臭牡丹含药血清对人肝癌MHCC97-H细胞周期和凋亡的影响

目的观察臭牡丹含药血清对B淋巴细胞瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白表达及人肝癌MHCC97-H细胞周期、凋亡的影响,探讨其抗肝癌的可能机制。方法 15%臭牡丹高、中、低剂量含药血清作用于MHCC97-H细胞,显微镜下观察细胞形态的变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果不同剂量臭牡丹含药血清作用于细胞后,细胞形态发生稀疏杂乱、折光性增强等改变;流式细胞术结果显示,随含药血清浓度的增加,细胞的凋亡比例和G2/M期细胞比例亦相应增加,S期细胞比例降低,中、高剂量组与模型组比较,差异显著(P0.05);Western blot法结果显示不同浓度臭牡丹含药血清干预下各组Bax蛋白的表达水平上调,Bcl-2蛋白的表达降低(P0.01)。结论臭牡丹含药血清可以促进MHCC97-H肝癌细胞凋亡并阻止其细胞周期,机制可能与上调Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白,影响Bax/Bcl-2比值有关。     

茅苍术麸炒品对人肝癌SMMC-7721细胞的体内外抑制作用

目的探讨茅苍术麸炒品对人肝癌SMMC-7721细胞的体内外抑制作用。方法 (1)取对数生长期SMMC-7721细胞,给予0μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL和600μg/mL茅苍术麸炒品干预24 h后,检测SMMC-7721细胞的存活率;给予0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL茅苍术麸炒品干预24 h后,观察SMMC-7721细胞形态学,同时行Hoechst染色后于倒置荧光显微镜观察细胞凋亡情况,并应用流式细胞术检测细胞的凋亡率。(2)取24只裸鼠,皮下注射SMMC-7721细胞建立移植性肝癌模型。待肿瘤体积达到100 mm³时,将裸鼠随机分为模型组和茅苍术麸炒品低、中、高剂量组,每组6只。低、中、高剂量组裸鼠分别每天灌胃0.8 g/kg、1.6 g/kg、3.2 g/kg的茅苍术麸炒品,模型组灌胃等体积的磷酸缓冲盐溶液。14 d后剥取肿瘤组织称质量,计算抑瘤率,并检测肿瘤组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关性X蛋白(Bax)和Survivin的蛋白表达水平。...     

呼肠孤病毒导致白血病细胞凋亡的分子机制研究

  目的  初步探讨溶瘤病毒呼肠孤病毒3型(Reovirus 3,Reo3)致白血病HL60细胞凋亡的分子机制。  方法  用不同感染复数(MOI)的Reo3感染HL60细胞, 设未感染的HL60细胞为对照组,病毒感染48 h后,通过CCK8法检测不同MOI的病毒对HL60细胞活性的影响;利用流式细胞术检测HL60细胞凋亡率;Western blot检测HL60细胞中双链RNA依赖性蛋白激酶(PKR)活化水平和凋亡相关蛋白表达情况。用PKR特异性抑制剂2-氨基嘌呤(2-AP)作用HL60细胞24 h后,Reo3感染HL60细胞48 h,检测细胞凋亡水平和凋亡相关蛋白表达水平。  结果  MOI为1的Reo3作用于HL60细胞48 h后对细胞的抑制作用明显,细胞存活率为(24.333±3.396)%,细胞凋亡率为(29.96±2.06)%,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。Western blot结果显示:与对照组比较,感染Reo3的HL60细胞PKR、p-PKR、Bax、Caspase3、cleaved Caspase3蛋白表达均升高(P＜0.05),而Bcl-2蛋白表达水平下降(P＜0.05)。与未加抑制剂组比较,采用2-AP预处理的HL60细胞感染Reo3后细胞凋亡率下降(P＜0.05),PKR磷酸化水平和凋亡相关蛋白表达水平亦下降(P＜0.05)。  结论  溶瘤病毒Reo3作用HL60细胞可以引起PKR的活化,导致HL60细胞的凋亡。     

栀子抑制小鼠S_(180)和肝癌及促进小鼠肝癌细胞凋亡作用

目的探讨栀子提取物对荷瘤小鼠S_(180)肉瘤和肝癌的抑瘤作用及肿瘤凋亡相关基因蛋白bcl-2表达以及细胞凋亡的作用。方法分别采用荷瘤小鼠S_(180)肉瘤和肝癌模型,灌胃栀子提取物10g·(kg·d)~(-1),qd×10d;观察瘤重和肿瘤抑瘤率,以及用酶联免疫分析法检测肝癌小鼠血清肿瘤凋亡相关基因蛋白bcl-2含量及用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡情况。结果栀子提取物能抑制荷瘤小鼠S_(180)肉瘤和肝癌的增重(P＜0．01),抑瘤率分别为44．8%和61．0%;下调荷瘤小鼠肝癌模型血清肿瘤凋亡相关基因bcl-2表达(P＜0．01),小鼠肝癌细胞凋亡率为52．6%。结论栀子提取物对荷瘤小鼠S_(180)肉瘤和肝癌有抑制作用,抑瘤作用机制是下调肿瘤凋亡相关基因bcl-2表达,从而诱导小鼠肝癌细胞凋亡。     

虎蝎化积膏联合顺铂诱导肝癌H22细胞凋亡作用及其机制

目的探讨虎蝎化积膏联合顺铂诱导肝癌H22细胞凋亡作用及其机制。方法将SD大鼠随机分为空白对照组和虎蝎化积膏组,连续给药3 d后,腹主动脉取血,制备虎蝎化积膏含药血清。将对数期H22细胞随机分为5组:正常组、空白血清对照组、顺铂组、20%虎蝎化积膏含药血清组、20%虎蝎化积膏含药血清+顺铂组,采用CCK-8法检测虎蝎化积膏含药血清对H22细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色法观察各组H22细胞凋亡形态变化;高内涵细胞成像分析技术检测H22细胞内B细胞淋巴瘤2基因(Bcl-2)、凋亡相关蛋白细胞色素C(Cyt C)、B细胞淋巴瘤2关联蛋白X(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶9(caspase-9)蛋白表达变化。结果与空白血清对照组比较,虎蝎化积膏含药血清组H22细胞增殖呈剂量-时间依赖关系的抑制作用,20%虎蝎化积膏含药血清的作用效果最佳。与空白血清对照组和单一用药组比较,20%虎蝎化积膏含药血清+顺铂组H22细胞呈现不同程度的核染色质聚集、核固缩,呈现出更典型的细胞凋亡特征;H22细胞内Cyt C、Bax和caspase-9平均荧光强度值明显增加(P0.01、P0.05),蛋白表达明显增多;Bcl-2平均荧光强度值明显降低(P0.01、P0.05),蛋白表达显著减少。结论 20%虎蝎化积膏含药血清联合顺铂可明显抑制肝癌细胞H22增殖,诱导其凋亡,作用机制可能与细胞内Bax和Bcl-2蛋白表达比例失调,胞质中Cyt C分泌增多,促使caspase-9蛋白表达增加有关。     

慈菇消脂丸对NF-κB介导的非酒精性脂肪肝病大鼠肝细胞凋亡的干预作用

目的通过观察慈菇消脂丸对高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠肝细胞凋亡相关调控基因核转录因子κB(NF-κB)、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响,探讨解毒化痰法治疗NAFLD的作用机制。方法 60只SPF级健康雄性Wistar大鼠,随机分为6组:正常对照组,模型组,慈菇消脂丸高、中、低剂量组,盐酸吡格列酮组,每组10只。采用高脂饮食喂饲大鼠建立NAFLD模型后,连续药物治疗6周。给药结束后,处死全部动物,取肝脏和血清。全自动生化分析仪检测各组大鼠肝功、血脂;HE染色观察肝脏的组织形态学特点;透射电子显微镜观察肝细胞的超微结构;Western Blot技术检测肝组织NF-κB、Bcl-2、Bax的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平升高(P0.01);肝组织呈中重度脂肪变性并同时伴有肝细胞凋亡;肝组织中NF-κB、Bax蛋白表达增强(P0.01),Bcl-2蛋白表达减低(P0.01),Bcl-2/Bax比值降低(P0.01)。与模型组比较,慈菇消脂丸各剂量组大鼠血清ALT、AST、TG、TC水平降低(P0.01);肝组织NF-κB、Bax蛋白表达减低(P0.01),Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax比值升高(P0.05)。与盐酸吡格列酮组比较,慈菇消脂丸高剂量下调NF-κB蛋白、上调Bcl-2蛋白表达的作用更显著(P0.01)。结论慈菇消脂丸能够明显改善NAFLD大鼠肝功及血脂;上调Bcl-2蛋白表达,降低NF-κB、Bax蛋白表达,使Bcl-2/Bax比值升高,从而抑制肝细胞凋亡,起到防治NAFLD的作用。     

14-3-3蛋白与细胞凋亡

14 3 3蛋白是Moore和Pere于 196 7年发现的 ,当时他们认为 14 3 3蛋白是脑所特有的一种酸性蛋白 ,并依据其在DEAE 纤维素色谱上的组分数以及在淀粉凝胶电泳中的迁移位置而命名为 14 3 3蛋白。但随后的大量研究表明14 3 3蛋白在所有的真核细胞中均有表达 ,是一个调节蛋白家族 ,能与许多功能不同的信号蛋白结合 ,例如蛋白激酶Raf 1、KSR 1、Bcr、Ca2 +/钙调蛋白激酶、PKC、蛋白磷酸酶cdc2 5c、促凋亡蛋白BAD、抗凋亡蛋白A2 0 、跨膜蛋白受体GA等。这就说明 14 3 3蛋白在信号传导、细胞周期调控、细胞凋亡等过程中具有极其重要的…     

三氧化二砷对恶性黑素瘤A375细胞NF-κB、C-IAP2及caspase-3表达的影响

目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）在诱导人黑素瘤A375细胞凋亡中,对核因子-κB（NF-κB）、细胞凋亡抑制蛋白2（C-IAP2）以及半胱氨酸-天冬氨酸特异性蛋白酶-3（caspase-3）表达的影响。方法：Western blot法检测A375细胞中NF-κB p65核蛋白的表达和caspase-3蛋白的活化,半定量RT-PCR法检测C-IAP2mRNA的表达。结果：2.5、5.0、10.0μmol/LAs2O3作用于A375细胞24h,NF-κB p65核蛋白表达比值分别为（39.60±7.76）%、（10.17±0.90）%和（4.43±0.91）%;caspase-3蛋白比值分别为（10.03±2.06）%、（23.43±3.28）%和（35.70±4.61）%;C-IAP2mRNA表达的比值为（66.78±15.46）%、（30.16±5.52）%和（6.46±4.54）%,上述各指标与相应对照组比较及组内两两比较差异均有统计学意义（P〈0.05~P〈0.01）,随着As2O3作用浓度的增加,caspase-3激活型蛋白增多,NF-κB p65核蛋白和C-IAP2mRNA表达下降。结论：As2O3能抑制NF-κB、C-IAP2基因的表达,活化caspase-3蛋白表达。推测NF-κB-C-IAP2-caspase-3通路可能是As2O3诱导A375细胞凋亡的途径之一。     

小鼠HSV-2阴道炎粘膜上皮细胞凋亡和NF-κB异常表达的关系

目的 探讨HSV-2在体内诱导细胞凋亡的效果、形态学特点、NF-κB蛋白的表达和TNF的促进凋亡作用。方法 用HSV-2333株感染小鼠阴道，光镜下进行原位观察，TUNEL末端标记染色显示凋亡的细胞，免疫组化技术检查NF-κB蛋白的表达。结果 感染后的第l天粘膜上皮内即出现大量的凋亡细胞，第3—6天凋亡细胞的数量及上皮内的分布范围达最高水平。凋亡细胞被TUNEL标记染成棕褐色，经免疫组化技术证实凋亡细胞有NF-κB蛋白的表达。结论 HSV-2333株阴道感染可同时诱导细胞坏死及凋亡，NF-κB蛋白的表达参与了细胞凋亡的发生，TNF可以促进HSV-2在体内诱导的细胞凋亡。细胞凋亡可能在限制病毒产生子代及限制感染区域扩展中起重要作用。     

瑞舒伐他汀对高同型半胱氨酸血症大鼠主动脉Bcl-2与Bax表达的影响

目的：观察瑞舒伐他汀对高同型半胱氨酸血症（hyperhomocysteinemia,Hhcy）Wistar大鼠主动脉组织B细胞淋巴瘤/白血病-2（B cell leukemia/lymphoma-2,Bcl-2）和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关蛋白X（Bcl-2-associated X protein,Bax）表达的影响。方法：应用ADVIA2400全自动生化仪检测正常对照组,Hhcy组和瑞舒伐他汀组大鼠的血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇和血浆同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）浓度;HE染色观察主动脉病理变化;应用免疫组化和实时荧光定量PCR检测主动脉组织Bcl-2、Bax表达。结果：瑞舒伐他汀组大鼠血浆Hcy浓度（10.47±0.07） μmol/L低于Hhcy组（85.38±0.2） μmol/L,差异具有统计学意义（P<0.05）;瑞舒伐他汀组大鼠主动脉损伤较Hhcy组减轻;免疫组化显示瑞舒伐他汀组大鼠主动脉Bcl-2蛋白表达比Hhcy组降低,Bax蛋白表达比Hhcy组升高,差异均具有统计学意义（P<0.05）;实时荧光定量PCR法显示瑞舒伐他汀组大鼠主动脉Bcl-2 mRNA表达较Hhcy组明显降低,而Bax mRNA表达却升高（P<0.05）。结论：瑞舒伐他汀可能通过降低血浆Hcy浓度及影响主动脉组织Bcl-2、Bax基因表达,从而延缓和改善Hhcy大鼠主动脉粥样硬化的进程及程度。     

车前子提取物对膜性肾病大鼠肾脏的保护作用及其机制

探讨车前子提取物（SPE）对膜性肾病大鼠肾脏的保护作用,并阐明其作用机制。     

疏肝清热健脾法对广泛性焦虑大鼠脑内bax、bcl-2表达的影响?

目的：研究疏肝清热健脾法对广泛性焦虑( GAD)大鼠脑内Papez环路区域的B细胞白血病/淋巴瘤-2(bcl-2)、B细胞白血病/淋巴瘤-2相关蛋白(bax)2种蛋白表达的影响。方法将40只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药治疗组和西药对照组4组,每组10只大鼠。模型组、治疗组、对照组采用不确定空瓶饮水刺激方法制备广泛性焦虑大鼠模型。治疗组和对照组分别以丹栀逍遥散(10.5 g/kg)和盐酸丁螺环酮(2 mg/kg)水溶液灌胃7 d,每天1次。模型组蒸馏水灌胃7 d。取脑组织,western blot法检测大鼠脑内海马和乳头体组织bax和bcl-2的含量。结果与正常组比较,模型组海马和乳头体组织的bax含量显著增加,差异有统计学意义( P <0.05或P <0．01),bcl-2的含量有较明显的下降,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,治疗组海马及乳头体组织的bax表达均有降低,差异有统计学意义( P<0.05或P<0.01), bcl-2的表达均有增加,差异有统计学意义( P<0.01)。结论以丹栀逍遥散为代表的疏肝清热健脾法能够降低GAD大鼠脑内海马和乳头体组织bax的水平,升高bcl-2的水平,降低bax/bcl-2值,干预和抑制Papez环路区域的细胞凋亡,从而改善焦虑症状。     

VAPB在肝癌中的表达与促增殖作用研究

目的:研究囊泡相关膜蛋白相关蛋白B(VAPB)在肝癌中的表达及其在肝癌细胞增殖与凋亡中的调控作用。方法:(1)分别用生物信息学分析与免疫组化实验,分析VAPB在肝癌癌组织与癌旁组织中的表达。(2)用实时荧光定量PCR(RT-PCR)与蛋白质印迹实验,检测肝癌细胞株与正常肝细胞株中VAPB的表达。(3)分别用MTS细胞活力实验与EdU细胞增殖实验,检测通过转染siRNA下调VAPB表达对肝癌细胞生长的影响。(4)用流式细胞仪检测通过转染siRNA下调VAPB对肝癌细胞凋亡的影响。结果:(1)与癌旁组织相比,VAPB在肝癌组织中的表达显著升高。(2)与正常肝细胞株相比,VAPB在4株肝癌细胞株中的表达均显著上调。(3)下调VAPB表达后,肝癌细胞的活力与增殖能力均被显著抑制。(4)下调VAPB表达诱导了肝癌细胞的凋亡。结论:肝癌组织与细胞中VAPB表达异常升高,VAPB可促进体外肝癌细胞的活力与增殖能力,同时抑制肝癌细胞的凋亡。     

NS398诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡及对bcl-2蛋白表达的影响

目的研究环加氧酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂NS398抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖及诱导其凋亡的效应和机制。方法MTT比色法观察NS398的细胞毒性作用及其浓度依赖性；透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化；琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA Ladder形成。流式细胞仪检测细胞凋亡率及与NS398作用时间的关系；Western blot测定bcl-2蛋白表达。结果不同浓度（0.1～100μmol／L）NS398均可使细胞生长受到抑制；电镜显示细胞呈典型的凋亡形态学变化；琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞DNA Ladder形成；流式细胞术检测证实细胞凋亡率与NS398作用时间呈明显相关。Western blot检测显示随着NS398作用时间延长，可不同程度地降低bcl-2蛋白表达。结论NS398能抑制人MG-63细胞增殖，诱导细胞凋亡，其作用机制可能与调控bcl-2蛋白表达有关。     

Bax抑制因子1过表达对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨过表达B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)抑制因子1(BI-1)对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡的影响,并阐明其作用机制.方法:60只大鼠随机分为假手术组、模型组、空载腺病毒(Ad-NC)组和BI-1腺病毒(Ad-BI-1)组,每组15只.除假手术组外,其他各组大鼠均采用冠状动脉左前降支结...     

菟丝子总黄酮对小鼠睾丸间质细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3的影响

背景 研究表明睾丸间质细胞的凋亡是造成男性不育的重要因素之一,而菟丝子总黄酮(total flavonoids from semen cuscutae,TFSC)具有抗凋亡、抗炎等药理活性,并在治疗男性不育方面有一定疗效.目的 观察菟丝子总黄酮对小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)凋亡的影响并探究其可能作用机制.方法 体外培...     

栀子抑制小鼠S180和肝癌及促进小鼠肝癌细胞凋亡作用

目的 探讨栀子提取物对荷瘤小鼠S180肉瘤和肝癌的抑瘤作用及肿瘤凋亡相关基因蛋白bcl-2表达以及细胞凋亡的作用.方法 分别采用荷瘤小鼠S180肉瘤和肝癌模型,灌胃栀子提取物10g·(kg·d)-1,qd×10d;观察瘤重和肿瘤抑瘤率,以及用酶联免疫分析法检测肝癌小鼠血清肿瘤凋亡相关基因蛋白bcl-2含量及用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡情况.结果 栀子提取物能抑制荷瘤小鼠S180肉瘤和肝癌的增重(P＜0.01),抑瘤率分别为44.8%和61.0%;下调荷瘤小鼠肝癌模型血清肿瘤凋亡相关基因bcl-2表达(P＜0.01),小鼠肝癌细胞凋亡率为52.6%.结论 栀子提取物对荷瘤小鼠S180肉瘤和肝癌有抑制作用,抑瘤作用机制是下调肿瘤凋亡相关基因bcl-2表达,从而诱导小鼠肝癌细胞凋亡.