毒力相关基因芯片分析感染单核细胞的贝氏柯克斯体毒力相关基因表达

目的 建立贝氏柯克斯体感染单核-巨噬细胞的细胞模型,利用建立的贝氏柯克斯体毒力相关基因芯片分析感染不同时期细菌的转录变化,尝试在分子水平上阐述感染早期贝氏柯克斯体的致病机制. 方法 选择贝氏柯克斯体九里株的166个毒力相关基因进行PCR扩增,制备贝氏柯克斯体毒力相关基因芯片.宿主细胞采用单核-巨噬细胞THP-1,用贝氏柯克斯体九里株感染细胞,在感染后的各时间点提取RNA,逆转录成cDNA,时间零点样品设定为参照组.采用双色荧光标记,待测DNA(即各感染后的各时间点得到cDNA)用Cy5标记,参照基因组DNA用Cy3标记.芯片杂交后,采用软件GenePixPro4.1,辅助以软件Excel,进行图片处理和数据分析. 结果 芯片分析发现贝氏柯克斯体16个基因在感染单核细胞的24h内得到显著表达. 结论 感染单核细胞得到显著表达的贝氏柯克斯体毒力相关基因与细胞内入侵、削弱吞噬细胞内杀菌抑菌作用、适应吞噬体/吞噬溶酶体内生存环境、增强菌体复制有关.     

类风湿关节炎滑膜巨噬细胞基因芯片分析

目的: 寻找并分析类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）的关键基因,从而更好地理解RA的潜在发病机制。方法: 采用表达谱的综合分析方法鉴定RA滑膜液巨噬细胞中差异表达基因（differential expression genes,DEGs）。利用功能注释、蛋白蛋白相互作用(protein protein interaction,PPI)网络构建以及寻找核心基因,探讨DEGs在RA中的潜在生物学作用。在GSE17755数据集中对鉴定的DEGs在RA外周血中的mRNA表达水平进行验证。结果： 与对照组相比,RA患者滑膜液巨噬细胞中共找出489个DEGs,其中上调基因359个,下调基因130个。DEGs在炎症反应调节、趋化因子受体结合、肿瘤坏死因子信号通路等方面均有较显著的富集。STAT1、CXCL10、FPR2、ITGAM、PPBP、IRF7、CCL5、OASL、OAS3、IRF1是DEGs的PPI网络中的核心基因。在GSE17755数据集中检测除FPR2之外的9个核心基因的mRNA表达情况,结果表明,与正常人相比,RA患者外周血细胞中STAT1、PPBP、OASL的表达水平明显上调,ITGAM、IRF7、CCL5、IRF1有下调的趋势。结论： STAT1与OASL等基因在RA疾病中可能发挥重要作用。     

苦参碱对K562细胞骨架的作用观察

目的：从细胞骨架方面进一步探索苦参碱对人白血病K562细胞株的作用机制。方法：采用微管吮吸技术和基因芯片技术分析苦参碱处理前后K562细胞粘弹系数和细胞骨架蛋白基因表达的改变。结果：0.1mg/ml苦参碱作用K562细胞24h后粘弹系数下降，细胞骨架类基因prefoldin 与ezrin 的mRNA表达增强。结论：苦参碱能够导致K562细胞的细胞骨架发生变化。     

单核巨噬细胞与动脉粥样硬化关系研究进展

动脉粥样硬化性疾病是一类严重威胁人类健康的疾病,具有致残率和致死率高的特点.研究显示单核巨噬细胞在动脉粥样硬化的发生发展中起关键作用,该文拟对单核巨噬细胞对动脉粥样斑块发生发展的作用机制进行综述.     

巨噬细胞内毒素耐受时细胞因子的基因表达谱变化及其转录调节机制

机体摄人内毒素可模拟革兰阴性菌感染的许多病理生理改变，如发热、弥散性血管内凝集、低血糖、休克甚至死亡。现已证明人、动物和体外培养的细胞均具有内毒素耐受反应。临床上失血、创伤、外科大手术患者的单核／巨噬细胞亦表现为对脂多糖的低反应能力，并与机体的免疫抑制状态有关。但是内毒素耐受的分子机制目前仍不完全清楚。我们利用首次基因芯片技术测定了脂多糖活     

细胞骨架调控大脑皮层神经元迁移机制的研究进展

在大脑皮层的发育过程中,神经元迁移是一个关键环节,主要分为放射状迁移和切向迁移两种类型.这两者都涉及前导突的形成以及细胞或胞核的移动等因素.在这些生物学过程中,微丝、微管和中间纤维三种细胞骨架发挥着至关重要的调控作用.其中,微丝由肌动蛋白单体聚合而成,可维持前导突的结构并确定迁移的方向;微管由α、β、γ三种微管蛋白聚合...     

Tuftsin对脾巨噬细胞、单核细胞表达HLA和B7-2的影响

本实验拟在国内首次化学合成Ｔｕｆｔｓｉｎ(Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ａｒｇ)的基础上 ,初步探讨其对单核细胞和巨噬细胞表达ＨＬＡ ＤＲ、ＨＬＡ ＡＢＣ和Ｂ7 2功能的影响。1　材料和方法　　Ｔｕｆｔｓｉｎ按Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ａｒｇ的结构由我校免疫学教研室在多肽合成仪上采用Ｆｍｏｃ保护固相法进行合成 ,合成Ｔｕｆｔｓｉｎ经毛细管电泳检测 ,纯度达 99.9% (详见文献 [1] )。取正常人新鲜血和切除人脾脏分离单核细胞和脾巨噬细胞 ,然后把细胞置于含 15 %小牛血清的 164 0培养液的 6孔培养板中 ,培养过夜后 ,洗去非粘附细胞 ,计数单…     

间充质干细胞调控单核细胞/巨噬细胞介导炎症反应的研究进展

间充质干细胞(MSCs)对机体炎症反应具有重要的调控作用,其主要调控途径是影响参与炎症反应的免疫细胞增殖、分化和炎性因子分泌。单核/巨噬细胞是参与体内炎症反应的主要功能细胞,而MSCs可以通过前列腺素E2、吲哚胺-2,3双加氧酶、转化生长因子β、白细胞介素10等多种中间途径来调控单核/巨噬细胞在炎症反应中的表型和作用,将促炎的M1型巨噬细胞转化为抑炎的M2型。MSCs在心肌梗死、急性肺损伤、皮肤切口愈合、肾损伤等多种疾病模型中发挥着重要作用,从而为MSCs治疗多种炎性及自身免疫性疾病提供理论基础。     

甲型流感病毒感染后粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对M1样气道单核细胞/巨噬细胞极化的影响

目的探究甲型流行性感冒（流感）病毒感染后粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）对M1样气道单核细胞巨噬细胞极化的影响。方法选取雄性NC/Nga小鼠（8周龄）60只,随机分成甲型流感病毒感染组（对照组,n=30）和GM-CSF过表达组（过表达组,n=30）。评估2组甲型流感感染的发病率和病死率,测定诱导GM-CSF的过表达及纯化对小鼠呼吸力学参数和支气管肺泡灌洗蛋白质（BAL）的影响;观察巨噬细胞的单核细胞分离、分化和极化;利用PCR法测定M1样气道单核/巨噬细胞极化标记基因的表达。结果过表达组的发病率低于对照组（P<0.05）;过表达组的病死率低于对照组（P<0.05）。对照组的呼吸力学参数<过表达组（P<0.05）;对照组的压力容积（PV）曲线的曲率<过表达组（P<0.05）;对照组呼吸系统总阻力和组织或外围气道阻力>过表达组（P<0.05）。过表达组细胞因子CCL17、CXCL9和MMP12的BAL蛋白表达水平高于对照组（P<0.05）。对照组的组织中CD11b+标记气道单核细胞/巨噬细胞极化高于过表达组（P<0.05）。提示正常组织中巨噬细胞以M2型为主,减少炎症反应。对照组中巨噬细胞M1样mRNA水平较高,其中TNF-α、MCP-1、IL-6 mRNA表达水平高于过表达组（P<0.05）。结论 GM-CSF过表达改善了甲型流感病毒感染对肺力学的影响,抑制M1样气道单核细胞/巨噬细胞极化则提示极化以M2样为主,减少炎症反应。     

巨噬细胞调理液对视网膜色素上皮细胞合成单核细胞趋化蛋白-1的作用

目的　评价巨噬细胞调理液 ( MCM)对视网膜色素上皮 ( RPE)细胞合成单核细胞趋化蛋白 - 1( MCP- 1)的作用 .方法　在培养的人 RPE细胞的培养液中加入 2 0 0 m L· L- 1培养人巨噬细胞调理液 ( MCM) ,培养 2 ,4 ,8,16,2 4和 4 8h后 ,对培养的细胞进行免疫组化和原位杂交 ,用 Western blot检测培养的上清液中 MCP- 1的含量 .同时在培养液中加入地塞米松 ( 10 - 8,10 - 7和 10 - 6 mol· L- 1 )和道诺霉素 ( 2 ,2 0和2 0 0 mg· L- 1 )重复上述实验 ,观察在此条件下 MCM对MCP- 1合成的作用 .结果　 2 0 0 m L· L- 1 MCM培养条件下RPE细胞 2 h时已检测出分泌的 MCP- 1并在 16h达到较高水平 .同时原位杂交和免疫组化在细胞中检测到 MCP- 1的表达 .加入地塞米松 ( P<0 .0 1)和道诺霉素 ( P<0 .0 5 )后 ,MCP- 1的分泌水平明显降低 ,其中地塞米松对 MCP- 1合成的抑制作用大于道诺霉素 .结论　 MCM刺激 RPE细胞产生MCP- 1,而 MCP- 1对巨噬细胞和淋巴细胞有较强的趋化作用 ,这种循环相互作用的过程对增生性玻璃体视网膜病变的发生可能有重要的作用 .在视网膜脱离后尽早使用地塞米松可能对抑制增殖性玻璃体视网膜病变有作用 .     

急性心肌梗死相关基因的生物信息学分析

目的从基因水平揭示心肌梗死的发病机制,为心肌梗死的基础研究和临床治疗提供新思路。方法从基因芯片公共数据库GEO（geneexpressionomnibus,GEO）中下载心肌梗死相关基因芯片数据,利用GENE-E进行差异基因分析,筛选出在心肌梗死患者中具有的差异表达基因,采用Panther、String等在线分析软件对差异表达基因进行生物信息学分析。结果在200个差异表达基因所编码的蛋白中,有168个存在蛋白与蛋白的相互作用关系;其生物学通路主要涉及细胞凋亡通路、表皮生长因子受体信号通路等。结论通过生物信息学分析心肌梗死相关基因芯片数据,提示心肌梗死发病是多种基因作用的结果,EPHB1,GRM6,CD2BP2在心肌梗死患者外周血中高表达,对相关基因的进一步分析有利于揭示心肌梗死的发病机制,从而为心肌梗死患者的早期筛查提供新的分子标志物。     

高通量基因芯片初步筛选ITP脾和正常脾巨噬细胞的差异表达基因

目的研究免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾和正常脾巨噬细胞的差异表达基因。方法提取9例ITP患者及9例正常人脾巨噬细胞的总RNA,反转录制备含荧光分子Cy5标记的cDNA探针,与含有30968点cDNA的表达谱芯片杂交后扫描荧光强度,筛选出差异表达的基因并进行分析。结果基因芯片共筛选出1545个差异表达基因,其中上调基因718个,下调基因827个。差异表达基因涉及免疫反应、细胞黏附及受体调节、细胞信号转导、细胞骨架和运动代谢、细胞凋亡、酶调活性等方面。差异表达基因生物路径涉及Toll样受体信号通路,Fcγ受体介导吞噬通路,促分裂原活化蛋白激酶信号通路、细胞内吞通路等。结论基因芯片筛选ITP患者脾巨噬细胞的差异表达基因是有效的。差异表达基因可能为ITP发病机制的研究提供新证据和治疗靶标。     

高密度脂蛋白和载脂蛋白A I促进单核细胞源性巨噬细胞产生前列腺素E2

前列腺素E2（PGE2）是巨噬细胞产生的二十烷酸代谢的主要产物之一。为探讨高密度脂蛋白（HDL）和载脂蛋白AⅠ(apoAⅠ)抗动脉硬化的作用机制，观察了二者对单核细胞源性巨噬细胞产生PGE2的影响。培养的人外周血单核细胞源性巨噬细胞先经过脂质负载，再分别与HDL3和apoAⅠ孵育；利用酶联免疫测定法检测细胞物上清液中的PEG2含量。结果显示：孵育24h后HDL3组细胞合成与分泌的PGE2是对照组的370％，apoAⅠ也增加巨噬细胞PGE2的产生。HDL3的作用明显大于apoAⅠ，且呈时间依赖性。表明HDL3和无脂质apoAⅠ都可以促进巨噬细胞产生PGE2，这可能参与HDL和apoAⅠ对血管的保护作用。     

利用基因表达谱芯片筛选卵巢癌相关差异表达基因的研究

目的:探讨VEGF、HE4、YKL-40、OPN、BRCA1基因在卵巢癌发生发展中的作用.方法:采用cDNA芯片技术分别检测13例卵巢癌和5例正常卵巢组织中上述基因cDNA表达谱差异.结果:VEGF、HE4、YKL-40、OPN基因在卵巢癌组织中表达上调;BRCA1基因在卵巢癌组织中表达下调.结论:上述基因与卵巢癌发生及发展关系密切.CDNA基因芯片技术对于探讨卵巢癌分子机制,寻找卵巢癌分子标志物具有重要意义.     

姜黄素对肿瘤相关巨噬细胞分泌细胞因子基因表达的影响

目的：研究姜黄素对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞（Cal27细胞）上清液诱导的肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）分泌细胞因子基因表达的影响,阐明姜黄素抗OSCC的作用机制。方法：将Raw264.7细胞随机分为对照组及不同浓度（1.25、2.50、5.00、10.00、20.00和40.00μmol·L^-1）姜黄素组,各组细胞加入Cal27细胞上清液共同孵育48 h,CCK-8法检测细胞活性。将Raw264.7细胞随机分为对照组及不同浓度（5、10和20μmol· L^-1）姜黄素组,各组细胞加入Cal27细胞上清液共同孵育36和48 h后,采用Real-time PCR法检测各组细胞中白细胞介素12（IL-12）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素10（IL-10）mRNA表达水平;Cal27细胞上清液孵育Raw264.7细胞48 h后,姜黄素组加入不同浓度（5、10和20μmol·L^-1）姜黄素干预48 h,采用Real-time PCR法检测各组细胞中IL-12、iNOS、TNF-α、IL-10和精氨酸酶1（Arg-1）mRNA表达水平。结果：与对照组比较,40 μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞活性明显降低（P<0.01）。不同浓度姜黄素与Cal27细胞上清液共同孵育Raw264.7细胞36 h,与对照组比较,20 μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-12 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,10和20μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中iNOS和TNF-α mRNA表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,20μmol·L^-1组Raw264.7细胞中IL-10 mRNA表达水平降低（P<0.01）;不同浓度姜黄素与Cal27细胞上清液共同孵育Raw264.7细胞48 h,与对照组比较,5和20 μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-12 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,5和20μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中iNOS、TNF-α和IL-10 mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）。Cal27细胞上清液孵育Raw264.7细胞48 h后,采用不同浓度姜黄素进行干预,与对照组比较,10和20 μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-12 mRNA表达水平升高（P<0.01）,不同浓度姜黄素组Raw264.7细胞中iNOS、TNF-α和Arg-1 mRNA表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,20μmol·L^-1姜黄素组Raw264.7细胞中IL-10 mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）。结论：姜黄素可以在诱导TAMs的不同阶段调节TAMs分泌细胞因子IL-12、iNOS、TNF-α、IL-10和Arg-1 mRNA表达水平。     

巨噬细胞膜变形性与细胞骨架微丝关系的研究

以巨噬细胞的圆形因子和面积作为细胞膜变形性指标,研究细胞膜变形性与膜下微丝的关系。结果表明,ConA能使细胞膜变形性增大,同时加入细胞松弛素B则膜变形性下降。本实验将图像分析技术和多元统计软件包结合,为定量研究活细胞行为的一个成功尝试。     

系膜增生性肾炎中单核细胞趋化蛋白-1的表达和单核巨噬细胞的浸润

目的观察在系膜增生性肾炎(MsPGN)中,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达和单核/巨噬细胞(MФ)的浸润情况.方法采用免疫组织化学和原位杂交技术观察17例MsPGN患者肾活检组织.结果①轻度MsPGN中,肾小球和肾小管间质中有少量Mφ浸润、MCP-1无明显表达(P＞0.05);②中度MsPGN中,肾小球、肾小管-间质中的Mφ浸润数、MCP-1表达量显著增高(P＜0.01).肾小球MCP-1+细胞数与肾小球内MФ数呈正相关(r=0.90,P＜0.01);MCP-1+小管数与小管间质内MФ数亦呈正相关(r=0.86,P＜0.01).结论①MФ参与中度MsPGN中肾小球和肾间质小管的炎症病变;②肾小球和肾小管间质中浸润的MФ可能受MCP-1趋化作用的影响.