Effects of gabapentin on apoptotic neurons in hippocampus of rats with status epilepticus

目的 研究加巴喷丁(GBP)对癫痫持续状态(SE)大鼠海马区神经元凋亡的影响.方法 SD大鼠48只随机分为对照组、戊四氮致痫组(PTZ组)、GBP组、GBP干预组(干预组),每组12只.戊四氮溶液60 mg·kg-1·d-1腹腔注射诱发SE.干预组致痫后给予GBP 600 mg·kg-1·d-1;GBP组仅给予GBP 600 mg·kg-1·d-1;对照组和PTZ组给予0.9%氯化钠溶液灌胃.采用头皮针状电极单极导联法观察大鼠痫性放电的脑电图.缺口末端标记法(TUNEL)检验凋亡阳性细胞.结果 TUNEL阳性细胞在PTZ组显著高于对照组(P<0.01);GBP组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);干预组表达低于PTZ组(P<0.05).结论 戊四氮致SE大鼠海马CA1和CA3区神经元TUNEL阳性细胞显著增加,GBP能显著减少TUNEL阳性细胞.     

癫痫大鼠海马内谷氨酸含量与神经元凋亡的相关性

目的 研究癫痫大鼠大脑海马组织CA3区中谷氨酸(Glu)含量与神经元凋亡的相关性.方法 SD大鼠随机分成两组:海人酸(KA)致痫组大鼠海马杏仁核注射KA 2μg/kg后分为6 h、1 d、3 d、7 d组,每组8只;对照组注射与致痫剂等容量生理盐水.采用高效液相色谱(HPLC)测定大鼠海马组织CA3区中Glu含量变化,流式细胞术及原位末端标记法(TUNEL)测定相应区域神经元凋亡情况,对海马组织CA3区中Glu含量与神经元凋亡数据进行相关性分析.结果 致痫组6 h后海马组织出现神经元凋亡,Glu含最增加,两者在3 d时达到高峰,7 d时出现下降.海马组织CA3区中Glu含量与神经元凋亡组间有统计学相关性.结论 急性期癫痫大鼠海马组织神经元凋亡增多,提示早期使用抑制Glu增加的药物可能会减少脑损害.     

川芎嗪对青霉素致痫大鼠神经元内Bim的表达

目的:探讨川芎嗪对青霉素致痫大鼠神经元内Bim的表达及统计分析。方法 :将实验大鼠随机分为3组:①A组(手术对照组),麻醉开颅手术1h后取海马;②B组(青霉素致痫组),青霉素诱发癫痫1h后取海马;③C组(TMP40mg.kg-1治疗组),青霉素诱发癫痫放电稳定后,再腹腔注射TMP(40mg.kg-1),待抑制作用最明显时取海马。应用免疫组织化学方法研究川芎嗪对青霉素致痫大鼠神经元内Bim的表达水平,采用HPIAS-1000图文报告管理系统对Bim的表达进行定量分析。结果:A组(手术对照组)神经元内Bim的呈低表达,B组(青霉素致痫组)神经元内Bim呈高表达,C组(TMP40mg.kg-1治疗组)神经元内Bim的呈低表达。A组和C组与B组Bim的表达比较差异有显著性(P<0.05)。结论:川芎嗪对青霉素致痫大鼠大脑神经元的凋亡具有重要的保护作用。     

神经节苷脂对大鼠弥漫性轴索损伤后细胞凋亡的影响

目的探讨神经节苷脂对大鼠弥漫性轴索损伤后海马CA1区神经元凋亡的影响。方法 Wistar大鼠,♂,192只,随机分为正常对照组、假手术组、脑损伤组和药物干预组。正常对照组不给予任何干预措施;假手术组仅进行头皮切开缝合处理;脑损伤组和药物干预组均制作弥漫性轴索损伤模型,其中药物干预组在制作模型后定期给予神经节苷脂（40 mg·kg-1·d-1）。造模3,6,12,24,336 h后,用免疫组化方法检测海马CA1区凋亡蛋白酶激活因子-1（apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1）蛋白的表达。结果脑损伤组和药物干预组大鼠海马CA1区Apaf-1蛋白表达含量均于3 h开始增加,6 h达到高峰,此后逐渐下降。药物干预组大鼠海马CA1区Apaf-1蛋白表达含量在各个时间点均低于脑损伤组,除3 h组外,差异均有统计学意义（P〈0·05）。结论弥漫性轴索损伤可引起大鼠海马CA1区神经元凋亡,神经节苷脂可改善该凋亡的发生发展。     

灵芝孢子粉对戊四氮致痫大鼠大脑皮质及海马区PCNA变化的影响

目的：探讨灵芝孢子粉对戊四氮（PTZ）致痫大鼠大脑皮质及海马区增殖细胞核抗原（PCNA）变化的影响,进一步研究癫痫的发病机制及灵芝孢子粉的干预机制。方法：免疫组织化学法（SABC法）检测皮质和海马区PCNA的免疫反应性;Western-blot检测海马区PCNA蛋白含量的变化。结果：癫痫模型组PCNA阳性细胞数目明显增多与对照组比较差异有显著性（P〈0.01）,灵芝孢子粉干预组与癫痫模型组比较PCNA阳性细胞数明显减少差异有显著性（P〈0.01）;PCNA在戊四氮致痫组的大脑海马区的蛋白含量与对照组比较差异有显著性（P〈0.01）,灵芝孢子粉干预组与癫痫模型组比较差异有显著性（P〈0.01）。结论：灵芝孢子粉可以通过调节PCNA含量抑制星形胶质细胞（AS）增生,从而影响戊四氮致痫大鼠癫痫发作的发生与发展。     

脑源性神经营养因子对戊四氮致癫痫大鼠海马神经肽Y表达的影响

目的 研究侧脑室内注入脑源性神经营养因子(BDNF)对戊四氮(PTZ)致癫痫大鼠海马区神经肽Y(NPY)表达的影响.方法 采用PTZ制备大鼠癫痫模型.立体定向自侧脑室注入BDNF.免疫组化观察NPY在海马CA1 区的表达,放射免疫测定海马,皮层,下丘脑组织NPY匀浆浓度.结果 免疫组化显示点燃模型组阳性反应神经元增多,BDNF干预组阳性反应神经元明显增多.点燃模型组海马组织匀浆NPY的放射免疫测定浓度增高 (P＜0.05);BDNF干预组海马组织匀浆NPY的放射免疫浓度明显高于点燃模型组(P＜0.05).结论 NPY参与了癫痫的发病过程,BDNF可以增加脑组织NPY浓度.     

JNK信号通路参与Aβ毒性对大鼠海马神经元的损伤

目的探讨β-淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)毒性对大鼠海马神经元的损伤以及JNK信号转导通路在此过程中的作用。方法应用Aβ1-40注射大鼠双侧海马CA1区建立毒性损伤模型,通过HE染色、Nissl染色、TUNEL染色、免疫组化法、透射电镜并结合图像分析技术研究海马的病理学变化以及神经元的存活与凋亡、超微结构及p-JNK阳性细胞率。结果与对照组比较,大鼠注射Aβ后,海马CA1区锥体细胞排列松散,数目减少,神经元固缩、浓染,胶质细胞明显增生,超微结构可见明显凋亡特征,TUNEL阳性细胞数明显增多(P<0.01),p-JNK阳性细胞比例明显升高(P<0.01)。结论 Aβ可明显诱导海马神经元凋亡,JNK信号转导通路参与了Aβ的神经毒性损伤作用。     

川芎嗪对癫痫的作用及其与白细胞介素-1受体关系的研究

目的:研究川芎嗪对癫痫的作用及其与白细胞介素-1受体(IL-1R)的关系。方法:用腹腔注射戊四氮制作大鼠癫痫模型,致痫前后分组分别给予川芎嗪,观察大鼠出现癫痫发作的潜伏期及持续时间,并用脑电图仪和免疫细胞化学方法研究川芎嗪对癫痫大鼠脑电图和皮层及海马区IL-1Rβ免疫反应阳性细胞的影响。结果:对照组无癫痫发作。致痫前给予川芎嗪组大鼠较癫痫组大鼠癫痫发作潜伏期延长,持续时间缩短,差异有显著意义(P<0.01);脑电图高电位痫样波发放减少,大脑皮层和海马IL-1Rβ免疫反应阳性细胞数减少,差异有显著意义(P<0.01);致痫后给予川芎嗪组,上述指标与癫痫组相比,差异无显著意义(P>0.05)。结论:川芎嗪抑制癫痫发作,其作用机制与通过白细胞介素-1对免疫-神经的调节有关。     

柴胡桂枝汤对SE大鼠IRE1、 CHOP蛋白表达的影响

目的：观察柴胡桂枝汤对癫痫持续状态（statusepil epticus,SE）大鼠内质网应激IRE1信号转导通路前存活分子IRE1mRNA与前凋亡分子CHOP蛋白在大鼠海马区表达的变化及该区域神经元细胞凋亡情况。方法：采用氯化锂-匹罗卡品制作SE模型,将90只SD大鼠随机分为对照组、SE组、药物组3组,每组按照SE后2h、4h、8h、24h、72h五个时间点分为5个亚组。应用原位细胞凋亡检测法（TUNEL法）观察海马区神经元细胞凋亡数、用RT-PCR检测SE后海马IRE1mRNA的表达,用免疫组织化学法检测CHOP蛋白表达。结果：①SE组8～72h时间点TUNEL阳性细胞数多于对照组（P〈0.01）,其阳性细胞数随惊厥持续时间延长而增加。药物组8～72h时间点TUNEL阳性细胞数较SE组明显减少（P〈0.05）。②对照组IRE1mRNA有少量表达;SE组IRE1mRNA的表达于SE后4h表达量为最高,随后逐渐下调;其4h,8h,24h时间点较对照组有显著差异（P〈0.01）。药物组4h,6h,24h时间点海马区IRE1mRNA的表达明显高于SE组,差异有显著性（P〈0.05）。③对照组未见CHOP阳性细胞,SE组于2h后在海马区可见CHOP阳性细胞,随时间的延长阳性细胞数逐渐增多,于24h达到高峰,之后逐渐下降;SE组CHOP阳性细胞数与对照组比较,两者有显著差异（P〈0.01）。药物组各个时间点CHOP数量表达明显少于SE组,两者有显著差异（P〈0.01）。结论：柴胡桂枝汤可能通过减少SE对内质网的刺激,上调前存活分子IRE1的表达,下调前凋亡分子CHOP的表达,减轻异常放电对脑组织的病理损害,发挥对神经元的保护作用。     

川芎嗪对青霉素致痫大鼠神经元Bcl-X_L基因表达的影响

目的:通过免疫组织化学方法来探讨川芎嗪(TMP)对青霉素致痫大鼠大脑神经元内Bcl-XL基因表达的影响。方法:使用青霉素致痫大鼠模型,采用BL-410生物机能实验系统记录双侧大脑皮层痫样放电,待癫痫样放电稳定后,腹腔注射不同剂量的TMP,待其抑制作用最明显时,取大脑切片,采用免疫组织化学方法观察大脑神经元内Bcl-XL基因表达的变化,利用计算机图像分析技术测量不同时期血管瘤组织和正常皮肤组织Bcl-XL基因表达的平均光密度和平均阳性面积。结果:A组(手术对照组)与B组(青霉素致痫组)、C组(TMP10mg.kg-1治疗组)之间Bcl-XL基因的平均光密度及阳性面积率有显著性差异(P<0.01),A组(手术对照组)与D组(TMP20mg.kg-1治疗组)、E组(TMP40mg.kg-1治疗组)之间Bcl-XL基因的平均光密度及阳性面积率的差异无显著性(P>0.05),B组(青霉素致痫组)与C组(TMP10mg.kg-1治疗组)之间平均光密度及阳性面积率的差异无显著性(P>0.05),D组(TMP20mg.kg-1治疗组)与E组(TMP40mg.kg-1治疗组)之间Bcl-XL基因的平均光密度及阳性面积率的差异无显著性(P>0.05)。结论:TMP可抑制青霉素致痫大鼠大脑神经元的凋亡,从而对神经元起了重要的保护作用。     

曲美他嗪对庆大霉素致大鼠肾毒性的预防作用研究

目的:探讨曲美他嗪对庆大霉素致大鼠肾毒性的预防作用。方法:将大鼠分为溶媒对照组,曲美他嗪低、高剂量组(5、10mg.kg-1.d-1),庆大霉素组(100 mg.kg-1.d-1)和低、高剂量联用组(曲美他嗪5或10 mg.kg-1.d-1+庆大霉素100 mg.kg-1.d-1),每组6只,曲美他嗪灌胃给予2 d,第3天开始曲美他嗪灌胃30 min后腹腔注射庆大霉素,无对应药物的注射生理盐水,连续给药7 d,末次给药后24 h处死大鼠。采用荧光偏振免疫分析法测定各组大鼠肾组织中庆大霉素的浓度;缺口末端标记(TUNEL)法观察各组肾脏细胞凋亡情况;苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理学改变。结果:与庆大霉素组比较,高剂量联用组大鼠肾组织中庆大霉素浓度明显降低(P<0.05),低、高剂量联用组大鼠肾脏细胞凋亡数目均明显降低(P<0.05或P<0.01);庆大霉素组大鼠肾脏可见炎性细胞浸润等病变形态;低、高剂量联用组肾脏组织病理变化均有好转。结论:曲美他嗪可能通过降低庆大霉素在肾脏中的蓄积来减轻庆大霉素引起的肾毒性。     

六味地黄汤对糖尿病大鼠心肌病变的影响

目的 通过研究六味地黄汤对糖尿病大鼠心肌细胞病理变化的影响,为其治疗糖尿病心脏并发症的药理作用提供实验依据.方法 随机将大鼠分为正常组、糖尿病组、六味地黄汤低、中、高剂量组(100、200和400mg.·kg-1·d-1)和罗格列酮组(100 mg·kg-1·d-1).除正常组外,其余各组采用腹腔注射链脲佐菌素法诱发糖尿病大鼠模型,造模成功后饲养4周,然后连续灌胃给药4周.于末次给药12 h后取材,观察大鼠心肌细胞的形态学变化及细胞凋亡指数.结果 与罗格列酮干预组相比,高剂量六味地黄汤能显著抑制糖尿病大鼠心肌细胞的形态学病变及细胞凋亡(P＜0.01),中剂量组亦具有一定抑制作用.结论 六味地黄汤对糖尿病心肌细胞的病理变化具有一定的抑制作用,可治疗该并发症.     

原儿茶醛防治醋酸泼尼松致生长期大鼠骨质疏松的研究

目的探讨醋酸泼尼松对生长期大鼠骨代谢指标的影响及不同剂量原儿茶醛对醋酸泼尼松性骨质疏松症的防治作用。方法 60只无特定病原体(SPF)级大鼠随机分为4组:正常对照组(NC组),模型对照组(GC组),高剂量原儿茶醛组(GHP组),低剂量原儿茶醛组(GLP组)。NC组每天灌胃0.9%氯化钠溶液,余3组分别灌胃泼尼松3.5 mg·kg-1·d-1造模,GHP组给予原儿茶醛8 mg·kg-1·d-1;GLP组给予原儿茶醛2 mg·kg-1·d-1。结果 GC组大鼠骨物理指标、骨密度减少,重要脏器比,骨矿物质和有机质下降(P<0.05);高、低剂量原儿茶醛治疗后大鼠骨物理指标,骨密度,重要脏器比,骨矿物质和有机质较GC组显著增加(P<0.05),与NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论原儿茶醛能明显改善模型动物的骨物理指标,增加骨密度、骨矿物质和有机质,增强重要脏器比,从而有效防治醋酸泼尼松致骨质疏松的发生。     

熊果酸对动脉粥样硬化大鼠氧化应激和炎性反应的影响

目的 研究熊果酸(UA)对动脉粥样硬化(AS)大鼠氧化应激和炎性反应的抑制作用,并探讨其机制.方法 采用高脂饲料喂养结合腹腔注射VD3的方法建立早期AS大鼠模型,并分别灌胃给予UA(10、20、40 mg· kg-1· d-1)和辛伐他汀(SV, 1.8 mg· kg-1· d-1)进行干预,作为干预组,另设模型组和健康对照组(喂食正常饲料并腹腔注射生理盐水).采用比色法测定血清中抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)]活性和丙二醛(MDA)、活性氧簇(ROS)含量;酶联免疫法(ELISA)测定血浆中炎性细胞因子[C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)]含量;苏木精-尹红(HE)染色观察主动脉形态结构改变并进行病变分级.结果 UA(20、40 mg· kg -1· d-1)同步干预组大鼠血清中 SOD、CAT 活性较模型组显著升高[(318.3 ±29.4)、(12.3 ±2.4)U· mL-1vs(249.3 ±25.1)、(9.3 ±1.7)U· mL-1],MDA、ROS含量显著降低[(31.2 ±5.1)vs(49.6 ±7.0) mmol· L-1和(291.3 ±31.8)vs(402.9 ±35.7)U· mL-1],且UA 40 mg· kg -1· d-1干预组GSH-Px活性显著升高[(809.3 ± 58.4)vs(676.1 ±48.5)U· mL-1];UA(20、40 mg· kg-1· d-1)同步干预组大鼠血浆中CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6含量较模型组均显著降低,且UA 40 mg· kg-1· d-1干预组IL-10含量显著升高[(37.6 ±4.9)vs(23.9 ±3.2)ng· L-1];UA同步干预组大鼠主动脉形态结构改变较模型组明显改善、病变评分显著降低,其中以UA 40 mg· kg-1· d-1干预组效果最为显著.结论UA可能通过抑制氧化应激损伤和炎性反应而对AS大鼠起到一定保护作用.     

山绿茶总黄酮对前列腺增生大鼠细胞增殖的影响

目的观察前列腺增生大鼠前列腺组织增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki-67的表达及山绿茶总黄酮(HHLTF)对其影响。方法 48只SD大鼠随机均分为前列腺增生模型(P)组、前列康治疗(Q)组、HHLTF高(H1)、中(H2)、低(H3)剂量治疗组和对照(C)组。除C组外各组大鼠去势后注射丙酸睾酮制作前列腺增生模型,用前列康(570mg.kg-1.d-1)或HHLTF 80、40、20mg.kg-1.d-1灌胃,连续5周;P、C组以生理盐水灌胃。计算大鼠前列腺指数,免疫组化法测定PCNA和Ki-67的表达。结果 H1、H2组的前列腺指数及PCNA、Ki-67表达均较P组显著降低(P<0.01)。结论HHLTF具有抑制前列腺增生的作用,其机制可能是通过抑制PCNA和Ki-67蛋白的表达而实现。     

复方甘草酸苷对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织SOD、MDA、MPO酶的影响

目的探讨复方甘草酸苷对溃疡性结肠炎(UC)大鼠的治疗作用。方法将50只SD大鼠随机分成正常对照组(10只,不做任何处理)和模型组[40只,采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)法复制UC大鼠模型]。造模3 d后,模型组又随机分成模型组对照组(0.9%氯化钠溶液)、复方甘草酸苷低、高剂量组(剂量分别为12.5,50 mg.kg-1.d-1)和阳性对照组(300 mg.kg-1.d-1美沙拉嗪溶液)。各组按设计剂量灌胃给药10 d后,取结肠组织观察病变程度并评分,并测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)的含量。结果各治疗组肠炎病变评分和MDA含量与模型对照组比较显著下降(P<0.05),SOD、MPO未见统计学差异。结论复方甘草酸苷对UC的治疗作用可能与减轻或阻断组织的脂质过氧化反应及改善组织的病变程度有关。     

普伐他汀提升肾病综合征合并高凝状态大鼠抗凝血酶Ⅲ水平

目的观察并比较普伐他汀和低分子肝素对肾病综合征高凝状态的影响.方法经尾静脉一次性注入阿霉素(2%的阿霉素,6.5 mg·kg-1)制作肾病综合征模型,观察普伐他汀、低分子肝素及联合用药对血浆凝血与纤溶分子标志物抗凝血酶Ⅲ、D-二聚体和纤维蛋白原的影响.结果普伐他汀和低分子肝素均可使血浆D-二聚体含量下降,普伐他汀可使肾病模型大鼠的抗凝血酶Ⅲ水平明显升高,而低分子肝素组抗凝血酶Ⅲ水平与模型组差异无统计学意义,三个治疗组的纤维蛋白原浓度、血液生化指标与模型组差异均没有统计学意义.结论阿霉素诱导的大鼠肾病综合征可出现明显的高凝状态,普伐他汀明显升高血浆ATⅢ水平,改善肾病综合征大鼠高凝状态.     

Effects of Angelica sinensis on longitudinal bone growth rate in adolescent female rats

OBJECTIVE To investigate the effect of A.sinensis on longitudinal bone growth rate in adolescent female rats.METHODS A.sinensis was extracted with 30% EtOH for 3h at 90℃in a reflux apparatus.Female Sprague-Dawley rats(33d-old)were randomly divided into three groups:control(vehicle),recombinant human growth hormone(rhGH;20μg·kg-1·d-1),and A.sinensis(300mg·kg-1·d-1).A.sinensis extracts or vehicle was administered orally twice daily for 4d.Longitudinal bone growth rate in newly synthesized bone was observed using tetracycline labeling(20mg·kg-1,intraperitoneally).RESULTS A.sinensis significantly increased longitudinal bone growth rate in adolescent female rats at 300mg·kg-1(6.1%,357.34±32.67μm·d-1)compared to control group(336.80±14.47μm·d-1).CONCLUSION A.sinensis extract significantly increased longitudinal bone growth rate and growth plate height in adolescent female rats.These results suggest that A.sinensis could be helpful for increasing bone growth rate in children who have growth retardation.     

Effect of Cymbopogon citratus Stapf extract on lipid profile and antioxidant status in streptozotocin-induced diabetic rats

OBJECTIVE To investigate the effects of Cymbopogon citratus Stapf water extract on lipid profile and antioxidant status in streptozotocin-induced diabetic rats.METHODS Diabetes was induced by injection of streptozotocin(STZ,50mg·kg-1)intraperitoneally.Diabetic rats were divided into 5groups,consisting of 6rats.GroupⅠ,reserved as diabetic control,was administered distilled water and groupⅡ,reserved as positive control,was administered glibenclamide(10mg·kg-1·d-1)throughout the duration of the experiment.Those in groupⅢ,ⅣandⅤ were administered 250,500 and 1000mg·kg-1·d-1 of the extract,respectively for 28 d.RESULTS Treatment with 500 and 1000mg·kg-1·d-1 of the extract resulted in reduction of serum AST,ALT,serum cholesterol,triglycerides and LDL,whereas HDL was found to be increased compared with diabetic control rats(P<0.05).Moreover,increased serum activities of superoxide dismutases and catalase were found in diabetic rats treated with the extract whereas serum thiobarbituric acid reactive substance was decreased,in comparison with diabetic control rat(P<0.05).CONCLUSION Cymbopogon citratus Stapf water extract provides a benefit effect on serum lipid and antioxidant effect in diabetic rats.Thus,the extract may lower cardiovascular disease risk and others complications related to hyperlipidemia and oxidative stress in diabetic patients.     

灵芝多糖抑制NADPH氧化酶表达防治大鼠动脉粥样硬化

目的探讨灵芝多糖对食饵性实验动脉粥样硬化(AS)大鼠的防治作用及其作用机制。方法将40只大鼠随机分为正常对照组、动脉粥样硬化模型组、灵芝多糖低、中、高剂量预防组。12周末颈动脉取血检测血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;处死大鼠,光镜观察各组主动脉粥样斑块形成情况;取主动脉测定活性氧(ROS)含量;免疫印迹观察其Nox4、p22phox蛋白表达情况。结果灵芝多糖各剂量组均可有效抑制动脉粥样硬化病理进程,降低血清MDA、SOD及主动脉ROS含量等氧化应激反应指标,减少主动脉Nox4、p22phox蛋白表达。结论灵芝多糖通过下调Nox4、p22phox等NADPH氧化酶蛋白表达水平抑制主动脉氧化应激反应,明显改善大鼠动脉粥样硬化。