褪黑素对细菌脂多糖导致的宫内感染脑损伤的保护作用

目的:研究褪黑素(melatonin,MT)对宫内感染胎鼠脑组织自由基的影响,探讨MT对宫内感染胎鼠脑组织的保护作用。方法:通过给孕鼠腹腔注射细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),造成宫内感染脑瘫动物模型,并行MT干预。选用妊娠第19天SD大鼠随机分为空白对照组、宫内感染组和MT处理组,宫内感染组孕鼠缓慢腹腔注射LPS500μg/kg,MT处理组孕鼠腹腔注射LPS 500μg/kg+MT 10 mg/kg。将各大组孕鼠根据注药后观察时间不同,平均分为注药后2 h、6 h、12 h 3小组,各小组4只孕鼠。各小组于相应的时间点迅速处死,于冰盒上剖腹取胎鼠脑组织,分别测定脑组织匀浆的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)含量,HE染色观察组织病理变化,并比较各组之间的差异。结果:宫内感染组较空白对照组胎鼠脑组织中SOD、GSH-Px活力下降,MDA含量上升;同时随着感染时间的延长,上述改变亦趋于明显,差异有统计学意义。与宫内感染组相比,MT处理组能提高胎鼠脑组织中SOD、GSH-Px活力,降低MDA含量。结论:宫内感染胎鼠脑组织在宫内已出现自由基蓄积而自身清除力不足,导致胎鼠脑组织损伤,并随着感染时间的延长而脑损伤逐渐加重。褪黑素能对宫内感染胎鼠脑损伤有抗氧化和较强的自由基清除作用,有神经保护作用。     

宫内炎症对仔鼠脑组织TLR4表达的影响

目的:探讨胎鼠及新生大鼠脑中TLR4及细胞因子TNF-α在宫内感染后脑损伤中的作用。方法:取孕龄17、18天(足月为22.5天)的SD大鼠,每次350μg/kg、连续2天腹腔注射,构建宫内感染大鼠模型(LPS组);对照组孕鼠腹腔注射同剂量的生理盐水(NS组)。观察胎盘和脑组织的病理改变。分别留取孕20、21天及生后1、3、7、14天(P1、P3、P7、P14)的新生大鼠脑标本,检测细胞因子TNF-α、TLR4的表达情况。结果:LPS组新生大鼠脑组织HE染色可见细胞水肿,组织疏松,细胞数减少。蛋白表达结果显示LPS组TLR4明显升高,较NS组差异有统计学意义,F=71.148,P=0.001;LPS组TNF-α较NS组差异有统计学意义,F=16.863,P=0.015。LPS组TLR4、TNF-αmRNA在G20、G21、P1、P3、P7的表达比NS组明显升高,差异有统计学意义(P0.05),而在P14两组差异无统计学意义(P0.05)。结论:宫内LPS感染后TLR4信号途径被激活,诱导炎性因子大量释放,最终导致脑损伤的发生。     

丙酮酸乙酯对宫内感染致脑损伤新生仔鼠AQP4表达和脑组织超微结构的影响

目的 研究丙酮酸乙酯(EP)对宫内感染致新生仔鼠脑损伤水通道蛋白4(AQP4)表达和脑组织超微结构的影响。方法 选取36只孕鼠随机分为 LPS组(n=12)、EP组(n=12)、NS组(n=12)。LPS组:孕17 d、18 d连续两天腹腔注射 LPS 380 μg/kg;EP组:同法制备孕鼠宫内感染模型,并在注射LPS后立即给予孕鼠腹腔注射 EP 40 mg/kg;NS组:腹腔注射同等量生理盐水。对孕鼠分娩后的胎盘和新生仔鼠脑组织进行HE染色观察宫内感染和脑损伤情况。剔除早产鼠,各组随机选取新生仔鼠36只,于生后12、24、48 h对脑组织进行免疫组织化学染色,观察AQP4的表达;电镜观察脑组织超微结构的变化。结果 与NS组比较,LPS组孕鼠胎盘组织可见大量的炎性细胞浸润,有宫内感染,LPS组仔鼠HE染色提示有脑损伤;与LPS组相比较,EP组仔鼠出生后24 h、48 h脑组织AQP4的表达量均低于LPS组(P<0.05);电镜下LPS组神经细胞超微结构显示损伤严重。结论 丙酮酸乙酯对宫内感染致脑损伤新生仔鼠的脑组织具有一定的神经保护作用,可能与AQP4表达水平有关。     

丙酮酸乙酯对宫内感染致脑损伤新生仔鼠12-脂氧合酶表达和细胞凋亡的影响

目的研究丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)对宫内感染致新生仔鼠脑损伤12-脂氧合酶表达和细胞凋亡的影响。方法 36只孕鼠随机分为LPS组、EP组、NS组,每组各12只。LPS组:于孕17天、18天孕鼠连续两天腹腔注射脂多糖380μg/kg;EP组:相同的方法制备孕鼠宫内感染模型,并于孕鼠腹腔注射LPS后立即给予腹腔注射EP 40mg/kg;NS组:给予等量生理盐水腹腔注射。孕鼠分娩后,取胎盘进行HE染色,以观察宫内感染情况。剔除早产鼠,随机选取各组仔鼠36只,分别于出生后1d、3d、7d进行检测,观察脑组织12-脂氧合酶(12-lipoxygenase,12-LOX)的表达和神经细胞凋亡情况。结果与NS组比较,LPS组孕鼠胎盘组织可见明显的炎性细胞浸润,血管充血等病理改变;与LPS组相比较,EP组仔鼠出生后1、3、7d脑组织12-LOX的表达量均低于LPS组(P0.05)、神经细胞凋亡指数均也均低于LPS组(P0.05)。结论 EP对宫内感染致脑损伤新生仔鼠的脑组织具有保护作用,可能与12-LOX表达水平和细胞凋亡降低相关。     

孕鼠DHA干预对宫内感染仔鼠脑组织炎症状态的影响

目的:探讨宫内感染的孕鼠DHA干预后,对围产期炎症暴露的仔鼠脑组织炎症状态的影响。方法:本实验将孕鼠随机分为3组,①对照组:孕期第1天开始无菌生理盐水灌胃至分娩,于孕第17、18天腹腔注射无菌生理盐水0.6 ml。②LPS组(模型组):无菌生理盐水灌胃,孕第17、18天连续两次腹腔注射LPS,计量为350μg/kg。③LPS+DHA组(干预组):孕期第1天开始给予DHA130 mg/kg灌胃至分娩,于孕第17、18天连续两次腹腔注射LPS,计量同②。取各组孕21天(G21),生后P1、P7、P14脑组织,用HE染色法观察不同时间点脑组织的病理改变,用免疫组化方法检测脑组织中OX42阳性小胶质细胞的表达情况。用Q-RT-PCR检测脑组织中细胞因子TNF-α的mRNA转录水平。结果:模型组脑白质早期可见水肿和形态较幼稚的细胞,甚至伴有局灶性出血,后期脑白质内神经纤维走向紊乱,组织疏松,细胞数减少。干预组早期脑白质可见较多水肿细胞,无明显出血灶和软化灶,P14时与对照组形态接近。与对照组相比:①模型组小胶质细胞OX42阳性表达在P14时仍较高(P<0.05);干预组至P7时亦较高(P<0.05),P14时无明显差异(P>0.05);干预组在各时间点与模型组比较均较低(P<0.05)。②模型组TNF-αmRNA的表达在P7时仍较高(P<0.05),而在P14无显著差异(P>0.05);干预组TNF-αmR-NA的表达较模型组低直至P7(P<0.05),而在P14无显著差异(P>0.05)。结论:宫内LPS感染可导致胎儿脑组织炎性反应,孕期补充DHA能通过减少小胶质细胞的持续活化和炎症细胞因子的表达而抑制胎儿脑组织的炎症反应,促进脑损伤的恢复。     

褪黑素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时免疫功能的影响

目的:探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)时脾脏中肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素6(IL-6)表达的变化及外源性褪黑素(MT)对其产生的影响。方法:选用7日龄的Sprague-Dawley大鼠,随机分为生理对照组、假手术组、模型组(HIBD组)、MT治疗组。建立新生鼠HIBD模型后,于不同时间点取脾脏组织,使用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法,对脾脏中TNF-α、IL-6、褪黑素受体1(MT1)mRNA的表达进行半定量检测。结果:假手术组脾脏TNF-α、IL-6、MT1的mRNA表达在24 h内均无显著变化,与生理对照组相比差异无统计学意义。HIBD组和MT治疗组TNF-α的mRNA表达在2 h升高,8 h达到高峰,随后下降,24 h内均显著高于假手术组(P<0.01),MT治疗组在24 h内各时间点TNF-αmRNA的表达均显著低于HIBD组(P<0.01)。HIBD组脾脏中IL-6的mRNA表达在8 h开始上升,24 h升高更显著。MT治疗组中脾脏IL-6 mRNA的表达在24 h内不断升高,各时间点均显著高于HIBD组(P<0.01)。脾脏中MT1的表达在HIBD组未见明显变化,而在MT治疗组,MT1在2 h较HIBD组明显下降(P<0.01),在4 h降至最低,8 h开始回升。结论:新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时,脾脏TNF-α,IL-6的表达上调,而褪黑素可以抑制TNF-α的表达而增加IL-6的表达,缺氧缺血性脑损伤对脾脏褪黑素受体的表达没有显著影响,而外源性褪黑素对褪黑素受体mRNA的表达有下调作用。     

促红细胞生成素对宫内感染致脑损伤早产新生大鼠神经胶质酸性蛋白和S-100β表达的影响

目的 通过重组人促红细胞生成素(recombinant erythropoietin ,rhEPO)对早产新生大鼠宫内感染脑损伤后神经胶质酸性蛋白和S-100β表达的影响,探讨其神经保护作用。方法 妊娠18 d孕鼠随机分为对照组、感染组和EPO干预组,对感染组及干预组分别给予LPS剂量0.45 mg/(kg·d)腹腔内注射,连用2 d,对照组按同样方法注射生理盐水,24 h后随机取部分孕鼠胎盘组织行HE染色观察其病理变化,余孕鼠继续怀孕至自然分娩,干预组新生鼠腹腔注射重组人促红细胞生成素5 000 U/(kg·d),连续注射3 d,部分待新生鼠6日龄大取其大脑,免疫组织化学法检测其大脑神经胶质酸性蛋白(the glial fibrillary acidic protein,GFAP)及酶联免疫方法检测血清中S-100β在宫内感染情况下及EPO干预后的不同表达变化。结果 与对照组比较,宫内感染及EPO干预组孕鼠胎盘组织HE染色后镜下观察均可见大量中性粒细胞浸润,血管充血、水肿等病理改变,与对照组比较,感染组、干预组GFAP的表达变化(对照组115.27±3.651;vs感染组105.68±3.189和干预组113.92±3.967)及S-100β结果(对照组0.32±0.05 vs感染组0.63±0.04,和干预组0.33±0.06),两组数据结果均显示感染组高于对照组及干预组,干预组及对照组差异无统计学意义。结论 宫内感染可使早产新生大鼠脑组织中GFAP及S-100β的表达均增加,而重组人促红细胞生成素降低宫内感染致脑损伤后神经胶质酸性蛋白和S-100β表达,保护脑组织。     

宫内感染早产大鼠脑胶质纤维酸性蛋白的表达及其意义

【目的】了解宫内感染对早产胎鼠脑胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达的影响,以探讨宫内感染与脑白质损害的内在免疫学机制,为临床早产儿脑白质损伤的诊断治疗提供实验依据。【方法】孕鼠随机分为两组:感染组和对照组。感染组:建立宫内感染的动物模型,于孕鼠怀孕15 d腹腔注射内毒素;对照组:孕鼠怀孕15 d腹腔注射生理盐水。分别于给药后2、4、12、24、72 h剖腹取胎鼠,取脑组织行石蜡切片。采用苏木精-伊红(HE)染色观察胎盘及早产胎鼠脑组织病理特点,用免疫组织化学方法检测早产胎鼠脑组织中GFAP的变化情况。【结果】感染组胎盘组织见中性粒细胞浸润,感染组胎鼠脑组织病理改变包括脑白质染色淡,结构疏松等。感染组胎鼠脑组织GFAP表达12、24、72 h较对照组明显增高(P<0.01)。【结论】GFAP参与了内毒素所致的脑白质损伤。     

宫内感染致肺损伤仔鼠血清IL-21与TNF-α及MMP-9表达水平

目的观察宫内感染引起的肺损伤仔鼠血清中白细胞介素-21(IL-21)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平。方法选择健康的孕期SD大鼠,随机分为对照组和脂多糖(LPS)组,其中LPS组分为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mg/kg 6个浓度组,分别在妊娠第18天腹腔注射不同浓度的LPS溶液,对照组腹腔注射同等体积的无菌生理盐水。记录孕期流产率及胎儿死亡率,通过苏木精-伊红染色观察新生仔鼠肺部组织的损伤情况,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测新生仔鼠血清中IL-21、TNF-α和MMP-9的水平。结果与对照组相比,LPS组的新生仔鼠的肺部组织有明显的炎症损伤。与对照组相比,LPS组死亡率较高,差异具有统计学意义(P0.05),且LPS浓度升高,新生仔鼠的死亡率升高,各组间有统计学差异(P0.05)。LPS组的新生仔鼠血清中IL-21、TNF-α和MMP-9的水平高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。且LPS浓度升高,IL-21、TNF-α和MMP-9的血清水平升高,各组间有统计学差异(P0.05)。结论通过对孕期大鼠腹腔注射LPS可成功建立宫内感染模型,孕期宫内感染会导致新生仔鼠死亡率升高,肺部组织损伤,同时LPS组的新生仔鼠血清中IL-21、TNF-α和MMP-9的表达水平增加,与LPS呈剂量依赖性。     

促红细胞生成素对宫内感染致脑损伤早产新生大鼠髓鞘碱性蛋白及远期脑发育的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对宫内感染致早产新生大鼠脑损伤后的神经保护作用。方法妊娠18 d孕鼠随机分为对照组、感染组和干预组,对感染组及干预组分别给予LPS剂量0.45 mg.kg1d腹腔内注射,连用2d,对照组按同样方法注射生理盐水,24 h后处死大鼠,取胎盘组织行HE染色观察其病理变化,余孕鼠继续怀孕至自然分娩,干预组新生鼠d 1腹腔注射重组人促红细胞生成素5 000 IU.kg1d,连续注射3 d,部分待新生鼠6日龄大取其大脑,免疫组织化学法检测其大脑髓磷脂碱性蛋白(MBP)宫内感染情况下及干预后的不同表达变化,余新生早产鼠饲养至42 d大小行迷宫试验。结果与对照组比较,感染及干预组孕鼠胎盘组织HE染色后镜下观察均可见明显的炎性白细胞浸润,血管充血等病理改变,对照组、感染组、干预组MAP的表达变化分别为:对照组(127.043.891)、感染组(149.683.189)和干预组(131.123.467),感染组MAP的表达低于对照组及干预组,干预组及对照组无明显差别;感染组大鼠Y型迷宫试验达标所需的训练次数较对照组及干预组明显增多,分别为:对照组(56.75.2)、感染组(145.89.6)和干预组(58.47.7),记忆保持中正确反应次数明显低于对照组及干预组,分别为:对照组(0.920.06)、感染组(0.520.09)和干预组(0.900.09),干预组及对照组无明显差异。结论宫内感染可使早产新生大鼠脑组织MBP的表达减少,而重组人促红细胞生成素可促进少突胶质细胞生成,影响早产新生大鼠髓鞘的形成并提高认知,改善新生大鼠的学习记忆功能,影响其远期智能发育。     

胰岛素不同时机给药对脓毒症大鼠炎性反应的影响

目的:通过注射内毒素(LPS)建立的大鼠脓毒症模型,观察胰岛素不同时机给药对血清和肝细胞因子表达的影响。方法:将81只大鼠分为九组,即A组腹腔注射等渗盐水;B组腹腔注射LPS;C、D、E、F、G、H、I组分别在腹腔注射LPS前30 min和注射后0、1、3、6、12、24 h给予胰岛素治疗。观察各组大鼠LPS注射后24和48h血清白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-10的变化,以及LPS注射48 h后肝组织IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的变化。结果:注射LPS后24和48 h,大鼠血IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10均显著增加。LPS注射48 h后,肝组织中IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-10蛋白水平也明显增加。在注射LPS前30 min或注射后6 h内给予胰岛素,能明显降低注射后24和48 h血清中的IL-1β、TNF-α和IL-6水平(P0.05);而IL-10水平则仅在注射LPS前或注射同时给予胰岛素,才较LPS组明显增加(P0.05)。在LPS注射前30 min或注射后6 h内给予胰岛素,注射后48 h肝内的IL-1β和TNF-α水平较LPS组明显降低(P0.05);而肝的IL-6水平仅在LPS注射前30min或与同时给予胰岛素时,才较LPS组明显降低(P0.05)。结论:胰岛素对脓毒症大鼠有抑制炎性细胞因子,增加抗炎介质释放等保护作用。在注射LPS 6 h内给予胰岛素可发挥良好的抗炎保护作用,而在注射LPS 6 h后给予胰岛素治疗其抗炎保护作用明显减弱。     

急性肝衰竭大鼠肝组织SOCS表达及意义

目的 研究急性肝功能衰竭(acute liver failur,ALF)大鼠肝组织细胞因子信号转导抑制因子(SOCSs)基因表达的动态变化及意义.方法 腹腔注射D-胺基半乳糖(D-GalN)、脂多糖(LPS)建立急性肝衰竭大鼠模型,D GalN和LPS剂量分别为800 mg/kg和8μg/只,分别在注射D-GalN、LPS后2,6,12,24,48 h 5个时间点留取大鼠血及肝脏标本.观察大鼠肝功能及肝脏病理变化;逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测动物肝组织中SOCS-1和SOCS-3mRNA表达;ELISA法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平.结果 肝衰竭大鼠肝组织SOCS-1和SOCS-3mRNA表达均明显上调,在造模后2 h即明显高于对照组,分别于6,12 h达高峰值.血清TNF-α、IL-6产生均显著增多(P＜0.01),均于造模后6 h达峰值.结论 急性肝功能衰竭可诱导体内SCCSs表达上调.其改变与TNF-α、IL-6水平的改变密切相关,提示其可能参与急性肝功能衰竭时炎症反应平衡的调节过程.     

瓦斯爆炸伤大鼠脑组织蛋白激酶CαmRNA与c-fos基因表达的关系

目的探讨蛋白激酶CαmRNA(PKCαmRNA)与c-fos基因蛋白(c-fos)的表达在瓦斯爆炸致大鼠脑损伤时的变化规律.方法建立瓦斯爆炸伤大鼠实验模型.采用原位杂交技术测定大鼠脑组织蛋白激酶CαmRNA,采用免疫组化染色法测定c-fos基因蛋白.结果PKCαmRNA与c-fos对照组大鼠脑组织均有少许表达.大脑皮质、海马PKCαmRNA 24 h、48 h及72 h组的表达明显增强,且48 h达高峰(P＜0.01);脑皮质、海马c-fos基因蛋白0.5 h表达开始有明显增加,4 h达高峰,以后强度逐渐降低,第5日基本恢复正常.结论瓦斯爆炸伤致脑组织缺血缺氧可促进脑神经细胞蛋白激酶CαmRNA的表达,PKCαmRNA可调节c-fos基因的表达,二者均参与了神经细胞的损伤过程.     

妊娠期宫内感染对胎龄<37周早产儿免疫指标的影响及相关机制研究

目的探讨妊娠期宫内感染对胎龄37周早产儿免疫指标的影响及相关机制,为临床诊治提供参考依据。方法收集2016年10月-2018年4月在徐州医科大学附属医院娩出的早产儿189例为研究对象,其中宫内感染组86例,未感染组103例。比较出生后24 h、7 d的外周血T淋巴细胞亚群(CD3~+、CD4~+、CD8~+)、免疫球蛋白(Ig G、Ig M、Ig A)、白细胞介素(IL-6、IL-8、IL-1β)及肿瘤坏死因子(TNF-α)水平。收集脐带血,分离脐带血单个核细胞(UBMC),RT-PCR检测细胞中Tlr2、Tlr4、Socs1、Socs3 mRNA表达水平;使用细菌脂多糖LPS刺激未感染组UBMC,检测不同刺激时间(1 h、3 h、6 h、12 h)的Tlr2、Tlr4、Socs1、Socs3 mRNA表达水平。结果出生后24 h、7 d感染组早产儿血清CD3~+、CD4~+、CD8~+水平明显高于未感染组,Ig G、Ig M、Ig G水平明显低于未感染组,IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平明显高于未感染组(均P0. 05)。感染组早产儿UBMC中Tlr2、Tlr4、Socs1、Socs3 mRNA表达水平明显高于未感染组(均P0. 05)。LPS刺激各时间点Tlr2、Tlr4、Socs1、Socs3 mRNA表达水平均明显高于空白对照组(均P0. 05);其中Tlr2 mRNA表达在LPS刺激3 h时达到峰值,Tlr4 mRNA表达在LPS刺激1 h时达到峰值,Socs1和Socs3 mRNA表达在LPS刺激3 h时达到峰值。结论宫内感染可引发早产儿体内免疫指标异常改变,其机制可能通过Toll样受体和Socs信号通路调节体内免疫反应。     

DHA对细菌脂多糖诱导的孕鼠炎症和胎鼠生长受限的作用

目的 探讨二十二碳六烯酸（docosahexaenoicacid,DHA）通过调节肠道紧密连接蛋白拮抗细菌脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱发的孕鼠炎症和胎儿生长受限的影响及机制。方法 模型建立：ICR孕鼠分为对照、DHA、LPS和DHA+LPS四组，每组11只孕鼠，DHA和DHA+LPS组全孕期（GD0-17）给予DHA(300mg/kg)灌胃处理，其余两组灌以等量的玉米油；LPS和DHA+LPS组在GD15-17灌胃1 h后腹腔注射LPS(100μg/kg)，其余两组给予等量的生理盐水处理，GD18取材时测量胎鼠、胎盘发育指标。机制探索：分组同上，每组6只孕鼠，DHA和DHA+LPS组在GD0-15给予DHA(300 mg/kg)灌胃处理，其余两组灌以等量的玉米油；LPS和DHA+LPS组在GD15灌胃1小时后腹腔注射LPS(100μg/kg)，其余两组给予等量的生理盐水处理，LPS注射1h后收集孕鼠血清及小肠组织。ELISA检测孕鼠血清中IL-6、TNF-α及DAO的水平；Westernblot、qPCR和IHC法检测母鼠小肠上皮紧密连接相关蛋白的表达及分...     

细菌脂多糖对急性胰腺炎大鼠核因子-κB及肿瘤坏死因子的影响

目的探讨细菌脂多糖(LPS)对大鼠实验性急性胰腺炎(AP)核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA及病理改变的影响,了解LPS在AP发生中的作用.方法 24只Wistar大鼠分为3组:AP组、LPS干预组及对照组;AP组蛙皮素诱导产生AP;LPS干预组在AP组基础上,给予腹腔内注射大剂量LPS(2mg/kg);对胰腺组织标本进行病理评分;RT-PCR检测胰腺组织中TNF-α mRNA表达的变化;应用流式细胞术(FCM)检测NF-κB表达的改变.结果与AP组相比,病理结果显示,LPS干预组胰腺组织水肿程度及炎性细胞浸润和坏死明显加重,胰腺组织损伤程度明显加重(病理评分7.21±0.53us,3.65±0.37,P＜0.01);FCM显示由于LPS的作用,NF-κB的表达明显上调(61.28±7.56us,41.13±11.72,P＜0.05),胰腺组织内炎性介质TNF-αmRNA的表达也同步上调(3.798±0.438us,2.856±0.365,P＜0.05).结论 LPS有加重AP病情的作用,其可能机制是LPS通过激活NF-κB及TNF-α从而实现了上述病理损害.     

重组人促红细胞生成素对宫内炎症致新生大鼠脑损伤髓鞘少突细胞糖蛋白表达变化与髓鞘修复关系的研究

目的 通过观察新生大鼠脑组织内髓鞘少突细胞糖蛋白(MOG) mRNA及MOG蛋白动态变化情况,探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)与宫内炎症致脑组织髓鞘损伤、修复的关系,为临床干预新生儿脑白质损伤提供依据。方法 1)选取孕15 d的Wistar大鼠分别经腹腔注射脂多糖及无菌生理盐水后分为脂多糖感染组和对照组,随机选取感染组经苏木素-伊红染色证实胎盘和新生大鼠脑组织存在炎性损伤的同胎新生大鼠64只,分为rhEPO治疗组和感染对照组,随机选取对照组中新生大鼠32只为空白对照组,分别于生后每日腹腔注射rhEPO(5 000 U/kg)或等量生理盐水。2)三组新生大鼠均分别于生后当日、3 d、7 d及14 d行左心室甲醛灌注取脑组织,利用RT-PCR检测脑组织中MOG mRNA,Western blot检测MOG蛋白水平变化。结果 1)空白对照组MOG mRNA水平在3 d[(2.05±0.75)倍]、7 d[(2.37±0.57)倍]及14 d[(3.36±0.81)倍]新生大鼠脑组织中均较当日组[(1.01±0.16)倍]明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);2) 感染对照组MOG mRNA水平在当日、3 d、7 d及14 d新生大鼠脑组织中均较同日龄空白对照组下降,且3 d和7 d组差异具有统计学意义(P＜0.05);3)rhEPO治疗组3 d[(2.18±0.89)倍]、7 d[(3.53±1.55)倍]及14 d[(3.30±1.12)倍]新生大鼠脑组织MOG mRNA水平较同日龄感染对照组均显著上升,差异有统计学意义(P＜0.05);4)rhEPO治疗组MOG蛋白水平在3 d(12.63±0.65 vs. 18.23±0.37)、7 d(13.59±1.10 vs. 22.72±2.77)及14 d(15.63±1.32 vs. 25.85±2.70)时均低于感染对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 宫内炎症致新生大鼠脑组织损害中存在通过抑制髓鞘MOG基因及蛋白表达的机制。早期应用rhEPO能够促进MOG基因及蛋白表达发挥神经修复保护作用,14 d的疗程目前为最佳疗程。     

钙通道阻滞剂对炎症因子平衡的影响及肝保护作用

目的:观察内毒素(LPS)刺激后大鼠肝致炎/抗炎细胞因子的表达,及钙通道阻滞剂(维拉帕米)在内毒素诱导的肝急性反应中对炎症因子的调控作用.方法:将24只SD大鼠随机分为A(对照)组、B(LPS)组和C(维拉帕米)组.B和C组分别给予等渗盐水和10 mg/kg维拉帕米,腹腔注射30 min后,给予10 mg/kg内毒素腹腔注射,60 min后,取大鼠肝匀浆和外周血.用酶联免疫吸附法(ELISA)测定肝组织以及血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10).结果:内毒素可诱导大鼠肝和外周血中TNF-α和IL-6的高表达(P＜0.01),而肝IL-10以及外周血清蛋白未见明显变化(P＞0.05).维拉帕米可抑制内毒素诱导大鼠肝和外周血中TNF-α和IL-6的高表达(P＜0.01),增加肝组织和外周血中IL-10的表达(P＜0.01),降低血中谷丙转氨酶、总胆红素、清蛋白水平(P＜0.01).内毒素可升高外周血和肝组织中TNF-α/IL-10以及血清中IL-6/IL-10(P＜0.01),维拉帕米可降低肝和循环中TNF-α/IL-10、IL-6/IL-10的比值(P＜0.01).结论:维拉帕米可调节致炎因子和抗炎因子的表达,改善内毒素诱导的急性肝损伤,致炎/抗炎因子比值可反应机体炎症反应的程度.     

内毒素耐受对D-GalN/LPS致大鼠肝损伤保护

目的 研究内毒素耐受(endotoxin tolerance,ET)对大鼠接受D-胺基半乳糖(D-GalN)/脂多糖(LPS)刺激后肝组织超微结构改变及血清细胞因子变化的影响.方法 雄性SD大鼠先以0.1mg/kg LPS腹腔注射,每日1次,连续5次,于第5次注射24h后再腹腔注射D-GalN 800 mg/kg和LPS 8μg/只,注射D-GalN/LPS 24 h后留取大鼠血及肝脏标本.苏木素-伊红染色及透射电镜下观察肝组织病理及超微结构变化;采用鲎试剂基质显色法测定血清内毒素水平.ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平.结果 ET组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBiL)水平均明显低于急性肝衰竭(ALF)组(P＜0.01),且ET组大鼠肝组织病理改变及超微结构变化明显轻于ALF组;同时,ET组大鼠血清内毒素、TNF-α、IL-6水平亦明显低于ALF组(P＜0.01).结论 内毒素耐受时,大剂量的D-GaIN和LPS腹腔注射可减轻肝组织损害,内毒素、TNF-α、IL-6释放减少.提示内毒素耐受可能有助于防治急性肝功能衰竭.     

急性百草枯中毒大鼠肺组织炎症因子表达的变化及意义

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织中炎症因子表达的变化,探讨早期及晚期炎症因子在急性PQ中毒肺损伤中的作用.方法 50只雄性SD大鼠随机分为2组:正常对照组(10只,生理盐水腹腔注射),PQ染毒组(40只,腹腔注射体积分数为1%的PQ溶液,20 mg/kg).PQ组于染毒后6 h及1、3、7 d处死,正常对照组于处理后1 d处死,检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)mRNA的表达,并观察大鼠的中毒表现及肺组织的病理改变.结果 PQ染毒组大鼠肺组织病理表现为早期充血水肿明显,大量炎性细胞浸润.与正常对照组相比,PQ染毒组大鼠肺组织中TNF-α、IL-10、HMGB-1 mRNA的表达在各时间点均有不同程度升高.PQ染毒组6 h和1 d时TNF-α mRNA表达分别为0.740±0.100和0.584±0.049,1、3 d时IL-10mRNA表达分别为0.551±0.016和0.524±0.010,6 h及1、3 d时HMGB-1 mRNA表达分别为0.695±0.060、0.87±0.154和0.819±0.188,与对照组比较,均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 大鼠急性PQ中毒后肺组织中TNF-α、IL-10及HMGB-1 mRNA的表达明显上调,早期及晚期炎症因子均参与PQ急性中毒肺损伤的致病过程.