O-ClcNAc修饰在谷氨酰胺诱导内毒素休克大鼠心肌组织HSP70表达中的作用

目的 探讨O位-N-乙酰葡糖胺(O-GlcNAc)修饰在谷氨酰胺诱导内毒素休克大鼠心肌组织热休克蛋白70(HSP70)表达中的作用.方法 健康雄性SD大鼠32只,随机分为4组(n=8),正常对照组(C组)仅静脉输注乳酸钠林格氏液;LPS组、G+LPS组和A+G+LPS组均静脉注射LPS10 mg/kg,G+LPS组给予LPS前1 h静脉注射谷氨酰胺0.75 g/kg,A+G+LPS组给予LPS前1h依次静脉注射谷氨酰胺0.75 g/kg和O-位-N-乙酰葡萄糖胺糖基转移酶抑制剂四氧嘧啶50 mg/kg.注射LPS后6 h处死大鼠,取心肌组织,测定O-GlcNAc和HSP70的表达水平.结果 与C比较,其他各组心肌O-GlcNAc和HSP70的表达水平均上调(P＜0.05);与LPS组比较,G+LPS组心肌O-GlcNAc和HSP70的表达水平上调(P＜0.05);与G+LPS组比较,A+G+LPS组心肌O-GlcNAc和HSP70的表达水平下调(P＜0.05).结论 O-GlcNAc修饰参与了谷氨酰胺诱导内毒素休克大鼠心肌HSP70表达上调.     

谷氨酰胺抑制人外周血单个核细胞细胞因子表达的机制

目的 探讨谷氨酰胺抑制人外周血单个核细胞(PBMCs)细胞因子表达的分子机制.方法 Ficoll密度梯度离心法提取健康志愿者新鲜PBMCs,将分离得到的细胞分为两部分.第一部分细胞分为六部分,分别用不同浓度的Gln(0、8、15 mmol/L)预处理0.5 h及2.0 h后,再用10 g/L内毒素刺激4.0 h,留取细胞及上清.第二部分细胞分为A、B、C三组,将热休克蛋白(HSP)阻断剂Quercetin(200 μmol/L)加入A组及B组中,作用0.5 h;再将谷氨酰胺8 mmol/L加入A组和C组中;1.0 h后在三组中均加入10 g/L内毒素刺激4.0 h,留取细胞及上清.酶联免疫吸附(ELISA)测定上清中PBMCs肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-10(IL-10)的表达,免疫印迹(Western Blot)技术检测细胞内HSP70的表达情况.对指标检测结果进行统计学分析.结果 8 mmol/L及15 mmol/L谷氨酰胺预处理0.5 h后能够明显增加HSP70的表达(P<0.05),8 mmol/L谷氨酰胺预处理2.0 h后能明显增加HSP70的表达(P<0.05).同时TNF-α和IL-10表达受抑(P<0.05);使用HSP70阻断剂Quercetin后,HSP70表达量明显下降,同时TNF-α和IL-10表达增加(P<0.05).结论 谷氨酰胺抑制内毒素刺激下PBMCs细胞因子的表达与HSP70介导有关.     

谷氨酰胺对脂多糖诱导鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的 观察谷氨酰胺(Gln)对脂多糖(LPS)诱导鼠心肌细胞损伤的保护作用及可能机制.方法 乳鼠心肌细胞原代培养分成四组:G组,给予5 mM Gln; GL组,给予5 mM Gln+4μg/ml LPS;L组,给予4μg/ml LPS;C组(对照组)给予等量双蒸水.细胞干预处理6 h后,测定各组心肌细胞生存率、心肌细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活力、心肌细胞热休克蛋白(HSP)70及胞核热休克因子(HSF)-1蛋白水平和心肌细胞核HSF-1转录活性.结果 四组心肌细胞生存率差异无统计学意义.GL组、L组细胞培养液LDH活力明显高于C组(P<0.05),L组高于GL组.G、GL、L组细胞HSP 70蛋白表达水平、细胞核HSF-1蛋白表达水平及转录活性明显高于C组(P<0.05),GL组明显高于G组和L组(P<0.05).结论 Gln减少LPS诱导鼠心肌细胞的损伤,可能与Gln增加心肌细胞核内HSF-1水平及转录活性,进而促进HSP70蛋白表达有关.     

血红素氧合酶1对大鼠心肌细胞急性损伤的保护作用

目的 了解血红素氧合酶1(HO-1)对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其机制. 方法分离培养SD乳鼠心肌细胞,根据细胞悬液中所加刺激物的不同分为对照组(A组):常规培养;LPS组(B组):培养液中加入终浓度为30 μmol/L的LPS,作用1 h;LPS+氯化血红素(heroin)组(C组):加入终浓度为5 μmol/L的heroin,作用1 h后再加入30 μmol/L的LPS作用1 h;LPS+ZnPP组(D组):加入终浓度为3 μmol/L的ZnPPⅨ,作用1 h后再加入30 μmol/L的LPS作用1 h.硫代巴比妥酸比色法及黄嘌呤氧化酶法测定各组心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量;检测心肌细胞节律、存活率及凋亡率;用反转录-PCR法检测HO-1 mRNA表达;蛋白质印迹法检测心肌细胞HO-1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子кB(NF-кB)的表达. 结果 B、C、D组LDH和MDA值分别为(113±15)、(79±13)、(154±22)U/L和(1.88±0.36)、(1.16±0.32)、(2.84±0.44)mmol/L,高于A组[(69±10)U/L、(0.87±0.25)mmol/L,P<0.05],而以上3组的SOD值[(17.8±1.8)、(22.5±2.4)、(13.4±1.5)U/mL]却低于A组[(24.3±3.6)U/mL,P<0.05].B、C、D组心肌细胞节律,凋亡率均高于A组(P<0.05),存活率低于A组(P<0.05).B、C、D组心肌细胞HO-1 mRNA表达均高于A组(P<0.05),其中C组最高.B、C、D组心肌细胞HO-1、TNF-α、NF-кB值均高于A组(P<0.05),其中C组的HO-1值最高,D组TNF-α、NF-кB值最高. 结论 LPS对心肌细胞有明显的损伤作用.HO-1可能通过抗炎性反应、减轻氧化应激以及减少细胞凋亡途径,对心肌细胞产生保护作用.     

谷氨酰胺抑制人外周血单个核细胞细胞因子表达的机制

Objective To investigate the mechanism that glutamine (Gin) downregulates the cytokine expression in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated human peripheral blood mononuclear cells (PMBCs). Methods PMBCs were extracted from healthy volunteer by density gradient centrifugation, the cells were divided into two parts. The first part of PMBCs was pretreated with Gin of the concentration of 0, 8,15 mmol/L for 0.5 h and 2.0 h respectively, then stimulated by LPS for 4. 0 h. Cells and supematants were collected. The second part of PBMCs was divided into group A, B and C. Group A and B were preteated with HSP70 blocker (Quereetin) for 1.0 h, then were stimulated by LPS for 4. 0 h. Cells and supematants were also collected. The release of TNF-α and IL-10 was analyzed via enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and HSP70 via Western Blot. In this experiment, the effect of Quercetin on TNF-α,IL-10 and HSP70 expression in human PBMCs was assessed. Results Gin led to an increase in HSP70 expression, and decreased TNF-α, IL-10 release at 4. 0 h after LPS stimulation when 8 mmol/L glutamine pretreated for 0.5 h and 2. 0 h, 15 mmol/L glutamine pretreated for 0.5 h (P < 0.05). The expression level of HSP70 was significantly decreased, however, the expression of TNF-α and IL-10 was enhanced in Quercetin group (P <0.05). Conclusion The effect of glutamine attenuating cytokine release in PBMCs is related to the enhancement of HSP70 expression.     

蛋白质氧位N-乙酰葡萄糖胺修饰对脓毒症大鼠肾脏的保护作用

目的 探讨应用谷氨酰胺(Gln)增加蛋白质氧位N-乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)修饰对脓毒症大鼠肾脏保护中的作用.方法 雄性SD大鼠,体重180 g～240 g,完全随机法分为5组:对照组(S组,行开关腹手术,n=12)；脓毒症组[C组,行盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)术,n=16];Gln治疗组(G组,行CLP术,术后即刻Gln 0.75 g/kg微量泵注1h,n=16)；槲戍素+Gln干预组(Q组,行CLP术,术毕时腹腔注射槲皮素0.4 g/kg,继予Gln微量泵注,n=16)；四氧嘧啶+Gln干预组(A组,行CLP术,术毕时腹腔注射四氧嘧啶90 mg/kg后,继予Gln微量泵注,n=16).维持麻醉并记录CLP术后16 h血压.24h测动脉血气分析,血浆肌酐(Cr)、尿液肾损伤分子-1(kidney injury molecule-1,KIM-1)含量,肾组织匀浆热休克蛋白70 (HSP70)、O-GlcNAc表达水平.结果 CLP术后16h,C组平均动脉压(MAP)下降幅度超过基础值30％,G组、Q组、A组大鼠MAP下降明显,24h动脉血乳酸浓度C组、G组、Q组、A组较S组明显升高(P＜O.05).CLP术后24 h,C组血Cr为(57.4±4.9) mmol/L,尿KIM-1为(66.3±8.8) ng/L,较S组的血Cr(35.7±5.9) mmol/L、尿KIM-1 (47.0±3.7) ng/L明显升高,G组血Cr为(42.2±5.4)mmol/L,尿KIM-1为(53.7±3.0) ng/L,较C组明显降低,Q、A两组血Cr分别为(51.4±2.9)、(57.4±2.6)mmol/L,尿KIM-1分别为(70.9±17.7)、(75.3±10.9) ng/L,较G组明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).肾组织蛋白质O-GlcNAc修饰水平G组较C组明显升高,A组较G组明显降低(P＜0.05)；肾组织HSP70表达C组较S组明显升高,G组较C组明显升高,Q、A组较G组明显下降(P＜0.05).结论 Gln通过增加细胞蛋白质O-GlcNAc修饰调节炎症反应,减轻脓毒症大鼠的肾损伤.     

氢对脂多糖-尼日利亚菌素诱导巨噬细胞焦亡的影响及lncRNA NEAT1在其中的作用

目的评价氢对脂多糖(LPS)-尼日利亚菌素诱导巨噬细胞焦亡的影响及长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)在其中的作用。方法体外培养人单核巨噬细胞系THP-1, 采用随机数字表法分为4组(n=25):对照组(C组)、LPS-尼日利亚菌素组(LN组)、富氢液培养基+LPS-尼日利亚菌素组(H+LN组)和慢病毒转染+富氢液培养基+LPS-尼日利亚菌素组(LV+H+LN组)。C组细胞使用普通培养基正常培养24 h;LN组加入终浓度为100 ng/ml的LPS和10 μmol/L的尼日利亚菌素孵育24 h;H+LN组将普通培养基更换为0.6 mmol/L的富氢液培养基, 随即加入终浓度为100 ng/ml的LPS和10 μmol/L的尼日利亚菌素孵育24 h;LV+H+LN组使用经慢病毒转染致NEAT1稳定过表达的THP-1细胞, 并将普通培养基更换为0.6 mmol/L的富氢液培养基, 随即加入终浓度为100 ng/ml的LPS和10 μmol/L的尼日利亚菌素孵育24 h。采用CCK-8法检测细胞活力, 比色法检测LDH释放量, ELISA法检测培养基IL-1β和IL-...     

自吞噬在脂多糖诱导HL-1心肌细胞损伤中的作用

目的 评价自吞噬在脂多糖(LPS)诱导HL-1心肌细胞损伤中的作用.方法 采用随机数字表法,将培养的HL-1细胞随机分为4组(n=15):正常对照组(C组)不予任何处理,继续培养24h;LPS组在细胞培养液中加入LPS(终浓度1 μg/ml);自吞噬诱导剂纳巴霉素组(R组)在细胞培养液中加入纳巴霉素(终浓度0.2 μg/ml),孵育48 h时加入LPS(终浓度1 μg/ml);自吞噬抑制剂三甲基嘌呤组(3-MA组)在细胞培养液中加入加入3-MA(终浓度10 mmol/L),孵育48 h时加入LPS(终浓度1μg/ml).各组孵育4h时测定自吞噬蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)表达水平,并观察线粒体超微结构,计算自吞噬体数量,测定线粒体光密度值、线粒体膜电位(JC-1).于孵育24h时测定细胞凋亡率和Caspase-3活性.结果 与C组比较,LPS组LC3Ⅱ表达水平、线粒体光密度值、细胞凋亡率和Caspase-3活性升高,自吞噬体数量增加,JC-1降低(P＜0.05);与LPS组比较,R组LC3Ⅱ表达水平和JC-1升高,自吞噬体数量增加,线粒体光密度值、细胞凋亡率和Caspase-3活性降低,3-MA组LC3Ⅱ表达水平和JC-1降低,自吞噬体数量减少,线粒体光密度值、细胞凋亡率和Caspase-3活性升高(P＜0.05).R组线粒体超微结构损伤较LPS组减轻,3-MA组较LPS组加重.结论 自吞噬可减轻LPS诱导的HL-1心肌细胞损伤,机制可能与清除受损线粒体,改善线粒体功能,抑制细胞凋亡有关.     

ROS/GADD153蛋白在血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞凋亡中的作用

目的 探讨活性氧簇(ROS)/GADD153蛋白在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞凋亡中的作用.方法 体外培养乳鼠心肌细胞,随机分为9组(n=5),Ⅰ组(C组)常规心肌细胞培养,不予其他处理;Ⅱ组(AngⅡ6组)给予100 nmol/L AngⅡ,孵育6 h;Ⅲ组(AnsⅡ12组)给予100 nmol/L AngⅡ,孵育12 h;Ⅳ组(ArtsⅡ24组)给予100 nmol/L Ang Ⅱ,孵育24 h;V组[N-乙酰-L半胱氨酸(NAC)+AngⅡ组]预先给予抗氧化剂NAC 5 mmol/L,2 h后给予100 nmol/L Ang Ⅱ,孵育24 h;Ⅵ组(NAC组)仅给予NAC 5 mmol/L,孵育24 h;Ⅶ组(anti-ODN组)GADD153反义寡核苷酸10 μmol/L转染24 h后,加入100nmoFL AngⅡ,孵育24 h;Ⅷ组(mis-ODN组)GADDl53错义寡核苷酸10 μmol/L转染24 h后,加入100nmol/L Ang Ⅱ,孵育24 h;Ⅸ组(脂质体对照组)加入等容量转染试剂,孵育24 h.检测细胞活力、细胞内ROS产量、细胞凋亡率及GADD153蛋白表达水平.结果 与C组相比,AngⅡ6组、AngⅡ12组、AngⅡ24组细胞活力降低,细胞凋亡率、ROS产量及GADD153蛋白表达升高,且呈时间依赖性(P＜0.05);与AngⅡ24组比较,NAC+AngⅡ组和anti-ODN组细胞活力升高,细胞凋亡率、ROS产量及GADD153蛋白表达降低(P＜0.05).结论 AugⅡ通过增加ROS产量,诱导GADD153蛋白表达上调,从而导致心肌细胞凋亡的发生.     

川芎嗪预先给药对胎鼠海马神经细胞缺氧/复氧时c-fos和HSP70表达的影响

目的 探讨川芎嗪预先给药对胎鼠海马神经细胞缺氧/复氧时c-fos和热休克蛋白70(HSP70)表达的影响.方法 胎鼠海马神经细胞培养鉴定后,随机分为5组(n=24):正常对照组(C组)、缺氧/复氧损伤组(A/R组)、不同浓度川芎嗪预先给药组(L组、M组和H组).C组不制备缺氧/复氧模型;A/R组、L组、M组和H组制备缺氧/复氧模型;L组、M组和H组加入川芎嗪,终浓度分别为60、200和800μg/ml,孵育1 h后制备缺氧/复氧模型.缺氧/复氧模型制备方法:海马神经细胞置入90%N2-10%CO2培养箱中孵育2 h诱导缺氧,然后放入37 ℃、5%CO2培养箱中复氧24 h.处理结束后测定海马神经细胞凋率、细胞活力、c-fos和HSP70的表达水平.结果 与C组比较,A/R组、L组和H组海马神经细胞活力降低,细胞凋亡率升高(P＜0.01);与A/R组比较,L组、M组和H组海马神经细胞活力升高,细胞凋亡率降低,c-fos表达下调,HSP70表达上调(P＜0.05);与L组比较,M组和H组海马神经细胞活力升高,细胞凋亡率降低,c-fos表达下调,HSP70表达上调(P＜0.05);与M组比较,H组细胞活力下降,细胞凋亡率升高,c-fos表达上调,HSP70表达下调(P＜0.01).结论川芎嗪预先给药抑制胎鼠海马神经细胞缺氧/复氧时细胞凋亡的机制可能与下调c-fos表达,上调HSP70表达有关.     

PKC在缺氧预处理和去甲肾上腺素预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价蛋白激酶C(PKC)在缺氧预处理和去甲肾上腺素预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 原代培养乳鼠心肌细胞,随机分为6组(n=25):对照组(Ⅰ组)常规培养;缺氧复氧组(Ⅱ组)细胞缺氧3 h,复氧1 h;缺氧预处理组(Ⅲ组)缺氧20 min,复氧20 min后制备缺氧复氧模型;去甲肾上腺素预处理组(Ⅳ组)细胞经终浓度为10-7 mol/L去甲肾上腺素孵育30 min后,去除去甲肾上腺素,再行缺氧复氧;H7+缺氧预处理组(Ⅴ组)细胞经终浓度为5×10-5 mol/L的H7孵育10 min后,去除H7,其余操作同Ⅲ组;H7+去甲肾上腺素预处理组(Ⅵ组)细胞经终浓度为5×10-5 mol/L的H7(PKC活性抑制剂)孵育10 min后,去除H7,其余操作同Ⅳ组.复氧结束后,测定心肌细胞存活率、培养液乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性和心肌细胞MDA含量和SOD活性.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组细胞存活率和SOD活性降低,LDH、CK的活性及MDA含量升高(P＜0.01).与Ⅱ组比较,Ⅲ组和Ⅳ组细胞存活率和SOD活性升高,LDH、CK活性及MDA含量降低(P＜0.01).与Ⅲ组比较,Ⅴ组细胞存活率和SOD活性降低,LDH、CK活性及MDA含量升高(P＜0.01).与Ⅳ组比较,Ⅵ组细胞存活率和SOD活性降低,LDH、CK活性及MDA含量升高(P＜0.05).结论 PKC激活参与了缺氧预处理与去甲肾上腺素预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

p38MAPK信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 健康新生SD大鼠,日龄1～3 d,处死后取心室肌组织,培养心肌细胞,随机分为7组:对照组(C组)于CO2培养箱中持续培养3 h;缺氧复氧组(AR组)细胞缺氧2 h,复氧1 h;七氟烷后处理组(SP组)细胞缺氧2 h,复氧开始即刻更换为3%七氟烷饱和的DMEM培养液,孵育20 min,再更换为无血清DMEM培养液,继续复氧40 min;七氟烷后处理+SB203580组(SP+SB组)于七氟烷后处理同时加入SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)至5 μmol/L,孵育20 min;七氟烷后处理+二甲亚砜组(SP+DMSO组)于七氟烷后处理同时加入0.1%DMSO,孵育20 min;SB203580组(SB组)于复氧开始时加入SB203580至5 μmol/L,孵育20 min;二甲亚砜组(DMSO组)于复氧开始即刻加入0.1%DMSO,孵育20 min.各组细胞分别接种于24孔培养板(1 ml/孔)、35 mm培养皿(5 mlnd/皿)和50 ml培养瓶(8 ml/瓶)中,每组12孔、6皿和6瓶.于复氧结束后,采用比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用台盼蓝排斥实验测定细胞存活率;采用流式细胞仪测定细胞凋亡率;采用Western blot法测定磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达水平.结果 与C组比较,其余各组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,AR组、SP组、SP+SB组、SP+DMSO组和DMSO组p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与AR组比较,SP组、SP+SB组和SP+DMSO组LDH活性降低,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与SP组比较,SP+SB组、SB组和DMSO组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,p-p38MAPK表达下调(P<0.05).结论 七氟烷后处理可通过激活p38MAPK信号转导通路减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

半肝入肝血流阻断下行多处肝段切除治疗复杂肝内胆管结石

目的 探讨应用半肝入肝血流阻断行多处肝段切除治疗复杂肝内胆管结石的临床价值.方法 回顾性分析2004年1月至2010年10月应用半肝入肝血流阻断下行多处肝段切除治疗复杂肝内胆管结石12例患者的临床资料.结果 12例无死亡,肝脏切除范围(肝段):Ⅱ+Ⅲ+Ⅴ1例;Ⅱ+Ⅲ+Ⅵ2例;Ⅱ+Ⅲ+Ⅴ+Ⅵ1例;Ⅱ+Ⅲ+Ⅵ+Ⅶ4例;Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ+Ⅵ3例;Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ+Ⅵ+Ⅶ1例;术中平均出血(560±291)ml.术后出现切口感染2例(17%)、胆漏1例(8%)、腹腔感染1例(8%)、胸腔积液3例(25%).12例均无肝功能衰竭、腹腔出血或胆道出血.术后10d结石清除率为83%(10/12),术后6周结石清除率为92%(11/12),11例获得长期随访92%(11/12),中位随访时间为31个月,优良率达92%(11/12).结论 多处肝段切除治疗复杂肝胆管结石的近、远期效果好,入肝半肝血流阻断应用于多处肝段切除,增加了手术的安全性.     

鞘内注射加巴喷丁对切口痛大鼠吗啡镇痛效应的影响

目的 探讨鞘内注射加巴喷丁对切口痛大鼠吗啡镇痛效应的影响.方法 雄性SD大鼠,体重250g～280 g,取鞘内置管成功的大鼠48只,随机分为6组(n=8):假手术组(S组)鞘内注射人工脑脊液(ACSF)10μl后,吸人1.4%异氟烷5 min,不制备模型;切口痛组(IP组)、加巴喷丁50μg组(G组)、吗啡2.5μg组(M1组)和吗啡5μg组(M2组)于制备切口痛模型前30 min分别鞘内注射ACSF10μl、加巴喷丁50μg、吗啡2.5μg和5μg;加巴喷丁50μg+吗啡2.5μg组(G+M1组)于制备模型前30 min鞘内注射加巴喷丁50μg和吗啡2.5μg.模型制备后2 h时测定术侧机械缩爪反射阈值(MWT)和热刺激缩爪反应潜伏期(TWL).结果 与S组比较,IP组、G组、M1组MWT降低,TWL缩短(P＜0.05),G+M1组和M2组MWT和TWL差异无统计学意义(P＞0.05);与IP组比较,G+M1组和M2组大鼠MWT升高,TWL延长(P＜0.05),G组和M1组MWT和TWL差异无统计学意义(P＞0.05);与G+M1组比较,G组和M1组MWT降低,TWL缩短(P＜0.05).结论 鞘内注射加巴喷丁可增强吗啡对切口痛大鼠的镇痛效应.     

羟乙基淀粉130/0.4对内毒素致大鼠急性肺损伤时TLR4表达的影响

目的 探讨羟乙基淀粉130/0.4对内毒素致大鼠急性肺损伤(ALI)时Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 雄性SD大鼠30只,体重250～300 g,随机分为5组(n=6),生理盐水对照组(NS组)、ALI组和H_(1-3)组.ALI组、H_1组和H_2组经右颈内静脉注射内毒素10ms/kg制备大鼠ALI模型,H_1组和H_2组注射内毒素完毕1 min后,右颈内静脉分别输注6%羟乙基淀粉130/0.4 15和30ml/kg,H_3组仅右颈内静脉输注6%羟乙基淀粉130/0.4 30 ml/kg,速率均为0.2 ml/min.注射内毒素后6 h时处死大鼠取肺,光镜下观察肺组织病理学;采用RT-PCR检测TLR4 mRNA的表达水平,Western bloting法检测肺组织TLR4蛋白的表达水平.结果 与NS组相比,ALI组TLR4 mRNA和蛋白的表达上调(P＜0.05),H_3组差异无统计学意义(P＞0.05);与ALI组相比,H_1组和H_2组TLR4 mRNA和蛋白的表达下调(P＜0.05);H_1组和H_2组TLR4 mRNA和蛋白的表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).病理结果显示:H_1组和H_2组肺损伤程度较ALI组明显减轻.结论 羟乙基淀粉130/0.4可能通过抑制TLR4表达上调,减轻炎性反应,从而减轻内毒素致大鼠ALI.     

瑞芬太尼预先给药对大鼠肝脏缺血再灌注损伤时肝细胞线粒体的影响

目的 探讨瑞芬太尼预先给药对大鼠肝脏缺血再灌注损伤时肝细胞线粒体的影响.方法 健康雄性SD大鼠60只,体重250～270 g,随机分为6组(n=10):对照组(C组)麻醉后直接取肝脏;缺血再灌注组(IR组)静脉输注等容量(7 ml)生理盐水;低浓度瑞芬太尼组(Rl组)静脉输注瑞芬太尼0.2 μg·kg-1·min-1;高浓度瑞芬太尼组(Rh组)静脉输注瑞芬太尼1 μg·kg-1·min-1;5-羟癸酸盐组(5-HD组)静脉输注5-HD 150 μg·kg-1·min-1;5-羟癸酸盐+高浓度瑞芬太尼组(5-HD+Rh组)静脉输注5-HD 150 μg·kg-1·min-1和瑞芬太尼1 μg·kg-1·min-1.除C组外,其余组均于输注20 min开腹,夹闭肝门30 min,再灌注60 min.观察肝细胞线粒体超微结构,制备肝细胞线粒体悬液,测定线粒体基质钙浓度([Ca2+]m)、线粒体摄钙后浓度([Ca2+]upost)、线粒体摄钙量([Ca2+]u)及丙二醛(MDA)含量.结果 C组线粒体[Ca2+]m、[Ca2+]upost、[ca2+]u及MDA含量低于其余各组;与IR组比较,Rl组与Rh组线粒体[Ca2+]m、[Ca2+]upost、[Ca2+]u降低;与RI组比较,Rh组[Ca2+]m、[Ca2+]upost降低;与Rh组比较,5-HD+Rh组和5-HD组[Ca2+]m、[Ca2+]upost、[Ca2+]u升高(P＜0.05或0.01);5-HD组和5-HD+Rh组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 瑞芬太尼0.2～1 μg·kg-1·min-1预先给药可减轻大鼠肝脏缺血再灌注时肝细胞线粒体损伤,其机制可能与开放线粒体ATP敏感性钾通道有关.     

p38MAPK/iNOS/HO-1信号通路在赤芍减轻大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用

目的 评价p38MAPK/iNOS/HO-1信号通路在赤芍减轻大鼠内毒素性急性肺损伤(AL1)中的作用.方法 健康清洁级雄性Wistar大鼠40只,随机分为5组(n=8):生理盐水对照组(C组)、内毒素组(L组)、赤芍组(R组)、赤芍预处理组(PR组)和SB203580组(S组).气管内滴注脂多糖(LPS)制备大鼠ALI模型.L组气管内滴注1 ml LPS溶液(2.5 mg/kg);C组滴注等容量生理盐水;R组、PR组分别于气管内滴注LPS后、滴注前2 h,经股静脉输注赤芍注射液15 mg·kg-1·h-1 2 h;S组于气管内滴注LPS前3 h,经股静脉输注SB203580溶液2.5 μmol·kg-1·h-1 3 h.于气管内滴注LPS后6 h时,经颈动脉采血样2 ml,行血气分析及测定血清NO浓度;颈动脉放血处死大鼠,测定支气管肺泡灌洗液蛋白浓度,计数中性粒细胞及细胞总数,检测肺组织MDA含量,p38MAPK、HO-1及iNOS的表达.观察肺组织病理学结果 .结果 与C组比较,其余各组肺组织p38MAPK、iNOS及HO-1表达上调,支气管肺泡灌洗液中性粒细胞计数比、蛋白浓度、肺组织MDA含量及血清NO浓度升高.PaO2和HCO1浓度降低(P<0.01);与L组比较,R组、PR组和S组p38MAPK及iNOS表达下调,HO-1表达上调.支气管肺泡灌洗液中性粒细胞计数比、蛋白浓度、肺组织MDA含量及血清NO浓度降低,PaO2和HCO3-升高(P<0.05);R组、PR组和S组肺组织损伤程度较L组减轻.结论 赤芍可减轻大鼠内毒素性急性肺损伤,可能与抑制p38MAPK/iNOS/HO-1信号通路有关.     

曲马多对神经病理性痛大鼠中脑远位触液神经元5-HT1A受体表达的影响

目的 探讨曲马多对神经病理性痛大鼠中脑远位触液神经元5-HT1A受体表达的影响.方法 SPF级雄性SD大鼠40只,体重220～280 g,采用坐骨神经慢性压迫法制备大鼠神经病理性痛模型,随机分为5组(n=8):正常对照组(C组)、生理盐水组(NS组)、曲马多组(T组)、神经病理性痛+生理盐水组(NP+NS组)和神经病理性痛+曲马多组(NP+T组).C组不行任何处理;NS组和T组仅暴露坐骨神经,分别腹腔注射生理盐水2 ml/kg或曲马多10 mg/kg;NP+NS组和NP+T组制备神经病理性痛模型,模型制备后第7天分别腹腔注射生理盐水2 ml/kg或曲马多10 mg/kg.除C组外,其余4组于腹腔注射曲马多或生理盐水前(T1)和注射后1 h(T2)时测定热痛阈和机械痛阈.于模型制备后第5天,左侧侧脑室注射30%霍乱毒素亚单位B与辣根过氧化物酶复合物(CB-HRP)3μl以标记远位触液神经元,并测定远位触液神经元5-HT1A表达水平.结果 与C组比较,NP+NS组中脑远位触液神经元5-HT1A受体表达下调(P＜0.05),其余组差异无统计学意义(P＞0.05);与NS组和T组比较,NP+NS组中脑远位触液神经元5-HT1A受体表达下调,热痛阈和机械痛阈降低,NP+T组热痛阈和机械痛阈降低(P＜0.05),中脑远位触液神经元5-HT1A受体表达差异无统计学意义(P＞0.05);与NP+NS组比较,NP+T组中脑远位触液神经元5-HT1A受体表达上调,热痛阈和机械痛阈升高(P＜0.05).结论 曲马多可下调中脑远位触液神经元5-HT1A受体的表达,该作用可能是其减轻大鼠神经病理性痛的机制之一.