变性高效液相色谱法同时检测5种食源性致病菌

[目的]建立变性高效液相色谱方法(DHPLC),同时检测5种食源性致病菌(包括沙门菌、副溶血弧菌、福氏志贺氏菌、大肠埃希菌O157:H7和单核细胞增生李斯特氏菌).[方法]针对5种食源性致病菌特异毒力基因设计引物,进行多重PCR扩增,扩增产物用高效变性液相色谱仪检测.[结果]柱温50%时,5种致病菌PCR扩增产物分别呈现特异DHPLC色谱图,并可充分分离.本方法检测灵敏度小于5 cfu/ml,对目的分离株的正确检出率大于98%,(82/83),38株非目的分离株检测均为阴性;对人工污染食品中的5种致病菌均可正确检测.[结论]该DHPLC方法具有较高的灵敏度和特异性,可同时检测5种食源性致病菌,适合于大批样品的快速筛检.     

马铃薯生物碱的高效液相色谱分析

马铃薯生物碱的高效液相色谱分析白求恩医科大学（１３００２１）杨煜，王学工长春光机所王闯贮存过久的马铃薯特别是发了芽的马铃薯含有大量的生物碱，食用后可导致急性中毒，甚至对胚胎的分化及生长发育具有明显的损害作用［１，２］。马铃薯中的生物碱主要是α－ｃｈａ...     

变性高效液相色谱分析浙江沿海地区ESBLs基因类型研究

目的运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术,检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型,了解浙江沿海地区ESBLs基因型分布情况。方法对171株多药耐药肠杆菌科细菌进行表型确证试验,采用多重PCR对标准菌株和ESBLs表型阳性的临床菌株进行CTX-M扩增,扩增产物经DHPLC分析,通过与标准菌株色谱峰比对进行临床菌株基因分型。结果 171株多药耐药肠杆菌科细菌,有142株临床菌株ESBLs表型阳性,经多重PCR扩增142株肠杆菌科109株携带CTX-M基因,52株为CTX-M-1产物,57株为CTX-M-9产物,检出率达79.80%,其中大肠埃希菌携带CTX-M基因比例最高,其次是肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌;109株临床菌株PCR产物经DHPLC分析检测出4种CTX-M基因型,33株携带CTX-M-3、19株携带CTX-M-15、5株携带CTX-M-9、52株携带CTX-M-14。结论运用DHPLC技术检测出CTX-M型ESBLs菌株有4种基因型,其中CTX-M-14型是CTX-M型ESBLs主要型别;该地区细菌携带CTX-M型ESBLs以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌最多见。     

高效氯氰菊酯的反相高效液相色谱分析

目的 建立用高效液相色谱法测定悬浮剂中高效氯氰菊酯含量的方法.方法 样品用乙腈超声溶解,用水+乙腈(23+77)在色谱柱上分离,高效液相色谱仪-紫外检测器(或者二极管阵列检测器)测定.结果 该方法检出限为6.4 mg/kg,在200～2000μg/ml范围内,相对标准偏差为0.20%～0.87%,回收率为93%～103...     

海产品中副溶血弧菌变性高效液相色谱检测技术研究

目的建立快速、准确检测海产品中副溶血弧菌的新方法。方法应用聚合酶链式反应(PCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术对海产品中致病菌(副溶血弧菌)进行检测,探讨其特异性和灵敏度。利用DHPLC在非变性温度下进行双链DNA分离的原理及DHPLC技术分析副溶血弧菌特异性PCR扩增产物。在优化的分析条件下,对样品洗脱峰排列形成的聚类分析图进行分析,得到副溶血弧菌的特征峰型图谱。结果该方法有很好的特异性,与传统检测方法进行比较其准确度为100%。结论本实验建立的海产品中副溶血弧菌PCR-DHPLC检测技术,特异性、灵敏度、准确度高,操作快速简便,在海产品安全检测中具有重要应用价值。     

保健食品中DHEA的高效液相色谱分析方法研究

[目的]为了对保健食品中的去氢表雄酮即3β-羟基-5-雄甾烯-17-酮[53-43-0](简称DHEA)进行质量控制.[方法]采用反相高效液相色谱法,ODS C18色谱柱,以甲醇-水为流动相,定量测定保健食品中的DHEA,[结果]本法的精密度(n=6)分别为18.85mg±0.69mg;43.50mg±0.89mg;72.48mg±0.86mg.相对标准偏差(RSD)分别为3.66%,2.06%,1.19%,添加高、中、低浓度DHEA的样品平均回收率分别为110.4%、99.28%、114.6%.[结论]为保健食品中的DHEA成分的质量控制提供了检测方法.     

沙门菌变性高效液相色谱法鉴定和分型研究

[目的]建立PCR与变性高效液相色谱(DHPLC)相结合的方法,对沙门菌进行鉴定和分型。[方法]针对16S rRNA基因或16S-23S之间序列保守区设计3对引物S1、S2和S3,PCR扩增产物或杂交产物用变性高效液相色谱仪鉴定。[结果]柱温50℃时,引物S1产物在不同血清型沙门菌显示为特异DHPLC图谱;柱温61.4℃时,引物S2杂交产物在不同血清型沙门菌显示为特异DHPLC图谱;引物S3可用于沙门菌的特异鉴定,但不能区分血清型;同一血清型内各菌株基因高度保守。[结论]PCR-DHPLC方法适用于不同血清型沙门菌的分型,但不适于同一血清型内的菌株分型。     

化妆品中9种防腐剂的高效液相色谱分析

为保证化妆品在有效期内不变质,各生产厂均在其中加入了一定量的防腐剂。过量的防腐剂将危害人体健康,为此卫生部发布了国家有关标准,规定了防腐剂的使用限量。为保证国家标准的有效实施,我们在参考国内外文献的基础上,建立了用高效液相色谱等度洗脱的方式同时分离测定常用9种防腐剂的方法。     

腐竹中甲醛的高效液相色谱分析

甲醛是一种细胞原浆毒 ,对人体有急慢性毒性作用 ,3 0mg/L的浓度即发生黏膜刺激症状 ,它可使机体过敏导致哮喘和寻麻疹 ,它还是可疑致癌物 ;此外 ,甲醛在机体内的代谢产物———甲酸 ,也对机体具有损害作用。因此无论在国内国外 ,都禁止将甲醛用于食品的加工处理。腐竹是受很多人喜爱的食品 ,据苏州市卫生检测中心的检测以及有关文献的报道[1,2 ] ,腐竹中掺甲醛均有较高的检出率。由于甲醛具有消毒防腐作用 ,许多不法食品加工经营者为满足其自身利益用甲醛加工处理腐竹等食品 ,以获得较好的结果。当前常用的甲醛检测方法主要有变色酸比色法…     

运用变性高效液相色谱技术快速检测肺炎克雷伯菌耐药性

目的 通过运用变性高效液相色谱（DHPLc）技术，对前期研究已确认产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的54株肺炎克雷伯菌临床分离株SHV型质粒进行基因分型，探讨其敏感性和特异性，试图建立一种快速检测肺炎克雷伯菌耐药性新方法。方法 利用PCR技术从肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出SHV型质粒的编码序列，扩增产物运用DHPLc技术进行分析和DNA测序，确定其基因突变的类型，最后通过比对确定其基因型。结果DHPLc分析样本的阳性率为100％，均表现为形态各异的异常洗脱峰（双峰或三峰）；测序结果表明所有样本与SHV-1比较均存在着耐药基因突变；并且DHPLc中异常峰一致的样本均为同一基因亚型。结论 本次实验中DHPLC的敏感性高达100％，并且每一种SHV亚型具有特定的洗脱峰型，所以DHPLc可用于细菌耐药基因的分型，能快速检测肺炎克雷伯菌耐药基因的突变，不但准确性较高，而且具有简便快捷、经济等特点，有很大的潜在临床价值。     

乳腺X线摄影技术应用于人群筛查准确性的Meta分析

目的 对全球X线摄影技术运用于乳腺癌筛查的准确性研究进行Meta分析。方法 在Medline、Embase、Cochrane和中国学术期刊网全文数据库（CNKI）文献库中,通过疾病名称、筛查干预、结果指标等关键词整合进行检索。截至2015年6月4日,共检索获得1 167篇文献。根据纳入和排除标准筛选,主要摘录筛查试验中的真阳性、假阳性、假阴性、真阴性的“四格表”数据。采用QUADAS量表进行文献质量评价。利用综合受试者工作特征（SROC）分析方法判断研究间的阈值效应并计算曲线下面积（AUC）,采用双变量混合效应模型对X线摄影技术在所有人群和乳腺致密的亚组人群中筛查的灵敏度及特异度进行Meta分析;对样本量大于10万的亚组进行敏感性分析。利用Q检验和I2统计量分析文献异质性,以漏斗图和线性回归方法检验发表偏倚。结果 最终纳入文献48篇（欧洲地区及美国38篇、亚洲地区8篇、大洋洲地区2篇）,总样本量为8 551 873例,筛查开展时间为1975-2013年,对象起止筛查年龄大部分在40～75岁。分析得出,X线摄影技术用于乳腺癌筛查的AUC为0.95（95% CI：0.93～0.97）,总体灵敏度为0.81（95% CI：0.77～0.84）,总体特异度为0.96（95% CI：0.94～0.96）,敏感性分析提示该结果稳定。其中对乳腺致密人群的亚组分析显示,X线摄影技术的合并灵敏度和特异度分别为0.74（95% CI：0.61～0.83）和0.93（95% CI：0.89～0.96）。漏斗图和线性回归结果显示纳入研究不存在发表偏倚。结论 X线摄影作为乳腺癌筛查技术具有较高灵敏度和特异度,但对乳腺致密女性的筛查准确性降低。     

Beyond sensitivity,specificity and statistical independence

Sensitivity and specificity have clear definitions when there is a single test for one disease, and the test is either positive or negative. This paper presents a unified appraoch for obtaining posterior probabilities (predictive values) when there are more than two test outcomes and/or more than one disease state. In these cases, sensitivity and specificity do not have clear definitions. Three examples from the literature demonstrate how this approach simplifies the presentation of Bayesian revision of prior probabilities. Use of proper care in data collection for the purpose of estimating conditional probabilities can avoid assumptions of statistical independence.     

无金标准诊断试验灵敏度和特异度的贝叶斯估计方法

目的 探讨在无金标准情况下诊断试验灵敏度和特异度的贝叶斯估计方法,并通过模拟实验验证此方法的有效性和适用性.方法 应用贝叶斯原理,结合一个或者两个对照诊断试验,采用对照诊断试验与待测诊断试验诊断结果相互独立或者存在相关模型;和两个对照诊断试验诊断结果存在相关,并且同时与待测诊断试验结果相互独立模型;以及一个对照诊断试验与待测诊断试验诊断结果存在相关,并且同时与另一个对照诊断试验诊断结果相互独立模型,对一种新的诊断方法的灵敏度、特异度进行估计.结果 模拟试验表明在先验信息相对准确的条件下,所给出的几种不同模型均能较准确的估计待测诊断方法的灵敏度和特异度,估测参数范围包括设定真值,并且估测参数均值基本与真实情况相同;此外,模拟实验结果表明,利用两个对照诊断试验模型估计参数的估计效果优于使用一个对照诊断试验模型时的参数估计效果.结论 本文介绍的贝叶斯方法能够有效地应用于无金标准诊断试验的评价,从而解决了无金标准诊断试验无法评价的难题.     

双管负压引流防治乳癌术后皮下积液临床分析

目的探讨双管负压引流对乳癌术后皮下积液的防治效果。方法将92例乳癌病人随机分成两组，实验组采取胸骨旁皮瓣下及腋窝分别放置一根引流管持续负压引流，对照组则常规腋窝负压引流。结果双管负压引流组较单纯腋下引流组病人发生皮下积液例数明显减少。结论皮瓣下双管负压引流可有效降低乳癌术后皮下积液的发生率。     

乳腺癌易感基因1在散发性乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 研究乳腺癌易感基因1(BRCA1)在散发性乳腺癌中的表达与各病理学指标之间的相关性.方法 应用SABC免疫组化染色法对30例乳腺纤维腺瘤和42例乳腺癌患者的病变组织中BRCA1的表达进行检测,并与腋窝淋巴结转移、肿瘤大小、组织学类型和组织学分级进行相关分析.结果 BRCA1在乳腺纤维腺瘤中的阳性表达率为85.7%(36/42),在乳腺癌中的阳性表达率为52.4%(22/42),乳腺癌中腋窝有淋巴结转移的BRCA1阳性表达率明显低于无淋巴结转移的BRCA1阳性表达率(P<0.05),BRCA1在乳腺癌中的阳性表达率随着组织学分级的升高有逐渐下降趋势,其中Ⅰ级和Ⅲ级、Ⅱ级和Ⅲ级比较差异有统计学意义(P<0.05),Ⅰ级与Ⅱ级比较差异无统计学意义(P>0.05),BRCA1的表达与肿瘤的组织学类型、肿块大小无关(P值均>0.05).结论 BRCA1在乳腺癌的发生、发展过程中有重要的作用,它有可能成为临床对乳腺癌治疗和判断预后的一个生物学指标.     

CA153、TSGF联合检测在乳腺癌辅助诊断中的价值

目的:研究血清CA153、TSGF在乳腺癌诊断中联合应用的价值。方法:收集乳腺癌,乳腺良性肿瘤患者以及正常人静脉血标本,化学显色法检测血清TSGF含量,放射免疫法检测CA153含量。结果:乳腺癌组TSGF和CA153水平分别是78.73±8.22 U/ml和69.75±21.8 U/ml,均明显高于乳腺良性肿瘤组及正常对照组(P<0.01)。乳腺癌组TS-GF、CA153联检敏感性为90.0%,准确性为92.3%,均明显高于单项检测。结论:联合检测CA153和TSGF可以明显提高乳腺癌患者诊断的准确性及敏感性。     

乳腺X线筛查乳腺癌引起过度诊断的研究进展

筛查历来就是一把双刃剑。癌症筛查在给部分人带来收益的同时,也会给另一部分人带来过度诊断。过度诊断是对永远不会导致症状出现或威胁生命的癌症的诊断,由此可能造成被诊断者接受不必要的治疗及终身监测,进而造成不必要的经济负担以及身体和心理上的损害。如何正确评价过度诊断,以及如何根据过度诊断产生的原因,采取有针对性的措施来减少或避免过度诊断,将是乳腺癌筛查中需要深度思考的问题。本文在系统总结既往相关研究的基础上,详细阐述乳腺X线筛查乳腺癌引起过度诊断产生的原因、评价方法,以及避免过度诊断可采取的措施。     

Twist及其相关调控基因在不同转移性人乳腺癌细胞中的差异表达

目的:观察不同转移潜能人乳腺癌细胞株中Twist及其相关调控基因mRNA表达的差异。方法:培养低侵袭性人乳腺癌细胞株MCF-7和高转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,采用RT-PCR法检测两种细胞株中Twist、脆性组氨酸三联体(FHIT)、皮性钙黏附素(E-cadherin)、细胞凋亡相关基因Mcl-1、Bcl-2和Bax mRNA表达的差异。结果:MCF-7中FHIT、E-cadherin、Bax mRNA的表达显著高于MDA-MB-435S细胞,Twist mRNA在MDA-MB-435S细胞中的表达明显高于MCF-7,Mcl-1、Bcl-2 mRNA在两种细胞株中的表达无明显差异。结论:Twist、FHIT、E-cadherin、Bax mRNA表达差异可能与人乳腺癌细胞的不同转移潜能有关。     

肺癌不同阳性标准痰细胞学筛查方法的灵敏度和特异度分析

目的 探讨改变阳性标准对职业高危人群肺癌痰细胞学筛查灵敏度及特异度的影响.方法 以1992-1999年间至少参加过1次年度性痰细胞学肺癌筛查的云南锡矿工人为研究对象,共9223名.研究对象年龄均40岁以上、井下工龄或冶炼工龄超过10年且无恶性肿瘤史.收集研究对象痰样进行筛查,以筛查阳性且被临床确诊的肺癌患者为真阳性,筛查阴性且在随访期间没有被临床诊断为肺癌的研究对象为真阴性,计算不同阳性标准痰细胞学筛查方法的灵敏度、特异度,并进行受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析,利用Hanley和McNeil法计算Z值,比较不同阳性标准ROC曲线下面积的差别.结果 截止到随访终止时间(2001年12月31日),9223名研究对象中共有500例肺癌患者,最常见的细胞类型为鳞癌[55.8%(222/398)],发病部位以中央型肺癌为主[68.5%(316/461)].在筛查过程中,共150例患者有痰细胞学筛查阳性史.阳性标准分别为重度不典型增生及以上、中度不典型增生及以上、轻度不典型增生及以上时,痰细胞学筛查方法灵敏度分别为30.0%(150/500)、36.4%(182/500)、53.0%(265/500);特异度分别为98.9%(8628/8723)、95.1%(8611/8723)、77.9%(7033/8723).3种阳性标准的ROC曲线下面积(由重度到轻度)分别为0.645(95%CI:0.635～0.654)、0.657(95%CI:0.668～0.667)、0.655(95%CI:0.645～0.664);重度与中度、轻度比较,以及中度与轻度比较,差异均无统计学意义(Z值分别为0.780、0.645、0.209,P值均>0.05).结论 随阳性标准的降低,痰细胞学筛查的灵敏度上升而特异度下降,但3种不同阳性标准的准确度并无明显差异.

Abstract：

Objective To discuss the effect of different positive criteria on the sensitivity and specificity of sputum cytology screening for lung cancer among Yunnan tin miners.Methods 9223 Yunnan tin miners who received at least one annual sputum cytology screening for lung cancer during the period between 1992 and 1999 were recruited in the study.At time of enrollment,all participants were aged over 40 years old,had at least 10 years of employment as an underground miner and(or) smelter,and had not been diagnosed with malignancy.In our study,a true positive was categorized as having at least one prior positive sputum screening and a diagnosis of lung cancer,while a true negative,by our definition,signified negative sputum examinations and no diagnosis of lung cancer during the follow up time.Based on different positive criteria,sensitivity and specificity of sputum cytology were computed and receiver operating characteristic(ROC) curve analysis was conducted.Z statistic was used to test the differences of the area under ROC based on Hanley and McNeil method.Results By the end of following up on December 31,2001,a total 500 lung cancer cases were diagnosed among 9223 participants: most were squamous cell carcinoma (55.8% (222/398)) and central lung cancers (68.5% (316/461)).150 lung cancer cases had a previous positive sputum screening result.When positive criteria were taken as grave atypical metaplasia,moderate atypical metaplasia and slight atypical metaplasia,the corresponding sensitivities were 30.0% (150/500),36.4% (182/500),53.0% (265/500) respectively; while the corresponding specificities were 98.9% (8628/8723),95.1% (8611/8723),77.9% (7033/8723) respectively.The areas under ROC curve according to different positive criterias were 0.645(95%CI: 0.635-0.654),0.657(95%CI: 0.668-0.667),0.655(95%CI: 0.645-0.664) respectively.There were no significant differences found in the comparisons between grave and moderate atypical metaplasia,grave and slight atypical metaplasia,moderate and slight atypical metaplasia(Z statistics were 0.780,0.645,0.209 respectively,all P values>0.05).Conclusion While the standard of positive criteria for diagnosis of lung cancer decreased,the sensitivity of sputum cytology screening increased and the specificity decreased.Since there were no significant differences of accuracy for different positive criteria.     

肿瘤标志物联合检测在乳腺癌诊断中的临床意义

目的:探讨TSGF、CA153和CEA联合检测在乳腺癌诊断中的价值。方法:收集65例乳腺癌、110例乳腺良性疾病和55例健康人群血清标本。用酶联法检测TSGF,用化学发光法检测CA153和CEA。结果:TSGF、CA153和CEA对乳腺癌的敏感性为76.9%、69.2%和20.0%,特异性为64.8%、91.3%、和92.0%。联合检测乳腺癌的敏感性为87.7%,特异性为89.5%。结论:联合检测敏感性和特异性与单项检测比较均高,对乳腺癌的诊断具有重要意义。