低氧反应元件调控缺血心肌转染hVEGF165基因表达对新生血管的影响

目的探讨动物整体水平下低氧反应元件（HRE）调控缺血心肌转染hVEGF165基因表达对促生血管的影响。方法建立兔心肌缺血动物模型,实验分为转基因组、缺血对照组、载体对照组和假手术组。取缺血区心肌组织,检测心肌组织HIF-1α和hVEGF165表达,应用CD31及α-SMA免疫组化染色测定缺血心肌新生血管密度变化。结果心肌缺血早期,伴随内源性HIF-1α表达增加,hVEGF165mRNA及蛋白表达相继升高,缺血4～6周至高峰（P〈0.01）,缺血12周,hVEGF165表达下调至缺血前水平。缺血12周,转基因组CD31（＋）血管密度显著高于缺血对照组（P〈0.01）;但是,与缺血前相比,缺血12周,转基因组α-SMA（＋）血管密度显著低于缺血前水平（P〈0.01）。结论HIF-1α-HRE对缺血心肌转染hVEGF165表达发挥了有效的正相调控作用,有效地促进缺血心肌毛细血管生成。但hVEGF165作为促血管生成早期调节因子,其促生血管的结构尚不完整。     

腺病毒介导的HIF-1α基因在急性心梗后缺血区心肌的表达和意义

目的研究腺病毒介导的低氧诱导因子-1α（HIF-1α）及其下游基因血管内皮生长因子（VEGF）在急性心肌梗死（AMI）后的缺血心肌不同时间点的表达,为I临床应用HIF-1α转基因治疗心肌缺血提供实验依据。方法建立兔AMI模型（120只）,随机分为4组（每组30只）,分别于心肌内注入腺病毒介导的HIF-1α基因（Ad-HIF-1α）、不含HIF-1α基因腺病毒颗粒（Ad-Blank）、HIF-1α核酶基因（Rz-HIF-1α）,假手术组（Sham）为对照,透射电镜及光镜观察心肌组织超微结构变化,免疫组化和免疫印迹（Westernblot）法检测HIF-1α、VEGF及CD31的蛋白表达。结果透射电镜及光镜结果证实载体注射、取材部位是AMI边缘缺血心肌。HIF-1α蛋白定位于缺血心肌细胞胞浆和胞核中,VEGF蛋白则定位于胞浆中。AMI后1d外源性HIF-1α蛋白及VEGF蛋白表达开始升高,7d达高峰,14、28d逐渐下降,56d时外源性HIF-1α蛋白已无表达,而VEGF蛋白56d仍有表达。结论腺病毒介导的HIF-1α基因在缺血心肌能被有效转染,并促使缺血区VEGF生成增多,促进血管新生。     

低氧诱导因子-1α在缺血和缺血/再灌注后大鼠心肌中的免疫组化表达型式

目的观察在心肌缺血和缺血/再灌注时大鼠心肌有无低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达及其表达的时-空间型式。方法选取220～280 g健康Wistar大鼠48只,随机分为3组:①正常对照组;②单纯缺血组;③缺血/再灌注组。利用免疫组织化学技术检测各组心肌HIF-1α的表达。结果正常对照组大鼠心肌组织未见HIF-1α表达。单纯缺血组大鼠心肌组织在缺血2 h即有HIF-1α的阳性表达,缺血12 h表达面积及强度达到最高,缺血24 h又有所下降。大鼠心肌组织中HIF-1α在细胞核及细胞浆中均有表达。在心肌缺血组大鼠心肌中的HIF-1α表达常呈区域性分布,与阴性表达区常有较明显的界限。缺血/再灌注组大鼠心肌组织在缺血45 min/再灌注1 h后即有HIF-1α表达,再灌注3 h后表达面积达到高峰,再灌注5 h又略有下降。单纯缺血组和缺血/再灌注组大鼠心肌组织的HIF-1α最高表达量差异无统计学意义。缺血/再灌注组大鼠心肌中的HIF-1α表达部位也呈区域性分布。结论心肌缺血或缺血/再灌注后大鼠心肌均有HIF-1α的表达,二者表达的时间过程相似,均在数小时内即达到高峰,且表达量差异无统计学意义;HIF-1α在细胞核及细胞浆中均有表达,在心肌组织中的表达常呈区域性分布,与阴性表达区常有较明显的界限,提示只在缺血部位有表达。     

腺病毒介导的HIF-1α基因对缺血心肌作用机制的初步探讨

目的:研究腺病毒介导的低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因转染入兔急性心肌梗死(AMI)边缘区缺血心肌后,HIF-1α、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的蛋白表达情况,初步探讨HIF-1α的作用机制.方法:建立兔AMI模型,随机分为4组,分别于心肌内注入腺病毒介导的HIF-1α基因(Ad-HIF-1α)、不含HIF-1α基因腺病毒颗粒(Ad-Blank)、HIF-1α核酶基因(Rz-HIF-1α),假手术组为对照,免疫组化和免疫印迹(Western blot)方法检测HIF-1α、ERK及P-ERK的蛋白表达.结果:AMI后1天外源性HIF-1α蛋白及p-ERK蛋白表达开始升高,7天达高峰,14、28天逐渐下降,56天时外源性HIF-1α蛋白及p-ERK蛋白均无表达,ERK在各时间点均有表达.在各组中,ERK含量基本无差异,p-ERK的蛋白含量在Ad-Blank组较Sham组升高,较Ad-HIF-1α组降低,Rz-HIF-1α组最低.结论:腺病毒介导的HIF-1α基因在缺血心肌能够有效表达,并能促进ERK的磷酸化,HIF-1α核酶基因能有效阻断缺血心肌HIF-1α的保护作用.     

红景天对急性心肌梗死大鼠心肌组织Ⅷ因子相关抗原、低氧诱导因子和血管内皮生长因子表达的影响

目的：观察红景天对急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）大鼠心肌组织低氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor1α,HIF-1α）、低氧诱导因子1β（hypoxia-inducible factor1β,HIF-1β）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响,探讨红景天促进大鼠缺血心肌血管新生的机制,并了解红景天苷是否为红景天发挥这些作用的有效成分。 方法：建立Wistar大鼠AMI模型,造模前7d开始分组灌胃生理盐水（对照组）、红景天（红景天组）或红景天苷（红景天苷组）,每组12只。灌胃持续至造模手术后第7天,处死动物取心脏标本。免疫组织化学方法检测梗死心肌边缘区和非梗死区Ⅷ因子相关抗原（von Willebrand factor,v WF）的表达,计算其免疫组织化学指数;实时定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）方法检测心肌组织HIF-1α、HIF-1β、VEGF mRNA的表达;蛋白印迹方法检测HIF-1α、HIF-1β、VEGF蛋白的表达。 结果：红景天组梗死边缘区和非梗死区心肌v WF蛋白表达均显著高于对照组（P〈0.05）;红景天组HIF-1α、HIF-1β、VEGF mRNA表达和HIF-1α、VEGF蛋白表达均较对照组显著升高（P〈0.01）,HIF-1β蛋白水平虽较对照组升高,但差异无统计学意义（P〉0.05）。红景天苷组各指标的表达水平均介于对照组和红景天组之间。 结论：红景天具有促进AMI大鼠心肌血管新生的作用,其机制可能与上调HIF-1α、HIF-1β、VEGF表达有关。红景天苷可能是红景天发挥上述作用的有效成分之一。     

不同持续时间低氧后运动对大鼠骨骼肌组织HIF-1α蛋白表达的影响

目的:探讨不同持续时间低氧后运动对大鼠骨骼肌组织HIF-1α蛋白表达的影响。方法:训练完后,将SD大鼠放入低氧仓中,将氧浓度控制为12.5%(相当于4000m海拔高度),分别在8h和12h后,将8h低氧组和12h低氧组动物取出。低氧刺激每天一次,每周5天,共持续4周。运用免疫组化方法检测大鼠骨骼肌组织HIF-1α蛋白表达。结果与结论:HIF-1α在低氧训练刺激下表达上调,HIF-1α蛋白表达随着低氧刺激的时间延长而增高。     

人参三七组方对急性心肌梗死大鼠缺血心肌血管内皮生长因子受体2和缺氧诱导因子1α表达的影响

目的：探讨人参三七组方对急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）大鼠缺血心肌血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2）和缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）表达的影响。 方法：100只Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、美托洛尔（商品名倍他乐克）组和高、低剂量人参三七组方组。除正常对照组大鼠外,结扎各组大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血模型,并于造模后予相应药物治疗12 d。治疗结束后,检测缺血心肌微血管密度（microvessel density,MVD）,蛋白免疫印迹法检测缺血心肌的血管内皮生长因子受体VEGFR-2和HIF-1α的蛋白表达,实时聚合酶链式反应法检测缺血心肌VEGFR-2和HIF-1α mRNA表达。 结果：模型组缺血心肌MVD较正常对照组及假手术组显著增加（P〈0.05）;高、低剂量人参三七组方组及倍他乐克组MVD较模型组显著增加,差异均有统计学意义（P〈0.01）;高、低剂量人参三七组方组之间比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。模型组VEGFR-2、HIF-1α的蛋白和mRNA表达上调,与正常对照组及假手术组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;高、低剂量人参三七组方组及倍他乐克组VEGFR-2、HIF-1α蛋白和mRNA表达均显著高于模型组（P〈0.05）;高、低剂量人参三七组方组之间比较,差异亦有统计学意义（P〈0.05）。 结论：人参三七组方能够促进缺血心肌VEGFR-2和HIF-1α表达,提高缺血心肌毛细血管密度,从而改善心肌缺血,促进侧支循环的形成。     

低氧反应元件对缺血心肌转导hVEGF165基因表达的调控

目的 探讨低氧反应元件（hypoxic response element,HRE）对缺血、复灌心肌转导人血管内皮生长因子165（human vascular endous growth factor 165, Hvegf165）基因表达的调控作用.方法 在猪冠状动脉回旋支起始处以钛夹阻断回旋支血流,建立可复灌的心肌缺血模型.携带9拷贝HRE（9HRE）-Hvegf165的腺相关病毒转染模型心肌,转染后4天,复灌组二次开胸打开钛夹恢复缺血区血供.取各组心肌组织,RT-PCR法测定hVEGF165mRNA的表达情况;免疫组化及免疫印迹法测定Hvegf165蛋白的表达情况;Ⅷ因子免疫组化染色检测局部毛细血管情况.结果 缺血心肌转导Hvegf165基因后,Hvegf165蛋白表达量明显增高,而复灌组表达明显减少（P＜0.01）.结论 9HRE作为调控缺血心肌组织内转导的Hvegf165基因的氧敏感开关灵敏、高效,使Hvegf165基因在缺血时高度表达,而复灌后表达水平下降.     

低氧对人肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-1α和低氧诱导因子-2α的差异性调控作用

目的探讨低氧对肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-lα(HIF-lα)和低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的差异性调控作用及其原因。方法体外培养肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间,采用RT-PCR和Western blot检测低氧对HIF-2α和HIF-lα基因的激活作用。通过加入线粒体活性氧族阻断剂观察低氧对HIF-2α和HIF-lα蛋白表达的影响,探讨其表达调控的机制。结果正常氧条件下,SPCA-1整细胞提取物和细胞核提取物中,HIF-1α几乎不表达,HIF-2α在整细胞提取物中有少量表达,但在细胞核提取物中无明显表达。经低氧(0.5%O2)处理4 h后,HIF-2α和HIF-1α蛋白均明显增多;HIF-2α和HIF-1α蛋白与细胞浓度、氧浓度有关;HIF-1α蛋白在低氧4 h后增加,6 h后显著降低,而HIF-2α蛋白低氧4 h增加后并保持于此水平。HIF-1αmRNA水平在低氧6～12 h时降低,而HIF-2αmRNA表达持续升高;经线粒体活性氧族阻断剂鱼藤酮、二亚苯基碘鎓和粘噻唑菌醇处理4 h后,HIF-2α和HIF-lα蛋白水平明显降低。结论低氧可在肺腺癌细胞诱导HIF-1...     

低压缺氧对兔动脉粥样硬化斑块中HIF-1α、VEGF及MMP-9表达的影响

目的观察低压缺氧对兔动脉粥样硬化斑块低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法将日本大耳兔随机分为常氧对照组和低压缺氧组,高胆固醇饮食12周建立兔动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)病变模型后,取主动脉内膜组织分别采用免疫组织化学方法和real-time PCR检测斑块组织中HIF-1α、VEGF、MMP-9蛋白和mRNA表达。结果低压缺氧组高斑块中HIF-1α、VEGF、MMP-9蛋白和mRNA的表达明显升高,与常氧对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低压缺氧能明显升高斑块中HIF-1α、VEGF、MMP-9蛋白和mRNA表达,可降低兔动脉粥样硬化斑块的稳定性。     

低氧诱导因子促内皮祖细胞活性的可行性研究

目的探讨在体外低氧诱导因子-1α（HIF-1α）促血管内皮祖细胞（EPCs）成血管活性的可行性。方法密度梯度法分离人外周血EPCs，电穿孔技术转染HIF-1α质粒至EPCs，RT-PCR法观察未转染／转染质粒在转染后3、12、20、72h，HIF-1α及下游靶基因血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达含量的变化；免疫组化法检测常氧中转染前后HIF-1α蛋白表达、VEGF受体Flk-1蛋白表达在不同组质粒转染后的差异；ELISA法测定各组质粒转染后VEGF在培养基上清中释放含量及VEGF依赖性一氧化氮合成酶（eNOS）含量的改变。结果HIF-1α基因有效转染入EPCs；HIF-1α mRNA在未转染时即有表达，在HIF-1α质粒转染后3、12、20、72h，含量较未转染时增加（P〈0．05）；HIF-1α过表达诱导VEGF表达上调（P〈0．05）。Flk一1蛋白在常氧下有一定含量，在HIF-1α质粒转染后Flk-1蛋白表达进一步增加。VEGF释放含量在HIF-1α过表达组显著增加（P〈0．05）；HIF-1α诱导eNOS含量增加，并与时间、VEGF刺激量成正比。结论HIF-1α质粒在体外能有效的转染入EPCs，促进其下游靶基因及受体表达，引起相应的功能学改变，促EPCs向内皮细胞分化、扩增，可进一步应用于基因治疗。     

低氧诱发人肝癌细胞株HepG2中IAP-2表达及相关机制

目的 研究极度低氧下人肝癌细胞株HepG2中凋亡抑制蛋白2（IAP-2）表达的变化，初步探讨其与缺氧诱导因子1（HIF-1）的相关性。方法 HepG2细胞株分组孵育，用免疫细胞化学定性检测IAP-2蛋白，再用Western blot半定量检测IAP-2蛋白变化，同时对比HIF-1蛋白表达；用RT-PCR检测IAP-2基因水平改变。结果 免疫细胞化学检测IAP-2蛋白在HepG2细胞中呈阳性表达，定位于胞质。Western blot显示，极度低氧1 h IAP-2蛋白表达明显高于常氧组（t=5．723，P〈0．05），3、5 h IAP-2持续高表达，复氧后恢复基线水平；实验还显示HIF-1和IAP-2的蛋白表达具有差异性：常氧组HIF-1未表达，低氧4h可诱发，IAP-2保持基线水平；极度低氧HIF-1无变化，IAP-2表达明显增高；复氧后HIF-1不表达，IAP-2恢复基线表达；加入氯化钴后HIF-1恢复表达，IAP-2保持基线。RT-PCR检测表明，极度低氧1 h IAP-2 mRNA表达明显高于常氧组（t=7．097，P〈0．05），3、5 h IAP-2持续高表达，该结果与上述IAP-2蛋白表达具有一致性。结论 首次表明极度低氧下IAP-2在人肝癌细胞株HepG2表达上调，并具有独立于HIF-1的抗凋亡机制。     

缺氧诱导因子1 alpha在急性心肌缺血中的表达规律

 【目的】研究心肌缺血状态下HIF-1α的表达规律及其在死亡之后48h的动态变化。【方法】建立SD大鼠急性心肌缺血模型。随机将大鼠分为正常对照组、假手术组、急性心肌缺血试验组和窒息组。用免疫组化、RT-PCR和Western blot检测心肌缺血及死亡后HIF-1α的表达规律。【结果】术后30min缺血心肌中开始出现HIF-1α mRNA表达上调，4～6h达高峰，至术后48h仍维持此高水平；蛋白质的表达相对滞后，于术后2h开始被检测到，之后表达进行性上升，至12h达高峰后维持在高水平；其它各组HIF-1α检测均为阴性。大鼠术后48h处死，死亡后48h内均可检测到HIF-1α mRNA和蛋白质的表达，但表达呈进行性下降趋势；其他各组均未检测到HIF-1α表达。【结论】HIF-1α可作为一个早期心肌缺血的敏感的辅助诊断指标，并用于急性心肌缺血缺氧性死亡和其他原因（例如窒息）缺氧造成的死亡的鉴别。     

缺氧诱导因子1 alpha在急性心肌缺血中的表达规律

【目的】研究心肌缺血状态下HIF-1α的表达规律及其在死亡之后48h的动态变化。【方法】建立SD大鼠急性心肌缺血模型。随机将大鼠分为正常对照组、假手术组、急性心肌缺血试验组和窒息组。用免疫组化、RT-PCR和Western blot检测心肌缺血及死亡后HIF-1α的表达规律。【结果】术后30min缺血心肌中开始出现HIF-1α mRNA表达上调，4～6h达高峰，至术后48h仍维持此高水平；蛋白质的表达相对滞后，于术后2h开始被检测到，之后表达进行性上升，至12h达高峰后维持在高水平；其它各组HIF-1α检测均为阴性。大鼠术后48h处死，死亡后48h内均可检测到HIF-1α mRNA和蛋白质的表达，但表达呈进行性下降趋势；其他各组均未检测到HIF-1α表达。【结论】HIF-1α可作为一个早期心肌缺血的敏感的辅助诊断指标，并用于急性心肌缺血缺氧性死亡和其他原因（例如窒息）缺氧造成的死亡的鉴别。     

糖尿病兔心肌缺血早期心肌细胞超微结构和心肌组织中肿瘤坏死因子α表达水平及其意义

目的：探讨糖尿病兔心肌缺血早期心肌细胞超微结构和心肌组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达水平的变化及其作用机制，为研究糖尿病心肌缺血损伤发生机制提供理论依据。方法：选择42只健康雄性新西兰大白兔，其中26只采用四氧嘧啶耳缘静脉注射方法建立糖尿病模型，将建模成功的22只白兔采用开胸部分结扎冠状动脉左前降支方法建立糖尿病心肌缺血模型。将建模成功的16只糖尿病心肌缺血模型兔分为糖尿病心肌缺血7 d组和28 d组（n=8），其余16只白兔按照相应时间点分为假手术对照7d和28 d组（n=8），只穿线不结扎。透射电镜下观察各组兔心肌细胞超微结构，TUNEL法测定各组兔缺血心肌组织中心肌细胞凋亡指数（AI），实时荧光定量PCR法测定各组兔缺血心肌组织中TNF-α表达水平。结果：假手术对照组兔心肌细胞核较大，核内染色质分布均匀，肌原纤维排列规则，肌节整齐，肌原纤维间线粒体丰富，结构清晰，而糖尿病心肌缺血组兔早期心肌细胞核不规则，肌原纤维结构松散，部分肌原纤维断裂，心肌细胞间线粒体增生明显。与假手术对照组比较，糖尿病兔心肌缺血7 d和28 d组缺血心肌细胞AI和TNF-α表达水平均明显升高（P<0.05），且心肌缺血7 d组高于心肌缺血28 d组（P<0.05）。结论：糖尿病兔心肌缺血早期发生心肌细胞超微结构破坏，心肌细胞凋亡增加；且TNF-α表达水平的升高参与了糖尿病心肌缺血损伤的发生。     

低氧诱导因子-1α、促红细胞生成素在血管性痴呆大鼠海马的表达

目的 观察低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和促红细胞生成素（EPO）在大鼠血管性痴呆（VD）形成过程中的动态表达规律,探讨VD发生的可能机制。方法 采用大鼠双侧颈总动脉永久性阻断法（2-VO）建立VD动物模型,应用Y型水迷宫实验测定动物的学习记忆能力,采用免疫组化法检测大鼠海马CA1区HIF-1α和EPO蛋白的表达．结果 ①随缺血时间的延长,痴呆组大鼠学习记忆能力进行性下降（P〈0．05）;②痴呆组大鼠海马CA1区HIF-1α、EPO的表达于缺血1周时最明显,此后缓慢下降,但与假手术组比较仍处于较高水平（P〈0．01）;③痴呆组大鼠两蛋白表达与学习记忆能力呈高度正相关（P〈0．01）。结论 HIF-1α和EPO参与了VD的发生发展过程,并可能在此过程中通过HIF—UEPO缺氧信号转导途径发挥了保护作用。     

低氧条件下HIF-1α与VEGF在宫颈癌Hela细胞中的表达

目的：探讨低氧对人宫颈癌Hela细胞低氧诱导因子（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）表达水平的影响。方法：Hela细胞按低氧和常氧分两组培养,采用免疫荧光染色法,检测HIF-1α和VEGF在蛋白水平上的表达。结果：低氧培养组Hela细胞中HIF-1α、VEGF的转录水平均高于常氧培养组,低氧培养组的细胞中HIF-1α荧光强度高于常氧培养组,差异有统计学意义（P<0.001）,同样的,低氧培养组的细胞中VEGF荧光强度高于常氧培养组,差异具有统计学意义（P<0.001）。结论：HIF-1α和VEGF在宫颈癌Hela细胞生成和生长过程中的作用依赖氧的调节。     

突变型HIF-1α慢病毒载体的构建及其在常氧条件下的抗降解作用

目的构建点突变型低氧诱导因子-1α（HIF-1α）慢病毒载体,并检测其在常氧条件下的抗降解作用。方法根据人的HIF-1α基因（NM₀01530）,对其全长编码区序列进行如下定点突变:803位天冬酰胺突变成丙氨酸,564位脯氨酸突变成丙氨酸,402位脯氨酸突变成丙氨酸。设计并合成3对引物用以导入变异点。PCR扩增序列片段,然后将目的基因PCR产物连接到载体pEGFP-N1上,构建真核表达载体pEGFP-N1-mutant/HIF-1α。PacI和AscI酶切鉴定后,用LR重组系统将目的序列重组到慢病毒载体plenti6.3V5-DEST上,构建慢病毒载体Lenti-MT（突变型HIF-1α）及Lenti-WT（野生型HIF-1α）。将Lenti-MT、Lenti-WT及Lenti-LacZ（对照组）转染293T细胞后,采用qPCR检测目的基因的表达。转染后的细胞在低氧条件下（2%O2）培养48 h,然后常氧条件下培养48 h,采用Western blot检测HIF-1α蛋白在不同氧浓度条件下的表达情况。结果与WT测序结果对比表明MT已被完成。酶切结果证明已成功构建pEGFP-N1-mutant/HIF-1α。qPCR结果显示Lenti-MT组目的基因表达高于Lenti-WT组,且差异具有统计学意义。低氧条件下,HIF-1α在WT组和MT组中的蛋白表达差异无统计学意义。但常氧条件下培养48 h后,WT组目的蛋白的表达显著下降,而MT组变化不大。上述结果表明MT具有明显的抗降解作用。结论成功构建了突变型HIF-1α,慢病毒载体在常氧条件下,Lenti-MT具有显著的抗降解作用。     

蜂毒素对骨肉瘤Saos-2细胞系HIF-1α及VEGF表达的影响

目的：研究低氧条件下蜂毒素（melittin）对骨肉瘤Saos-2细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨蜂毒素抗骨肉瘤细胞血管生成的机制。方法：分别设空白对照组和低氧对照组,以及加入终浓度为2、4、8μg/ml的蜂毒素组;采用免疫印迹试验（Western—blot）检测细胞HIF-1α蛋白表达,逆转录RT—PCR检测HIF-1α和VEGFmRNA转录水平的变化。结果：与空白对照组比较,低氧对照组细胞中HIF-1α的蛋白表达及VEGF的mRNA表达均明显升高（P〈0．05）;蜂毒素组细胞的HIF-1α蛋白表达明显低于低氧对照组（P〈0．05）,并具有剂量依赖性;蜂毒素组细胞的VEGF mRNA水平明显低于低氧对照组（P〈0．05）,且有剂量依赖性。结论：模拟的低氧条件可以诱导骨肉瘤Saos-2细胞系中HIF-1α通路的激活;蜂毒素通过抑制HIF-1α蛋白水平的表达、影响其通路中下游基因VEGF mRNA水平的表达而抑制骨肉瘤Saos-2细胞中低氧诱导的HIF-1α通路的激活。由此推断蜂毒素可能通过此途径抑制骨肉瘤血管的生成,达到抗肿瘤的效果。     

高糖联合低氧对体外培养的人视网膜色素上皮细胞HIF-1α及VEGF表达的影响

目的探讨高糖及高糖联合低氧对体外培养的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial，RPE）细胞低氧诱导因子1α（hypoxia—inducible factor-1α，HIF-1α）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的影响。方法通过使用化学低氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞低氧环境，研究RPE细胞分别在5．56mmol／L葡萄糖（对照组）、5．56mmol／L葡萄糖＋150μmol／L CoCl2（低氧组）、25mmol／L葡萄糖（高糖组）以及25mmol／L葡萄糖＋150μmol／L CoCl2（联合组）的培养条件下，通过反转录PCR检测HIF-1α及VEGF mRNA的表达，Western blot分析检测HIF-1α及VEGF蛋白水平。结果与对照组比较，高糖组RPE细胞HIF-1α mRNA表达无显著性差异，而高糖组可检测出微量的HIF-1α蛋白，对照组未能检测出HIF-1α蛋白；且高糖组VEGF mRNA表达和蛋白合成均增加（均P〈0．05）。与低氧组比较，联合组RPE细胞HIF-1α mRNA表达无显著性差异，但HIF-1α蛋白水平明显高于低氧组（P〈0．05）；同时VEGF mRNA表达和蛋白合成也均明显增加（均P〈0．05）。结论高糖对体外培养的人RPE细胞HIF-1α的影响是促进蛋白的合成，且对HIF-1α蛋白有一定的稳定作用，在联合低氧条件下高糖促进合成的HIF-1α蛋白更加稳定，同时也促进VEGF的表达增加。