O-ClcNAc修饰在谷氨酰胺诱导内毒素休克大鼠心肌组织HSP70表达中的作用

目的 探讨O位-N-乙酰葡糖胺(O-GlcNAc)修饰在谷氨酰胺诱导内毒素休克大鼠心肌组织热休克蛋白70(HSP70)表达中的作用.方法 健康雄性SD大鼠32只,随机分为4组(n=8),正常对照组(C组)仅静脉输注乳酸钠林格氏液;LPS组、G+LPS组和A+G+LPS组均静脉注射LPS10 mg/kg,G+LPS组给予LPS前1 h静脉注射谷氨酰胺0.75 g/kg,A+G+LPS组给予LPS前1h依次静脉注射谷氨酰胺0.75 g/kg和O-位-N-乙酰葡萄糖胺糖基转移酶抑制剂四氧嘧啶50 mg/kg.注射LPS后6 h处死大鼠,取心肌组织,测定O-GlcNAc和HSP70的表达水平.结果 与C比较,其他各组心肌O-GlcNAc和HSP70的表达水平均上调(P＜0.05);与LPS组比较,G+LPS组心肌O-GlcNAc和HSP70的表达水平上调(P＜0.05);与G+LPS组比较,A+G+LPS组心肌O-GlcNAc和HSP70的表达水平下调(P＜0.05).结论 O-GlcNAc修饰参与了谷氨酰胺诱导内毒素休克大鼠心肌HSP70表达上调.     

蛋白O-GlcNAc修饰在谷氨酰胺改善感染性休克大鼠血管低反应性中的作用

目的 评价蛋白O位-N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)修饰在谷氨酰胺改善感染性休克大鼠血管低反应性中的作用.方法 健康雄性SD大鼠32只、2～3月龄,体重250 ～ 300 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=8):假手术组(S组)、感染性休克组(C组)、谷氨酰胺组(G组)和四氧嘧啶组(A组).采用盲肠结扎穿孔法制备感染性休克模型.于造模前1hG组和A组经30 min静脉输注谷氨酰胺0.75 g/kg,A组同时腹腔注射四氧嘧啶90 mg/kg.于造模后6h、依次静脉注射去氧肾上腺素(PE) 0.5、1,0、2.0、2.5 μg/kg,每次间隔20 min,计算给药后MAP的增幅百分比.经心内穿刺采集血样,测定血清NO浓度.处死后取胸主动脉环行血管张力实验,计算离体血管环对PE反应的半数有效浓度(EC50)和最大效应(Emax);测定胸主动脉蛋白O-GlcNAc修饰和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平.结果 与S组比较,C组、G组和A组MAP增幅百分比、离体血管环对PE反应的Emax降低,离体血管环对PE反应的EC50、血清NO浓度、胸主动脉iNOS含量和蛋白O-GlcNAc修饰水平升高(P＜0.05);与C组比较,G组胸主动脉蛋 白O-GlcNAc修饰水平升高,离体血管环对PE反应的EC50降低,G组和A组MAP增幅百分比、离体血管环对PE反应的Emax升高,胸主动脉iNOS含量和血清NO浓度降低(P＜0.05);与G组比较,A组高体血管环对PE反应的EC50、血清NO浓度、胸主动脉iNOS含量升高,MAP增幅百分比、离体血管环对PE反应的Emax和蛋白O-GlcNAc修饰水平降低(P＜0.05).结论 谷氨酰胺通过提高蛋白O-GlcNAc修饰水平改善感染性休克大鼠血管低反应性.     

热休克蛋白90对大鼠缺氧心肌细胞丝氨酸苏氨酸蛋白激酶表达的影响

目的探讨内源性热休克蛋白90（HSP90）在缺氧心肌细胞丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（AKT）相关信号通路中的作用。方法建立新生Wistar大鼠心肌细胞缺氧模型，将细胞分为正常组、缺氧组、加入HSP90特异性阻断剂格尔德霉素后再缺氧组（格尔德霉素＋缺氧组）。于缺氧后1、3、6、12、24、48h用噻唑蓝法检测心肌细胞的活力；缺氧24h，原位缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡指数（AI）；缺氧1、3、6、12、24h，蛋白质印迹法检测大鼠心肌细胞中内源性HSP90及AKT表达水平。结果（1）缺氧24、48h，缺氧组、格尔德霉素＋缺氧组细胞活力均较正常组明显下降（P〈0．05）；格尔德霉素＋缺氧组细胞活力缺氧12h即开始明显下降，缺氧48h时明显低于缺氧组（P〈0．05）。（2）缺氧24h，缺氧组细胞AI为（10．7±1．2）％，明显高于正常组[（1．9±0．3）％．P〈0．05]；格尔德霉素＋缺氧组细胞AI为（26、3±5．3）％，明显高于缺氧组（P〈0．01）。（3）缺氧12h，缺氧组心肌细胞内源性HSP90及AKT表达水平高于正常组与格尔德霉素＋缺氧组；缺氧24h，缺氧组有所下降．格尔德霉素＋缺氧组则下降更明显。结论内源性HSP90对维持心肌细胞的活力有重要作用．缺氧心肌细胞AKT表达水平可受内源性HSP90表达水平的影响。     

谷氨酰胺诱导大鼠热休克蛋白70mRNA的表达

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是感染或非感染(如创伤、休克)等致病因素作用于机体后,诱发机体细胞合成的一组高度保守的蛋白质,谷氨酰胺(Glu-tam ine,Gln)作为体液中最丰富的氨基酸之一,对机体多个脏器有保护作用。一些研究表明,Gln在体外可促进果蝇Kc细胞HSP的表达[1];Gln诱导的HSP表达对肠道上皮细胞有保护[2]。但Gln是否能在动物的各个脏器引起HSP的表达及时间和量效关系如何,尚未见明确报道。本研究对此进行了实验观察,拟为临床应用提供理论依据。1材料和方法1.1主要试剂力太(批号J20020081,Fresennius Kabi公司,德国),…     

O-GlcNAc修饰在谷氨酰胺减轻脓毒症大鼠脑损伤中的作用

目的 评价O-GlcNAc修饰在谷氨酰胺减轻脓毒症大鼠脑损伤中的作用.方法 健康清洁级4周龄SD雄性大鼠60只,体重180-240 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组:假手术组(S组,n=12)、脓毒症组(CLP组,n=16)、谷氨酰胺组(G组,n=16)及谷氨酰胺+四氧嘧啶组(G+A组,n=1 6).采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立大鼠脓毒症模型,G组术毕静脉注射谷氨酰胺0.75 g/kg,G+A组术毕静脉注射谷氨酰胺0.75 g/kg及腹腔注射四氧嘧啶90 mg/kg,CLP组和S组注射等容量生理盐水.术后24h时记录神经反射评分,断颈处死,测定脑组织含水量,采用Western-blot法测定脑组 织O-GlcNAc表达水平,观察脑组织病理学结果.结果 与S组比较,CLP组、G组及G+A组大鼠脑组织含水量、神经反射评分升高(P＜0.05);与CLP组比较,G组和G+A组大鼠脑组织含水量、神经反射评分降低,G组大鼠脑组织蛋白质O-GlcNAc表达上调(P＜0.05);与G组比较,G+A组大鼠脑组织含水量、神经反射评分升高,脑组织蛋白质O-GlcNAc表达下调(P＜0.05);S组、CLP组及G+A组大鼠间脑组织蛋白质O-GlcNAc表达差异无统计学意义(P＞0.05).G组病理学损伤较CLP组及G+A组轻.结论 O-GlcNAc修饰参与了谷氨酰胺减轻脓毒症大鼠脑损伤的过程.     

谷氨酰胺对脂多糖诱导鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的 观察谷氨酰胺(Gln)对脂多糖(LPS)诱导鼠心肌细胞损伤的保护作用及可能机制.方法 乳鼠心肌细胞原代培养分成四组:G组,给予5 mM Gln; GL组,给予5 mM Gln+4μg/ml LPS;L组,给予4μg/ml LPS;C组(对照组)给予等量双蒸水.细胞干预处理6 h后,测定各组心肌细胞生存率、心肌细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活力、心肌细胞热休克蛋白(HSP)70及胞核热休克因子(HSF)-1蛋白水平和心肌细胞核HSF-1转录活性.结果 四组心肌细胞生存率差异无统计学意义.GL组、L组细胞培养液LDH活力明显高于C组(P<0.05),L组高于GL组.G、GL、L组细胞HSP 70蛋白表达水平、细胞核HSF-1蛋白表达水平及转录活性明显高于C组(P<0.05),GL组明显高于G组和L组(P<0.05).结论 Gln减少LPS诱导鼠心肌细胞的损伤,可能与Gln增加心肌细胞核内HSF-1水平及转录活性,进而促进HSP70蛋白表达有关.     

HSP70和iNOS表达在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的作用

为探讨热休克蛋白 70 (ＨＳＰ70 )和诱导型一氧化氮合酶 (ｉＮＯＳ)在缺血预处理对大鼠肾脏缺血再灌注中的作用 ,我们用免疫组化方法 ,对肾脏缺血大鼠模型的ＨＳＰ70和ｉＮＯＳ进行了检测。材料和方法　健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠 81只 ,体重 (2 37.2± 16 .6 ) ｇ ,雌雄不限。随机分为对照组 (ＣＯＮ)、缺血再灌注组(ＩＲ)、缺血预处理后缺血再灌注组(ＩＰＣ) ,每组 2 7只。ＩＰＣ组连续 3次左肾血管蒂缺血 5ｍｉｎ后再灌注 5ｍｉｎ ,再缺血 1ｈ ,然后再灌注 0、2、6ｈ取标本 ;ＩＲ组在切除右肾 30ｍｉｎ后 ,左肾缺血 1ｈ ,取标本时间同ＩＰＣ组…     

谷氨酰胺对人肺泡Ⅱ型上皮细胞热休克蛋白70表达的影响

目的评价谷氨酰胺对人肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞热休克蛋白（HSP）70表达的影响。方法取人肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞,在不含谷氨酰胺的DMEM培养液中孵育24h作为空白对照组（C组）,43℃孵育1h、37℃恢复4h作为阳性对照组（PC组）,不同浓度（2、4、8、12和16 mmol/L）谷氨酰胺的DMEM培养液中孵育24h作为不同浓度谷氨酰胺诱导组（Gln2组、Gln4组、Gln8组、Gln（12）组和Gln（16）组）,8mmol/L谷氨酰胺的DMEM培养液中孵育不同时间（1、2、6、12、24和48 h）作为不同时间谷氨酰胺诱导组（T1组、T2组、T3组、T4组、T5组和T6组）。分别采用RT-PCR和Western blot法检测HSP70 mRNA和蛋白的表达。结果与C组比较,PC组和不同浓度谷氨酰胺诱导组人肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞HSPTO mRNA和蛋白的表达均升高,Gln8组HSP70 mRNA和蛋白表达水平高于Gln2组、Gln4组、Gln（12）组和Gln（16）组（P＜0．01）,而与PC组相比差异无统计学意义（P＞0．05）。与C组比较,PC组和不同时间谷氨酰胺诱导组HSP70 mRNA和蛋白的表达均升高,T5组HSP70 mRNA和蛋白表达水平高于T1组、T2组、T3组、T4组和T5组（P＜0．01）,而与PC组相比差异无统计学意义（P＞0．05）。结论谷氨酰胺可明显上调体外培养人肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞HSP70 mRNA和蛋白的表达,并呈浓度和时间依赖性。     

谷氨酰胺诱导热休克蛋白70表达对高氧肺损伤的干预效果

目的观察谷氨酰胺诱导大鼠肺组织表达热休克蛋白70(HSP70)的作用及HSP70对高氧肺损伤的保护作用。方法健康清洁级雄性Wistar大鼠18只(体重252~286g),随机均分为谷氨酰胺组(G组)和对照组(C组):G组以0.75g/kg谷氨酰胺行腹腔注射,每天注射1次,连续3d;C组大鼠每天腹腔注射同等容积的生理盐水。于注射后第4天每组各取3只大鼠的肺组织,用免疫印迹法(Western blotting)检测HSP70表达,其余12只大鼠全部放入高氧环境(氧浓度95%)中继续喂养,观察在高氧环境下第6天两组大鼠肺组织形态学改变。结果注射谷氨酰胺后第4天,G组大鼠肺组织HSP70蛋白表达水平明显升高,其灰度值为20.34±2.26;C组HSP70蛋白表达水平较低,其灰度值为1.82±0.67,G组明显高于C组(P<0.05)。G组第6天肺部炎症表现为肺泡内极少量红细胞渗出;而C组病理改变为肺泡大小不等,肺泡腔变大,肺泡壁变薄,有肺大泡形成,肺泡内有出血和炎症细胞浸润。结论大鼠腹腔注射谷氨酰胺可明显增加肺组织HSP70表达,HSP70可减轻高氧肺损伤时肺组织炎性改变。     

热休克蛋白27、70与恶性肿瘤

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)广泛存在于生物体内,是一类在进化上高度保守的细胞应激蛋白.其中HSP27和HSP70在抗凋亡过程中发挥重要的作用,在多种肿瘤细胞中异常高表达,尤其是腺癌起源的肿瘤.HSP27和HSP70在恶性肿瘤的发生、发展中的作用及其机制是近年来研究的热点,有望对肿瘤的治疗提供新的平台.     

热休克蛋白70在大鼠急性打击损伤脊髓中的表达

目的观察急性打击损伤大鼠脊髓组织中热休克蛋白70（heat shock protein70，HSP 70）的表达。方法65只大鼠随机分为3组：正常对照组5只、手术对照组和脊髓损伤组各30只，采用改良Allen法建立脊髓损伤动物模型。手术对照组和脊髓损伤组分别于处置后的2h、6h、12h、24h、48h、72h这6个时间点各采集5只大鼠的脊髓。应用免疫组织化学染色方法观察不同时点各组脊髓中热休克蛋白的表达变化。结果在大鼠正常胸段脊髓中没有基础性HSP70的表达。打击造成急性脊髓损伤后2h，脊髓组织内出现HSP70的表达，损伤后24～48h脊髓组织中HSP70染色达到高峰，并维持至损伤后72h。结论在遭遇损伤性刺激后，脊髓组织在随后的2～72h内HSP70的表达明显增加；HSP70可能在阻止脊髓的继发性损伤方面发挥一定的作用。     

Ezrin shRNA联合HSP70对骨肉瘤细胞凋亡和增殖的影响

 目的 探讨Ezrin基因沉默联合热休克蛋白（heat shock protein, HSP）70诱导的免疫杀伤对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用人成骨肉瘤MG63细胞系作为研究对象,将人HSP70和Ezrin-shRNA的DNA片段分别克隆至含CMV和pU6双启动子的表达载体pGFP-V-RS中构建含HSP70和Ezrin-shRNA的真核表达载体pGFP-V-RS-shRNA和pGFP-V-RS-shRNA-HSP70。重组质粒分别转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆。荧光显微镜观察细胞形态及转染效果;荧光定量RT-PCR及蛋白印迹western blot检测稳定转染细胞株Ezrin和HSP70基因及蛋白水平的变化;采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡能力变化,Western blot检测凋亡及周期相关蛋白表达量变化;MTT法检测HSP70刺激产生特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对靶肿瘤细胞的杀伤作用。结果 荧光图像及基因和蛋白表达分析证实,首次成功构建同时沉默Ezrin和过表达HSP70的特异性载体。较单纯沉默Ezrin,同时过表达HSP70会在一定程度上减弱沉默Ezrin蛋白促进细胞凋亡和抑制增殖的效果,但与对照细胞相比,M63细胞凋亡率仍明显上升,自11.01%±0.22%上升至24.28%±0.50%,增殖速度则自395.14%±2.24%减少至310.00%±2.83%。另外,Western blot检测发现Ezrin-shRNA可促进凋亡基因Bax的表达,相反可降低抗凋亡基因Bcl-2和细胞周期蛋白Cyclin D1的表达。而Ezrin-shRNA/HSP70组较Ezrin-shRNA组促Bax表达和降低Bcl-2、细胞周期蛋白Cyclin D1表达有所减弱,但较阴性对照组仍有明显效果。MG63细胞的CTL细胞毒杀伤效应显示各效靶浓度下CT+IL-2+HSP70组的杀伤活性高于CT+IL-2组,最高达56.33%±1.95%。结论 同时沉默Ezrin、过表达HSP70既可以促进骨肉瘤细胞凋亡抑制其增殖,并利用HSP70诱导的CTL,增强对靶肿瘤细胞的杀伤作用。     

维持性血液透析患者炎症状态与血清热休克蛋白70的关系

目的探讨维持性血液透析（MHD）患者热休克蛋白70（HSP70）检测与炎症状态的关系。方法将MHD患者92例根据超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平分为2组：非炎症组（hs-CRP〈3mg／L）58例;炎症组（hs-CRP≥3mg／L）34例。检测2组患者血清前白蛋白（PA）、血白蛋白（Alb）、hs-CRP、血红蛋白（Hb）、HSP70、铁蛋白、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）等。结果尿毒症患者血清HSP70与hs-CRP、IL-6、TNF-α、铁蛋白等炎症指标无明显相关性;与Hb、Alb、总胆固醇等营养指标也无相关性。非炎症组透析前HSP70水平较低,透析后迅速升高（P=0．013）;而炎症组透析前后的HSP70水平差异无统计学意义（P=0．871）。结论炎症状态可能是导致炎症组HSP70升高的原因;但HSP70不能反映MHD患者是否存在慢性炎症状况,也不能反映其蛋白质营养状态。透析前、后HSP70水平检测可反映机体抗应激反应能力。     

川芎嗪预先给药对胎鼠海马神经细胞缺氧/复氧时c-fos和HSP70表达的影响

目的 探讨川芎嗪预先给药对胎鼠海马神经细胞缺氧/复氧时c-fos和热休克蛋白70(HSP70)表达的影响.方法 胎鼠海马神经细胞培养鉴定后,随机分为5组(n=24):正常对照组(C组)、缺氧/复氧损伤组(A/R组)、不同浓度川芎嗪预先给药组(L组、M组和H组).C组不制备缺氧/复氧模型;A/R组、L组、M组和H组制备缺氧/复氧模型;L组、M组和H组加入川芎嗪,终浓度分别为60、200和800μg/ml,孵育1 h后制备缺氧/复氧模型.缺氧/复氧模型制备方法:海马神经细胞置入90%N2-10%CO2培养箱中孵育2 h诱导缺氧,然后放入37 ℃、5%CO2培养箱中复氧24 h.处理结束后测定海马神经细胞凋率、细胞活力、c-fos和HSP70的表达水平.结果 与C组比较,A/R组、L组和H组海马神经细胞活力降低,细胞凋亡率升高(P＜0.01);与A/R组比较,L组、M组和H组海马神经细胞活力升高,细胞凋亡率降低,c-fos表达下调,HSP70表达上调(P＜0.05);与L组比较,M组和H组海马神经细胞活力升高,细胞凋亡率降低,c-fos表达下调,HSP70表达上调(P＜0.05);与M组比较,H组细胞活力下降,细胞凋亡率升高,c-fos表达上调,HSP70表达下调(P＜0.01).结论川芎嗪预先给药抑制胎鼠海马神经细胞缺氧/复氧时细胞凋亡的机制可能与下调c-fos表达,上调HSP70表达有关.     

吡那地尔超极化停搏对大鼠离体心脏蛋白激酶C及热休克蛋白70的影响

目的探讨吡那地尔超极化停搏对大鼠离体心脏蛋白激酶C（PKC）ε及热休克蛋白70 （HSP70）的影响。方法成年雄性SD大鼠,成功建立Langendorff离体再灌注模型的32个心脏,随机分为4组（n=8）：自然停搏组（A组）、St.Thomas组（B组）、吡那地尔超极化组（C组）和白屈菜赤碱组（D组）。A组、B组和C组K-H液平衡灌注15min后,A组停止灌注,B组灌注St.Thomas停搏液,C组灌注超极化停搏液;D组K-H液平衡灌注10min后,白屈菜赤碱液灌注5min,再灌注超极化停搏液。记录各组平衡灌注15min和再灌注20min时冠脉流量（CF）、心率（HR）、左室发展压（LVDP）、左室收缩峰压（LVSP）和左室压力瞬时最大变化率（dp/dtmax）;再灌注30min时测定心肌膜性PKCε和HSP70的表达。结果与K-H液平衡灌注15min时相比,再灌注20min时A组、B组和D组CF、HR、LVSP、LVDP及dp/dtmax降低（P〈0.05）;与C组相比,其余各组再灌注20min时CF、HR、LVSP、LVDP及dp/dtmax降低,膜性PKCε和HSP70的表达下调（P〈0.05）。结论吡那地尔超极化停搏通过上调膜性PKCε和HSP70表达,促进大鼠心肌缺血再灌注时心功能恢复。     

Lipopolysaccharide up-regulates heat shock protein expression in rat lung pericytes

BACKGROUND: Heat shock proteins (HSP) function as molecular chaperones, participating in protein folding and maturation throughout the cell. Serum HSPs may correlate with acute lung injury. Pericytes are perivascular cells located abluminally from endothelial cells, and play a regulatory role in capillary leak. It is our hypothesis that pericytes express HSP 60 and HSP 70, and these HSPs are up-regulated in response to lipopolysaccharide (LPS). METHODS: Rat microvascular lung pericytes were isolated and cultured. Cells from passages three to five were used and treated with LPS (control, 10 ng/mL, and 100 ng/mL) for either 4 or 18 h. Immunoblotting and real-time PCR were used to analyze the presence and quantity of HSP 60 and HSP 70. RESULTS: Immunoblotting revealed the presence of HSP 60 and HSP 70 in control pericytes. After 4 h of treatment with LPS (10 ng/mL and 100 ng/mL), no increase in protein expression of HSP 60 or HSP 70 was seen. However, after 18 h an increase in protein expression of HSP 60 and HSP 70 was seen. Real-time PCR demonstrated the presence of HSP 60 mRNA and HSP 70 mRNA in control pericytes. An increase in mRNA was seen after 18 h of LPS treatment, but not after 4 h. CONCLUSIONS: This study provides the first in vitro evidence that rat lung pericytes express HSP 60 and HSP 70. HSP 60 and HSP 70 are up-regulated after 18 h of LPS exposure. Pericyte heat shock protein expression may contribute to the lung's response seen in sepsis.     

热休克蛋白70和血红素加氧酶-1表达在肾缺血后处理减轻肾缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价热休克蛋白70(HSP70)和血红素加氧酶-1(HO-1)表达在肾缺血后处理减轻肾缺血再灌注损伤中的作用.方法健康雄性SD大鼠140只,体重250～280 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=35):假手术组(S组)仅开腹,游离双侧肾脏,分离双侧肾蒂不夹团;肾缺血再灌注组(I/R组)夹闭双侧肾蒂缺血45 min,恢复灌注;缺血后处理组(IPo组)夹闭双侧肾蒂45 min,再灌注10 s,缺血10 s,反复3次,恢复灌注;HSP抑制剂槲皮黄酮+缺血后处理组(Q+IPo组)缺血前1 h 腹腔注射槲皮黄酮100 mg/kg,余操作同IPo组.于再灌注即刻(T0)、1、3、6、12、24、48 h(T1～6)时各组随机取5只大鼠抽心脏血后取肾,检测肾组织HSP70、HO-1的mRNA和蛋白表达,T3时抽心脏血,测定血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)浓度、caspase-3 mRNA的表达,TUNNEL法检测肾组织凋亡细胞,计算凋亡指数(AI),光镜下观察肾组织病理学结果.结果 与S组比较,其余组T3时血清Cr和BUN浓度和AJ升高,caspase-3 mRNA表达上调,各时点HSF70、BO-1的mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,IPo组T3时血清Cr和BUN浓度和AI降低,caspase-3 mRNA表达下调,T1～5时HSP70、HO-1的mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05);与IPo组比较,Q+IPo组T3时血清Cr和BUN浓度和AJ升高,caspase-3mRNA表达上调,T1～5时HSP70、HO-1的mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).IPo组肾组织病理学损伤较I/R组减轻,Q+IPo组肾组织病理学损伤程度与I/R组相似.结论 HSP70和H0-1表达参与了肾缺血后处理减轻肾缺血再灌注损伤的过程.

Abstract：

Objective To evaluate the role of the expression of heat shock protein 70 (HSP70) and heme oxygenase-1 (HO-1) in the reduction of renal ischemia-reperfusion (I/R) injury by ischemic postconditioning in tats.Methods One hundred and forty healthy male SD rats weighing 250-280 g were randomized into 4 groups ( n = 35 each) : sham operation group (S group) ; I/R group; ischemic postconditioning group (IPo group); quercetin (an inhibitor of HSP) + ischemic postconditioning group (Q + IPo group). Renal I/R was produced by clamping bilateral renal pedicels for 45 min followed by reperfusion. In group S, bilateral kidneys were only exposed through a midline incision but their- pedicels were not clamped. In IPo and Q + IPo groups, 45 min ischemia was followed by three 10 s episodes of ischemia at 10 s intervals for reperfusion and in addition intraperitoneal quercetin 100 mg/kg was injected at 1 h before ischemia in group Q + IPo. Blood samples from hearts were obtained at 0, 1, 3, 6, 12, 24 and 48 h of reperfusion (T0-6) and the rats were then sacrificed and kidneys removed to detect the expression of HSP70 and HO-1 mRNA and protein in renal tissues. The blood samples obtained at T3 were used to determine serum creatinine (Cr) and urea nitrogen (BUN) concentrations and the expression of caspase-3 mRNA . The apoptosis in the renal tissues was detected using TUNEL and apoptotic index ( AI) was calculated. Microscopic examination was performed with light microscope. Results Compared with group S, the serum Cr and BUN concentrations and AI were significantly increased at T3,the expression of caspase-3 mRNA was up-regulated at T3, and the expression of HSP70 and HO-1 mRNA and protein was up-regulated at T0-6 in the other groups (P ＜ 0.05) . Compared with group I/R, the serum Cr and BUN concentrations and AI were significantly decreased at T3, the expression of caspase-3 mRNA was down-regulated at T3, and the expression of HSP70 and HO-1 mRNA and protein was up-regulated at T1-5 in group IPo ( P ＜ 0.05) . Compared with group IPo, the serum Cr and BUN concentrations and AI were significantly increased at T3, the expression of caspase-3 mRNA was up-regulated at T3, and the expression of HSP70 and HO-1 mRNA and protein was down-regulated at T1-5, in group Q + IPo ( P ＜ 0.05) . The microscopic examination showed that the renal I/R injury was significantly attenuated by ischemic postconditioning and the degree of injury in group IPo was similar to that in group I/R. Conclusion The expression of HSP70 and HO-1 is involved in the reduction of renal I/R injury by ischemic postconditioning in rats.