞分离机MNC程序采集外周血造血干细胞效果.方法 用COM.TEC型血细胞分离机MNC程序采集16例血液系统肿瘤患者外周血干细胞,患者采用化疗、粒细胞集落刺激因子动员,采集的干细胞用流式细胞仪检测CD34+细胞数.共采集32次,每例采集2次,每次处理抗凝全血(9 158±2 166)mL,抗凝剂(919.78±230.60)mL,时间(178.1±38.0)min.结果 采集1次CD34+细胞数为(1.62±0.32)×106/kg,MNC采集效率为(81.25±14.57)%,单采后患者血小板(plt)、血红蛋白(Hb)、红细胞比容(Hct)分别下降13.0%、7.2%、9.1%,与采集前比较,差异无统计学意义(P＞0.05).采集过程中未发生严重不良反应.结论 COM.TEC型血细胞分离机MNC程序能采集到血小板含量低、产量高而有效的自体CD34+细胞,采集方法可靠,可以满足临床治疗要求.     

MCS+增强型血细胞分离机采集外周血造血干细胞探讨

目的 初步探讨增强型血细胞分离机(MCS+)在采集外周血造血干细胞(peripheral blood stem cells,PBSC)中的应用,对影响采集的相关因素进行分析.方法 总结本院2004～2007年26例自/异体共48次PBSC采集,分析采集成功率、采集物的各项指标、参数设定及各种影响因素.结果 26例患者其中3例(11.5%)行肘静脉穿刺,23例(88.5%)股静脉插管.每次平均采集时间(342±43)min,处理全血量(10 128±1877)mL,平均循环数32±8,终产品(113±25)mL,单个核细胞数(MNC)(148.88±46.47)×109/L,MNC采集率(93.2±2.4)%,CD34+ 细胞数(7.91±3.48)×106/kg .26例患者中4例采集1次,22例连续采集2次,共48次采集,全部病例均获造血功能重建,无移植相关死亡.结论 采用MCS+ 采集PBSC,应根据不同患/供者的实际情况,合理设置各种采集参数、选择适当穿刺部位,经1～2次采集,均能收集到足够高质量的PBSC并安全用于移植,满足临床治疗要求.     

枸杞对小鼠辐射损伤后造血系统修复的影响

目的 探讨枸杞在小鼠辐射损伤后造血系统修复过程中的作用。方法 小鼠随机分为3组,正常对照组不做任何处理,喂饲正常饲料;另外2组,给予4.5Gy照射后,喂饲正常饲料或添加枸杞的饲料,1个月后,处死小鼠,应用流式细胞仪分析外周血、脾脏、胸腺及骨髓中各种血细胞。结果 枸杞饲料组小鼠,外周血B细胞增多,骨髓前体B细胞及未成熟B细胞增多,造血干、祖细胞均显著减少。结论 枸杞促进辐射损伤后造血干细胞动员,加速造血系统的恢复。     

儿童外周血造血干细胞采集方法与效果评价

目的:探讨儿童外周血造血干细胞(PBSC)的采集方法,并对采集效果进行评价。方法:患者采用化疗和G-CSF或GM-CSF动员,异体供者用G-CSF动员,待WBC数回升至>5.0×109/L,应用CS-3000 Plus、COM TEC和COBE Spectra 3种血细胞分离机进行PBSC采集,设定循环血量为总血容量(TBV)的2～3倍,对于体重<20 kg,红细胞压积(HCT)<24%或者TBV≤1 100～1 650 ml的小儿,须采用经25 Gyγ射线照射的同型少白细胞红细胞预注管路和低流速分离(全血流速一般为10～30 ml/min)。用流式细胞仪检测所采集干细胞的CD34+细胞数,并计数单个核细胞(MNC)数。分析采集细胞中CD34+细胞数与采前MNC数量及采集循环血量的关系。结果:使用CS-3000 Plus血细胞分离机成功采集10例,COBE Spectra血细胞分离机成功采集18例,COMTEC血细胞分离机成功采集3例。采集次数为1～5次,平均1.5次,获得CD34+细胞数(7.9±2.9)×106/kg,MNC数(7.4±3.1)×108/kg。相关性分析显示,所采集到的CD34+数量和采集前MNC数、采集的循环血量呈正相关(r2=0.6229,P<0.0001;r2=0.1905,P=0.0141)。结论:根据儿童患者/供者的体重、TBV、动员情况和循环血量等因素选择合适采集方法,经过1～2次单采都可以安全地采集到高浓度的、能满足临床需要的PBSC。     

XE-2100全自动血细胞分析仪检测外周血造血干/祖细胞

目的探讨XE-2100全自动血细胞分析仪在检测外周血造血干/祖细胞(HSC/HPC)的临床应用.方法采用XE-2100全自动血细胞分析仪上的未成熟细胞信息(IMI)通道和流式细胞术(FCM)分别对10例健康新生儿脐血、20例白血病患者及1例异体外周血干细胞移植(Allo-PBSCT)供者经动员后不同时间外周血中造血干/祖细胞动态变化进行检测.结果在脐血和PBSCT供者的外周血中,IMI检测的HSC/HPC的百分率与FCM检测的CD34 细胞的百分率有良好的相关性,r=0.82(P＜0.01).标本批内变异系数(CV)小于10%;对存在有幼稚细胞的白血病患者,两种方法的相关性差.供者经动员后,HPC与CD34 细胞同时上升,于第5天同时出现峰值.结论在同种异体外周血干细胞移植(Allo-PBSCT)时,选择健康人作供体,XE-2100全自动血细胞分析仪能简捷、快速、费用经济地检测外周血造血干/祖细胞,为临床上判断外周血干细胞最佳采集时机提供了一种新的参考方法.     

氨磷汀对化疗中外周血造血干/祖细胞的保护作用

目的　评估氨磷汀 (amifostine ,AMF)在保护造血干 /祖细胞免受化疗药物依托泊甙 (etoposide ,VP 16)损伤方面的作用。方法　提取新鲜和冻存的外周血造血干细胞 (PBSC)和HL 60细胞 ,分为AMF VP 16组、VP 16组和空白对照组 ,用台盼蓝拒染法检测细胞活性 ,CFU GM集落培养计数 ,流式细胞仪测定细胞的凋亡率。结果　新鲜和冻存的PB SC样本中 ,AMF VP 16组的细胞存活率和集落形成能力较VP 16组显著提高 (均P <0 .0 5 ) ;HL 60细胞样本中 ,AMF VP 16组与VP 16组凋亡率的差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论　AMF能保护造血干 /祖细胞免受化疗药物VP 16的损伤 ,并且不影响VP 16对HL 60细胞的杀伤效果。     

脐血单个核细胞和CD34+细胞体外扩增造血干/祖细胞

考察了脐血单个核细胞(MNC)和CD34+富集细胞在SCF+IL-3+IL-6+FL+Tpo细胞因子组合下的体外扩增特性.实验发现CD34+富集细胞具有很高的扩增潜力,通过3周培养总细胞扩增了(883.2±322.4)倍,而MNC仅扩增了(53.3±6.2)倍.对比细胞集落生成和CD34+细胞的扩增发现,MNC的集落密度由最初的(270.9±54.9)CFCs/105cells上升至第7天的(1 496.3±417.7)CFCs/105cells,CD34+细胞百分比则由最初的(0.99±0.18)%上升至第7天的(4.4±1.9)%,而CD34+富集细胞在培养过程中,虽然集落总数和CD34+细胞总数始终呈上升趋势,但是其集落密度和CD34+细胞百分比则始终呈下降趋势.在两种起始细胞培养中,CFU-GM(粒细胞-巨噬细胞集落形成单位)在集落中的含量逐渐增加,BFU-E(爆式红细胞集落形成单位)含量则逐渐降低.在3周的短期培养中,MNC可以得到更多的集落形成细胞(CFC)和CD34+细胞.     

外周血造血干细胞动员和采集13例临床分析

目的：探讨外周血干细胞动员方案和采集效果。方法：对我院自2011年以来9例恶性血液病及4例健康供者予以联合化疗＋粒细胞集落刺激因子（G-CSF）或单用G-CSF进行动员,再予以血细胞分离机行外周血干细胞采集,分析不同年龄组、疾病及动员方案等对采集效果的影响。结果：13例外周血造血干细胞均成功采集,供者组（G-CSF方案）动员时间明显小于疾病组（化疗＋G-CSF方案）,两组之间动员及采集效果差异无统计学意义,不同年龄分组之间动员及采集效果差异也无统计学意义。结论：根据不同疾病采取相应动员采集方案,可成功采集,采集过程是安全的。     

枸杞对小鼠辐射损伤后造血系统修复的促进作用

目的 探讨枸杞在小鼠辐射损伤后造血系统修复过程中的作用。方法 小鼠随机分为3组,正常对照组不做任何处理,喂饲正常饲料;另外2组,给予4.5 Gy照射后,喂饲正常饲料或添加枸杞的饲料,1个月后,处死小鼠,应用流式细胞仪分析外周血、脾脏、胸腺及骨髓中各种血细胞。结果 枸杞饲料组小鼠,外周血细胞总数及B细胞增多,骨髓细胞总数减少,骨髓前体B细胞及未成熟B细胞增多,造血干、祖细胞均显著减少。结论枸杞促进辐射损伤后造血干细胞动员及分化,加速造血系统的恢复。     

动员的外周血干/祖细胞中P21的表达与CD34+细胞的相关性

目的检测动员的外周血干/祖细胞中P21的表达及与CD34+细胞的相关性,探讨其在动员过程中的变化及意义.方法选取异基因外周血干细胞移植正常供者9例和自体外周血干细胞移植者(急性白血病患者)6例,运用流式细胞术检测动员的外周血干/祖细胞中CD34+细胞及其亚群,用免疫细胞化学的方法检测外周血动员前后P21的表达.结果动员的外周血干/祖细胞中P21的表达明显高于动员前,二者间差异有统计学意义(P<0.05);动员的外周血干/祖细胞中CD34+细胞比例与P21的表达率呈正相关(r=0.553).结论外周血干/祖细胞动员过程中P21表达增高,可能与其促进祖细胞增殖、调控分化过程及抗凋亡活性有关.     

脐血造血细胞的冷冻保存方法的比较

目的 :比较程控降温和 - 70℃冰箱直接保存脐血造血细胞对细胞活性的影响及免疫磁珠分离法对细胞生物学活性的影响。方法 :用密度梯度离心法分离出脐血中单个核细胞后 ,采用联合冷冻保护剂经程控降温后存放于液氮和直接存放于 - 70℃冰箱两种方法冷冻保存一个月 ,从细胞活力、细胞回收率、集落形成能力、集落回收率等方面比较这两种冷冻方法的优劣。另外 ,用免疫磁珠分离法正性分选脐带血中CD34+细胞 ,流式细胞仪计数分选前后的CD34+细胞的纯度及回收率 ,并分别进行分选前后的细胞培养。结果 :细胞活力、细胞回收率、集落形成能力、集落回收率在冷冻的两组间差异不显著。用免疫磁珠分选后CD34+细胞纯度达 88.3% ,回收率为 4 6 .2 % ,分选后的CD34+细胞比分选后CD34 细胞的细胞活力及集落形成能力明显要高。结论 :两种方法均可对脐血造血细胞进行保存。免疫磁珠分选法能够提供高纯度的造血干细胞 ,其分选过程不会影响细胞的活力及集落形成能力 ,为CD34+细胞分选和移植的临床应用提供实验依据     

人参多糖对小鼠造血干/祖细胞的动员作用

目的:探讨人参多糖(GPS)对小鼠造血干/祖细胞(HSPC)的动员作用,为从植物多糖中寻找造血干细胞动员剂提供实验依据.方法:采用WBC、MNC计数、免疫细胞化学、流式细胞术和造血祖细胞体外培养检测经GPS动员后外周血WBC、MNC、CD34 细胞和CFU-Mix产率的变化.结果:给小鼠尾静脉注射GPS 2mg/kg后4h外周血WBC、MNC升高达到峰值,为NS组的3倍和3.5倍;外周血中CD34 细胞百分率和CFU-Mix产率分别为0.0079±0.0010和(25.0±9.1)cfu/2×105MNC,显著高于NS组;GPS和G-CSF联合动员时外周血WBC、MNC数量,CD34 细胞百分率和CFU-Mix产率都明显优于单用GPS的效果.结论:人参多糖对小鼠HSPC有一定动员作用,与G-CSF联合应用有协同作用.     

瑞舒伐他汀钙对冠心病患者外周血内皮前体细胞水平的干预作用

目的 观察瑞舒伐他汀钙片对冠心病患者外周血CD34 与VEGFR-2(血管内皮生长因子-2) 共同标记的血管内皮前体细胞CD34+/VEGFR-2+EPCs 水平的影响,进一步研究他汀类的非调脂作用.方法 选取经皮冠状动脉造影检查明确诊断的冠心病患者112 例,按结果分为单支病变组(37 例)、双支病变组(36 例)、三支病变组(39 例),给予瑞舒伐他汀钙片(10mg1/ 晚) 治疗.治疗前及治疗1 月后,流式细胞仪检测外周血CD34+/VEGFR-2+ EPCs 在全血中所占的比例.结果 1) 瑞舒伐他汀钙片干预1 月后,血浆中总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-CH) 与干预前相比均有显著性下降(P<0.001),甘油三酯(TG) 与干预前相比,呈下降趋势(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C) 变化无统计学意义(P>0.05) ;2) 随着冠脉病变加重,外周血CD34+/VEGFR-2+EPCs 含量逐渐减少(P<0.05) ;3) 在冠状动脉同一病变程度上,冠心病患者外周血中CD34+/VEGFR-2+EPCs 水平较用药前明显上升(P<0.05).结论 他汀类药物除具有较好的调脂作用外,还可以提升外周血中循环内皮前体细胞的数量,有利于减慢冠状动脉粥样硬化进程.     

用CS-3000血细胞分离机进行自体外周血造血干/祖细胞采集的回顾性研究

目的 评价Baxter CS-3000 Plus血细胞分离机在外周血造血干/祖细胞采集中的效能及影响因素.方法 应用Baxter CS-3000 Plus血细胞分离机对50例患者采集104次,对采集数据进行回顾性分析.结果 采集过程中未发现严重不良反应.单次采集可获得单核细胞(MNC)2.13×108/kg(0.17～7.47×108/kg)、CD34 细胞2.27×106/kg(0.02～10.78×106/kg),平均采集2次即可达到采集目标.CD34 细胞与MNC细胞数呈明显正相关(r=0.598,P＜0.001).采集物CD34 细胞每千克体重计数与外周血CD34 细胞计数也呈正相关(r=0.688,P＜0.001),而与外周血白细胞总数、MNC、红细胞压积和患者年龄无相关性.性别和诊断不是CD34 细胞采集量的影响因素.结论 Baxtrr CS-3000Plus血细胞分离机可以安全高效地从外周血中分离出CD34 细胞;应用采集前外周血CD34 细胞计数可进行采集效能和采集时机的预测.     

循环内皮祖细胞数量与抑郁症的关系研究

目的 抑郁症患者外周血中循环内皮祖细胞（EPCs）数量的变化,探讨抑郁症患者血管内皮功能的改变及其与抑郁状态的关系.方法 选择抑郁症患者30例为病例组,正常健康成人30例为对照组,以CD34、CD133/AC133、VEGFR2/KDR荧光抗体标记EPCs,采用流式细胞仪检测两组循环EPCs的CD34^＋、CD34^＋/KDR^＋、CD133^＋/KDR^＋、CD34^＋/CD133^＋/KDR^＋表达情况.结果 抑郁症组的CD34^＋、CD34^＋/KDR^＋、CD133^＋/KDR^＋、CD34^＋/CD133^＋/KDR^＋细胞数均明显低于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.Pearson相关分析显示汉密尔顿抑郁量表总分与循环EPCs CD34^＋、CD34^＋/CD133^＋/KDR^＋细胞数呈负相关（P＜0.05）,与CD34^＋/KDR^＋、CD133^＋/KDR^＋细胞数无相关关系（P ＞0.05）.结论抑郁症患者的循环EPCs数量减少,且EPCs水平与抑郁症状的严重程度存在负相关.     

造血干细胞动员及采集的影响因素

目的研究影响外周血干细胞的动员及采集因素。方法35例血液病患者予以化疗＋粒细胞集落刺激因子（G—CSF）动员,15例正常供者予以G—CSF动员。用CobeSpectra血细胞分离机采集外周血干细胞。结果外周血造血干细胞的有效动员与被动员者的年龄、性别、体表面积、采集的循环血量及骨髓是否曾经累及无关,而与动员所应用的化疗的种类相关;以环磷酰胺（CTX）为主的化疗＋G—CSF动员优于柔红霉素＋阿糖胞苷（DA）＋G—CSF（P〈0．01）;CTX为主的化疗＋G—CSF动员产品单个核细胞与中剂量阿糖胞苷＋G—CSF动员无统计学差异,CD34^＋含量则CTX组显著优于DA组（P〈0．05）;中剂量阿糖胞苷＋G—CSF动员与DA＋G—CSF动员方案相比较,两组无统计学差异（P〉0．05）。结论外周血造血干细胞的有效动员与动员所应用的化疗种类相关,CTX为主的化疗＋G—CSF动员效果最佳,蒽环类药物动员效果相对较差并动员前尽量减少使用。     

银杏叶提取物对兔外周血干细胞动员的影响

目的:探讨银杏叶提取物对兔外周血干细胞的动员作用。方法:30只26²8周龄新西兰大白兔,体重为2.528周龄新西兰大白兔,体重为2.5³.0kg,随机分三组:银杏叶提取物组(Egb)、G-CSF组、生理盐水组,给药方法为腹腔注射7d,1次/d;给药后23.0kg,随机分三组:银杏叶提取物组(Egb)、G-CSF组、生理盐水组,给药方法为腹腔注射7d,1次/d;给药后2⁸d,采用外周血WBC和MNC计数、造血干细胞体外培养、免疫细胞化学等检测各组外周血WBC、MNC、CD34+细胞、CD49d阳性细胞、CFU-GM、CFU-MK、CFU-E的产率及兔骨髓基质细胞中VCAM-1阳性细胞百分率。结果:Egb组给药第7天外周血WBC、MNC数量达到高峰,分别为给药前的3倍和3.5倍;Egb组CD49d阳性细胞、外周血CD34+及骨髓基质细胞的VCAM-1阳性细胞百分率分别为(9.37±3.01)%、(0.63±0.37)%和(48.13±9.84)%,均高于生理盐水组;其中CFU-GM、CFU-MK和CFU-E产率分别为(12.94±3.03)%、(11.49±2.93)%和(24.52±8.62)%,均高于生理盐水组。结论:银杏叶提取物(Egb)对兔骨髓造血细胞有一定的增生作用,同时对外周血干细胞有一定的动员作用,这可能与其上调兔骨髓基质细胞和外周血粘附分子的表达有关。