低相对分子质量肝素对内毒素诱导的内皮细胞表达vWF:Ag、PAI-1和PS的影响

目的观察低相对分子质量肝素（LMWH）对内毒素（LPS）作用下人脐静脉内皮细胞（HUVEC）表达血管性血友病因子相关抗原（vWF：Ag）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）及蛋白S（PS）的影响。方法常规从脐带分离及培养HUVEC，取第1～3代HUVEC于24孔板进行分组实验。应用酶联免疫吸附法（ELISA）或免疫比浊法测定HUVEC上清液中的vWF：Ag、PAI-1及PS。结果（1）在LPS刺激下，HUVEC培养上清液中vWF：Ag量较对照组增加（由2．0％增至3．5％），差异有显著性（P〈0．05）。不同浓度LMWH（20u／ml、50u／ml、100u／ml）均可抑制LPS对HUVEC表达vWF：Ag的影响，与内毒素组比较，差异有显著性（P〈0．05）；（2）在LPS刺激下，HUVEC表达PAI-1的量增加，与对照组比较，差异有显著性（P〈0．05）。加入不同浓度的LMWH，可下调LPS对HUVEC表达PAI-1的影响。各剂量组与LPS组比较，差异均有显著性（P〈0．05）；（3）以1μg／ml LPS刺激HUVEC，PS表达量下降，与对照组比较，差异有显著性（P〈0．05）。同时加入LMWH可上调LPS对HUVEC表达PS的影响，各剂量组与LPS组比较，差异有显著性（P〈0．05）。结论LPS可上调HUVEC表达vWF：Ag及PAI-1，下调HUVEC表达PS。LMWH能拮抗上述作用。提示：LMWH对LPS诱导的内皮细胞的活化与损伤有保护作用，在重症炎症状态下使用LMWH可能有利于器官功能的恢复和预防DIC。     

尿酸对人脐静脉内皮细胞增殖及PAI-1分泌的影响

目的探讨尿酸（UA）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖及纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）分泌的影响,以阐明其在动脉粥样硬化发生中的作用。方法用MTT比色法观察不同浓度UA（0、2、4、8、16mg／dL）作用24h对HUVECs增殖的影响;用ELISA方法评价不同浓度UA（0、2、4、8、16mg／dL）作用HUVECs 24h及8mg／da UA作用HUVECs 1、3、6、12、24h对细胞培养液中PAI-1的影响。结果UA呈剂量依赖性抑制内皮细胞增殖,8、16mg／dL UA组与对照组（0mg／dLUA）比较均有统计学意义（P〈0．01）。UA诱导HUVECs分泌PAI-1呈浓度依赖性增加,8、16mg／dL UA组与对照组比较均有统计学意义（P〈0．01）;UA诱导HUVECs分泌PAI-1亦呈时间依赖性,与1h比较,3、6、12、24h均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论UA抑制HUVECs增殖,诱导HUVECs分泌PAI-1,这可能与高尿酸血症致动脉粥样硬化作用机制有关。     

瘦素在诱导血管内皮细胞纤溶酶原激活物抑制物-1表达中的作用

目的通过体外研究探讨瘦素对血管内皮细胞纤溶酶原激活物抑制物-1表达的影响。方法Ⅱ型胶原酶消化法分离和培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,在不同时间采用不同剂量瘦素培养HUVECs,应用荧光定量PCR、Northern blot以及Western blot检测技术研究瘦素对HUVECs PAI-1 mRNA及蛋白表达的影响。结果100ng／ml瘦素作用于内皮细胞,PAI-1 mRNA表达水平随着时间延长呈升高的趋势,8h达到最高（P〈0．001）,24h后仍高于起点（P〈0．005）,而tPA的表达则无显著变化（P〉0．05）。不同浓度的瘦素作用于内皮细胞,其PAI-1 mRaNA水平呈剂量依赖性升高（P〈0．001）;tPAmRNA表达亦无显著变化（P〉O．05）。100ng）ml瘦素孵育HUVECs时间依赖性促进PAI-1蛋白表达,24h达到最高峰。结论瘦素可能通过诱导血管内皮细胞PAI-1表达促进动脉粥样硬化和血栓的形成。     

TNF-α对人脐静脉内皮细胞t-pA、pAI-1表达的研究

目的：观察肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）组织型纤溶酶原激活物（tissue plasminogen activitor,t-PA）及其抑制剂-1（plasminogen activitor inhibitor-1,PAI-1）表达的影响。方法：原代分离HUVECs细胞并进行传代培养,分别以6个TNF-α浓度组（0、1、10、20、50、100 ng·m L-1）处理不同时间（0、1、3、6、12、24 h）,酶联免疫吸附分析（ELISA）法测定t-PA、PAI-1抗原的表达;逆转-聚合酶链反应（RTPCR）检测t-PA、PAI-1基因的表达。结果：TNF-α促进PAI-1抗原的表达,并呈剂量和时间依赖关系,在TNF-α10 ng·m L-1作用6 h时最明显（P〈0.01）;TNF-α促进PAI-1 mRNA的表达,并呈剂量和时间依赖关系,在TNF-α10 ng·m L-1作用3 h时已非常明显（P〈0.01）,6 h时达到高峰（P〈0.01）;而TNF-α对HUVECs表达t-PA抗原、mRNA无明显影响。结论：炎症因子TNF-α可能通过上调PAI-1表达而诱发血栓相关疾病。     

致密斑细胞COX-2的表达及AP-1、NFKB信号通路

目的评估低盐（LS）培养对小鼠致密斑（MMDD1）细胞环氧化酶-2（COX-2）表达及核因子-kB（NF-kB）和活化蛋白-1（AP-1）活性的影响。方法经脂质体转染含NF-kB或AP-1的报告质粒,采用瞬时表达方法检测正常盐（NS）与LS培养对NF-kB和AP-1转录活性的影响。采用RT-PCR检测MMDD1细胞COX-2表达的变化,Western blot方法检测细胞内P-p38MAPK、p-p44／42、c-Jun、c-Fos和COX-2蛋白的表达。结果LS培养促进了MMDD1细胞COX-2mRNA和蛋白表达（P〈0．01）。LS培养后,p38和p44／42的磷酸化程度显著上调（P〈0．01）,180min后达到高峰。p38抑制剂SB-203580、p44／42抑制剂PD-98059可降低LS诱导的COX-2表达（P〈0．01）。LS培养促进了c-Jun、c-Fos蛋白表达（P〈0．01）,激活了AP-1和NF-kB的转录活性（P〈0．01）。25umol／L NF-kB抑制剂PDTC和20umol／L AP-1抑制剂curcumin下调了LS诱导的NF-kB、AP-1活性（P〈0．01）。25umol／L PDTC、20umol／L curcumin降低了LS诱导的COX-2mRNA和蛋白表达（P〈0．01）。结论LS培养可促进MMDD1细胞COX-2的表达,其作用可能与促进p38MAPK、p44／42激酶的磷酸化,增加NF-kB和AP-1的活性有关。     

罗格列酮对2型糖尿病心血管相关标志物的影响

目的：观察2型糖尿病的一些心血管相关标志物水平变化及罗格列酮（RSC）对这些标志物的影响。方法：157例受试者分为正常对照组（NGT）、糖耐量低减组（IGT）、2型糖尿病未合并大血管病变组（DM。）及合并大血管病变组（DM2）。应用RSG（4mg／d）治疗16周后，观察c反应蛋白（CRP）、Ⅰ型血浆纤溶酶原活化抑制剂（PAI-1）、假性血友病因子（vWF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的水平变化。结果：治疗前从NGT、IGT、DM，副DM2组，CRP、PAI-1、vWF、MMP-9水平逐渐升高，CRP、PAI-1在各组间有显著差异（P〈0．05）；DM1、DM2组vWF和MMP-9与NGT、IGT组比较有显著差异（P〈0．05）；经RSG治疗后，IGT组、DM1组CRP水平明显下降（P〈0．01），各组PAI-1下降（P〈0．01），DM2组vWF和MMP-9下降（P〈0．05）。结论：RSG不同程度降低心血管相关标志物水平，对IGT和2型糖尿病心血管具有保护作用。     

不同强度的游泳对大鼠凝血和纤溶系统的影响

目的研究不同量强度的游泳对机体凝血系统和纤溶系统的影响。方法40只Waster大鼠进行不同强度量的游泳后，测定其血浆组织因子（TF）抗原、组织因子途径抑制物（TFPI）抗原、组织型纤溶酶原激活物（t-PA）活性、纤溶酶原激活剂抑制物-1（PAI-1）活性、抗血管性假性血友病因子（vWF）浓度和凝血酶调节蛋白（TM）抗原。结果①中小量强度游泳后，血浆t-PA活性和t—PA／PAI-1比值明显升高（P〈0．01），PAI-1活性却明显降低（P〈0．05）；大强度量游泳组t-PA活性和PAI-1活性没有明显改变（P〉0．05）：②与对照组相比，游泳使TFPI水平升高，其中小强度量和中强度组TFPI含量明显升高（P〈0．01），且中运动量组大鼠血浆TF水平明显降低，TFPI／TF比值显著性升高（P〈0．01）；大强度组的TF和TFPI含量有所升高，但TFPI／TF比值变化不明显（P〉0．05）；③不同强度的游泳训练均可使大鼠血浆TM浓度升高（P〈0．05或P〈0．01），但对血浆vWF浓度没有明显影响，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论中小量强度的游泳可以改善机体的凝血和纤溶功能，而大强度量运动不利于改善纤溶功能，且有可能降低机体的抗凝功能。     

云芝多糖B对血管紧张素Ⅱ诱导的巨噬细胞膜糖胺聚糖和细胞内谷胱甘肽含量变化的影响

目的 探讨野生云芝多糖水溶性新组分CVP-B对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的RAw264．7巨噬细胞糖胺聚糖（GAG）表达及细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）的作用。方法用超速离心法分离巨噬细胞膜,用1,9-二甲基亚甲基兰法测定CVP-B对AngⅡ诱导RAW264．7巨噬细胞膜GAG表达的影响：同时应用荧光分光光度法测定CVP-B对AngⅡ诱导RAW264,7巨噬细胞内GSH变化的影响。结果AngⅡ（1μmol／L）刺激RAW264,7细胞,细胞膜GAG含量升高115％;随着CVP-B浓度升高（1,10,50ixg／m1）,AngⅡ（1μmol/L）诱导的细胞膜GAG分别降低13％、43％（P〈0.01）及52％（P〈0．01）。同时,AngⅡ（1μmol/L）刺激RAW264．7细胞,细胞内GSH活性降低69％（P〈0．01）;随着CVP．B浓度升高（1,10,50μg/ml）,AngⅡ（1μmol/L）诱导的GSH活性分别升高11％、104％（P〈0．01）及168％（P〈0．01）。结论CVP-B能明显抑制AngⅡ氧化应激诱导的RAW264．7巨噬细胞膜GAG表达。     

高静水压培养对人脐静脉内皮细胞t-PA和PAI-1的影响

目的探讨高静水压培养对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）t—PA和PAI-1的影响及其可能的作用机制。方法选用第4～6代HUVECs，接种于24孔培养板中。依培养压力分为3组：大气压组（0mmHg），中压组（90mmHg）和高压组（180mmHg），每组18份标本。在同一压力组，根据不同药物干预又分为3个亚组：对照组（Ctrl组），双丁酰环磷腺苷组（DBA组，10μmoL／L）和硝普钠组（NP组，10^-4moL／L），每组6份标本。采用ELISA法测定上清液t-PA和PAI-1的抗原浓度，并用细胞内总蛋白进行标化，同时测定细胞内Ca^2＋浓度。结果与大气压组的对照组比较，中压和高压组t-PA浓度均显著降低（P〈0.01），PAI-1浓度显著增高（P〈0.01），t-PA／PAI-1比值显著降低（P〈0.01），[Ca^2＋]i也显著增高（P〈0.01）。cGMP诱导剂NP显著降低三个压力组的PAI-1浓度（P〈0.01）和增高t—PA／PAI-1比值（P〈0.05），cAMP的同功异构体DBA显著升高三个压力组的PAI-1浓度（P〈0．01，P〈0．05）。DBA和NP对t-PA浓度没有显著影响（P〉0.05）。结论高静水压可损害内皮细胞的抗纤溶功能。第二信使cAMP、cGMP和细胞内钙离子在此可能起调节作用。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞表达ICAM-2及与树突状细胞粘附的影响

目的 探讨同型半胱氨酸（Hcy）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分泌和表达细胞间粘附分子-2（1-CAM-2）以及内皮细胞与树突状细胞（DC）粘附的影响。方法 在人脐静脉内皮细胞培养基中加入浓度为0．5mmol／L的Hey作用不同时间，以及加入不同浓度的Hey作用24h。用ELISA法检测内皮细胞培养基中HU-VECs分泌ICAM-2的蛋白含量，用Western blot法检测HUVECs表达ICAM-2的蛋白含量，用分子探针标记的DC与HUVECs共孵育，共聚焦显微镜下计数粘附于HUVECs的DC数量，以检测Hey对HUVECs与DC粘附的影响。结果用0．5mmol／L Hey干预后，HUVECs分泌ICAM-2蛋白在12h开始高于空白组（P〈0．05），24h和48h均增加显著（均P〈0．01）；而ICAM-2蛋白的表达在6h开始高于空白组（P〈0．05），24h达峰值（P〈0．01），48h下降显著，且与空白组相比无统计学差异。用不同浓度的Hey干预24h后，ICAM-2蛋白的分泌和表达及HUVECs与Dc粘附均呈剂量依赖性增加，当Hey浓度高于0．5mmol／L时增加更显著。结论 Hey能刺激HUVECs分泌和表达ICAM-2蛋白，从而促进HUVECs与DC的粘附，这可能是其诱导动脉粥样硬化早期形成的重要机制之一。     

Mechanism of ligustrazini against thrombosis

Objective To investigate the mechanism of Chinese medicine ligustrazini against thrombosis, and the effects of ligustrazini on plasminogen activator inhibitor (PAI-1) expression in normal endothelial cells and lipopolysaccharide (LPS) stimulated endothelial cells. Methods Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were cultured by trypsin digestion method. PAI-1 protein in HUVEC conditioned medium was measured by Sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and PAI-1 mRNA expression was determined by Northern blot analysis. Using electrophoretic mobility shift assay (EMSA), we observed HUVEC nuclear factor-kappa B (NF-κB) nuclear translocation. Results LPS treatment of cultured HUVECs resulted in a significant increase in PAI-1 protein and mRNA expression by these cells. However, when HUVECs were incubated with LPS plus ligustrazini, the upregulation of PAI-1 by LPS was abated. Moreover, ligustrazini could decrease the basal level of PAI-1 protein and mRNA in HUVECs as compared with control. Nuclear extracts prepared from HUVECs stimulated by LPS demonstrated that binding to the NF-kB oligo nucleotide increased as compared with the unstimulated cells, but ligustrazini did not change those binding in the absence or presence of LPS. Conclusions Ligustrazini inhibited both basal and LPS-induced PAI-1 protein and mRNA expression in endothelial cells, and the modulation of PAI-1 in HUVECs by ligustrazini might have other mechanisms rather than NF-kB     

Activation of peroxisome proliferator-activated receptor α in human endothelial cells increases plasminogen activator inhibitor type-1 expression

Objective To investigate the effect of peroxisome proliferator-activated receptors(PPARs) activators on plasminogen activator inhibitor 1(PAI-1) expression in human umbilical vein endothelial cells and elucidate a possible mechanism.Methods Human umbilical vein endothelial cells(HUVECs) were obtained from normal fetus,and cultured conventionally.Then the HUVEC were exposed to fatty acids and prostaglandin J2 in varying concentrations with fresh media.RT-PCR and ELISA were used to determine the expression of PPAR and PAI-1 in HUVECs.Transient co-transfection of PAI-1 promoter and PPARα gene or PPARγ gene to ECV304 was performed.Results PPARα,PPARγ and PPARγ mNRA in HUVECs were detected by RT-PCR.Treatment of HUVECs with PPARα and PPARγ activators-linolenic acid,linoleic acid,oleic acid and prostaglandin J2,but not with stearic acid could augment PAI-1 mRNA expression and protein secretion in a concentrationdependent manner.Proportional induction of PAI-1 promoter activity was observed through increasing amounts of PPARαDNA in HUVECs throgh a transient gene transfection assay,although the mRNA expression of the 3 subtypes of PPAR with their activators were not changes compared with controls.Conclusions HUVECs express PPARs,PPARs activators may increase PAI-1 expression in endothelial cells(EC).Although PPARs expresslon was not enhanced after being stimulated by their activators in EC,the functionally active PPARαis probably involved in regulating PAI-1 expression in EC.     

THE INCREASE IN PLASMINOGEN ACTIVATOR INHIBITOR TYPE—1 EXPRESSION BY STIMULATION OF ACTIVATORS FOR PEROXISOME PROLIFERATOR—ACTIVATED RECEPTORS IN HUMAN ENDOTHELIAL CELLS

INTRODUCTIONPlasminogenactivatorinhibitortype－１（PAI－１），themajorphysiologicalinhibitoroftissueplasminogenacti－vatorandurokinase，limitsfibrinolysis．ConsiderableevidencelinksPAI－１tomyocardialinfarctionanddeepvenousthrombosis（１）．Circulatinglip     

TNF—α或mmLDL对人脐静脉内皮细胞PAI—1的细胞及其机制

目的：探讨肿瘤坏死因子α（TNF－α）或弱氧化修饰低密度脂蛋白（mmLDL)对人脐静脉内皮细胞（HUVECs)PAI－1活性和mRNA表达的影响及其分子机制。方法：用发色底物法测定HUVECs培养液中PAI－1的活性,用Northern印迹分析法检测PAI－1基因mRNA的表达情况,并分别用蛋白激酶C（PKC）或促分裂原活化蛋白激酶激酶（MAPKK）抑制剂干预上述诱导实验。结果：TNF－α或mmLDL作用HUVEC后,PAI－1活性和mRNA基因表达均明显增加,促分裂原活化蛋白激酶－激酶（MAPKK）的抑制剂PD98059（60μmol/L)能明显阻断TNF－α（100U／ml)或mmLDL(50μg/ml)对PAI－1活性和mRNA的诱导,但PKC的抑制剂Staurosporine(10nmoo/L)和H7（15μmol/L)无显著阻断作用。结论：（1）TNFα或mmLDL能增强血管内皮细胞PAI－1尖性与mRNA表达;（2）PAI－1活性提高与其mRNA表达增加有关。（3）MAPK途径可能在TNF-α或mmLDL诱导血管内皮细胞PAI－1表达中起重要作用。     

人脐静脉内皮细胞用于构建组织工程心脏瓣膜的实验研究

目的：以人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)为种子细胞，体外构建组织工程心脏瓣膜(TEHV)，并对其分泌纤溶物质——组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其抑制物(PAI-1)的作用进行观察。方法：获取并扩增HUVECs，种植在猪脱细胞主动脉瓣叶上，体外静态构建TEHV。观察内皮细胞的形态学变化和生长状况。收集瓣膜培养液，采用发色底物法检测瓣膜内皮细胞分泌的t-PA和PAI-1活性。结果：以猪脱细胞主动脉瓣叶作支架，HUVECs做种子细胞，体外成功构建TEHV，种植的HUVECs在瓣膜表面长成一层连续的细胞层，生长状态良好。瓣膜表面的内皮细胞能够分泌纤溶物质t-PA和PAI-1。结论：HUVECs种植在猪脱细胞瓣膜支架上可以构建TEHV，且瓣膜内皮细胞能够分泌t-PA和PAI-1。