The kinetic level of CD4+CD25+ regulatory T cells in peripheral blood of rat with renal allograft

目的 监测CD4+CD25+调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植外周血中的动态变化,研究其在预测排斥反应和免疫耐受中的价值.方法 流式细胞术监测CD4+CD25+ 调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植外周血中的动态变化.结果 CD4+CD25+调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植急性排斥反应过程中明显低于同系对照组,而CsA组CD4+CD25+ 调节性T细胞明显高于同系对照组.结论 CD4+CD25+ 调节性T细胞在抑制肾脏移植排斥反应中发挥重要作用,动态监测外周血中CD4+CD25+ 调节性T细胞的水平可预测和判断急性排斥反应的发生,了解肾脏移植后受体和移植肾之间的免疫反应程度或耐受状态.     

CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg调节性T细胞与移植肾长期存活的关系

[摘要] 目的 探讨肾移植术患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T 细胞( regulatory T cell , Treg) 百分含量,血清细胞因子IL-10的水平变化对移植肾远期存活的影响及其作用机制。 方法 肾移植术受者30例按肾移植术后恢复情况分为移植肾长期存活组16例,急性排斥组14例。健康志愿者20 例。分别检测外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg 百分含量、血清IL-10 水平、血清肌酐水平,所得结果进行相关分析。 结果　移植肾长期存活组CD4+CD25+Foxp3+ Treg 百分含量较正常组及急性排斥组均显著升高。CD4+CD25+Foxp3+ Treg 百分含量和血清IL-10 水平呈正相关(r=0.604,p<0.05),移植肾长期存活组的血清肌酐水平明显低于急性排斥组,CD4+CD25+Foxp3+ Treg 百分含量和血清肌酐水平呈负相关（r=-0.534,p<0.05）。结论 CD4+CD25+Foxp3+ Treg 有可能参与移植术后受者对同种异体移植肾免疫耐受,与受者长期存活密切相关;外周血CD4+CD25+Foxp3+ Treg 百分含量可作为临床反映移植受者免疫功能状态的指标之一。     

应用CD4+CD25+Treg细胞诱导大鼠肾移植免疫耐受的研究

目的 应用供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞诱导移植免疫耐受,抑制大鼠肾移植慢性排斥反应.方法 以SD、Wister大鼠分别为供、受体建立同种异体肾移植慢性排斥反应动物模型;受体脾细胞悬液同供体肾组织抗原孵育培养,诱导获得对供体抗原的特异性;采用MACS法分选具有供体抗原特异性的CD4 CD25 T细胞,FACS流式细胞法检测分选的CD4 CD25 T细胞及CD4 CD25 Treg细胞纯度;获得之供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞于同种异体肾移植术后2、4、6、8、10周,分别经尾静脉注射入受者体内(实验组,n=12),选取未注射组为对照(n=12).观察两组移植肾脏存活时间;术后第10、40、80天MTT法检测比较两组受体脾细胞对供体抗原刺激反应程度;术后第10、20、40、60、80天分别监测各组血肌酐水平.结果 FACS流式细胞法检测分选的CD4 CD25 T细胞得率为4.13%,分离纯度为73.34%;CD4 CD25 Treg细胞纯度为65.22%.所分选之CD4 CD25 Treg细胞成功获得供体抗原特异性,对供体抗原的抑制率(IR)为85.4%.移植肾存活时间:治疗组移植肾存活时间为(98.83±6.66)d,显著长于对照组的(78.25±4.71)d,组间差异有统计学意义(P＜0.05);术后第40、80天治疗组脾细胞对供体抗原刺激反应程度均明显低于对照组,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).术后第20、40、60、80天对照组血肌酐指标明显高于治疗组,同治疗组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞可特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应,有效抑制了移植肾慢性排斥反应的发生.     

外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例与移植肾长期存活关系的研究

目的研究外周血CD4 CD25 调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)比例对移植肾远期存活的影响及其作用机制,为CD4 CD25 Treg参与移植免疫耐受及临床采用监测CD4 CD25 Treg比例评估移植受者免疫功能状态提供实验依据。方法肾移植受者42例按肾移植术后恢复情况分为移植肾长期存活组28例,慢性排斥组14例,健康志愿者10例,检测外周血CD4 CD25 Treg比例、血清TGF-β1、IL-10水平,所得结果进行相关分析。结果移植肾长期存活组CD4 CD25 Treg比例较正常组及慢性排斥组均显著升高。CD4 CD25 Treg比例和血清IL-10水平显著相关(r=0.77,P<0.01),CD4 CD25 调节T细胞比例和血清TGF-β1水平无相关性。结论移植术后受者外周血CD4 CD25 Treg比例与受者长期存活密切相关,CD4 CD25 Treg有可能参与移植术后受者对同种异体移植肾免疫耐受的形成;外周血CD4 CD25 Treg比例可作为临床反映移植受者免疫功能状态的指标之一。     

哮喘患儿CD4+CD25+调节性T细胞及FOXP3的表达

目的:研究CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘儿童外周血中的比例改变,并探讨其临床意义.方法:采用细胞内染色的流式细胞术检测急性发作期哮喘患儿外周血CD4+CD25+Treg及其调控基因FOXP3的表达,并与健康对照组进行比较.结果:急性发作期哮喘患儿外周血CD4和CD25双阳性细胞所占比例与健康对照组无明显差异(P>0.05),而CD4+CD25+FOXP3调节性T细胞在外周血中的比例明显低于健康对照组(P<0.01).结论:哮喘患儿外周血CD4+CD25+FOXP3调节性T细胞在外周血中的比例明显减少,可能与哮喘的发病机制有关.     

乳腺癌患者外周血中CD4+CD25+与CD8+CD122+调节性T细胞的水平变化及临床意义

目的 探讨乳腺癌（Mammary cancer）患者外周血中CD4+CD25+与CD8+CD122+调节性T细胞(Tregs )的分布情况及临床意义。方法 采用流式细胞仪测定65例乳腺癌患者外周血中的CD4+CD25+与CD8+CD122+调节性T细胞水平,结果与18例正常健康人对比。结果 乳腺癌患者外周血中的CD4+CD25+与CD8+CD122+调节性T细胞均显著高于对照组（P <0.01）;且与乳腺癌的分期呈正相关。 结论 乳腺癌患者外周血中具有免疫负调控功能的CD4+CD25+与CD8+CD122+调节性T细胞水平较高, 可能与乳腺癌的病情及预后相关。     

心脏移植大鼠自发免疫耐受模型中CD4+ CD25+Treg与FOXP3的变化

目的行Wistar(供体)到SD(受体)大鼠的腹部异位心脏移植建立自发免疫耐受模型,探讨CD4 CD25 Treg与FOXP3在同种异体心脏移植大鼠自发免疫耐受形成过程中的作用。方法以光镜、电镜观测移植心肌的病变特点、以流式细胞术检测外周血CD4 CD25 T淋巴细胞数量变化、RT-PCR检测其功能基因FOXP3的表达情况。结果CD4 CD25 T淋巴细胞在对照组中无明显变化,在心脏移植组(实验组)中CD4 CD25 T淋巴细胞术后第1天开始上升,第3天[(6.07±1.55)]达峰值,第5天[(5.44±1.47)]、第7天[(3.35±0.46)]逐渐下降,术后第3,5天明显高于对照组(P<0.05);FOXP3在对照组中无明显表达,在实验组中术后第3、5天表达明显,第7天表达下降。移植心脏的心肌病理改变在第1,3天逐渐加重,第5天时病变最重,第7天减轻,第7天移植心脏排斥反应减轻提示移植心脏产生免疫耐受。结论心脏移植大鼠自发免疫耐受模型中CD4 CD25 T与FOXP3均上调。且基本与移植心脏排斥反应呈负相关,提示CD4 CD25 T细胞的数量与功能变化可能参与自发免疫耐受的形成。     

CD28超竞争单抗对大鼠原位气管移植术后早期免疫炎性损伤的影响

目的:研究大鼠原位气管移植术后应用CD28超竞争单抗对在体扩增CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞的效果及对移植气管早期免疫排斥炎性反应的影响。方法:采用大鼠同种异体原位气管移植模型,分2组。治疗组受体移植当天经腹腔注射CD28超竞争单抗JJ316(0.5 mg);对照组注射同型抗体mIgG(0.5 mg)。于术后第5天采用流式细胞仪检测颈部引流淋巴结、脾及外周血单个核细胞中CD4+CD25+FoxP3+T细胞的比率;移植气管进行病理形态学检查。结果:CD28超竞争单抗治疗组较同型抗体mIgG对照组气管闭塞程度、炎症反应细胞浸润及呼吸道上皮损伤情况明显减轻;外周血、脾脏及颈部淋巴结中CD4+CD25+FoxP3+T细胞的比率[(16.9±4.2)%、(14.8±3.6)%、(5.8±1.2)%]高于同型抗体mIgG对照组[(2.8±1.4)%、(3.3±1.3)%、(2.9±0.9)%,P<0.05]。结论:大鼠原位气管移植后在体应用CD28超竞争单抗可减轻术后早期的免疫排斥损伤。     

自身免疫性溶血性贫血患者CD4~+CD25~+调节性T细胞的研究

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞与自身免疫性溶血性贫血发病的关系。方法应用流式细胞术检测自身免疫性溶血性贫血初发病患者及正常对照者的外周血CD4+CD25+调节性T细胞。结果自身免疫性溶血性贫血初发病患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的比例及CD4+CD25+调节性T细胞在总CD4+T细胞中所占比例均明显低于正常对照组。结论自身免疫性溶血性贫血患者CD4+CD25+调节性T细胞的降低致细胞免疫功能受损,可能是自身免疫性溶血性贫血发病的一个重要因素。     

CD4+ CD25+调节性T细胞在肺癌中的表达及其临床意义

目的：：探讨CD4+ CD25+调节性T细胞在晚期肺癌中的表达及其临床意义。方法：应用流式细胞术分析42例肺癌患者(肺癌组)外周血CD4+ CD25+调节性T细胞表达水平,与15名健康志愿者作对照。结果：肺癌组患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞数量为(7.17±3.63)%,明显高于对照组的(4.25±2.11)%(P<0.01)。肺癌组患者外周血中调节性T细胞数量在病理类型间差异无统计学意义(P>0.05),晚期肺癌患者外周调节性T细胞数量高于早期患者(P<0.05)。结论：调节性T细胞在肺癌患者中比率明显升高,并与临床进展有关。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与肝移植免疫耐受

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞因其独特的免疫抑制功能而备受关注,在诱导和维持移植免疫耐受方面具有重要的作用。肝脏具有移植免疫特性．但肝移植术后如何避免排斥反应、诱导免疫耐受、提高存活率这一问题仍尚未解决。CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在肝移植免疫耐受中具有重要的作用。本文即从CD4^＋CD25^＋调节性T细胞入手,对其在肝移植排斥反应与免疫耐受中的作用加以综述。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在HBV宫内感染的表达及意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)在HBV宫内感染者血液中的表达及意义。方法:流式细胞技术检测157例乙肝大三阳但肝功能正常孕产妇外周血、其分娩新生儿脐血、HBV宫内感染婴幼儿外周血中CD4+CD25+Treg表达水平。结果:HBV宫内感染产妇外周血及新生儿脐血中CD4+CD25+Treg的百分数较未感染组高(P<0.05);HBV持续感染者CD4+CD25+Treg比例较感染转阴组高(P<0.05)。结论:CD4+CD25+Treg抑制体内HBV清除,宫内感染与其表达上调有关。     

HBV转基因小鼠CD4+CD25+调节性T细胞免疫抑制功能的研究

目的 通过对HBV转基因小鼠CD4+、CD4+CD25+调节性T细胞数量和免疫抑制功能的研究,探讨CD4+CD25+调节性T细胞在乙肝免疫耐受中的作用.方法 用流式细胞术对12只HBV转基因小鼠和12只正常小鼠外周血CD4+、CD4+CD25+调节性T细胞的频率进行检测;磁珠分选小鼠脾CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞,分为HBsAg刺激组和ConA刺激组体外单独和共培养,ELISA方法检测诱生的细胞因子IL-2.结果 与正常小鼠比较,HBV转基因小鼠外周血CD4+、CD4+CD25+调节性T细胞数量差异无统计学意义(P＞0.05).HBsAg刺激组,CD4+CD25-T细胞单独或共培养,HBV转基因小鼠CD4+CD25-T细胞诱生IL-2水平显著低于正常小鼠(P＜0.01);ConA刺激组,HBV转基因小鼠CD4+CD25-T细胞诱生IL-2水平与正常小鼠相比则差异无统计学意义(P＞0.05);两组小鼠CD4+CD25-T细胞单独培养时诱生IL-2水平均显著高于共培养(P＜0.01).结论 与正常小鼠比较,HBV转基因小鼠CD4+、CD4+CD25+调节性T细胞数量和免疫抑制功能差异无统计学意义,但T细胞水平对乙肝病毒存在特异性免疫耐受.CD4+CD25+调节性T细胞可抑制CD4+、CD8+T细胞.     

磁激活分选法双重分离大鼠外周血单个核细胞CD4~+CD25~+调节性T细胞

目的:应用磁激活细胞分选(MASC)技术从卵白蛋白(OVA)免疫耐受大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)中分选出大量高纯度CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg),以研究其在支气管哮喘中的作用。方法:从OVA免疫耐受大鼠外周血中分离出PBMCs,应用MASC技术阴性分选CD4+T细胞,再阳性分选出CD4+CD25+Treg;流式细胞仪检测。结果:分选前的CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞数的11.07%,CD4+T细胞占总数的21.88%;CD4阴性分选后,CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞数的10.95%,CD4+T细胞占总数的89.28%;CD25阳性分选后,CD4+T细胞超过总数的95%,而CD4+CD25+Treg细胞占总数的90.92%,CD4+CD25+Treg细胞纯度大于90%。结论:应用MASC技术成功从OVA免疫耐受大鼠的PBMCs中分选出了高纯度的CD4+CD25+Treg细胞。     

大鼠肝移植自发免疫耐受模型CD4+CD25+和CD8+CD28-调节性T细胞的变化

目的:比较CD8 CD28-,CD4 CD25 调节性T细胞(T regulatory cells,Treg)及其亚群表型在大鼠自发免疫耐受形成中的变化,并探讨其在肝移植免疫耐受形成中的作用.方法:(1)建立雄性Brown Norway近交系大鼠(简称BN)到Lewis近交系大鼠(简称LEW)原位肝移植免疫耐受模型(存活＞120 d),取同周龄LEW大鼠作为对照组,应用梯度离心法分离外周血及脾单个核细胞,应用流式细胞仪检测CD8 CD28-,CD4 CD25 T细胞亚群比例;(2)应用免疫磁珠分离方法,通过间接法阴性分选和直接法阳性分选两步分离纯化CD8 CD28-,CD4 CD25 T细胞,并对其亚型表型进行检测,比较它们在移植耐受前后的差别.结果:(1)耐受组大鼠外周血及脾单个核细胞中CD8 CD28-,CD4 CD25 调节性T细胞的比例同对照组比较:CD8 CD28-T细胞增高,外周血为(30.2±5.8)%比(16.4±6.1)%,脾为(23.7±7.2)%比(13.4±5.5)%,P＜0.01;CD4 CD25 T细胞无明显差别,外周血为(9.9±3.5)%比(10.4±4.2)%,脾为(15.1±3.7)%比(14.7±4.6)%,P＞0.05.(2)CD8 CD28-,CD4 CD25 T细胞的亚型表型检测,①CD8 CD28-T细胞:耐受组为CD152(CTL-4)-,CD11b ,CD25-,CD45RO ;对照组为CD152(CTL-4)-,CD11b ,CD25-,CD45RO部分表达(76%);②CD4 CD25 T细胞:耐受组为CD152(CTL-4) ,CD11b ,CD28 ,CD45 RO ;对照组为CD152(CTL-4) ,CD11b ,CD28 ,CD45 RO .结论:CD8 CD28-Treg细胞在耐受组大鼠外周血及脾单个核细胞中的比例明显增高,而CD4 CD25 Treg细胞则无明显改变,提示CD8 CD28-Treg细胞在大鼠肝移植自发耐受的形成中的作用可能更为重要;CD152(CTL-4)在两种Treg细胞表达差别可能是引起它们作用及表现不同的重要原因;黏附分子CD11b可能同两种Treg细胞的功能均密切相关;CD8 CD28-Treg细胞包含着不同亚群,而CD45RO表达的增加可能同CD8 CD28-Treg细胞发挥抑制功能密切相关.     

慢性移植肾病初期外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞变化及意义

摘要：目的研究慢性移植肾病(CAN)发生初期外周血CD4+CD25+Foxp3+T(TREG)细胞变化及意义。方法对25例初发CAN的
受者外周血CD4+CD25+high/CD4+T 比率及Foxp3表达进行了检测,同时与使用同一抗排斥治疗方案、移植肾功能正常的30例受
者、以及未行肾移植的慢性肾功能不全尿毒症期的20例和正常人20例进行比较,研究了CAN发生初期TREG细胞的变化。结
果CAN发生初期的受者,CD4+CD25+Thigh/CD4+比率为0.71±0.33,Foxp3表达率为62.75±10.80;移植肾功正常者,两指标分别为
1.17±0.25及70.42±6.87,移植肾病组两指标均明显低于移植肾功能正常组（P<0.01）。无论移植肾功能正常与否,移植受者的
CD4+CD25+high/CD4+比率和Foxp3表达率均较未行移植尿毒症患者(1.53±0.35及77.86±7.09)及正常人(1.65±0.28及81.35±2.39)
明显降低（P<0.01）,而正常人及未移植尿毒症患者两指标无明显差别。结论与移植肾功能正常者相比,CAN发生初期患者外
周血中CD4+CD25+high/CD4+ 比率及Foxp3表达率均明显降低,且与肌酐增高无关,提示TREG在CAN的发生中具有一定意义。
     

放射损伤对恶性肿瘤外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的影响

目的:观察放射治疗过程中不同剂量时患者外周血T细胞亚群和CD4 CD25 调节性T细胞的变化.并探讨其临床意义.方法:用流式细胞仪检测放射治疗中不同剂量时患者外周血T细胞亚群和CD4 CD25 调节性T细胞的水平,并进行分层分析.结果:放疗剂量为30GY、50GY时,恶性肿瘤患者CD3 、CD4 、CD8 T细胞比例及CD4 /CD8 比值与放疗前相比,差异无统计学意义,而早期(Ⅰ、Ⅱ)、进展期(Ⅲ、Ⅳ)患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞的水平与放疗前相比,差异有统计学意义(F=4.66,P=0.041),且与剂量呈正相关.结论:放疗可能对恶性肿瘤患者的免疫功能有一定的损害,尤其是患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞水平升高,且它与剂量呈正相关;放疗后外周血CD4 CD25 调节性T细胞比例比CD4 /CD8 比值更能敏感反应免疫功能状态,可能成为恶性肿瘤患者的更敏感的免疫监测指标.     

哮喘患者外周血Rho激酶及CD4+CD25+调节性T细胞测定

目的：比较不同研究对象外周血Rho激酶及CD4+CD25+调节性T细胞的表达规律，探讨Rho激酶和CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘患者中的变化和相关性。方法：选取中、重度哮喘患者16例，健康对照组14例，通过年龄、性别配对，ELISA测定所有研究对象血清Rho激酶水平，流式细胞仪测定CD4+CD25+调节性T细胞水平，所有研究对象经肺功能仪测定肺功能。结果：哮喘组外周血Rho激酶表达水平高于对照组(P<0.05)，外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平低于对照组(P<0.05)；两组外周血Rho激酶与肺功能第1秒用力呼气容积(forced expiratory volume in one second，FEV1)占预计值百分比(FEV1%)无相关关系(r=-0.491，P>0.05)；两组外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平与肺功能FEV1%呈轻度正相关关系(r=0.380，P=0.038)；两组外周血Rho激酶与CD4+CD25+调节性T细胞水平无相关关系(r=-0.438，P>0.05)。结论：哮喘患者外周血Rho激酶水平升高，CD4+CD25+调节性T细胞水平降低，可能在哮喘发病过程中起一定的作用。     

外周血及蜕膜组织中CD4加CD25加调节性T细胞比例与原因不明复发性流产的关系研究

目的：：探讨外周血及蜕膜组织中 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例与原因不明复发性流产的关系。方法：随机选取自2012年6月到2015年6月,我院门诊部与住院部的原因不明复发性流产患者62例(观察组)和正常妊娠妇女62例(对照组)作为研究对象。采用流式细胞四色荧光法测量两组研究对象外周血及蜕膜组织中的 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例。分析比较两组研究对象外周血及蜕膜组织中 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例情况。结果：观察组患者外周血中 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例低于对照组患者外周血中 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞的比例,且两组差异具有统计学意义( t ＝2.669,P ＝0.015);观察组患者蜕膜组织中 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例低于对照组患者蜕膜组织中CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例,两组差异具有统计学意义(t ＝4.986,P ＝0.001)。结论：外周血及蜕膜组织中 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例在早孕期显著升高,参与了正常妊娠的维持,有可能是调控母胎界面局部免疫耐受形成的一个重要因素;外周血及蜕膜组织中 CD4＋CD25＋调节性 T 细胞比例降低可能与 URSA 的发生有关。