HCV RNA检测与HCV/HBV共感染相关分析

目的探讨丙型肝炎病毒（HCV）RNA检测在HCV单独感染和HCV、乙型肝炎病毒（HBV）合并感染中的临床意义。方法对96例HCV感染者分别分为CH和LC组,HCV和HCV＋HBV组,检测抗-HCV、HCV RNA。结果 96例HCV感染患者中肝硬化组HCV RNA阳性率较慢性肝炎组差异无统计学意义。乙肝和丙肝二重感染者HCV RNA阳性率显著高于单纯HCV感染（χ2=5.65,P=0.017）。单纯HCV感染者和乙肝及丙肝二重感染者血清丙肝病毒含量差异有统计学意义（χ2=5.134,P=0.023）。结论在HCV RNA检测的同时结合HBV DNA的检测,对HCV感染的临床诊治有重要的指导意义。     

用PCR筛查献血者血液中HBV和HCV

<正> 目前,尽管已用HBsAg、抗-HCV及ALT等指标筛选献血者,但输血后肝炎(PTH)仍时有发生。其中,输血后丙型肝炎预后更差,更易转为慢性,发展为肝硬化和肝癌。自聚合酶链反应(polymoerase chainreaction,PCR)技术问世以来,由于其能从分子水平直接检测HBV-DNA和HCV-RNA,因此有望用于常规筛选献血者,以减少PTH的发生。笔者就此问题作一简单综述。1 PCR筛查HBV感染 HBsAg是乙型肝炎感染最常见的标志,检测HB-sAg用于献血者的筛选,大大减少了输血后乙型肝炎的发生率,但是HBsAg阴性并不能完全排除HBV感染。据报道,在输注HBsAg阴性血液成分后仍有0.3％～1.7％的乙型肝炎发生率。导致HBsAg假阴性的     

寡核苷酸基因芯片检测HBV基因型方法的建立与临床研究

目的 建立寡核苷酸基因芯片检测HBV基因分型的方法并对HBV携带者基因型进行临床分析。方法根据Genbank中已发表的128株HBV全基因组序列系统进化分析结果设计了A-H不同HBV基因型的特异探针及巢式PCR引物。利用反向杂交原理，先将不同HBV基因型特异的寡核苷酸探针固定在芯片上，再与地高辛（Dig）标记的扩增产物杂交从而检测HBV基因型。本研究检测了200例HBVDNA阳性患者，为了验证基因芯片检测的结果，随机选取其中40份样本进行直接测序。结果在200份血清样本中检测到B、C基因型以及BC混合型，依次占11．5％（23／200），80．5％（161／200），8％（16／200）。在与测序方法进行对比的40份样本中，除3份例混合型用测序方法不能检出混合感染外，利用测序结果进行系统发育分析得到的结果与基因芯片检测结果一致。进一步的克隆分析发现这3份样本均为混合感染。结论基因芯片是进行HBV基因分型的方便可靠的工具，并能更好地检测不同基因型混合感染的情况。本研究中，HBV基因型以C型为主，与B型相比，C型HBV感染者病情较为严重。     

应用液相芯片技术检测拉米夫定耐药相关性HBV变异

法较     

HBV和HCV重叠感染患者生化免疫指标变化及临床意义

目的了解HBV和HCV重叠感染情况及其对肝功能及血清病毒载量的影响。方法常规检测3816例临床血清样本中的HBV及HcV血清标志物以及肝功能等指标,实时荧光定量PCR检测病毒载量。结果3816例送检样本中HBsAg阳性率8．9％（341／3816）,抗HCV抗体阳性率1．2％（46／3816）,其中HCVRNA检测阳性15例,现症感染率为0．39%。3816例样本中,HBV／HCV重叠感染15例,单纯HBV感染326例,单纯HCV感染31例。单纯HBV感染患者血清转氨酶（ALT和AST）及总胆红素（TBil）水平均明显高于重叠感染患者和单纯HCV感染患者。HBV／HCV重叠感染组患者HBVDNA栽量低于单纯HBV感染组,两组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;HBV／HCV重叠感染组患者HCVRNA载量也低于单纯HCV感染组,但两组比较,差异无统计学意义（P〉O．05）。结论重庆地区HBV／HCV感染情况与我国一般人群分布基本一致,重叠感染患者肝功能血清学指标改变低于单纯HBV感染患者。     

血友病A患者血制品治疗后HBV和HCV感染指标分析

目的对血友病A患者替代治疗后血液传播乙型、丙型肝炎病毒(HBV、HCV)的感染指标进行检测。方法对经本院确诊的35例血友病A患者采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗-HCV、HBV六项指标。结果 35例血友病A患者的抗-HCV阳性率为88.6%,输血次数和输注血液制品为主的种类与患者抗-HCV阳性率有相关性(P<0.01)。HBV六项指标检查,其中5例患者抗-HBe阳性(占14.3%),明显低于抗-HCV阳性率。结论血友病A患者替代治疗输血次数越多,感染风险越大,而较少输注以冷沉淀为主的血液制品的患者,其感染风险相对较小,且目前HCV感染率明显高于HBV感染率。     

从角膜组织中快速检测HBV、HCV的方法探讨

目的：运用多重巢式PCR技术，同步检测人组织中的乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒，为角膜移植供体组织材料中乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的快速筛查建立方法。方法。参照相关文献和Genbank公布的乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒全基因序列，分别设计并合成乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的半巢式和巢式引物。供体角膜周边组织材料2份，由河南省眼科研究所眼库提供。角膜供体年龄为18～45岁。以上角膜材料均由河南省各地、市级医院送来，供体人员生前是否患有乙型肝炎和／或丙型肝炎均情况不明。在得到角膜周边组织材料后，每份迅速切取10mg左右置于无茵研磨器内研磨，用一步法快速提取基因组DNA和总RNA。首次完成丙型肝炎病毒的反转录cDNA，然后在同一反应体系内同时加入乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒引物，采用“双退火温度”，共35个循环，进行两轮巢式扩增。结果：在32份样本中，乙型肝炎病毒阳性为3份（阳性率9．3％）；丙型肝炎病毒均为阴性（阳性率0％）。结论：从角膜周边组织中提取基因并用于乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的组织快检，可扩大用于角膜移植材料的来源。运用多重巢式PCR技术对角膜供体材料中DNA和RNA的组织快检，具有方法简便、灵敏度高、出结果快、经济等优点，具有推广应用价值。     

蒙古国717例HBV、HCV和ALT检测结果的分析及意义

<正>近年来,随着我国对外交流的日益频繁,每年有大批外籍人士进入我国[1],而与我国近邻的蒙古国人来我区留学、旅游顺便做健康体检及就医的人数也在逐年增加,为了方便其到本     

两种荧光定量PCR 仪检测HBV、HCV核酸结果的一致性

目的 探讨不同荧光定量PCR仪检测肝炎病毒 DNA 及RNA结果的一致性。 方法 参照美国NCCLS EP9-A2文件,以MJ Opticon 2为参比仪器,ABI 7300为实验仪器,检测HBV DNA 及 HCV RNA,分析结果的相关性及预期偏倚,评价两种仪器检测结果的一致性。 结果 MJ Opticon 2 及ABI 7300检测HBV DNA 及 HCV RNA具有良好的相关性 （rHBV=0.995;rHCV=0.993）,预期偏差在可接受范围内。 结论 MJ Opticon 2 及ABI 7300检测结果具有较好的一致性,可用于同时检测HBV DNA或HCV DNA。     

日本进行HCV、HBV和HIV病毒核酸筛查的现状

日本红十字会输血部对自愿献血者血液的细胞成份以及做血浆蛋白分离的血浆，在预筛后与发出前。第一次在全国范围用核酸扩增检测（NAT）方法检测血液中的乙型肝炎病毒（HBV），丙型肝炎病毒（HCV）和人类免疫缺陷病毒（HIV-1），使用多重NAT试剂对血液和血液制品，包括存活时间短的血小板检测，可节省检测时间，费用和人力，在2000年2月1日-2001年4月30日期间，采用50份血样品混合筛查。从血液和血液成分中查出112份HBV阳性，25份HCV阳性和4份HIV-1阳性。     

Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒探针的制备及其在检测乙型肝炎病毒DNA中的应用

目的制备Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(hepatitis B virus deoxynucleic acid,HBV DNA)基因探针,研究其在检测HBV DNA中的应用.方法分别用枸橼酸还原金氯酸法、化学共沉淀法制备Au、Fe3O4纳米颗粒,二法结合制备Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒.通过金-硫(Au-S)共价键,将烷氢硫醇修饰的寡核苷酸结合在Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒上,制备纳米颗粒HBV DNA基因探针.用荧光标记法检测纳米颗粒探针表面寡核苷酸的覆盖率和与其互补的寡核苷酸的杂交效率.在尼龙膜上,使用Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒基因探针通过斑点杂交法、Ag染色法检测HBV DNA.在纳米颗粒基因探针液相检测体系中加入HBV DNA,透射电镜下观察.结果制备的Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒粒径均匀,为(15±5)nm,水相分散良好,具有磁性.Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒基因探针表面寡核苷酸的最大覆盖率为(120±8)条,最大杂交效率为(14±2)%.斑点杂交法可检出低至1010copies/ml的合成靶DNA,可目视化检出乙肝患者血清中HBV DNA的PCR产物.在液相检测体系中加入HBV DNA,透射电镜观察到纳米颗粒组装成大的网状结构的聚集体.结论成功制备了Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒HBV DNA基因探针,它可直接用于HBV DNA的检测.     

乙型肝炎病毒感染不同时期外周血单个核细胞微小RNA表达变化及其意义

目的 探讨微小RNA( microRNAs,miRNAs)在乙型肝炎病毒(HBV)感染不同时期表达谱的变化及其意义.方法 建立检测miRNA的RNA DNA嵌合探针液态芯片(xMAP)法,对其特异性、重复性、准确性进行评估;2010年10月至201 1年10月收集苏州大学附属第一医院住院和门诊急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、乙型肝炎后肝硬化及肝癌患者各40例,健康对照40名;采用xMAP液态芯片技术检测外周血单个核细胞(PBMC)中miR-191、-223、-222、-145、-21、-31、-126、-20a、-372的表达水平,以miR-103为内参,将(靶miRNA分子平均荧光强度-对应本底平均荧光强度)/(miR-103平均荧光强度-对应本底平均荧光强度)的比值作为有效数据分析各组miRNAs表达特征,采用SPSS 17.0统计软件,组间比较用单因素方差分析,若差异有统计学意义,用LSD-t法行组间两两比较.结果 xMAP液态芯片法检测miRNAs特异性为100％;重复性实验证实高值参比品的检测信号CV值均小于5％,低值参比品的检测信号CV值均小于10％;准确性实验证实9种miRNA的回收率为(100±5)％;miR-222(F=1.32,P＞0.05)、-191 (F=1.98,P＞0.05)、-145 (F=0.78,P＞0.05)、-21(F=0.64,P＞0.05)、-31(F=0.83,P＞0.05)、-372(F=1.75,P＞0.05)组间表达差异无统计学意义;miR-223组间表达差异有统计学意义(F=14.56,P＜0.05),在急性乙型肝炎组表达最高(15.37±4.01),肝癌组表达最低(6.91±3.18);组间miR- 126表达差异有统计学意义(F=17.43,P ＜0.05),在健康对照组表达最高(6.33±2.75),肝癌组表达最低(2.38±1.07);组间miR-20a表达差异有统计学意义(F=19.48,P ＜0.05),健康对照组表达最低(0.33±0.18),肝癌组表达最高(0.81±0.24).结论 xMAP液态芯片法检测miRNA特异性强、准确度高、重复性好,适合大通量临床检测;miRNA的检测可为HBV感染的慢性化进展机制提供一个新的研究线索.     

标准物质在乙型和丙型肝炎病毒核酸检测标准化中的重要性

病毒核酸是HBV和HCV感染诊断和治疗监测的重要标志物，病毒核酸标准物质是不同实验室间检测结果可比性、试剂溯源性、测量程序的评价和质量控制的物质基础。无生物传染危险性且稳定的标准物质的研究是HBV和HCV核酸检测标准物质的发展方向。     

艾滋病病毒感染者合并丙型肝炎病毒感染的临床研究

目的　探讨人类免疫缺陷病毒 (HIV)和丙型肝炎病毒 (HCV)混合感染的临床特点。方法　收集 2 8份HIV合并HCV感染血清、血浆和 2 4份单纯HIV阳性血清、血浆。进行HIV、HCV载量、T淋巴细胞、血常规、肝功能等检测 ,分析 2组实验室检测指标的差别。结果　HIV合并感染者的HCV载量与各项检测指标无明显相关性。HIV感染组的HIV载量 (4 8± 0 9lg拷贝 /ml)高于HIV合并感染组 [(4 1± 1 0 )lg拷贝 /ml,P <0 0 5 ],而前者红细胞和血红蛋白值低于后者 (P <0 0 5 )。HIV合并感染组的丙氨酸转氨酶异常者 [(87 0± 6 9 6 )U/L ,占 6 4 % ]明显高于HIV感染组 [(2 0 6± 13 6 )U/L ,占 10 % ,P <0 0 1]。结论　HIV合并感染组的HIV载量低于HIV感染组 ,而肝功能损害明显重于HIV感染组 ,HCV载量与各项实验室指标无明显相关性。     

丙肝病毒与乙肝病毒重叠感染几率观察

目的通过对查体人群及已感染丙肝病毒(HCV)病人的乙肝病毒(HBV)感染率进行比较分析,观察HCV重叠感染HBV的几率情况。方法利用酶联免疫吸附试验,对两组分别检测HBV感染情况。结果查体人群的HBV感染率为9.76%,HCV感染病人的HBV感染率为32.7%,两组间差异有显著统计学意义(P<0.05)。结论 HCV感染人群组中重叠感染HBV的几率较高,对抗-HCV阳性患者应注意警惕重叠感染。     

纳米金标芯片检测用于前列腺癌多基因诊断的实验研究

目的利用纳米金标基因芯片检测前列腺癌（prostatic cancer,PCa）特异性多基因,探讨其临床意义。方法应用纳米金标基因芯片对11个PCa特异性基因靶标（IGF1、P27、AR、PSMA、KLK3、PCNA、Ki-67、KLK1、KLK2、TMPRSS2、SREBF2）进行检测,对各基因表达进行研究。结果纳米金标基因芯片检测单链核酸的灵敏度达到80f mol/L,在优化条件下,目标上调基因呈阳性表达,下调及阴性对照无显色,可肉眼分辨。结论纳米金标基因芯片技术检测PCa特异性基因方法快速简单,灵敏度高,特异性好,可对选定的11个目标基因定性及半定量检测,不需要借助于特殊仪器,操作简单,样本保存时间长,在普通实验室即可完成。纳米金标基因芯片检测有望成为PCa早期诊断的新一代芯片检测系统。     

血友病合并HIV/HCV感染者52例高效抗反转录病毒疗效分析

目的探讨血友病合并人免疫缺陷病毒(HIV)/丙型肝炎病毒(HCV)感染者高效抗反转录病毒治疗(HAART)方案[司他夫定(d4T) 拉米夫定(3TC) 依非韦仑(EFV)]的疗效。方法观察52例合并HIV/HCV感染的血友病患者在接受“d4T 3TC EFV”抗HIV治疗后CD4T淋巴细胞计数、HIVRNA载量的变化情况及药物的不良反应。结果抗HIV治疗后,CD4T淋巴细胞计数均有不同程度的升高,平均每月增长(7.70±4.80)个/mm3,HIVRNA载量显示不同程度下降,50例患者的HIVRNA载量在治疗后2~7个月均低于检测水平;29例患者出现三酰甘油升高,22例出现血尿酸升高。结论“d4T 3TC EFV”方案是合并HIV/HCV感染的血友病患者安全、有效的HAART方案。     

多重定量PCR法同步检测HBV、HCV和HIV-1在血液筛查中的优化及应用

目的 初步探讨多重定量聚合酶链反应（PCR）同步检测乙型肝炎病毒（HBV） DNA,丙型肝炎病毒（HCV） RNA及人类免疫缺陷病毒（HIV）-1 RNA在血液筛查中的应用前景.方法 选择2012年8月至12月,于孝感市中心血站志愿献血的合格献血者血样中,经2次酶联免疫吸附法（ELISA）检测HBV表面抗原（HBsAg）、抗HCV及抗HIV-1,检测结果均呈阴性的4 800份血样为研究对象.采用全自动核酸混合提取仪对该4 800份血样进行核酸提取,然后利用多重定量PCR方法对血样中HBV、HCV及HIV-1进行同步扩增检测.采用中国药品和生物制品检定所提供的HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA标准参考品,检测多重定量PCR的灵敏度,并与单重定量PCR的灵敏度进行比较.在HBV、HCV及HIV-1 3者中任意1种病毒基因组浓度较高的条件下,对多重定量PCR检测另2种低浓度病毒基因组的能力进行评估.结果 增加多重定量PCR中c-MMLV逆转录酶和Hot Taq酶的用量,并适量加入单链结合蛋白（SSB）,可使其扩增效率提升至单重定量PCR扩增水平.本组4 800份血样中,经多重定量PCR检测出3份HBV DNA阳性样品,ELISA漏检率为0.062 5％,未发现HCV RNA和HIV-1 RNA阳性样品;多重定量PCR检测HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA在95％置信区间的灵敏度浓度分别为115 IU/mL、376 IU /mL和232 IU /mL;单重定量PCR检测HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA在95％置信区间的灵敏度浓度分别为51 IU /mL、94 IU /mL和78 IU/mL.结论 本研究初步建立了对献血者血液同时进行HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA检测的多重定量PCR检测方法;该检测体系经过进一步优化后,有望应用于临床大规模血液病毒筛查.