鸡肌球蛋白轻链激酶在大肠杆菌中的表达

目的建立鸡肌球蛋白轻链激酶（ｍｙｏｓｉｎｌｉｇｈｔｃｈａｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＬＣＫ）ｃＤＮＡ表达克隆。方法将ＭＬＣＫ功能区（自动抑制区、钙调蛋白识别区和活性催化区）的ｃＤＮＡ插入质粒ｐＢＫｒｓｖ中，重组质粒（ｐＢＫｒｓｖ－ＭＬＣＫ）转化入大肠杆菌中并获得表达。结果Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹试验表明表达产物的分子量与插入片段ｃＤＮＡ所含信息相一致。结论所获重组克隆在体外表达，表达蛋白具有使多肽底物磷酸化的活性     

肌球蛋白轻链激酶和肌球蛋白轻链9基因在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的研究肌球蛋白轻链激酶（MYLK）及肌球蛋白轻链9（MYL9）在非小细胞肺癌（NSCLC）的表达情况及其与NSCLC临床特征的关系。方法采用荧光定量PCR方法检测60例NSCLC组织、癌旁组织和60例正常肺组织中MYLK mRNA和MYL9 mRNA的表达情况,并分析癌组织MYLK mRNA及MYL9 mRNA表达值与临床分期的相关性。结果 MYLK mRNA、MYL9 mRNA在癌组织中的表达量明显低于癌旁组织及正常肺组织（P均〈0.05）,癌旁组织和正常肺组织中MYLK mRNA、MYL9 mRNA表达量无统计学差异（P均〉0.05）。在癌症患者中,淋巴结转移组MYLK mRNA及MYL9 mRNA的相对表达量比无淋巴结转移组高（P〈0.05）。腺癌组织与鳞癌组织MYLK mRNA及MYL9 mRNA的相对表达量无统计学差异（P〈0.05）。MYLK mRNA与MYL9 mRNA的表达呈正相关（P〈0.001）,MYLK mRNA及MYL9 mRNA表达与肿瘤临床分期呈正相关（P〈0.05）。结论 NSCLC组织中MYLK mRNA和MYL9 mRNA表达均明显低于癌旁组织及正常组织,MYLK mRNA及MYL9 mRNA的表达与临床分期呈正相关。     

肌球蛋白轻链激酶在急性肺损伤模型的表达及意义

目的 通过建立细菌脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺损伤模型,并观察其炎症程度和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达,探讨MLCK在急性肺损伤发病机制中的作用.方法 20只BALB/c雌性小鼠,按随机数字表法分为LPS组(n=10)和生理盐水对照组(n=10),LPS组鼻内注入30μL含20 μg LPS的生理盐水,对照组仅用生理盐水.比较两组的病理学、湿干比重、肺泡灌洗液(BALF)总细胞计数的不同,并采用免疫组化法观察MLCK在肺组织的表达,用RT-PCR法检测肺组织中MLCK mRNA的表达.结果 与对照组比较,LPS组表现为明显的肺充血、水肿、中性粒细胞浸润,肺含水量增加,BALF细胞总数含量增高(P＜0.05或P＜0.01);免疫组化结果显示,LPS组MLCK表达较对照组更明显;RT-PCR结果显示LPS组MLCK mRNA吸光度值较对照组高.结论 LPS能导致急性肺损伤,MLCK活性上调在其发病机制中起一定作用.     

肌球蛋白轻链激酶在急性肺损伤模型的表达及意义

目的通过建立细菌脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺损伤模型,并观察其炎症程度和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达,探讨MLCK在急性肺损伤发病机制中的作用。方法20只BALB/c雌性小鼠,按随机数字表法分为LPS组(n=10)和生理盐水对照组(n=10),LPS组鼻内注入30μL含20μg LPS的生理盐水,对照组仅用生理盐水。比较两组的病理学、湿干比重、肺泡灌洗液(BALF)总细胞计数的不同,并采用免疫组化法观察MLCK在肺组织的表达,用RT-PCR法检测肺组织中MLCK mRNA的表达。结果与对照组比较,LPS组表现为明显的肺充血、水肿、中性粒细胞浸润,肺含水量增加,BALF细胞总数含量增高(P<0.05或P<0.01);免疫组化结果显示,LPS组MLCK表达较对照组更明显;RT-PCR结果显示LPS组MLCK mRNA吸光度值较对照组高。结论LPS能导致急性肺损伤,MLCK活性上调在其发病机制中起一定作用。     

肌球蛋白轻链激酶与炎症性疾病关系的研究进展

肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)可以调控肌球蛋白轻链的磷酸化,进而调控基于肌动蛋白与肌球蛋白之间相互作用的细胞骨架活动.近几年研究报道,长链MLCK与短链MLCK的异常表达在不同的炎症性疾病中多有发生,炎症相关因子能诱导MLCK表达升高.本文对MLCK在肺炎、血管损伤以及炎性肠病中的作用,及MLCK参与炎症性疾病的可能信号通路进行了综述.     

心肌型肌球蛋白轻链激酶调控肌球蛋白轻链对心肌肥大的影响

目的 探讨心肌型肌球蛋白轻链激酶(cardiac myosin light chain kinase,cMLCK)对AngⅡ诱导的心肌肥大的作用.方法 纯化cMLCK作为激酶,体外激酶反应实验探索cMLCK活性位点.制作野生型cMLCK (WT-cMLCK)及敲除了氨基端(N端)的变异体(ΔNT-cMLCK)腺病毒,感...     

人非肌肉肌球蛋白轻链激酶N端表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的：构建人非肌肉肌球蛋白轻链激酶(hnmMLCK)N端表达载体及其体外表达与表达产物的纯化。方法：用PCR方法扩增hnmMLCK的N端cDNA ,插入质粒pBKcmv中的构建成表达载体，转化入大肠杆菌XL1-blue，经IPTG诱导表达，表达产物用电洗脱的方法初步纯化。结果：经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证明所构建质粒为hnmMLCK重组质粒，SDS－PAGE证实获得分子量为21ku的融合蛋白，表达量约占菌体总蛋白的21％。结论：成功构建了重组hnmMLCK表达载体，并在大肠杆菌中获得表达，为进一步研究及临床应用奠定了良好基础。     

早期糖尿病大鼠肾脏肌球蛋白轻链激酶表达

目的观察早期糖尿病大鼠肾脏肌球蛋白轻链激酶（MLCK）表达及意义。方法腹腔注射链尿佐菌素（65mg／ks）诱发糖尿病模型,应用胰岛素控制血糖,心脏取血检测血糖及肾功能相关指标。通过免疫组化与Western-blot检测肾组织肌球蛋白轻链激酶表达。结果与正常对照组相比,模型组血糖及肾功能相关指标发生显著性变化。正常组肾小球、肾小管及肾脏血管均有MLCK的表达。模型组与正常对照组相比,肾小球表达MLCK有一定的减弱,治疗组与正常对照组相比无明显变化。结论早期糖尿病肾病形成可能是由于肌球蛋白轻链激酶表达降低所致。胰岛素治疗糖尿病肾病机制可能是增加肾脏肌球蛋白轻链激酶的表达。     

哮喘模型大鼠支气管平滑肌肌球蛋白轻链激酶的表达

目的探讨哮喘模型大鼠支气管平滑肌肌球蛋白轻链激酶（MLCK）表达的变化。方法SD大鼠24只,随机分为正常对照组（A组）、哮喘模型激发1周组（B组）和哮喘模型激发2周组（C组）。以卵蛋白（OVA）致敏和激发建立大鼠支气管哮喘模型,用免疫组织化学和免疫印迹法分析三组大鼠支气管平滑肌中MLCK表达。结果哮喘模型激发1周组大鼠支气管平滑肌MLCK表达较正常对照组明显增加,2周组增加更明显,差异均有显著性（P〈0．05）。结论支气管平滑肌MLCK表达增加可能与哮喘发病有关。     

肌球蛋白轻链激酶在烧伤大鼠血清引起的内皮细胞骨架改变过程中的作用

目的 观察烧伤大鼠血清刺激人脐静脉内皮细胞株ECV-304引起的纤维状肌动蛋白在细胞内分布变化的时间效应以及肌球蛋白轻链激酶在其中的作用。方法 用烧伤大鼠血清分别孵育细胞30min、1h、2h、4h和6h。或在烧伤血清作用30min之前或之后使用5μmol／L的ML-7作用30min。使用罗丹明标记的鬼笔环肽探针特异性结合并显示细胞内的纤维状肌动蛋白．并在Nikon TE-300荧光显微镜下观察照相。结果 正常情况下，纤维状肌动蛋白主要分布在内皮细胞内的外周膜部位。使用烧伤大鼠血清进行30min～12h的刺激后，内皮细胞内可观察到明显的应力纤维形成，并且随着刺激时间的延长而增强。可以通过使用肌球蛋白轻链激酶特异性抑制剂ML-7预处理细胞30min来抑制这种效应。此外，ML-7还能够改善烧伤大鼠血清引起的内皮细胞内肌动蛋白重排。结论 本研究表明，大鼠烧伤血清能够通过激活肌球蛋白轻链激酶引起明显的细胞内肌动蛋白排列的改变。在烧伤血清刺激细胞后．抑制肌球蛋白轻链激酶可以改善烧伤大鼠血清引起的内皮细胞骨架重排。     

同型半胱氨酸对内皮细胞肌球蛋白轻链激酶表达的影响

目的：研究同型半胱氨酸( Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)运动能力以及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达的影响。方法不同浓度的Hcy处理人脐静脉内皮细胞后, MTT法检测Hcy对HUVEC增殖的影响,划痕实验检测Hcy对细胞迁移的影响,免疫组化法及Western blot法检测ML-CK表达的变化。结果随着浓度的升高,Hcy对HUVEC的增殖有显著的抑制作用,对HUVEC的迁移有明显的促进作用,免疫组化法及 Western blot 法结果显示 Hcy 可以增强MLCK的表达。结论 Hcy对HUVEC的迁移具有促进作用,可能是Hcy通过上调MLCK的表达所致。     

硫化氢对糖尿病大鼠心肌肌球蛋白轻链激酶表达的影响

目的：观察外源性硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)表达的影响。方法：32只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DM组)、NaHS治疗组(DM+NaHS组)和NaHS对照组(NaHS组),每组8只。采用链脲佐菌素55 mg/kg腹腔注射诱导1型糖尿病大鼠模型。造模成功后,DM+NaHS组和NaHS组大鼠腹腔注射NaHS溶液28 μmol/kg干预治疗。8周后,测定大鼠左心室功能指标;计算心体比;测定血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和肌酸激酶同工酶(creatine kinase MB isozyme,CK-MB)水平;透射电镜观察心肌细胞超微结构变化; RT-PCR和Western印迹分别检测心肌组织MLCK mRNA和蛋白表达。结果：与NC组比较,NaHS组各项指标差异无统计学意义(均P>0.05),而DM组左心室收缩和舒张功能下降,心体比明显增大(均P<0.01),血清中LDH和CK-MB水平明显增高(均P<0.01),心肌超微结构损伤明显,心肌组织MLCK mRNA和蛋白表达明显降低(均P<0.01)。与DM组比较,DM+NaHS组左心室功能和心肌超微结构损伤明显改善,心体比明显降低(均P<0.05),血清中LDH和CK-MB水平明显下降(均P<0.01),MLCK mRNA和蛋白表达明显升高(均P<0.01)。结论：外源性H2S对糖尿病大鼠心肌损伤具有保护作用,机制可能与增强心肌MLCK表达有关。     

人血小板肌球蛋白轻链激酶的研究

报道了人血小板匀浆上清液肌球蛋白轻链酶微量快速测定方法，对该酶的性质进行了初步研究，并建立了较为合适的测定酶活性的体系。该酶活性依赖于Ｃａ＾２＋和ＣａＭ，其半激活浓度分别为０．３５ｍｍｏｌ／Ｌ和１０μｍｏｌ／Ｌ，ＴＦＰ能抑制该酶活性，其半抑制浓度为１５０μｍｏｌ／Ｌ。     

肌球蛋白轻链激酶在烧伤大鼠血清引起的内皮细胞骨架改变过程中的作用

目的观察烧伤大鼠血清刺激人脐静脉内皮细胞株ECV-304引起的纤维状肌动蛋白在细胞内分布变化的时间效应以及肌球蛋白轻链激酶在其中的作用。方法用烧伤大鼠血清分别孵育细胞30 min、1 h、2 h、4 h和6 h。或在烧伤血清作用30 min之前或之后使用5 μmol/L的ML-7作用30 min。使用罗丹明标记的鬼笔环肽探针特异性结合并显示细胞内的纤维状肌动蛋白,并在Nikon TE-300荧光显微镜下观察照相。结果正常情况下,纤维状肌动蛋白主要分布在内皮细胞内的外周膜部位。使用烧伤大鼠血清进行30 min~12 h的刺激后,内皮细胞内可观察到明显的应力纤维形成,并且随着刺激时间的延长而增强。可以通过使用肌球蛋白轻链激酶特异性抑制剂ML-7预处理细胞30 min来抑制这种效应。此外,ML-7还能够改善烧伤大鼠血清引起的内皮细胞内肌动蛋白重排。结论本研究表明,大鼠烧伤血清能够通过激活肌球蛋白轻链激酶引起明显的细胞内肌动蛋白排列的改变。在烧伤血清刺激细胞后,抑制肌球蛋白轻链激酶可以改善烧伤大鼠血清引起的内皮细胞骨架重排。     

脂质过氧化对培养心肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化系统的影响

应用氢过氧化枯烯作为机体产生自由基的引发剂，作用于培养的心肌细胞，激起和促使细胞曹受过氧化损伤，同时使用硒、维生素等抗自由基物质，观察细胞中肌球蛋白轻链磷酸化系统的变化。     

肌球蛋白轻链激酶mRNA在非小细胞肺癌患者外周血的表达情况及其临床意义

目的 探讨肌球蛋白轻链激酶(MYLK) mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血的表达情况及其与临床特征的关系.方法 48例NSCLC患者(肺癌组)和48例非肿瘤患者(对照组),抽取静脉血后分离出单个核细胞,使用实时荧光定量PCR检测MYLK mRNA的表达情况,并分析其表达量与临床特征的关系.结果 肺癌组及对照组患者外周血均有MYLK mRNA表达,肺癌组患者MYLK mRNA表达量为(1.40±0.57),明显低于对照组的(2.03±0.16)(P＜0.05);术前组与术后组、鳞癌组与腺癌组、高+中分化组与低分化组、男性组与女性组、吸烟组与不吸烟组的MYLK mRNA相对表达量比较,差异均无统计学意义(P均＞0.05);Ⅲ+Ⅳ期组患者、有淋巴结转移组患者MYLK mRNA相对表达量分别高于Ⅰ+Ⅱ期组、无淋巴结转移组患者(P＜0.05).结论 外周血MYLK mRNA的表达水平可能与NSCLC发生发展有关,对判断NSCLC预后有一定价值.     

高脂血症对大鼠动脉肌球蛋白轻链激酶活性及表达的影响

目的探讨高脂血症对大鼠动脉肌球蛋白轻链激酶活性及表达的影响。方法胆固醇喂食大鼠4周和12周,颈动脉取血后检测血清标本中血脂成分的变化,免疫组化和Western blot分析动脉肌球蛋白轻链激酶的表达,γ-^32 P参入法检测动脉肌球蛋白轻链激酶活性。结果血清中各种脂质发生显著变化,大鼠在喂食胆固醇膳食4周和12周后动脉肌球蛋白轻链激酶表达显著增强,肌球蛋白轻链激酶活性显著升高。结论胆固醇对大鼠动脉肌球蛋白轻链激酶的表达与活性变化相关,肌球蛋白轻链激酶表达与活性变化可能是高脂血症形成的因素。     

抑制肌球蛋白轻链激酶活性诱导细胞凋亡的研究

目的:探讨抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)活性诱导细胞凋亡。方法:应用尿素/甘油胶检测平滑肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平,流式细胞仪检测平滑肌细胞凋亡细胞比例。结果:ML-7处理后细胞具有剂量依赖的肌球蛋白轻链去磷酸化与细胞凋亡,肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡。结论:抑制MLCK活性足以引起细胞凋亡,且肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡。     

脂质过氧化对培养心肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化系统的影响

应用氢过氧化枯烯（ＣＨＰＯ）作为机体产生自由基的引发剂，作用于培养的心肌细胞，激起和促使细胞遭受过氧化损伤，同时使用硒（Ｓｅ）、维生素Ｅ（ＶＥ）等抗自由基物质，观察细胞中肌球蛋白轻链磷酸化系统的变化。结果表明，ＣＨＰＯ引发的自由基以及脂质过氧化反应，造成肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和ＡＴＰ酶活性显著下降，Ｓｅ、ＶＥ以及二者联合应用，可使心肌细胞抗自由基损伤的能力极大增强，ＭＬＣＫ和ＡＴＰ酶活性都有不同程度的提高。提示：ＣＨＰＯ引发的自由基已造成了对心肌细胞肌球蛋白磷酸化系统的损害，Ｓｅ和ＶＥ的应用，对保护肌球蛋白分子的完整结构和其生化功能起着重要作用。     

肌球蛋白轻链激酶抑制剂的临床应用前景

目的：探索肌球蛋白轻链激酶（ ＭＬＣＫ） 抑制剂的作用机制及其与临床某些疾病的关系。方法：综述了国内外近年来对ＭＬＣＫ及其抑制剂的研究情况。结果：ＭＬＣＫ的活性与某些临床疾病的发生密切相关，而广泛存在多种植物中的ＭＬＣＫ抑制剂抑制ＭＬＣＫ的活性，具有抗癌，抗病等多种生理功能。结论：ＭＬＣＫ抑制剂的研究从一个方面揭示了某些药物的作用机理，将对体外筛选此类化合物提供一种有用的研究途径。