特发性血小板减少性紫癜患者CD4^＋CD25^＋Treg细胞的表达

目的：近年研究发现，CD4^＋CD25^＋Treg细胞不论数量缺失或功能紊乱均可导致免疫异常的发生，对调节性T细胞的深入认识，将会对免疫异常疾病如自身免疫性疾病、移植物抗宿主病、过敏性疾病等发病机制的揭示有着深远的意义。实验将进一步验证CD4^＋CD25^＋Treg细胞与特发性血小板减少性紫癜发病的关系及可能机制。 方法：实验于2007—06／09在中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所实验室完成。①实验材料：中国协和医科大学血液病医院住院的特发性血小板减少性紫癜患者27例治疗前后外周血，患者确诊符合血液病诊断及疗效标准。正常人外周血15份，实验均征得患者或家属知情同意。②实验方法：应用流式细胞术检测特发性血小板减少性紫癜患者、正常对照、以及治疗前后患者外周血中CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例。对其中治疗有效的23例患者，采用密度梯度离心法从治疗前后的外周血中提取单个核细胞，以RT—PCR方法检测其中Foxp3 mRNA的表达水平。 结果：①特发性血小板减少性紫癜患者外周血中CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例以及CD4^＋CD25^＋Treg细胞在总CD4^＋T细胞中所占比例明显均低于正常对照组（P〈0．05）。②有效治疗后的特发性血小板减少性紫癜患者CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例与治疗前相比无明显改变（P〉0．05），但Treg细胞中Foxp3mRNA的表达水平比治疗前明显增加（P〈0．05）。 结论：特发性血小板紫瘢患者体内存在CD4^＋CD25^＋Treg细胞的异常，数量的减少、Foxp3表达的降低所造成的CD4^＋CD25^＋Treg细胞免疫抑制功能受损可能是特发性血小板减少性紫瘢发病的一个重要因素。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在ITP患者发病机制中的作用

目的研究慢性特发性血小板减少性紫癜（CITP）患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞数量及Foxp3基因的表达水平,探讨它们在CITP发病机制中的作用。方法分别收集40例CITP患者及健康对照组外周抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞。利用PE标记的抗-CD4单抗,FITC标记的抗-CD25单抗,作双色流式细胞术,分析CITP患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞百分率,采用RT-PCR法检测T细胞Foxp3 mRNA表达水平。结果CITP患者外周血CD4^＋T、CD4^＋CD25^＋T细胞百分率及T细胞Foxp3 mRNA水平均低于对照组（P〈0.01）,且CD4^＋CD25^＋T细胞百分率与Foxp3 mRNA水平呈正相关。结论CITP患者细胞免疫功能失调,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的数量与功能发生改变,T淋巴细胞耐受机制的破坏可能与CITP的发病机制有关。     

CD4^＋CD25^highT细胞在特发性血小板减少性紫癜发病机制中的作用

本研究探讨特发性血小板减少性紫癜（ITP）治疗前后患者外周血中CD4^＋CD25^highT细胞（CD25-PE染色阳性〉10^2为CD4^＋CD25^highT细胞）的表达情况及其可能的作用机制。应用免疫荧光标记和流式细胞术检测20例治疗前ITP患者、20例治疗后患者及14名正常人外周血中CD4^＋CD25^highT细胞的表达。结果表明：ITP患者治疗前外周血T细胞表面CD4^＋CD25^highT细胞表达水平明显低于治疗后组及正常对照组（P均〈0．01）；ITP治疗后患者组与正常对照组相比无显著性差异（P〉0．05）。结论：ITP治疗前患者外周血中CD4^＋CD25^highT细胞水平较正常对照组明显降低，而在治疗有效后有所升高。外周血CD4^＋CD25^highT细胞表达率与血小板数量呈正相关。CD4^＋CD25^highT细胞水平的检测可作为对ITP患者预后判断的一个有效指标，并可以作为免疫治疗的靶点进行进一步研究。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与肿瘤免疫治疗

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Tregs）于1995年由Sakaguehi等首次报道，将去除了CD25^＋细胞的CD4^＋单阳细胞过继转移给裸鼠，则裸鼠发生多种自身免疫疾病；而将CD4^＋CD25^＋T细胞CD4^＋T细胞共同转移，则不发生自身免疫疾病。此研究揭示CD4^＋CD25^＋T细胞具有维持自身免疫耐受的功能。肿瘤的形成和进展与机体的免疫功能密切相关，CD4^＋CD25^＋T细胞在肿瘤免疫逃逸中起重要作用。本文就调节性T细胞在肿瘤免疫调节中的研究进展进行综述。     

调节性T细胞在慢性特发性血小板减少性紫癜中的作用

特发性血小板减少性紫癜（ITP）与免疫异常密切相关。目前认为慢性ITP患者存在Th1／Th2失衡，并以Th1反应占优势。调节性T细胞（Treg）是机体重要的T细胞亚群，在自身免疫性疾病的发生和发展中具有重要作用，其表型为CD4^＋CD25^＋。FOXP3是Treg的特征性转录因子，其表达水平能反映Treg功能。为了研究Treg在ITP发病中的作用，我们对25例慢性ITP患者CD4^＋CD25^＋T细胞的数量及功能进行检测。     

异基因造血干细胞移植中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与急性移植物抗宿主病的相关性

背景：CD4^＋CD25^＋调节性T细胞是调节性T细胞的一个重要亚群,在诱导移植耐受方面起着重要作用。目的：综述CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的特性、免疫调节作用机制及其与急性移植物抗宿主病的相关性。方法：应用计算机检索PubMed、Medline数据库1990-01/2010-02,维普数据库2000-01/2010-02以及运用Google网络数据库有关CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及其他与急性移植物抗宿主病相关性研究的文献。结果与结论：CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在异基因造血干细胞移植后产生的急性移植物抗宿主病中起着重要作用,不仅能有效预防和治疗急性移植物抗宿主病,同时还能保留移植物抗白血病效应作用。随着研究的深入,发现CD4^＋CD25^＋调节性T细胞很有希望成为急性移植物抗宿主病早期风险预测的一项重要实验诊断指标,并且有可能通过调控移植后患者体内CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平来预防和控制急性移植物抗宿主病的发生。但是,要将CD4^＋CD25^＋调节性T细胞应用于临床尚有问题有待解决,例如CD4^＋CD25^＋调节性T细胞细胞表面特异性标志物是什么,如何提高CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在人体内的活性以及怎样充分发挥其免疫抑制功能等。     

CD4＋CD25＋调节性T细胞和Th17细胞在特发性血小板减少性紫癜中的表达和意义

目的验证并探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞及Th17细胞与特发性血小板减少性紫癜发病的关系及可能机制。方法入选自2009年12月至2010年11月在山东省医学科学院附属济宁市第一人民医院血液内科门诊就诊或住院治疗的41例ITP患者（其中初治19例,复发22例,符合难治标准17例）及同期41例健康查体者为研究对象。所有标本均抽取清晨空腹外周血,以肝素钠抗凝。应用流式细胞术（FCM）测定ITP患者和健康对照外周血的CD4＋CD25＋调节性细胞及Th17细胞百分率;应用酶联免疫吸附试验（ELISA技术）测定ITP患者和健康对照血浆的IL-17水平。结果 ITP病例组外周血CD4＋CD25＋调节T细胞的百分率明显低于对照组（P〈0.05）,而Th17细胞的比例显著高于正常对照组（P〈0.05）,血浆IL-17水平在两组间差异无统计学意义（P〉0.05）;病例组中初治患者与复发患者外周血CD4＋CD25＋调节T细胞的百分率比较差异无统计学意义（P〉0.05）;难治组患者外周血CD4＋CD25＋调节T细胞的百分率低于非难治组（P〈0.05）;初治患者治疗后外周血CD4＋CD25＋调节T细胞百分率显著升高,但仍低于正常对照组（P〈0.05）。ITP病例组的CD4＋CD25＋Treg/Th17较健康对照组明显下降,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞显著减少,Th17细胞明显增加,出现Treg/Th17细胞失衡,这可能是影响特发性血小板减少性紫癜发生发展的一个重要因素。ITP患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞减少程度在初治与复发ITP患者中差异无统计学意义;难治性ITP可能与CD4＋CD25＋调节性T细胞数量减少和Treg/Th17失衡尚未纠正有关。初治ITP患者经临床常规治疗后外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞比例回升。     

特发性血小板减少性紫癜患者外周血调节性T细胞的研究

目的研究特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Tr细胞）的变化，探讨其在ITP发病机制中的作用。方法分别收集35例ITP患者及健康对照组外周抗凝静脉血，分离纯化T淋巴细胞。应用藻红蛋白（PE）标记的抗CD4单抗及异硫氰酸荧光素（FITC）标记的抗CD25单抗，作双色流式细胞术，分析ITP患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞百分率。结果ITP组外周血中Tr细胞明显低于健康对照组（P〈0．05），Tr细胞占CD4^＋T细胞的比例也低于健康对照组（P〈0．05）。结论ITP患者外周血存在细胞免疫功能失调，Tr细胞数量减少可能与ITP的发病机制有关。     

CD4^＋CD25^highT细胞在特发性血小板减少性紫癜发病机制中的作用

本研究探讨特发性血小板减少性紫癜（ITP）治疗前后患者外周血中CD4^＋CD25^highT细胞（CD25-PE染色阳性〉10^2为CD4^＋CD25^highT细胞）的表达情况及其可能的作用机制。应用免疫荧光标记和流式细胞术检测20例治疗前ITP患者、20例治疗后患者及14名正常人外周血中CD4^＋CD25^highT细胞的表达。结果表明：ITP患者治疗前外周血T细胞表面CD4^＋CD25^highT细胞表达水平明显低于治疗后组及正常对照组（P均〈0．01）；ITP治疗后患者组与正常对照组相比无显著性差异（P〉0．05）。结论：ITP治疗前患者外周血中CD4^＋CD25^highT细胞水平较正常对照组明显降低，而在治疗有效后有所升高。外周血CD4^＋CD25^highT细胞表达率与血小板数量呈正相关。CD4^＋CD25^highT细胞水平的检测可作为对ITP患者预后判断的一个有效指标，并可以作为免疫治疗的靶点进行进一步研究。     

CCL20抑制小鼠胸腺CD4^＋CD25^＋天然调节性T细胞的发育

本研究探讨趋化因子CCL20对小鼠胸腺CD4^＋CD25^＋双阳性调节性T细胞发育的影响,为天然调节性T细胞调控的研究提供基础数据。采用14.5天龄胚鼠胸腺进行体外培养,以FACS检测不同时间点胸腺CD4^＋CD25^＋细胞的改变,同时计数每个胸腺小叶的细胞数变化。结果表明：体外胸腺培养的第1-6天胸腺细胞比例、细胞数量的变化趋势与胸腺体内发育的第14.5、15、16、17、18、19天CD4^＋CD25^＋双阳性T细胞的比例、细胞数量的变化趋势相似;在胸腺体外培养的第1-6天,CD4＋CD25^＋T细胞占CD4^＋T细胞的比例分别为58.29%、12.14%、6.08%、17.78%、9.06%、4.04%,占CD25^＋T细胞的比例分别为3.75%、10.81%、17.20%、51.93%、61.64%、80.06%,这一发育趋势与体内结果具有一致性。在4μg/ml的CCL20干预下,胸腺体外培养的第3、6天CD4^＋CD25^＋胸腺细胞分别从3.24±0.18、3.96±0.24下降至1.27±0.11、1.76±0.22（p值均〈0.001）。结论：体外培养的CD4^＋CD25^＋双阳性胸腺细胞数量和比例变化与体内发育变化趋势一致,CCL20明显下调胸腺CD4^＋CD25^＋的表达,这将为天然调节性T细胞的调控研究提供有效的参考依据。     

沙利度胺对多发性骨髓瘤患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞作用的临床研究

本研究探讨沙利度胺治疗前后多发性骨髓瘤（MM）患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的比例及变化规律，为有效的免疫治疗提供理论依据。采用流式细胞术检测MM患者外周血CD3、CD4、CD8、NK及CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例；采用成组设计的两样本均数比较的t检验进行统计学分析，以P〈0．05为检验水准。结果表明：MM患者治疗前CD4^＋CD25^＋highT比例较正常人明显升高（P〉0．01），沙利度胺治疗有效患者的CD4^＋CD25^＋highT比例较治疗前明显降低（P〈0．01），治疗无效者Treg比例无显著变化（P〉0．05）。16例经化疗完全缓解，CD4^＋CD25^＋highT比例为6．91±1．12％，较治疗前升高，但无显著性差异（P〉0．05）。沙利度胺治疗有效者CD3^＋T、CD4^＋T、NK细胞比例及CD4／CD8比值较治疗前明显升高（P〉0．05或0．01），CD8^＋T治疗前后无显著变化（P〉0．05）。结论：CD4^＋CD25^＋Treg细胞的免疫抑制作用可能是MM免疫逃逸的重要机制，下调MM患者CD4^＋CD25^＋Treg可能是沙利度胺治疗MM有效的机制之一。     

特发性血小板减少性紫癜患者外周血调节性T细胞表达的研究

目的通过分析特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者治疗前后外周血CD4+CD25+调节性T细胞的变化,探讨它们在ITP发生过程中的作用。方法流式细胞仪检测40例ITP患者治疗前后和30例健康对照者的外周血CD4+CD25+调节性T细胞的比例并分析比较。结果 40例ITP患者治疗前CD4+CD25+调节性T细胞的表达明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),治疗后除无效组外,其表达明显高于治疗前(P<0.05),但仍低于对照组(P<0.05),初诊组与无效组比较差异无统计学意义(P>0.05);显效组、良效组和进步组均明显高于无效组(P<0.05),但良效组和进步组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ITP患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例降低,但治疗后随着病情的好转逐渐升高,提示CD4+CD25+调节性T细胞可能在ITP的发病中起着重要作用。     

急性白血病儿童外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞和NK细胞的变化及其在白血病免疫中的意义

本研究观察急性白血病患儿外周血CD4^＋CCD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）及自然杀伤细胞（nature killer cell,NK）在不同病程阶段的变化,了解白血病患儿的免疫状态,以探讨CD4^＋CD25^＋Treg细胞及NK细胞在急性白血病肿瘤免疫中的意义。建立流式细胞术检测外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞和NK细胞的方法：检测急性白血病初诊患儿25例、完全缓解患儿28例及20例正常健康对照者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞及NK细胞的数量及比例。结果表明：初诊组、完全缓解组及对照组外周血CD4^＋CD25^＋CD127^＋占CD4^＋T细胞的比例分别为（9．55±2．41）％,（8．54±2．51）％和（6．25±0．85）％,在初诊患儿组和缓解患儿组高于正常对照组,且在初诊患儿组高于完全缓解组（P〈0．05）;同时,与正常对照组比较,急性白血病患儿的NK细胞数量减少,完全缓解后患儿组NK细胞数量仍低于正常对照（4．11±3．87％和10．41±7．20％w14．06±5．95％,P〈0．05）。结论：联合应用CD4、CD25及cDl27检测Treg细胞简便可行、重复性好、检测结果可靠、准确,CD4^＋CD25^＋CD127^＋T细胞可较好地反映CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例。急性白血病患儿外周血中Treg细胞数量升高,NK细胞数量降低,表明急性白血病患儿NK细胞免疫功能处于抑制状态。Treg细胞可能在白血病的发生、发展中起一定作用,参与NK细胞的调节可能是Treg细胞在白血病免疫中的一个环节。     

大肠癌患者外周血CD4^＋CD25^＋CD127^lo/-调节性T细胞的含量及临床意义

目的探讨大肠癌患者外周血CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-调节性T细胞（Treg）的变化及意义。方法流式细胞术检测36例大肠癌患者及30例健康人外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg的变化；ELISA检测同一标本血清中转化生长因子β（TGF—β）的表达水平。结果36例大肠癌患者外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg占CD4^＋、淋巴细胞的比例为（6．92±1．31）％，与正常对照组（4．91±1，24）％相比差异有显著性（P〈0．05）。20例腺癌、7例黏液癌、9例未分化癌患者外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg比例分别为（6．81±1．52）％、（6.99±1．21）％、（7．08±1．17）％，各组间比较差异无显著性（P〉0．05），均高于对照组的（4．91±1．24）％，差异有显著性（P〈0，05）。IV期大肠癌患者外周血CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg高于Ⅱ期大肠癌患者（P〈0．05）。大肠癌组外周血清中TGF—β水平显著高于正常对照组，随着TGF—β水平增加，CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg比例逐渐增高，两者呈正相关。结论大肠癌患者外周血中CD4^＋、CD25^＋、CD127^lo/-Treg表达增高，与临床分期相关，但与组织学分类无关，导致机体免疫抑制，可能参与大肠癌发生。     

CD4^＋、CD25^＋调节性T细胞在重型乙型肝炎发病中的作用

目的探讨CD4＋、CD25＋调节性T细胞（CD4＋、CD25＋ Tr）在重型乙型肝炎病人发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测重型乙型肝炎病人及对照组外周血CD4＋、CD25＋ Tr的水平及应用PCR测定重型乙型肝炎病人及对照组外周血中HBVDNA滴度。结果重型乙型肝炎组外周血CD4＋、CD25＋ Tr的百分率为（2.63±0.83）%,较慢性乙型肝炎组的（4.15±1.17）%差异有显著性（P〈0.05）,较无症状HBV携带者组及健康对照组差异有非常显著性（P均〈0.01）;重型乙型肝炎组外周血HBVDNA滴度为1.2×10^4copies/ml,较慢性乙型肝炎组（2.3×10^6copies/ml）和无症状HBV携带者（7.8×105copies/ml）差异有非常显著性（P均〈0.01）;不同乙型肝炎病人外周血CD4^＋、CD25^＋ Tr的百分率与HBVDNA滴度正相关。结论CD4^＋、CD25＋^ Tr能抑制T细胞对HBV的免疫反应;重型乙型肝炎患者发病与CD4^＋、CD25^＋ Tr表达过低有关。     

Foxp3转染小鼠CD4^＋CD25^-T细胞抑制树突状细胞功能

为了研究Foxp3基因表达与CD4^＋T细胞免疫活性的关系,用逆转录病毒转染Foxp3基因,在幼稚CD4^＋CD25^-T细胞内强制性表达FOXP3蛋白,进而研究转染后的CD4^＋CD25^-T细胞对树突状细胞的免疫共刺激分子和免疫功能的影响,并通过Transwell试验研究转染Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞对树突状细胞的作用是否依赖于细胞之间的直接接触。结果表明：通过逆转录病毒载体转染,成功建立了表达Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞模型,转染后1周Foxp3阳性表达的T细胞比例为38%。强制性表达Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞可以在体外发挥免疫抑制作用,可以诱导树突状细胞表面免疫共刺激分子CD80和CD86表达水平的下调。体外淋巴细胞增殖试验结果表明,Foxp3转染小鼠CD4^＋CD25^-T细胞可以抑制树突状细胞对异基因淋巴细胞的活化。结论：转染Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞对树突状细胞发挥的作用依赖于细胞之间的直接接触。     

自身免疫性血小板减少性紫癜患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞、sFas和sFasL的表达及临床意义

本研究通过检测成人自身免疫性血小板减少性紫癜(AITP)外周血中CI4+CD25+调节性T细胞(Treg)、sFas和sFasL的表达,探讨它们在AITP发病机制中的作用及临床意义,为寻求AITP治疗的有效方法提供理论依据.采用流式细胞术分别检测30例AITP患者和18例正常对照者外周血CD4+T、Treg、CD4+ CD25-T细胞表达率及Treg/CD4+T比值;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测AITP患者治疗前后及对照组外周血sFas、sFasL表达水平.结果表明,AITP组外周血中CD4+T细胞表达率低于对照组(p＜0.05),Treg细胞表达率及Treg/CD4+T比值明显低于正常对照组(p＜0.0l).AITP组患者治疗前外周血中sFas和sFasL水平明显高于治疗后和正常对照组(p＜0.01),AITP组治疗后与正常对照组外周血sFas、sFasL水平差异无统计学意义(p＞0.05).AITP患者治疗前Treg细胞表达率、Treg/CD4+T细胞比值与血小板计数呈正相关;AITP患者外周血中sFas和sFasL水平呈正相关;CD4+T细胞、CD4+CD25 -T细胞表达率,sFas、sFasL浓度与血小板计数无明显相关;Treg细胞表达率和sFas、sFasL浓度间没有明显相关性.结论:Treg在AITP的发病机制中发挥一定作用;Treg细胞水平与AITP病情的严重程度有关;sFas和sFasL水平异常参与了AITP的免疫病理过程.