双向电泳分析精索静脉曲张不育患者精浆蛋白质的表达差异

目的:初步观察精索静脉曲张不育患者与正常成人精浆中蛋白质的差异表达,为进一步探讨精索静脉曲张导致不育的分子机制奠定基础.方法:应用蛋白质组学的双向电泳技术,对精索静脉曲张患者与正常成人精浆蛋白质表达进行比较,观察其差异点.结果:得到分辨率和重复性均好的精索静脉曲张患者与止常成人精浆蛋白的双向凝胶电泳图谱,发现二者之间在表达上有明显差异,差异表达蛋门质点数共38个.结论:精索静脉曲张患者导致不育可能与精浆中某些蛋白质的表达和修饰改变有关,对这些差异蛋白质点的进一步分析有助于揭示精索静脉曲张导致男性不育的分子机制.     

低浓度三氯乙烯诱发L-02肝细胞蛋白质组异常表达

【目的】研究低剂量三氯乙烯对人L-02肝细胞蛋白质表达谱的影响，以助于阐明三氯乙烯引起细胞早期应答反应的分子机制。【方法】L-02肝细胞暴露于低剂量（3μmol／L）三氯乙烯24h后，提取细胞总蛋白，双向电泳分离蛋白质，软件分析凝胶图像，基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱（MALDI-TOF-TOF-MS）对相关异常变化斑点进行鉴定。【结果】和对照组比较，低剂量三氯乙烯处理后L-02肝细胞蛋白质表达发生改变，初步鉴定出7个差异蛋白。低剂量三氯乙烯刺激后，上调的蛋白有核糖体样蛋白（similar to ribosomal protein）和SET protein，下调的蛋白有异柠檬酸脱氢酶（isocitrate dehydrogenase，NADP）和腺苷二磷酸-核糖基化因子鸟苷酸因子6（ADP-ribosylation factor guanine nucleotide factor 6），微管-肌动蛋白交叉连接因子1（microtubule-actin crosslinking factor 1）特异表达，肽基脯氨酰顺-反异构酶PPI（peptidyl pmlyl cis／tralls isomerase）缺失。【结论】低剂量的三氯乙烯处理后，L-02肝细胞中的蛋白表达谱发生明显变化，这为三氯乙烯毒作用机制的进一步研究提供了线索。     

低浓度三氯乙烯诱发L-02肝细胞蛋白质组异常表达

[目的]研究低剂量三氯乙烯对人L-02肝细胞蛋白质表达谱的影响,以助于阐明三氯乙烯引起细胞早期应答反应的分子机制.[方法]L-02肝细胞暴露于低剂量(3 μmol/L)三氯乙烯24 h后,提取细胞总蛋白,双向电泳分离蛋白质,软件分析凝胶图像,基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOFMS)对相关异常变化斑点进行鉴定.[结果]和对照组比较,低剂量三氯乙烯处理后L-02肝细胞蛋白质表达发生改变,初步鉴定出7个差异蛋白.低剂量三氯乙烯刺激后,上调的蛋白有核糖体样蛋白(similarto ribosomalprotein)和SET protein,下调的蛋白有异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,NADP)和腺苷二磷酸-核糖基化因子鸟苷酸因子6(ADP-ribosylation factor guanine nucleotide factor 6),微管-肌动蛋白交叉连接因子1(microtubule-actin crosslinking factor 1)特异表达,肽基脯氨酰顺-反异构酶PPI(peptidyl prolyl cis/trans isomerase)缺失.[结论]低剂量的三氯乙烯处理后,L-02肝细胞中的蛋白表达谱发生明显变化,这为三氯乙烯毒作用机制的进一步研究提供了线索.     

结核病患者和正常人血清蛋白质双向凝胶电泳差异比较

目的 初步探讨结核病患者与正常人之间血清蛋白质的差异,以期筛选出新的结核病实验诊断标志物。 方法 对10例菌阳肺结核（+组）、10例菌阴肺结核（－组）、10例肺外结核（肺外组）及10例正常人（正常组）分组混合血清应用17cm pH4-7 IPG胶条进行双向凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis, 2-DE）,每组平行电泳3块胶条。电泳结束后对2-DE胶条进行考马斯亮蓝染色,染色后用Umax powerlook2000扫描仪以投射方式、300dpi分辨率扫描获取2-DE图谱,然后用2-DE分析软件ImageMaster 2D Platium5.0进行分析。 结果 在正常组、＋组、-组、肺外组中,分别平均可以检测到310±64、307±33、296±54、267±23个清晰可见的蛋白质点。正常组与＋组、-组、肺外组的匹配率分别为(74±2)%、(76±2)%和(68±5)%。通过对4组2-DE图谱比较,＋组与正常组间有21个差异蛋白质点（其中9个上调）,-组与正常组间有18个差异蛋白质点（其中8个上调）,肺外组与正常组间有24个差异蛋白质点（其中7个上调）。将＋组、-组、肺外组合并为结核组与正常组比较有3个差异蛋白质点（其中2个上调）。 结论 结核病患者和正常人血清蛋白质存在差异,有望从血清中筛选出新的结核病实验诊断标志物。本研究建立了两者间血清蛋白质组差异蛋白质的初步模型,但有待进一步验证并进行差异蛋白质鉴定。     

结直肠癌患者与正常人血清蛋白质双向凝胶电泳差异分析

目的 利用血清蛋白质组学技术分析结直肠癌患者与正常人血清蛋白质表达谱的差异,寻找结直肠癌相关血清标志物.方法 分别采用pH3～10和pH4～7的IPG干胶条,在优化的实验条件基础之上,利用双向凝胶电泳(2-DE)分离结直肠癌患者和正常人血清蛋白质,硝酸银染色,获取图像后PDQuest软件分析差异表达的血清蛋白质点.结果 采用pH值3～10的胶条分离血清蛋白共有17个,结直肠癌组表达量上调的蛋白质点7个,表达量下调的蛋白质点7个.采用pH值4～7的胶条分离血清蛋白共有13个,结直肠癌组表达量上调的蛋白质点8个,表达量下调的蛋白质点5个.结论 所筛选的差异蛋白质点为进一步结直肠癌相关血清蛋白质的鉴定和其他肿瘤血清蛋白质学研究奠定了良好的基础.     

胶质瘤组织中蛋白质表达谱的研究及疾病相关蛋白质的筛选

目的利用双向凝胶电泳-MALDI-TOF质谱技术进行胶质瘤组织中蛋白质表达谱的研究,并进行胶质瘤组织中疾病相关蛋白质的筛选。方法分别提取6例胶质瘤患者脑组织、6例相对正常脑组织的总蛋白质,进行双向凝胶电泳、银染,两组凝胶图像差异分析,得到差异蛋白质。对目的差异蛋白质进行MALDI-TOF质谱分析。结果获得了分辨率较高的胶质瘤和相对正常脑组织双向凝胶电泳图谱,鉴定了29个差异蛋白质点中的18个蛋白质,得到15个阳性结果。在鉴定中得到阳性结果的差异蛋白质中,胶质瘤组织上调的蛋白质有:γ-肌动蛋白、三联基元蛋白5的环指蛋白、假想蛋白、RAS结合蛋白、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原、SMC1结构维持染色体1样1、ATP结合盒转运载体蛋白1和果糖二磷酸醛缩酶;下调的蛋白质有:β-球蛋白、脑肌酸激酶、类似S期激酶活化剂、CUG-BP和ETR-3样因子、类似磷酸二酯酶4D相互作用蛋白、CD2抗原和肌动蛋白结合蛋白。结论利用双向凝胶电泳-MALDI-TOF质谱技术进行胶质瘤组织中疾病相关蛋白质的研究得到差异蛋白质,其中上调蛋白质功能为细胞的骨架结构形成、细胞的侵袭性生长、肿瘤耐药性和促进细胞增殖等;下调蛋白质功能为免疫调节、细胞周期调节、抑制细胞迁移、在脑组织中参加细胞能量代谢和调节细胞特异性和发育等;还有一些未知功能蛋白质。所得结果为胶质瘤疾病蛋白质组学的进一步研究打下了一定的工作基础。     

食管鳞癌转移淋巴结蛋白质双向凝胶电泳图谱差异分析

目的 分析食管鳞癌转移淋巴结与正常淋巴结组织蛋白质表达差异.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)技术和计算机辅助的图像分析方法,对食管鳞癌转移淋巴结与正常淋巴结组织蛋白质进行分离和比较分析.结果 获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱,比较分析显示23个蛋白点的表达量存在明显差异,其中新增蛋白点4个,缺失1个,14个蛋白点表达发生明显上调,4个蛋白点表达发生明显下调.结论 食管鳞癌转移淋巴结与正常淋巴结蛋白质表达存在明显差异,可能与食管鳞癌淋巴结转移机制有关.     

不同分化喉鳞状细胞癌蛋白质组差异表达的研究

目的 研究不同分化程度喉鳞状细胞癌黏膜组织蛋白质组的差异表达.方法 用固相pH梯度双向凝胶电泳分离不同分化程度喉癌黏膜组织总蛋白质,行考马斯亮蓝染色,Image Master 2D软件分析所获得的双向凝胶电泳图谱,找出差异表达的蛋白质点.结果 获得分辨率和重复性均较好的双向凝胶电泳图谱,发现13种蛋白质与喉癌分化密切相关.其中有7种蛋白质在高分化喉癌组织中表达上调,6种蛋白质表达明显下调.结论 利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离不同分化喉鳞状细胞癌黏膜组织总蛋白质,建立了重复性较强的不同分化喉鳞状细胞癌黏膜组织蛋白质组表达图谱,且两者蛋白质的表达明显不同,可能与喉癌不同分化程度的发病机制有关.     

慢性马兜铃酸肾病大鼠模型肾组织中蛋白质组的差异表达

目的:制备慢性马兜铃酸肾病的大鼠模型,建立马兜铃酸肾病大鼠肾组织和正常大鼠肾组织的双向电泳图谱,从而展示差异表达的蛋白质,为进一步筛选介导马兜铃酸毒性作用的蛋白质分子奠定基础. 方法:应用马兜铃酸腹腔注射制备大鼠慢性马兜铃酸肾病模型,提取其肾组织中总蛋白质,采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对模型组和正常组肾组织中蛋白质进行差异展示. 结果:成功制备了慢性马兜铃酸肾病大鼠模型,并建立了模型组和正常组大鼠肾组织的双向电泳图谱,发现了差异蛋白质. 结论:马兜铃酸导致大鼠肾组织中蛋白质差异表达,这些差异表达的蛋白质可能介导了马兜铃酸的毒性作用.     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

目的建立血清蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术.方法对血清蛋白质2-DE的各种条件进行调整、优化.结果建立了稳定的2-DE技术.结论已建立的血清蛋白质2-DE技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

结节性甲状腺肿与甲状腺癌P21WAF1蛋白和层粘连蛋白的表达

目的研究P21WAF1蛋白和层粘连蛋白(LN)在结节性甲状腺肿中的表达水平及意义.方法应用免疫组化SP法检测50例结节性甲状腺肿、40例正常甲状腺组织、40例甲状腺癌标本中P21WAF1蛋白和LN的表达. 结果 P21WAF1蛋白和LN表达阳性率在结节性甲状腺肿分别为(52.14±29.02)%,(26.45±15.89)%;正常甲状腺组织为(87.01±7.21)%,(20.45±10.2)%;甲状腺癌为(14.20±12.04)%,(60.12±23.77)%;三者比较差异有显著性(P＜0.01).甲状腺癌P21WAF1和LN的表达呈负相关(r=-0.610,P<0.05).结论 P21WAF1和LN联合测定对鉴别良恶性甲状腺肿瘤有一定的临床价值.     

S100A4蛋白在甲状腺不同组织中的表达及与甲状腺癌转移的关系

目的:探讨S100A4蛋白的表达及与甲状腺癌转移的关系。方法:用免疫组化检测130份(例)甲状腺石蜡标本的S100A4蛋白表达情况,其中甲状腺癌80份(例)(乳头状癌55例、滤泡癌15例、髓样癌10例);甲状腺良性肿瘤50份(例)(结节性甲状腺肿、甲状腺滤泡型腺瘤各25例);癌旁甲状腺组织30例;正常甲状腺组织5例(对照)。结果:S100A4蛋白表达甲状腺癌组织阳性率77.5%(62/80),甲状腺良性肿瘤阳性率16.0%(8/50),癌旁甲状腺组织、甲状腺正常组织均呈阴性。甲状腺癌组织与后三者比,S100A4蛋白的表达均有统计学意义(P<0.01)。有、无淋巴结转移的癌组织S100A4蛋白表达阳性率分别为83.3%(25/30)和74.0%(37/50)(P<0.05)。有配对淋巴结转移的30例甲状腺癌中,S100A4表达率淋巴结转移癌高于相应原发灶(P<0.01)。结论:S100A4蛋白在甲状腺癌组织中过表达与转移有关,有希望成为一个能够预测肿瘤病情发展及指导临床治疗的标记物。     

分化型甲状腺癌的外科治疗分析

目的探讨分化型甲状腺癌的外科治疗的疗效。方法参照分化型甲状腺癌的危险性评估,不同患者的手术采用不同的切除范围。结果 128例分化型甲状腺癌术后5年生存率为100%,10年生存率97.7%。结论甲状腺癌的规范手术决定了患者的预后,采用适当的手术方式,同时加强术后的治疗,可明显提高生存率。     

Ras基因和c-myc基因在结节性甲状腺肿合并甲状腺癌中的表达

目的:探讨正常甲状腺组织和结节性甲状腺肿合并甲状腺癌中Ras基因和c-myc基因的表达。方法:采用LSAB法作免疫组化染色检测了20例结节性甲状腺肿旁正常甲状腺组织和40例结节性甲状腺肿、40例结节性甲状腺肿合并甲状腺癌中Ras和c-myc基因的表达。结果:Ras和c-myc基因在甲状腺正常组织中均呈阴性。在40例结节性甲状腺肿合并甲状腺癌中Ras和c-myc基因的阳性表达率分别为52.5%和77.5%。结节性甲状腺肿合并甲状腺癌中Ras和c-myc基因的表达呈明显正相关(P<0.05)。结论:Ras和c-myc基因在结节性甲状腺肿合并甲状腺癌的发生、发展中起到重要作用。     

几种不同提取方法对Hela细胞总蛋白双向电泳结果的影响

目的比较几种不同的提取方法对Hela细胞总蛋白双向电泳图谱的影响。方法采用反复冻融裂解法、超声加冰浴裂解法、室温振摇及试剂盒纯化法提取Hela细胞总蛋白,进行双向凝胶电泳(2-DE)。以7cmpH3-10NL固相pH梯度胶条做一向等电聚焦,上样量为300μg,SDS-PAGE做二向垂直电泳,改进的胶体考马斯亮蓝染色,ImageMaster2D Platinum软件分析电泳图谱。结果反复冻融裂解法得到的2-DE图谱条纹很多,蛋白点数较少(400±);超声加冰浴裂解和室温振摇法得到的2-DE图谱横向条纹明显减少,蛋白点数明显增加(分别为700±和800±);进一步用试剂盒纯化法得到的2-DE图谱基本上没有蛋白拖尾现象,且加Destreak试剂后蛋白点数有所增加(由800±→900±),但纯化的同时有低丰度蛋白的丢失。结论超声加冰浴裂解和室温振摇法处理细胞,可得到条纹较少、蛋白点数较多较全的2-DE图谱;进一步用蛋白纯化试剂盒和Destreak试剂纯化样品能更好地解决碱性端的横向拖尾,得到较多的蛋白点。     

105例分化型甲状腺癌的超声比较分析

目的 分析比较105例分化型甲状腺癌的超声声像图特点,探讨其对分化型甲状腺癌的诊断价值,降低术前超声误诊率。方法 回顾性分析105例分化型甲状腺癌患者的术前超声声像图,按照术后病理结果分为甲状腺乳头状癌组（PTC组）和甲状腺滤泡癌组（FTC组）,对两组癌结节的大小、回声水平、边界、形态、钙化及转移情况进行比较分析。结果 PTC组的癌结节较小（10.22±4.94mm）,以低回声为主（80.00%,84/105）,边界模糊（84.76%,89/105）,形态不规则（86.67%,94/105）,伴微小钙化（78.09%,82/105）,有颈部淋巴结转移（34.78%,32/92）;FTC组的癌结节较大（15.25±6.13mm）,低回声比例高（71.43%,10/14）,边界清晰（57.14%,8/14）,形态规则（64.29%,9/14）,多无钙化（57.14%,8/14）,少部分可伴边缘钙化（28.57,4/14）,易发生血行转移（30.77%,4/13）。结论 PTC超声表现典型,临床上较易鉴别,对缺乏恶性征象FTC术前超声可根据病灶大小、钙化及转移特点结合细针穿刺结果判断结节良恶性,有效地减少临床误诊。     

基质金属蛋白酶在乳头状甲状腺癌中的表达

目的：研究基质金属蛋白酶（Matrix Metalloproteinase，MMPs）基因在乳头状甲状腺癌中的表达。方法：手术中获得的乳头状甲状腺癌、甲状腺腺瘤、桥本氏炎症及正常甲状腺组织的新鲜标本共31例，提取其总RNA，然后进行RT-PCR，比较MMP-2、MMP-9与MMP-14在不同疾病组织中的表达差异。结果：3种MMPs基因在乳头状甲状腺癌中的表达阳性率显著高于腺瘤、桥本氏炎症和正常甲状腺组织。结论：MMPs基因在乳头状甲状腺癌中表达增高与癌的发生有关。     

29例乳头状甲状腺癌的超声诊断分析

目的分析乳头状甲状腺癌的超声表现特征,以提高甲状腺良恶性肿块的超声诊断及鉴别诊断水平。方法探讨我院29例病理证实为乳头状甲状腺癌肿块的术前超声检查,分析病灶的位置、回声、大小、内部有无钙化、后方回声、边界、内部的血流丰富程度、阻力指数及颈部淋巴结是否肿大。结果乳头状甲状腺癌声像图表现有以下特征：多呈实质低闻声、后方回声多衰减、边界不清（无包膜）、纵横比〉1、形态欠规则、呈浸润性生长、微钙化、高阻血流频谱、同侧颈部淋巴结转移等。结论掌握乳头状甲状腺癌超声表现特征,可提高对本病的认识,减少漏诊及误诊,为If缶床治疗提供有价值的信息。     

Survivin蛋白在乳腺癌中的表达及意义

目的：探讨Survivin蛋白在乳腺癌组织中表达的临床意义。方法：应用免疫组织化学法（SP法）检测60例乳腺癌组织和15例乳腺增生症中Survivin蛋白的表达。结果：Survivin在乳腺癌组织中表达的阳性率为68．3％（41／60），Survivin在乳腺癌中的阳性表达率明显高于乳腺增生症20．0％（3／15）（P〈0．05）；但与患者乳腺癌组织组织学分型、淋巴结转移无明显相关性。结论：Survivin蛋白表达异常在乳腺癌发生中可能有一定的作用。     

甲状腺结节钙化在超声诊断甲状腺癌中的价值

目的 探讨钙化灶在超声诊断甲状腺癌中的价值.方法 回顾244例甲状腺结节伴钙化患者的临床资料,以病理结果为标准,分析钙化灶与甲状腺癌的相关性.结果 钙化形态不同（微钙化、粗钙化）的结节在良恶性结节中构成比有显著性差异（x2=70.984,P＜0.01）.钙化结节中边界不同（边界清、边界不清）的结节在良恶性结节中构成比有显著性差异（x2=86.844,P＜0.01）;钙化结节中结节数目不同（单发结节、多发结节）的结节在良恶性结节中构成比有显著性差异（x2=43.094,P＜0.01）.结论 甲状腺结节内钙化灶在超声诊断甲状腺癌中具有辅助诊断、鉴别结节性质的临床价值.