CPUHY002对人肝微粒体CYP450酶体外抑制作用研究

目的：评价CPUHY002在体外对人肝微粒体细胞色素P450（CYP450）酶6种亚型酶活性的影响.方法：将CPUHY002与CYP450酶6种亚型的特异性探针底物非那西丁、双氯酚酸钠、奥美拉唑、右美沙芬、氯唑沙宗、丙酸睾酮与人肝微粒体进行孵育,采用LC-MS/MS法测定对应6种代谢产物对乙酰氨基酚、4-羟基双氯酚酸、5-羟基奥美拉唑、右啡烷、6-羟基氯唑沙宗、6β-羟基睾酮的浓度,求算出IC50.结果：CPUHY002对CYP2C19和CYP2E1的IC50值分别为48.02 μmol/L和47.19 μmol/L,对CYP1 A2、CYP2D6、CYP3A4和CYP2C9的IC50值＞100 μmol/L.结论：CPUHY002对于CYP2C19和CYP2E1具有弱抑制作用,对CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4和CYP2C9无抑制作用.     

刺五加对大鼠及人肝微粒体酶CYP450的作用观察

以１０ｇ／１００ｇ体重的刺五加给予大鼠灌胃５天，检测大鼠肝微粒体酶活力。结果表明，给药组肝微粒体酶ＣＹＰＩＡ１活性受抑；正常人组服用高于临床剂量的刺五加１周，利用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）以咖啡因为代谢探针间接反映人肝微粒体酶ＣＹＰＩＡ２活性。结果表明，正常人组该酶活性在用药后受抑；ＣＹＰＩＡ１、ＣＹＰＩＡ２能够催化多种前致癌物在机体内的活化，根据刺五加对这些酶的抑制，说明该药在一定程度上能防御肿瘤的发生     

LC-MS/MS法研究苯环喹溴铵对大鼠肝微粒体CYP450酶的抑制作用

建立同时测定大鼠肝微粒体中7种特异性底物对应代谢产物（对乙酰氨基酚、4″-羟基美芬妥英、右啡烷、4-羟基甲苯磺丁脲、6-羟基氯唑沙宗、1-羟基咪达唑仑和6β-羟基睾酮）的LC-MS/MS法,并应用探针底物法研究苯环喹溴铵对大鼠肝微粒体CYP450酶的抑制作用。将CYP450酶6种亚型的7种特异性探针底物非那西丁（CYP1A2）、S-美芬妥英（CYP2C11）、右美沙芬（CYP2D1/2）、甲苯磺丁脲（CYP2C6）、氯唑沙宗（CYP2E1）、咪达唑仑（CYP3A1/2）和睾酮（CYP3A1/2）分别与大鼠肝微粒体及系列浓度的苯环喹溴铵溶液进行温孵反应,合并处理后的微粒体溶液,采用LC-MS/MS法同时测定对应底物代谢产物的含量,计算相应的IC₅₀,评价是否有抑制作用。并应用已知抑制剂对所建立的探针底物法进行验证。在大鼠肝微粒体温孵体系中,苯环喹溴铵对CYP1A2,CYP2C11,CYP2C6,CYP2E1和CYP3A1/2的IC₅₀均大于100 μmol/L,对CYP2D1/2的IC₅₀为（2.16±0.22）μmol/L。结果表明,苯环喹溴铵对CYP2D1/2可能有抑制作用,对CYP450酶的其他亚型无抑制作用。     

探针药物法评价苦碟子注射液对大鼠肝微粒体CYP3A4的体外抑制作用

目的观察苦碟子注射液对大鼠肝微粒体CYP3A4的体外抑制作用与CYP3A4酶底物合用药时可能产生的相互作用。方法采用SD大鼠肝微粒体体外孵育法,设阴性对照组、阳性抑制剂对照组和苦碟子注射液组。利用高效液相色谱法测定底物睾酮的减少量,计算得到IC50,评价苦碟子注射液对大鼠肝微粒体CYP3A4酶的抑制活性,以酮康唑为阳性对照药。结果在体外人肝微粒体孵育体系中,当Tris-HCl缓冲液浓度为0.1mol/L,p H为7.4,温度为37℃时,睾酮最佳反应底物浓度为100μmol/L,最佳孵育时间为40min,最佳蛋白浓度为0.5mg/m L。阳性抑制剂酮康唑的IC50值为0.0707μmol/L,表明孵育体系满足CYP3A4酶抑制活性的评价要求。9个不同体积终浓度(0、0.01%、0.10%、0.20%、0.50%、1.00%、2.00%、5.00%、10.00%)的苦碟子注射液对CYP3A4酶的相对抑制率分别为0,2.94%、16.44%、22.70%、31.44%、37.47%、46.37%、51.74%和60.40%,半数抑制率IC50值为3.46%,高于其日用药量浓度。结论在体外正常剂量下,苦碟子注射液对人CYP3A4无明显抑制作用,可以与其底物联合用药。     

氢溴酸槟榔碱对人肝CYP450 酶的体外影响

目的 采用液质联用法结合特异性探针技术,研究氢溴酸槟榔碱（AH）对人肝微粒体（HLM） 中细胞色素P450（CYP450）亚型酶的体外影响。方法 将CYP1A2、2E1、3A4、2C9、2D6、2B6 的探针 底物分别在0 ～ 160μmol/L AH 的HLM 中温孵,高效液相法测定CYP1A2、2E1、3A4、2C9 的酶活性;高 效液相色谱- 串联质谱仪测定CYP2D6、2B6 的酶活性。结果 AH 对HLM 中CYP2D6、2B6、2E1、2C9 的酶活性有轻微抑制作用,且随AH 浓度的升高而增强。当AH 为160μmol/L 时,对CYP2D6、2B6、2E1、 2C9 酶活性的抑制率分别为36.2%、38.3%、35.0% 和35.4%。结论 槟榔嗜好者使用CYP1A2、2E1、3A4、 2C9、2D6、2B6 6 个CYP450 酶的底物药物时,其代谢相互作用的风险仍不可忽视。     

“Cocktail”体外探针法评价补骨脂素对人肝微粒体P450酶亚型活性的影响

[目的]利用Cocktail体外探针法,测定补骨脂有效成分补骨脂素对人肝微粒体多种P450酶亚型活性的影响,为补骨脂临床联合用药安全提供参考。[方法]建立液质联用方法,同时测定人肝微粒体P450酶中各探针代谢产物6α-OH紫杉醇、α-OH咪达唑仑、4-OH甲苯磺丁脲、去甲基右美沙芬、7-OH香豆素、对乙酰氨基酚和6-OH氯唑沙宗的含量。通过Cocktail体外探针实验中补骨脂素对人肝微粒体P450酶各亚型的影响,证明补骨脂对人体肝脏的代谢有影响作用。[结果]所建立的液质联用方法精密可靠,符合生物样品测定要求,可用于人肝微粒体中各P450酶探针的代谢产物的定量分析。与对照组相比,补骨脂素组各底物的转化率均下降,其中香豆素的转化率下降最为显著,补骨脂素对其转化的抑制率为95.84%,而紫杉醇的转化的抑制最不明显,仅为10.39%。补骨脂素对其他几种底物的转化抑制率均在82%～91%之间。[结论]补骨脂素对人肝微粒体的CYP1A2、2A6、2C8、2C9、2D6、2E1和3A4亚型均有抑制,其中对CYP2A6、1A2和2D6 3种亚型的影响较为显著,表明补骨脂素对人肝微粒体P450酶不同亚型影响差异显著,长期给药补骨脂应关注药物联合用药安全。     

银杏叶提取物诱导大鼠肝脏细胞色素P450酶蛋白的表达

[目的]研究银杏叶提取物对大鼠肝脏细胞色素P450酶CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A1蛋白表达的影响.[方法]银杏叶提取物10mg/kg和100mg/kg两个剂量,大鼠经灌胃处理10 d后,取出肝脏,称重,制备肝微粒体,以未经处理者为对照组,测定CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A1的蛋白表达.[结果]CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A1的蛋白表达在给药后比对照组显著升高,且存在明显的剂量依赖性.[结论]银杏叶提取物能显著诱导大鼠CYP1A1、CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A1的蛋白表达水平,故有可能影响与之同时服用的药物的疗效.     

雷诺嗪对大鼠肝微粒体蛋白质及细胞色素P450的影响

目的 研究雷诺嗪对大鼠肝重、肝微粒体蛋白质及细胞色素P450含量的影响.方法 将大鼠分成空白对照组和雷诺嗪组各8只,雷诺嗪组连续给予雷诺嗪为50 mg·kg-1·d-1,连续灌胃给药7 d后,测定大鼠的肝重、肝微粒体蛋白质及细胞色素P450含量,氨基比林-N-脱甲基酶、红霉素脱甲基转移酶和7-乙氧基-3-异吩噁唑酮脱烃酶的活性.结果 雷诺嗪灌胃7 d后,大鼠肝重、肝微粒体蛋白含量与对照组比较差异无显著性;雷诺嗪组肝微粒体细胞色素P450含量与对照组比较明显减少(P＜0.01).雷诺嗪对大鼠肝微粒体中红霉素脱甲基酶和7-乙氧基-3-异吩噁唑酮脱烃酶的活性基本无影响,对氨基比林-N-脱甲基酶有明显的抑制作用(P＜0.05).结论 雷诺嗪可能引起肝药酶对某些药物代谢的改变.     

089 银杏提取物EGb 761对大鼠肝细胞色素P450及对大鼠和人类固醇代谢和排泄的影响

一些对大鼠的体内、体外试验显示，服用银杏提取物可能影响肝的异生物体代谢和引起药物相互作用，而在人体试验未获得该提取物能调节细胞色素P450（CYP450）酶活性的证据。     

氯胺酮多次给药对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶的诱导作用

目的考察氯胺酮对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶活性的影响。方法以10mg.kg-1.d-1氯胺酮灌胃给予大鼠,连续给药10d。在第11d处死大鼠,以钙离子沉淀法制备肝微粒体。采用Omura和Sato方法测定细胞色素P450含量,采用7-戊氧基试卤灵-O-去烷基反应测定细胞色素P450_2B酶的活性。结果给药组和对照组细胞色素P450的总含量分别是（0.679±0.216）nmol·mg-1和（0.398±0.109）nmol·mg-1,细胞色素P450_2B酶的活性分别是（13.40±3.15）pmol·min-1.mg-1和（7.04±2.09）pmol·min-1.mg-1。结论氯胺酮能够增加大鼠肝微粒中细胞色素P450含量,并能显著诱导细胞色素P450_2B酶的活性。     

葡萄柚汁中的香柠檬亭对辛伐他汀在大鼠肝微粒体中代谢的抑制作用

作者研究了从银杏中提取的29种成分体外对人肝微粒体5种主要细胞色素P450（CYP）同工酶CYPlA2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A活性的抑制作用。结果显示，三萜内酯类化合物银杏内酯A、B、C、J和白果内酯以及黄酮醇苷类成分对5种CYP同工酶活性仅有微弱的或无抑制作用；黄酮醇苷元山柰酚、槲皮素、芹菜苷元、4一羟基-甲基芹菜苷元、     

抗人肝微粒体蛋白单克隆抗体细胞系的建立及鉴定

目的 初步建立抗人肝微粒体蛋白单克隆抗体规模化制备技术平台,为制备抗人细胞色素P450(CYP450)亚型蛋白的单克隆抗体奠定基础.方法 按常规方法进行细胞融合,以酶联免疫吸附测定法(ELISA)筛选杂交瘤,以ELISA、免疫组化(HI)、免疫印迹(Western Blot)、免疫沉淀(IP)对单克隆抗体加以鉴定.结果 进行6次融合,共筛出216株杂交瘤,其分泌抗体类型为IgG1、IgG2a、IgG2b、及IgM.免疫组化(IH)图片上,人肝细胞浆内均可见阳性颗粒.免疫沉淀(IP)和免疫印迹(Western Blot)结果显示,所制备抗体与人肝微粒体蛋白有特异性结合.结论 筛选制备的单克隆抗体杂交瘤能分泌抗人肝微粒体蛋白单克隆抗体,并且有较强特异性,为下一步研究提供了基础与技术平台.     

细胞色素P450酶系统在中医药研究中的应用

细胞色素P450发现于50年代,30多年来取得很大进展。在药物代谢、毒理学、肿瘤生化等的研究中,都涉及到细胞色素P450及其同功酶的作用。     

注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响

目的 研究注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶系CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响。方法 将SD大鼠分成盐酸头孢他美给药组和生理盐水空白组,每组6只,雌雄各半,给药组尾静脉注射盐酸头孢他美50 mg/(kg·d),连续给药7 d,每天2次。HPLC法同时测定CYP450的3种同工酶特异性探针底物在SD大鼠肝微粒体内代谢产物生成量和原型探针底物降解量,判断酶亚型活性变化。分析柱Diamonsil C₁₈ (150 mm×4.6 mm,5 μm),流速1.0 mL/min。CYP1A2代谢样品测定条件为甲醇(0.1%甲酸)(A)-水(0.1%甲酸)(B),0~5 min: 18%A,5~10 min: 18%~60%A,10~15 min: 60%A,检测波长为247 nm;CYP3A4代谢样品测定条件为甲醇(A)-水(0.02%甲酸)(B),0~11 min: 40%~60%A,检测波长为223 nm;CYP2E1代谢样品测定条件为甲醇(A)-水(B),0~10 min: 37%~75%A,检测波长为287 nm。结果 探针底物及其代谢产物在测定浓度范围内线性关系良好(r≥0.999 7),精密度RSD<6％(n=5),提取回收率83.2%～97.5%。SD大鼠连续注射给予盐酸头孢他美后,CYP3A4的活性与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),可能存在诱导作用;CYP1A2和CYP2E1的活性与对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05)。结论 静注给予盐酸头孢他美能诱导SD大鼠肝微粒体CYP3A4,对CYP1A2和CYP2E1没有诱导或抑制作用。提示经CYP3A4 代谢的药物在临床上与注射用盐酸头孢他美合用时,可能存在潜在药物-药物相互作用。     

延胡索乙素对映体对小鼠CYP450酶诱导和抑制作用研究

目的:考察延胡索乙素(tetrahydropalmatine,THP)对映体对小鼠肝脏主要CYP450酶的体外抑制及体内诱导作用,从而预测其在临床上可能发生的代谢性药物相互作用,为临床合理用药提供科学依据。方法:以探针底物法,考察左旋延胡索乙素[(-)-tetrahydropalmatine,(-)-THP]和右旋延胡索乙素[(+)-tetrahydropalmatine,(+)-THP]体外对小鼠肝微粒体主要Ⅰ相代谢酶CYP1A2、CYP2C、CYP2D22、CYP2E1、CYP3A11活性的影响;采用微粒体体外孵育鸡尾酒法(cocktail法),考察小鼠经高、低剂量(-)-THP和(+)-THP(240 mg/kg和60 mg/kg)连续灌胃7 d后,其肝微粒体中主要I相代谢酶活性的变化,以评价(-)-THP和(+)-THP对小鼠肝微粒体主要CYP450酶是否具诱导作用。结果:(-)-THP和(+)-THP体外对小鼠肝微粒体主要的CYP 450 I相代谢酶的抑制作用均不强,(+)-THP对CYP2C抑制的IC50为43.89μmol/L,两者对本研究考察的其它CYP亚型的IC50均大于100μmol/L;...     

人体CYP450孤儿酶功能特性的研究进展

近年来,人体中一些所谓的\     

母源性铅接触对子代习肝微粒体药酶活性的影响

目的：观察给母鼠孕期及哺乳期饮用不同剂量的铅水后，其子代鼠肝微粒体药酶活性的变化。结果：给母鼠饮用小剂量铅水（５００μｇ／Ｌ，超过ＷＨＯ规定的饮用水标准５倍），其子代４周龄鼠肝铅含量明显增加，氨基经林脱甲基酶（ＡＭＤ）、谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）活性明显降低，Ｐ４５０含量及细胞色素Ｃ还原酶（ＮＡＤＰＨ－Ｃ）、苯胺羟化酶（ＡＮＨ）无明显变化，子代８周龄鼠（即铅负荷排除４周后）与正常子代鼠相比各药