层流低切应力刺激对人脐静脉血管内皮细胞Toll样受体mRNA表达的影响

目的用RT-PCR和Northern杂交技术,评价层流低切应力刺激对人脐静脉血管内皮细胞Toll样受体(TLR-4)信号受体表达的影响。方法用未刺激和经42μN/cm2处理1 h的脐静脉血管内皮细胞提取总RNA,采用RT-PCR和Northern杂交技术观察切应力刺激1 h人脐静脉血管内皮细胞TLR-2和TLR-4 mRNA的表达情况。结果RT-PCR和Northern杂交均显示,层流低切应力刺激1 h后血管内皮细胞TLR-4表达增强,TLR-2几乎无变化。结论层流低切应力可引起人脐静脉内皮细胞TLR-4mRNA表达增加,提示炎症信号受体TLR-4可能介导层流切应力诱导的血管内皮细胞某些效应基因的表达。     

鳞癌COPD病人血管重建与TLR-4和NF-κB表达检测

目的探讨TOLL样受体4(TRL-4)和核因子-κB(NF-κB)在鳞癌慢性阻塞性肺疾病(COPD)病人血管重建中的作用。方法收集男性鳞癌手术病人40例,根据肺功能分为COPD组和对照组,各20例,取其手术切除肺叶无癌组织浸润的外周肺组织,行苏木精-伊红(HE)染色和MASSON三色法染色,镜下观察血管炎症程度并测定管壁面积占血管总面积百分比(WA%)、管壁厚度占血管直径百分比(WT%)及管壁胶原纤维的厚度;免疫组织化学染色法测定血管中TLR-4、NF-κB及增殖细胞核抗原(PCNA)的含量。结果 COPD组动脉炎症程度、WA%、WT%及胶原纤维厚度较对照组显著增加(t=-10.08～-5.74,P<0.01)。COPD组动脉TLR-4、NF-κB及PCNA表达量较对照组显著增加(t=-5.28、-10.00、-10.26,P<0.01)。COPD组动脉TLR-4与NF-κB、血管炎症程度、WA%、WT%、管壁胶原纤维厚度及PCNA水平呈正相关(r=0.731～0.840,P<0.01)。结论鳞癌COPD病人肺动脉存在明显炎症反应、血管肌化,而TLR-4、NF-κB的表达增加可能参与了血管重建。     

脐动脉波形异常伴妊高征患者胎盘血管内皮生长因子的表达及其意义

目的 :探讨胎儿脐动脉波形异常伴妊高征 ( PIH)与胎盘血管内皮生长因子 ( VEGF)表达水平的关系。方法 :采用彩色多普勒超声 ,对 5 0例妊娠晚期孕妇进行脐动脉搏动指数 ( PI)、阻力指数 ( RI)及收缩期末最大血流速度与舒张期最小血流速度比值 ( S/D)测定 ,根据脐动脉波形变化分为 4组 :脐动脉波形异常伴 PIH组 7例 ,脐动脉波形异常不伴 PIH组 1 0例 ,脐动脉波形正常伴PIH组 8例 ,脐动脉波形正常不伴 PIH组 2 5例。用蛋白免疫印迹技术测定 4组患者胎盘组织中VEGF的水平。用免疫组化法 ,用抗 F8因子抗体标记 4组孕妇胎盘中的血管密度。结果 :4组孕妇胎盘 VEGF积分吸光度值分别为 1 72 73± 2 0 74、31 0 2 7± 465 2、2 35 84± 1 780、41 90 3± 1 1 0 0 9。脐动脉波形异常伴 PIH组与脐动脉波形正常不伴 PIH组比较 ,差异有显著性 ( P<0 .0 1 )。结论 :胎盘的 VEGF表达下降使胎盘血管密度降低与脐动脉波形异常及妊高征的发生有关。     

Toll样受体-4在人肺腺上皮细胞、单核细胞和脐静脉血管内皮细胞的表达

目的　检测炎症信号Toll样受体 - 4 (TLR 4 )在人肺腺上皮细胞系 (SPC A 1)、单核吞噬细胞系 (THP 1)和脐静脉血管内皮细胞 (HUVECs)的表达情况。方法　设计人TLR 4PCR特异引物 ,从SPC A 1、THP 1和HUVECs提取总RNA ,采用一步法RT PCR和地高辛标记的Northern杂交技术检测TLR 4mRNA在三种细胞的表达 ;用免疫荧光细胞化学染色在蛋白质水平检测TLR 4在三种细胞的表达。结果　RT PCR、Northern杂交和免疫荧光细胞化学染色均显示 ,三种细胞均表达TLR 4受体。结论　本实验结果表明除单核吞噬细胞外 ,大血管内皮细胞和肺腺上皮细胞亦表达Toll受体基因 ,提示在炎症反应中Toll信号受体可能介导这些细胞效应分子基因转录激活的信号传导     

健心颗粒对血管内皮细胞KLF4表达的影响

目的观察健心颗粒对人脐静脉血管内皮细胞炎症损伤的干预作用。方法通过炎症因子TNF—α诱导人脐静脉内皮细胞建立内皮细胞损伤模型,随机分为正常组、健心颗粒组、TNF-α组、TNF-α加健心颗粒组,用RT—PCR、Western—Blot、免疫组化法检测脐静脉内皮细胞Kruppel因子4（KLF4）表达的变化。结果与正常组比较,TNF-α刺激后,KLF4表达水平明显升高;健心颗粒干预后,KLF4表达水平下降。结论健心颗粒能够抑制激活的人脐静脉血管内皮细胞中KLF4的表达。     

激光手术在阻断双胎输血综合征中供血胎儿脐动脉舒张末期血流缺如或倒置中的作用

目的:本研究是通过分析激光治疗后双胎输血综合征(TTTS)患者的胎盘体积和血管吻合情况,来探讨供血胎儿脐动脉舒张末期血流缺如或倒置(AREDV)的原因。研究设计:TTTS患者在孕16周和孕26周成功地进行了选择性交通支的激光光凝固(SLPCV)治疗,出生后两胎儿均存活而且多普勒和胎盘的资料完整,符合本研究。SLPCV前与术后24h分别用多普勒检测脐动脉(UA)。异常UA多普勒所见的定义为持续性AREDV。根据SLPCV前后UA多普勒结果分为以下4组:①正常-正常;②正常-异常;③异常-正常;④异常-异常。血管吻合的类型根据术中所见分类。个别胎盘块…     

炎症信号受体Toll基因在人肺腺上皮细胞和血管内皮细胞的表达

目的　研究炎症信号受体 Toll m RNA在人单核吞噬细胞系 (THP- 1)、脐静脉血管内皮细胞(UVECs)和肺腺上皮细胞系 (SPC- A- 1)的表达情况。方法　分别设计人 TL R2 和 TL R4两对特异引物 ,从 THP- 1、UVECs和 SPC- A- 1提取总 RNA,采用一步法 RT- PCR和地高辛标记的 Northern杂交技术检测 TL R2 和 TL R4在 3种细胞的表达。结果　 RT- PCR和 Northern杂交显示 ,3种细胞均表达 TL R4受体 ,但仅 THP- 1和人 U VECs表达 TL R2 受体。结论　本实验结果表明除单核吞噬细胞外 ,大血管内皮细胞和肺腺上皮细胞亦表达 Toll受体基因 ,提示在炎症反应中 Toll信号受体可能介导这些细胞效应分子基因转录激活的信号传导。     

Lipopolysaccharide upregulates the expression of Toll-like receptor 4 in human vascular endothelial cells

目的：探讨内皮细胞TLR2和TLR4的表达以及内毒素对其表达的影响。方法：按RNA提取试剂盒说明书提取内毒素作用后的ECV-304(人脐静脉内皮细胞株)和人脐静脉内皮细胞总RNA,运用逆转录PCR(RT-PCR)检测细胞TLR2和TLR4mRNA的表达。结果：人脐静脉内皮细胞和ECV304细胞株均能表达TLR2和TLR4mRNA,但是,TLR4的表达水平明显强于TLR2的表达,LPS能明显上调TLR4的表达,但对TLR2的表达无影响。结论：本研究提示TLR4能明显上调LPS作用的信号转导分子,在LPS对内皮细胞的激活效应中具有重要的作用;ECV-304是内皮细胞研究的良好的实验模型,可代替人脐静脉内皮细胞而较为广泛应用。     

炎症信号受体TLR-4基因的克隆及真核表达

为探讨TLR 4基因在真核细胞的表达情况 ,用RT PCR技术从人脐静脉血管内皮细胞总RNA扩增TLR 4全密码子cDNA序列。限制性内切酶HindⅢ和BamHⅠ双酶切真核表达质粒pcDNA3和TLR 4cDNA片段 ,构建重组质粒pcDNA3 TLR4。用Dosper阳离子转染试剂包裹质粒 ,转染人胚肾 2 93细胞 (HEK 2 93细胞 )。用免疫荧光细胞化学染色及流式细胞术分析TLR 4基因表达。结果 :从人脐静脉血管内皮细胞扩增出 2 72 6bp的TLR 4cDNA片段。经PCR、酶切及序列测定分析证实质粒 pcDNA3内插入了TLR 4cDNA片段 ,免疫荧光细胞化学染色和流式细胞术分析均检测到TLR 4基因在人胚肾 2 93细胞表达。本研究显示重组真核表达质粒 pcDNA3 TLR4在HEK 2 93细胞表达TLR 4蛋白 ,有利于进一步研究其相应配体和信号传导通路     

三维能量多普勒超声定量监测子痫前期胎盘血流灌注的临床价值

目的利用三维彩色能量多普勒超声成像(3D-CPA)结合其定量参数测定VOCAL功能,探讨3D-CPA对妊娠高血压综合征子痫前期患者胎盘内血流灌注显示情况、三维能量多普勒指数与二维彩色多普勒指数的相关性并评价其临床意义。方法采用GE公司Voluson 730三维超声成像系统的3D-CPA测量39例妊高征子痫前期及19例正常孕妇的胎儿胎盘的血管化指数(VI),血流指数(FI),血管化-血流指数(VFI),并与胎儿脐动脉S/D值、子宫动脉PI值以及胎儿大脑中动脉PI值比较分析。结果子痫前期患者胎儿胎盘的三维能量多普勒指数低于正常组且与脐动脉、子宫动脉、大脑中动脉血流指数相关。结论三维彩色能量多普勒超声成像(3D-CPA)技术是一项观察胎盘血流灌注的非常实用的方法。血管化指数(VI),血流指数(FI),血管化-血流指数(VFI)可直接反映子痫前期胎盘血流灌注情况,对了解胎盘功能及估计胎儿预后具有实际应用价值。     

miR205-3p靶向MDM2调控乳腺癌血管内皮细胞增殖的研究

目的分析miR205-3p通过靶向鼠双微体2基因（MDM2）调控乳腺癌血管内皮细胞增殖的作用机制，探讨乳腺癌临床治疗可行的分子靶点。方法采用乳腺癌细胞（MDA-MB-231）皮下移植瘤组织为试验样本，通过免疫荧光实验检测移植瘤组织中是否有人源性肿瘤血管内皮细胞的存在，利用血管内皮细胞纯化技术得到移植瘤中的血管内皮细胞（即乳腺癌血管内皮细胞）。采用显微镜下观察细胞形态、内皮细胞成管实验及吞噬实验，验证血管内皮细胞的形态及生物学特性。检测乳腺癌血管内皮细胞和人脐静脉内皮细胞的miR205-3p的表达是否有差异，采用生物信息学分析方法得到miR205-3p的靶基因。通过改变miR205-3p的表达，研究靶基因的蛋白表达水平的改变。采用体外增殖实验及体内成瘤实验观察miR205-3p对乳腺癌血管内皮细胞及乳腺癌移植瘤增殖能力的影响。结果乳腺癌血管内皮细胞具有内皮细胞功能。相比较人脐静脉内皮细胞，miR205-3p在乳腺癌血管内皮细胞中表达降低（P＜0.05）。利用生物信息学分析得到miR205-3p的靶基因为MDM2，提高miR205-3p的表达水平后可降低MDM2蛋白的表达（P＜0.05），并在体内及体外水平都可影响乳腺癌血管内皮细胞的增殖能力。结论miR205-3p的表达水平升高可有效降低MDM2的表达，抑制肿瘤血管内皮细胞的增殖，这为抗肿瘤血管生成作用的研究及靶向药物开发提供了新的思路。     

基因芯片分析稳定转染HBx基因的HepG2肝癌细胞对人脐静脉血管内皮细胞基因的差异表达

目的采用基因芯片技术筛选稳定转染HBx基因的HepG2肝癌细胞对人脐静脉血管内皮细胞的差异表达基因。方法①以人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为细胞模型,通过transwell共培养技术,分别将肝癌细胞HepG2及稳定转染HBx基因肝癌细胞HepG2(HepG2-X)与HUVEC共培养。②分别提取细胞总RNA,通过基因芯片技术筛选差异表达基因。结果有643条基因差异表达明显,其中UBR3、ATXN3等19条基因经HBx干预后表达量明显上升,FOLR1、HSPs、ZNF等624条明显下降。结论利用基因芯片技术可以筛选HBx参与的肝癌血管生成差异表达基因,为肝癌的诊治、预防提供一定的理论依据。     

炎症信号受体Toll基因在人肺腺上皮细胞和血管内皮细胞的表达

目的 研究炎症信号受体Toll mRNA在人单核吞噬细胞系（THP-1）、脐静脉血管内皮细胞（UVECs)和肺腺上皮细胞系（SPC-A-1）的表达情况。方法 分别设计人TLR2和TLR4两对特异引物,从THP-1、UVECs和SPC-A-1提取总RNA,采用一步法RT-PCR和地高辛标记的Northern杂交技术检测TLR2和TLR4在3种细胞的表达。结果 RT-PCR和Northern杂交显示,3种细胞均表达TLR4受体,但仅THP-1和人UVECs表达TLR2受体。结论 本实验结果表明除单核吞噬细胞外,大血管内皮细胞和肺腺上皮细胞亦表达Toll受体基因,提示在炎症反应中Toll信号受体可能介导这些细胞效应分子基因转录激活的信号传导。     

人类早孕期胎盘灌注与PlGF蛋白表达的关系

目的:本试验旨在研究人类早孕期血清胎盘生长因子(PlGF)水平和胎盘灌注之间的短暂性关系。研究设计:测定孕7～22周正常单胎孕妇,胎儿和胎盘附着处的脐动脉收缩期多普勒血流速度指数。应用酶联免疫吸附试验测定孕妇血清PlGF水平。结果:孕14周左右,母亲血清PlGF水平呈指数增长。通过脐动脉收缩期多普勒血流速度指数测定,胎盘灌注随孕周增加显著增加(P<0.0001)。PlGF表达水平与胎盘灌注增加密切相关(P<0.033)。结论:孕12～14周,血清PlGF的显著增加,与母亲/胎儿接触面灌注增加一致。PlGF表达和胎盘灌注的关系,提示PlGF可能对保证妊娠…     

RNA干扰人脐静脉血管内皮细胞组织因子基因表达

目的 利用RNA干扰技术沉默脐静脉内皮细胞中组织因子基因,实现瞬时沉默,为进行组织因子(TF)表达干扰的体内试验进行探索.方法 设立3种处理方法:①空白未干扰;②假干扰;③RNA干扰,每种实验方法各有3个样本.将合成的人组织因子基因(NM 001993)干扰片段shRNA序列,扩增、提取、测序正确后,转染至人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),分别对3种处理方法后TF基因沉默前后mRNA的表达采用Gel-Pro Analyzer软件进行区带灰度值扫描并分析、TF蛋白水平的表达采用免疫荧光检查进行观察.结果 shRNA转染到HUVECs后TFmRNA的表达处理间差异显著,F=27.657,P=0.001,未干扰和假干扰之间没有显著性差异(P=0.103,>0.05),未干扰和干扰之间(P=0.000,<0.05)有显著性差异.空白未干扰TF免疫荧光检测呈现"满天星"的表现,在阴性对照组荧光染色略有减少,在RNA干扰组TF蛋白表达明显减少.结论 HUVECs中TF的表达被所构建的pENTRTM/U6-TF-shRNA载体明显抑制,有可能成为未来出凝血及其它疾病的新的治疗手段之一.     

缺氧诱导因子-1αmRNA和蛋白在妊高征胎盘组织中表达定位

目的 :探讨缺氧诱导因子 1α( HIF- 1α)在妊高征胎盘组织细胞中的定位。方法 :收取 1 0例妊高征孕妇的胎盘组织 ,应用免疫组织化学方法 ,观察 HIF- 1α蛋白在妊高征胎盘组织细胞中的定位表达 ;应用原位杂交的方法 ,观察 HIF- 1α m RNA在妊高征胎盘组织细胞中的定位表达。结果 :在妊高征胎盘中 ,HIF- 1α蛋白主要表达在合体滋养细胞、血管内皮细胞的胞核和胞浆中 ;HIF- 1 α m RNA主要表达在合体滋养细胞和血管内皮细胞的胞浆中。结论 :HIF- 1 α在妊高征胎盘组织中表达主要集中在胎盘的合体滋养细胞和血管内皮细胞。妊高征胎盘中合体滋养细胞和血管内皮细胞表达 HIF- 1 α,可能与妊高征的发病及病理生理有关     

牛蒡根水提取物对高血压患者血清致伤血管内皮细胞TLR4、NF-κB表达的影响

目的：探究牛蒡根水提取物对高血压患者血清致伤血管内皮细胞Toll样受体-核转录因子(TLR-NF-κB)信号转导通路的影响。方法选取2014年12月至2016年1月于桂林医学院附属医院诊治的高血压病患者40例纳入高血压组,选择健康体检者40例纳入对照组。分别采用两组研究对象的血清干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)24 h,应用不同浓度的牛蒡根水提取物干预高血压患者血清诱导的HUVEC-C TLR4表达(24 h)及核转录因子(NF-κB)活化(2 h)。将细胞连续培养24 h后将细胞蛋白提取,并用免疫印迹(Western blot)技术检测细胞内TLR4蛋白及NF-κB抑制因子I-κBα蛋白的表达。结果①高血压组细胞提取蛋白中的TLR-4水平为(0.6701±0.09118),明显高于对照组(0.224±0.03097),I-κBα水平为(0.2915±0.05492),明显低于对照组的（0.5437±0.08997),差异均有统计学意义(P<0.05);②牛蒡根水提取物干预低剂量组、中剂量组及高剂量组细胞蛋白中的TLR-4表达水平分别为(0.2709±0.06139)、(0.4551±0.03512)、(0.4287±0.04589),均低于高血压组的(0.6701±0.09118),同时高于对照组的(0.224±0.03097);I-κBα表达水平为(0.4795±0.05743)、(0.36085±0.06085)、(0.31000±0.04910),高于高血压组的(0.2915±0.05492),同时低于对照组的(0.5437±0.08997),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论经TLR-NF-κB信号途径介导的免疫紊乱和炎症反应可能是高血压病血管内皮损伤的机制之一,牛蒡根水提取物可通过抑制细胞TLR-4、NF-κB的表达,从而抑制炎症因子的表达来达到保护血管内皮细胞的作用。     

shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因对乳腺癌血管生成潜力的影响

目的 研究shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因对人乳腺癌细胞株诱导血管内皮细胞形成管腔能力的影响.方法 通过质粒shRNA-CXCR4沉默CXCR4基因后,RT-PCR、Western-blot检测3株人乳腺癌细胞的CXCR4 mRNA及其蛋白的表达;应用人乳腺癌细胞株与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)双室联合培养技术,观察人乳腺癌细胞株通过shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后诱导HUVEC形成管腔能力的影响.结果 质粒shRNA-CXCR4作用于3株人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MCF-7后能明显抑制其CXCR4基因的mRNA及蛋白表达水平:对乳腺癌细胞诱导的人脐静脉血管内皮细胞HUVEC形成管腔样结构的能力有显著的抑制作用(P<0.05).结论 shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明显抑制人乳腺癌细胞诱导管腔形成能力.     

1型糖尿病患者胎儿胎盘循环中K_(ATP)通道功能受损

目的:糖尿病患者围生期患病率增加,部分可能与血管功能失调有关。因为钾离子通道的功能是重要的血管功能调节因素,本研究探索糖尿病患者胎儿胎盘血管床中钾离子通道功能是否受损。研究设计:对体外分离的47例胎盘小叶样本行体外双重灌注血管,以研究血管钾离子通道功能。设计了适当的对照组试验,以排除非特异性因素的影响。结果:对照组优降糖(KATP通道阻滞剂)增加胎儿胎盘动脉灌注压最大达37±6m m H g,而糖尿病组最大灌注压为15±6m m H g(P<0.05)。4-鸟安定(KV通道阻滞剂)增加2组胎儿胎盘动脉灌注压于相当水平(分别为21±4m m H g、22±…     

靶向siRNA沉默Akt1基因表达及其对肺癌培养基促内皮细胞迁移的抑制作用

目的:研究小干扰RNA(siRNA)对血管内皮细胞Akt1基因表达的沉默作用及其对肺癌A549细胞条件培养基促血管内皮细胞迁移的影响。方法:以人脐静脉内皮细胞为靶细胞,设计针对Akt1基因mRNA的siRNA(siAkt1),利用阳离子脂质体介导转染人脐静脉内皮细胞,采用半定量PCR技术(RT-PCR)检测Akt1mRNA的表达,用Western blotting技术检测Akt总蛋白表达。同时用体外"伤口愈合"实验观察细胞迁移。结果:筛选出的siAkt1能显著抑制内皮细胞Akt1mRNA(P<0.01)和Akt总蛋白的表达(P<0.05),A549细胞条件培养基显著促进人脐静脉内皮细胞迁移(P<0.05),但对转染siAkt1的人脐静脉内皮细胞迁移没有促进作用(P>0.05)。结论:特异性siRNA通过有效抑制Akt1基因的表达而抑制A549细胞条件培养基促血管内皮细胞迁移的作用,这为肺癌血管生成干预治疗提供了新的理论基础。