抗氧化物原花青素对人未成熟卵母细胞体外成熟的影响

目的探讨抗氧化物原花青素对卵胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)周期中人类未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)、受精及胚胎发育的影响。方法选取2019年1月至2020年12月在成都市妇女儿童中心医院行ICSI治疗周期321例,共获得未成熟卵母细胞837枚,随机分为对照组和原花青素组两组,原花青素组在人未成熟卵母细胞IVM培养液中添加原花青素,对照组不添加原花青素。未成熟卵母细胞在两组培养液中培养24 h,观察两组的成熟率、受精率、卵裂率、可利用胚胎率以及囊胚形成率,并通过荧光染料Hoechst33342对胚泡进行染色,检测囊胚的总细胞数。结果无论是GV期还是MI期卵母细胞,原花青素组的成熟率、可利用胚胎率及囊胚形成率均高于对照组,差异有统计学意义(P 0.05),但受精率和卵裂率两组间比较差异无统计学意义(P0.05);原花青素组孵化囊胚细胞总数均高于对照组,差异有统计学意义(P 0.05)。结论添加原花青素能提高人类未成熟卵母细胞的体外成熟率和胚胎发育潜能。     

卵泡刺激素及戊酸雌二醇对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的:探讨卵泡刺激素(FSH)、戊酸雌二醇(E2)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟、受精及卵裂能力的影响.方法:对雌性小鼠进行超促排卵后处死小鼠,取出卵巢,刺破卵泡,收集形态较好的未成熟卵母细胞,随机分为6组,在不添加激素的基础培养液中以及分别添加10,50 IU/mL的FSH及1,10,100 mg/L的戊酸E2的培养液中培养24h后,观察各组卵母细胞的成熟情况.对已成熟的卵母细胞进行体外受精,观察卵母细胞受精情况.受精后继续培养48～72 h,观察其卵裂情况.比较各组的成熟率、受精率和卵裂率.结果:①各浓度FSH组及各浓度戊酸E2组与对照组相比,成熟率[生发卵泡破裂率(GVBD率)、MⅡ率]及卵裂率的差别均无统计学意义(P＞0.05).②10,50 IU/mL FSH组以及10 mg/L戊酸E2组的受精率分别为41.18％,40％和42.86％,均高于对照组(19.44％),差异有统计学意义(P＜0.05);1,100 mg/L戊酸E2组与对照组相比受精率差异均无统计学意义(P＞0.05).③各浓度FSH组之间以及各浓度戊酸E2组之间成熟率(GVBD率、MⅡ率)、受精率及卵裂率的差别均无统计学意义(P＞0.05).结论:在小鼠体外成熟培养液中添加10,50 IU/mLFSH及10 mg/L戊酸E2能促进小鼠卵母细胞胞质的成熟,从而提高受精率.     

ICSI周期未成熟卵母细胞24h体外成熟后受精 发育潜能和临床结局分析

目的 研究胞浆内单精子注射(ICSI)周期中未成熟卵母细胞体外培养24 h成熟后进行ICSI的受精、发育潜能和临床结局，以期为未成熟卵母细胞的临床应用提供参考。方法 回顾性分析华中科技大学同济医学院附属同济医院生殖医学中心2018年1月—2021年10月行辅助生殖助孕治疗的不孕症患者的临床资料，以ICSI周期中未成熟卵母细胞比例>50%的69例患者作为研究对象，将263枚24 h体外成熟(IVM)的卵母细胞(B组)与来自相同周期的241枚体内成熟的同胞卵母细胞(A组)进行对比，分别比较两组胚胎的受精、发育潜能及临床结局。结果 B组成熟的卵母细胞(MII)比率59.63%明显高于A组的34.63%,差异有统计学意义(P<0.01),两组其余的基础资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在受精方面，B组2原核(2PN)受精率50.57%与A组的51.45%接近；1PN率3.42%、3PN率3.42%和退化(DA)率16.73%与A组相比(分别为2.07%、3.32%、12.45%)呈升高趋势，但差异均无统计学意义(P>0.05)。B组第3天(D3)继培数68.42%较A组的50.81%明显增多，D3优胚率15.79%和可利用囊胚率20.88%较A组(分别为28.23%、39.68%)明显下降，差异均有统计学意义(P<0.05);第2天(D2)卵裂率90.98%、囊胚形成率34.07%、优质囊胚率8.79%与A组相比(分别为95.97%、49.21%、11.11%)呈下降趋势，但差异均无统计学意义(P>0.05)。A组复苏移植18例：妊娠3例(分娩1例，正在进行的妊娠2例);B组复苏移植15例：妊娠3例(分娩2例，正在进行的妊娠1例),分娩胎儿均健康无畸形及并发症。结论 对于MII卵母细胞较少的ICSI周期，未成熟卵母细胞体外培养24 h成熟后进行ICSI具有一定的临床应用价值，充分利用这部分卵母细胞可以提高卵子利用率和增加妊娠机会。     

人脐带血清用于人未成熟卵母细胞体外成熟培养并获得妊娠的观察

目的:以人脐带血清作为卵母细胞体外成熟培养(IVM)培养液的主要成份开展IVM技术研究,旨在为IVM临床妊娠率的提高,IVM技术的进步探索一条新路。方法:47例、47个周期的PCOS患者接受了IVM技术的治疗。未成熟卵母细胞分别入IVM培养液Ⅰ(含人成熟卵泡液,卵泡液组)和IVM培养液Ⅱ(含脐带血清,脐带血清组)行体外成熟培养,分析人脐带血清对IVM结果影响。结果:脐带血组:15周期,160枚未成熟卵母细胞,体外成熟过程中,成熟率、优质胚率及临床妊娠率分别为93.75%(150/160)、50.00%(60/120)和40.00%(6/15),已分娩4例,另2例处于妊娠阶段;卵泡液组:32周期,未成熟卵母细胞349枚,成熟率、优质胚率分别为77.08%(269/349)和23.77%(53/223),胚胎移植31周期,获得7例临床妊娠,妊娠率为22.58%(7/31),目前已分娩4例,3例流产。成熟率和优质胚率方面,脐带血组高于卵泡液组。结论:人脐带血清作为IVM液的主要成份相对于人成熟卵泡液,将更加有助于未成熟卵母细胞的体外成熟培养、改善胚胎质量,并获得较好的妊娠结局。     

两种培养液用于未成熟卵体外培养成熟治疗多囊卵巢综合征不孕症效果比较

目的:比较两种培养液用于卵母细胞体外成熟(IVM)技术治疗多囊卵巢综合征不孕症的效果。方法:取出未成熟卵母细胞置于Ⅰ、Ⅱ两种成熟培养液中进行体外培养成熟后行单精子胞浆注射,受精后取优质胚胎移植宫腔,同时比较其对助孕结局的影响。结果:两组共23例患者进行了24个IVM治疗周期。Ⅰ组的获卵率,成熟率,受精率,卵裂率,种植率和妊娠率分别为:47.42%,70.30%,95.52%,84.38%,3.13%,5.88%;Ⅱ组分别为47.47%,70.21%,84.85%,71.43%,30.77%,50.00%。Ⅱ组的妊娠率,种植率显著高于Ⅰ组(P<0.05),两组获卵率,成熟率,受精率,卵裂率差别无统计学意义(P>0.05)。结论:IVM对卵泡发育和成熟障碍的多囊卵巢综合征患者助孕有效,用含0.1 IU/ml的hCG,0.5μg/ml E2的卵子成熟培养液助孕效果较好。     

不同来源人未成熟卵细胞体外成熟及胚胎发育的临床观察

目的:比较辅助生殖周期中不同来源未成熟卵细胞体外成熟(IVM)培养后的发育潜能。方法:根据卵细胞来源不同分为IVM组、卵泡减灭组和裸卵组。各组体外培养后的成熟卵细胞分批行夫精卵胞浆内单精子注射(ICSI),统计受精和胚胎发育情况。结果:3组间受精率、卵裂率和优质胚胎率差异无统计学意义(P0.05)。结论:3种不同来源的未成熟卵细胞经IVM培养均能到达MⅡ期,ICSI受精后可获得形态学上的优质胚胎。     

ICSI联合IVM技术在卵巢低反应高龄患者中的应用

目的:探讨胞浆内单精子注射(ICSI)联合未成熟卵母细胞体外成熟(IVM)技术在卵巢低反应高龄患者中的应用价值。方法:回顾性分析2016年1月—2018年9月于郑州大学第一附属医院生殖医学中心行ICSI助孕治疗81个周期,年龄≥35岁,获卵数≤3个,且卵母细胞均未成熟。按促排卵方案分为微刺激方案组(n=37)和拮抗剂方案组(n=44),统计2组患者基础情况、实验室结果及妊娠结局。结果:①2组患者年龄、不孕时间、基础内分泌、基础窦卵泡数及抗苗勒管激素(AMH)比较,差异均无统计学意义(P0.05);②拮抗剂方案组Gn总量较微刺激方案组高,差异有统计学意义(P0.05);③微刺激方案组与拮抗剂方案组体外培养成熟率、2PN率、卵裂率、可利用胚胎率及优胚率比较差异均无统计学意义(P0.05);④微刺激方案组与拮抗剂方案组的胚胎存活率、种植率和临床妊娠率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:对于卵巢低反应的高龄患者行ICSI联合IVM培养有利于提高卵母细胞成熟率及胚胎利用率,增加妊娠机会,微刺激方案Gn用量少对卵巢低反应患者是经济有效的选择。     

人卵母细胞解冻后培养时间不同对妊娠结局的影响

目的探讨卵母细胞玻璃化冷冻复苏后行ICSI授精前培养最佳的时间。方法回顾分析行卵母细胞解冻患者32例共33周期,根据卵母细胞解冻后不同培养时间将33周期分两组：A组卵母细胞解冻后培养4h行ICSI20周期,解冻卵母细胞202枚,20周期均移植;B组3h≤卵母细胞解冻后培养时间〈4h行ICSI13周期,解冻卵母细胞109枚,其中11周期移植,另外2周期因受精后胚胎质量差未移植。比较两组卵母细胞存活率、受精率、卵裂率、可利用胚胎率、种植率以及临床妊娠率。结果A、B两组患者平均年龄、平均移植胚胎数差异无统计学意义（P〉0．05）;A、B两组卵母细胞存活率分别为94．6％、93．6％,受精率和2PN受精率分别为95．3％、90．1％和89．2％、78．4％,卵裂率和2PN卵裂率分别为95．1％、90．7％和94．5％、82．4％,可利用胚胎率分别为55．2％、51．3％,种植率分别为27．3％、40．9％,解冻周期临床妊娠率分别为55．0％、46．2％,移植周期妊娠率分别为55．0％、54．5％;A、B两组卵母细胞存活率、受精率、卵裂率、可利用胚胎率、种植率、解冻周期临床妊娠率以及移植周期临床妊娠率差异均无统计学意义（P〉0．05）,但两组2PN受精率、2PN卵裂率A组高于B组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论①卵母细胞解冻后培养3～4h行ICSI授精可以获得较好的妊娠结局。②A组2PN受精率、2PN卵裂率高于B组且解冻周期临床妊娠率有增高的趋势,是否卵母细胞解冻后培养时间接近4h即3．5—4h行ICSI有更好的妊娠结局需要以后加大样本量进一步证实。     

超排卵周期未成熟卵母细胞体外培养及其激活效应

目的:探讨超排卵周期中获得的未成熟卵母细胞的利用价值及人工辅助激活能否改善源于此类卵母细胞的胚胎的发育结局。方法:对226枚超排卵周期中获得的未成熟卵母细胞行体外成熟(IVM)培养,发育至MⅡ期卵母细胞行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)授精,受精后卵母细胞随机分成非激活组和激活组,非激活组卵母细胞ICSI后不作任何处理直接移入G-1中培养,激活组卵母细胞ICSI后入7%无水乙醇作用6 min(即人工辅助激活),比较两组受精、卵裂、优质胚胎、囊胚及优质囊胚形成情况。结果:未激活组和激活组体外成熟率分别为83.9%(94/112)和82.5%(94/114)、受精率分别为80.9%(76/94)和76.6%(72/94)、优质胚胎率分别为14.3%(10/70)和25.0%(18/72),囊胚形成率分别为8.6%(6/70)和16.7%(12/72),两组间差异无统计学意义(P>0.05),但卵裂率激活组(100%,72/72)高于未激活组(92.1%,70/76),差异有统计学意义(P<0.05),优质囊胚率激活组(83.3%,10/12)明显高于未激活组(0%,0/6),差异有统计学意义(P<0.01)。结论:超排卵周期中的未成熟卵母细胞经体外培养成熟可获得比较满意的受精率及早期胚胎发育潜能,人工辅助激活技术为超排卵周期中获取的未成熟卵母细胞的充分利用提供一种新的思路     

未成熟卵母细胞体外成熟在多囊卵巢综合征的临床应用

目的:探讨未成熟卵母细胞体外成熟在多囊卵巢综合症的应用。方法:自然或小剂量FSH刺激至卵泡直径达到10mm注射hCG,36h后经阴道穿刺获取未成熟卵母细胞,体外培养24～48h,成熟卵母细胞进行ICSI。结果:11例PCOS患者共获卵141个,平均12.8个,培养24～48h后共96个达到MⅡ期,成熟率68%,ICSI后受精共59个,自然受精6个,ICSI受精率68%,自然受精率67%,46个发生卵裂(其中6个为自然受精),ICSI卵裂率68%,优质胚胎(Ⅰ～Ⅲ级)37个,自然受精6个均为优质胚胎。移植后14天,2例血hCG阳性,移植后28天探及子宫内单个孕囊并见原始心管搏动。IVM失败后4例原克罗米芬抵抗者,3例诱导排卵成功,其中1例妊娠,另1例经HMG两个周期妊娠。结论:①IVM是PCOS不孕治疗的新选择;②体外成熟卵母细胞可以自然受精;③经阴道卵巢穿刺可以作为PCOS手术治疗的一种方式。     

ICSI联合IVM技术在卵巢低反应高龄患者中的应用

目的：探讨胞浆内单精子注射（ICSI）联合未成熟卵母细胞体外成熟（IVM）技术在卵巢低反应高龄患者中的应用价值。方法：回顾性分析2016年1月—2018年9月于郑州大学第一附属医院生殖医学中心行ICSI助孕治疗81个周期，年龄≥35岁，获卵数≤3个，且卵母细胞均未成熟。按促排卵方案分为微刺激方案组（n=37）和拮抗剂方案组（n=44），统计2组患者基础情况、实验室结果及妊娠结局。结果：①2组患者年龄、不孕时间、基础内分泌、基础窦卵泡数及抗苗勒管激素（AMH）比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；②拮抗剂方案组Gn总量较微刺激方案组高，差异有统计学意义（P＜0.05）；③微刺激方案组与拮抗剂方案组体外培养成熟率、2PN率、卵裂率、可利用胚胎率及优胚率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）；④微刺激方案组与拮抗剂方案组的胚胎存活率、种植率和临床妊娠率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：对于卵巢低反应的高龄患者行ICSI联合IVM培养有利于提高卵母细胞成熟率及胚胎利用率，增加妊娠机会，微刺激方案Gn用量少对卵巢低反应患者是经济有效的选择。     

卵母细胞体外成熟治疗多囊卵巢综合征不孕症

[目的]应用卵母细胞体外成熟（IVM）技术治疗多囊卵巢综合征不孕症。[方法]23例患者中的152个未成熟卯母细胞进行体外培养,成熟后行单精子卵胞浆内注射。受精后取优质胚胎移植宫腔,同时对其影响因素进行探讨。[结果]共培养成熟105个卵子,成熟率69．1％。受精率92．0％,卵裂率79．4％。5例妊娠,周期妊娠率27．8％,1例已出生1个正常男婴。IVM结局与末成熟卵子的形态及体外培养系统有关。[结论]IVM对卵泡发育和成熟障碍,特别是难治性多囊卵巢综合征患者助孕有效。     

细胞松弛素B在人类体外成熟卵子冷冻中的作用

目的:探讨细胞松弛素B在人类体外成熟卵子玻璃化冷冻中的作用。方法:收集常规胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(ICSI-ET)周期中未成熟卵母细胞234枚(包括生发泡期即GV期和第1次减数分裂中期即MⅠ期),在体外培养24～48 h,181枚卵母细胞成熟(排出第2极体),随机分成3组并行玻璃化冷冻。A组(43枚)用细胞松弛素B(CB)预处理30 min后行玻璃化冷冻;B组(66枚)用CB预处理20 min后行玻璃化冷冻,C组(72枚)未用CB预处理直接行玻璃化冷冻。D组为对照组30枚体内成熟卵子未用CB处理直接玻璃化冷冻。各组卵子冷冻3周后解冻,复苏的卵子行ICSI辅助授精,观察各组成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:冻融后的体外成熟卵子,其成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率均显著低于体内成熟卵子(P<0.05)。A组的成活率显著低于B、C两组(P<0.05),A、B、C 3组间的受精率、卵裂率差异无统计学意义(P>0.05),A、B两组未获囊胚,C组仅有1枚囊胚。结论:冻融体外成熟卵子,成活率、受精率、卵裂率均下降,囊胚形成率低,胚胎后期发育潜能显著降低。CB预处理未能提高卵子冷冻的成活率、受精率、卵裂率及胚胎的发育潜能。     

Enhancement of lipid metabolism with L-carnitine during in vitro maturation improves nuclear maturation and cleavage ability of follicular porcine oocytes

The aim of the present study was to assess the effects of L-carnitine, an enhancer of lipid metabolism and mitochondrial activity, during in vitro maturation (IVM) on nuclear maturation and in vitro fertilisation of porcine follicular oocytes and subsequent embryo development. Mitochondrial functions, intracellular lipid content and reactive oxygen species (ROS) levels in oocytes were also investigated. L-carnitine supplementation in 0.6-5mgmL(-1) concentration during IVM significantly improved (P<0.05) the rates of metaphase-II (MII) stage oocytes compared with the control; however, fertilisation rates and monospermy were not improved. Although supplementation of IVM medium with L-carnitine significantly increased oocyte cleavage (P<0.05), further development to the blastocyst stage was not improved. The density of active mitochondria was significantly higher and the density of lipid droplets was significantly lower (P<0.05) in L-carnitine-treated oocytes compared with the control. Furthermore, the ROS levels in L-carnitine-treated oocytes were significantly lower than those in the control. In conclusion, enhancing mitochondrial functions by L-carnitine improved oocyte maturation and cleavage underlining the importance of lipid metabolism for nuclear and cytoplasmic maturation of porcine oocytes.     

Improvement of embryonic development and clinical outcomes of germinal vesicle stage oocytes using a microvibration culture system

ABSTRACT

In vitro maturation (IVM) has evolved as a clinical treatment option in assisted reproductive technology. However, the poor developmental potential of germinal vesicle (GV)-stage oocytes is still suboptimal. This study’s objective was to evaluate the effect of a microvibration culture system (MVC) during IVM and/or in vitro culture (IVC) on the clinical outcomes and the embryonic development potential of human GV-stage oocytes collected from human chorionic gonadotropin (HCG)-primed IVM and fertilization-embryo transfer (IVM/F-ET) cycles of patients with polycystic ovaries (PCO). A total of 206 HCG-primed IVM/F-ET cycles were divided into four groups according to the microvibration and static culture system applied during IVM and/or IVC: Group SS (static system during both IVM and IVC); Group SV (static system during IVM alternated with microvibration system during IVC); Group VS (microvibration system during IVM alternated with static system during IVC), and Group VV (microvibration system during both IVM and IVC). The results indicate that the rates of in vitro MII oocytes per cycle, fertilization, and cleavage were not significantly different between the groups. The rate of good-quality embryos in Group SV tended to be higher than the rate in Groups SS and VS, but there was no significant difference between Group SS and Group SV. Clinical pregnancy, implantation, and live birth rates of Groups SV and VS were slightly higher than those of Group SS. However, the rate of good-quality embryos with at least six cells on day 4, the clinical pregnancy, implantation, and live births in Group VV were significantly higher than those in Group SS. These results indicate that, compared with the static culture system, the MVC system applied for both IVM and IVC seems to improve the clinical outcomes and the quality of embryos of GV oocytes derived from HCG-primed IVM/F-ET cycles in PCO patients.

Abbreviations: PCO: polycystic ovaries; HCG: human chorionic gonadotropin; GV: germinal vesicle; MII: metaphase II; IVM: in vitro maturation; IVF: in vitro fertilization; IVC: in vitro culture: MVC: microvibration culture; SC: static culture; ICSI: intracytoplasmic sperm injection; IVM/F-ET: IVM and fertilization-embryo transfer; AMH: anti-Mullerian hormone; OHSS: ovarian hyperstimulation syndrome     

OOCYTE MEMBRANE MATURATION AND OOCYTE-SPERM RELATIONSHIP: TRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPY STUDY

The success of in vitro maturation (IVM) depends greatly on the acquisition of immature oocytes. Immature oocytes in prophase I (PI) and metaphase I (MI), aspirated after controlled ovarian hyperstimulation, were incapable of fertilization, leading to a lower fertilization rate. Therefore, they must be evaluated on a fine structure level for their in vitro maturation (IVM) processes and their relationship with sperm. Oocyte membrane maturation and oocyte-sperm relationship were studied using transmission electron microscopy. A total of 55 human oocytes obtained from 20 patients at various times and 83 oocytes obtained from the dissected ovarians of female Wistar rats were used for transmission electron microscopy (TEM) evaluation. Despite being in either prophase I and metaphase I or in metaphase II, the oocytes were not fertilized after 48 h of incubation. At the various stages of maturation between PI and MII, the number and the size of microvilluses on the oocyte membrane increased as MII approached and decreased after full maturation. Oocyte activation was related to oocyte membrane maturation and has an effect on the oocyte sperm penetration.