层粘蛋白促进复方壳多糖组织工程皮肤基底膜构建的实验研究

目的 证实外源性层粘蛋白能否促进复方壳多糖组织工程皮肤基底膜的构建.方法 在体外培养组织工程皮肤的培养基中加入浓度为0、1、5、20μg/ml的外源性层粘蛋白,培养15 d,通过HE染色及PAS染色,观察获得的组织工程皮肤的组织学特性;并利用免疫组化染色对基底膜的重要成分包括Ⅳ型胶原和层粘蛋白进行观察,观察基底膜构建情况.结果 加入20μg/ml的层粘蛋白,可明显促进基底膜的形成,且免疫组化染色结果显示Ⅳ型胶原和层粘蛋白反应强阳性.结论 层粘蛋白可促进复方壳多糖组织工程皮肤基底膜的构建,并呈浓度依赖性.     

复方壳多糖组织工程皮肤活力测定的研究

目的介绍一种快捷、简便、灵敏和准确的测定组织工程皮肤活力的方法。方法采用SYTO 13和溴化乙锭(ethid-ium bromide,EB)2种荧光核酸染色剂对冻存后组织工程皮肤进行染色,通过流式细胞计数仪及荧光显微镜下观察等方法计算活细胞。结果4℃条件下,组织工程皮肤冻存7d后表皮活力值为未冻存时的62.46%;冻存7d后真皮活力值为未冻存时的54.21%。结论SYTO/EB双重核酸染色法是测定组织工程皮肤活力的既简便又准确的方法。     

复方壳多糖组织工程皮肤分泌b-FGF的初步研究

目的 研究组织工程皮肤培养液中碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)的分泌情况.方法 收集复方壳多糖组织工程皮肤制备过程中复方壳多糖皮肤替代物(SE)、复方壳多糖真皮替代物(DE)、单层角质形成细胞(KC)以及复方壳多糖DE与KC在transwell内共培养的培养液样本,双抗体夹心ELISA法测定其中b-FGF分泌量.结果 b-FGF分泌量依次为单层KC＜复方壳多糖DE/KC共培养＜复方壳多糖SE＜复方壳多糖DE.结论 角质形成细胞能调控成纤维细胞分泌b-FGF能力,有利于伤口愈合.     

去牛血清清蛋白化对复方壳多糖组织工程皮肤单向混合淋巴细胞反应的影响

目的探索复方壳多糖组织工程皮肤去牛血清清蛋白化的洗涤方法及对其单向混合淋巴细胞反应的影响。方法从头制备复方壳多糖组织工程皮肤,ELISA法检测不同洗涤条件下外渗液中牛血清清蛋白的浓度,然后检测在最优洗涤条件下组织工程皮肤单向混合淋巴细胞反应的强度。结果当洗涤间隔时间为3h,洗涤次数为2次时能使外渗液中牛血清清蛋白的浓度降到50ng/mL以下;按该方法洗涤后,组织工程皮肤的单向混合淋巴细胞反应强度显著降低。结论复方壳多糖组织工程皮肤以3h×2次洗涤,能够显著降低其外渗液中牛血清清蛋白的浓度及其单向混合淋巴细胞反应的强度。     

龙血竭对组织工程皮肤修复皮肤缺损的作用

[目的]观察龙血竭对组织工程皮肤修复皮肤缺损创面的促进作用.[方法]将人成纤维细胞种植入胶原海绵,人角质形成细胞种植在表层,构建组织工程皮肤,并移植入裸鼠皮肤缺损创面;实验动物随机分为4组,选用"活血圣药"龙血竭于移植后2 d分别进行创面外敷、单纯口服、创面外敷+口服治疗,并设空白对照组.组织工程皮肤移植后9 d取材检测,观察创面局部表皮厚度、真皮层中层粘连蛋白(Ln)、Ⅰ型胶原蛋白的表达及毛细血管增生情况.[结果]龙血竭能促进组织工程皮肤移植后表皮的发育及真皮层中毛细血管的增生,增强Ln、Ⅰ型胶原蛋白的分泌,龙血竭外敷+口服组效果最佳.[结论]龙血竭对组织工程皮肤修复皮肤创面有促进作用.     

压应力对组织工程软骨细胞增殖的影响

目的 探讨不同强度的压应力对组织工程软骨细胞增殖的影响.方法 将兔软骨细胞接种到脱钙骨基质支架上,应用仿生多功能组织工程组织培养仪,加压组分别在压缩幅度为0～5%、0～10%、0～20%,频率0.1Hz周期性压力下培养,对照组不加压.通过大体观察、组织切片、MTT法及流式细胞术分别观察组织形态、细胞数量与分布、检测细胞增殖活力及细胞周期.结果 0～10%组的组织工程软骨体积最大、最厚,形态佳,组织切片见软骨细胞数目最多,分布更为均匀,排列紧密,基质分泌较多.加压组的软骨细胞活力显著增强,S期细胞百分比均明显高于对照组,以0～10%组尤为明显.结论 组织工程软骨细胞增殖能力受周期性压力强度的调控,其中频率0.1 Hz、强度0～10%的周期性压力能更好地促进软骨细胞增殖.     

组织工程皮肤与正常皮肤组织学差异的实验研究

目的:研究组织工程皮肤与正常皮肤表皮层组织学的差异,并探讨其意义.方法:用组织工程方法构建人全层皮肤,以正常在体皮肤作为对照,组织学、免疫细胞化学、透射电镜观察表皮层的异同.结果:组织工程皮肤与正常皮肤在组织学上有一定差异,缺少上皮钉突,CK19在组织工程皮肤成熟期表达阴性,但CK10和pan-CK在两者表达皆为阳性,透射电镜观察上皮结构接近正常皮肤.结论:组织工程皮肤表皮层与真皮层结合不如正常皮肤紧密,可能与缺少上皮钉突有关,其表皮细胞基本分化成熟.     

组织工程皮肤的研究及应用

组织工程皮肤是目前组织工程领域研究的热点,也是该领域发展最成熟的成果。国外许多组织工程皮肤产品已经被FDA批准进入临床应用。本文就组织工程皮肤的种类及应用进行综述。     

组织工程皮肤的缺陷与对策

组织工程皮肤的研究发展迅速，但至今仍无一种理想的皮肤替代物，主要的缺陷是容易感染、移植成功率低、缺乏皮肤附属器，保存方法不完善，免疫排斥问题没有完全解决。目前的对策有：加入抗生素或应用有抗感染能力的材料，促进组织工程皮肤血管化，初步构成含毛囊的组织工程皮肤，尝试冷冻保存及减低移植物抗原性。     

基于pADM的组织工程化皮肤修复新西兰兔皮肤损伤

目的初步探讨组织工程化真皮在兔皮肤损伤修复中的作用。方法利用组织工程化真皮移植法进行兔皮肤损伤修复,观察修复过程,比较其修复效果,并进行组织学观察和BrdU免疫组化染色观察。结果实验组修复效果优于空白组,实验组愈合时间为（18.2±3.8）d,空白组为（28±2.3）d。结论猪脱细胞真皮基质材料具有良好的生物相容性和功能性,具有优良的体表创伤修复潜力;构建组织工程化真皮亦是一种有潜力的人体体表创伤修复方法。     

复合壳多糖人工皮肤的初步实验研究

目的探讨复合壳多糖人工皮肤移植家兔后表皮层角蛋白的表达以了解移植后皮肤表皮的分化情况.方法分别将复合壳多糖人工皮肤移植前、移植后1个月、移植后2个月、正常人皮肤、正常兔皮肤石蜡块切片,用抗广谱角蛋白多抗、抗角蛋白K5和K10单抗进行免疫组化染色,观察表皮层角蛋白的表达和表皮分化情况.结果复合壳多糖人工皮肤移植后1个月及2个月表皮层均有较强的角蛋白表达,与正常皮肤相似;基底层以上细胞有角蛋白K10表达,且越接近表皮表面表达越强,与正常人皮肤相似,基底层细胞有角蛋白K5表达,但明显弱于正常人皮肤.结论复合壳多糖人工皮肤移植家兔后表皮层均有角蛋白表达,有增生性细胞和分化细胞,表皮分化良好、层次清楚,与正常皮肤相近.     

层粘连蛋白及其受体在葡萄胎中表达与预后的相关研究

目的：探讨层粘连蛋白（Laminin,LN）和受体（Laminin Receptor,LN-R）的表达在葡萄胎预后中的意义.方法：应用免疫组化方法对41例葡萄胎组织（经随访13例发生恶变）和20例正常早孕绒毛组织中LN及LN-R进行检测.结果：LN在正常绒毛、葡萄胎未恶变组和恶变组中的强表达率分别为,90.0%（18/20）、71.4%（20/28）、38.5%（5/13）;LN-R分别为70.0%（14/20）、71.4%（20/28）、84.6%（11/13）.LN表达葡萄胎预后恶变组显著高于其他两组.结论：LN和LN-R在葡萄胎中的表达可能在葡萄胎恶变过程中起重要作用,有望作为判断葡萄胎预后的参考指标之一.     

氧化应激对血管内皮细胞Grx表达的研究

目的采用体外实验，研究人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells．HUVEC）是否受氧化应激而高表达Grx。方法体外分离培养HUVEC；用不同浓度H2O2处理HUVEC，MTT法检测HUVEC活力。RT—PCR半定量检测GrxmRNA表达水平的差异。结果成功获得体外培养的HU—VEC；300-500mol／L H2O2均在不同程度上抑制细胞增殖（P〈0.05）。RT—PCR结果表明，GrxmRNA的表达随着200umol／L H2O2作用时间的增加而增加，30min时与正常对照组差异显著（P〈0．01）；不同终浓度H2O2作用30min结果表明，300umol／L H2O2作用可使GrxmRNA的表达量最高（P〈0．01）。结论建立了分离培养HUVEC的方法；氧化应激可上调HUVEC Grx mRNA表达，且HUVEC内Grx的表达与H2O2刺激呈时间剂量依赖关系。     

热应激对大鼠肝脏节律性基因Per2mRNA表达水平的影响

目的探讨急性热应激对大鼠节律基因Per2mRNA昼夜表达水平的影响。方法选用雄性Wistar大鼠,随机分为对照组和热暴露组。对照组:置于室温24℃环境中;热暴露组:环境温度为32℃,经7 d热暴露后,采用体温遥感技术监测大鼠体温变化,测定大鼠脑垂体与肾上腺的相对质量及肝脏Per2 mRNA昼夜的表达水平。结果急性热应激对大鼠体温和体质量无影响,但可增加大鼠脑垂体和肾上腺的相对质量,并可显著抑制节律基因Per2 mRNA在夜间的表达水平。结论急性热应激可干扰Per2 mRAN的昼夜节律性表达。     

龙血竭外用对糖尿病大鼠皮肤溃疡Smads蛋白表达的影响

目的 探讨龙血竭外用对糖尿病大鼠皮肤溃疡Smads(drosophila mothers against decapentaplegic protein)蛋白表达的影响.方法 建立糖尿病大鼠皮肤溃疡模型,以胰岛素为对照药,随机分为龙血竭组、胰岛素组、模型组、正常组.龙血竭组予以龙血蝎胶囊内容物外用于创面,每天换药1次,连续用药14 d;胰岛素组予以胰岛素稀释液外用于创面,每天换药1次,连续用药14 d;模型组、正常组大鼠将创伤面暴露于外,不作任何处理.检测各组大鼠Smads蛋白表达水平.结果 模型组Smad3、Smad4的表达水平高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);备用药组Smad3、Smad4的表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05).龙血竭组Smad3、Smad4表达水平低于胰岛素组,差异有统计学意义(P<0.05),与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 龙血竭对糖尿病大鼠皮肤溃疡Smads蛋白表达有下调作用.     

强脉冲光对小鼠皮肤胶原及PCNA表达的影响

目的:观察强脉冲光(intense pulsed light,IPL)对小鼠皮肤的胶原纤维及细胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的影响,探讨强脉冲光嫩肤的分子生物学机制?方法:采用能量密度为32 J/cm2强脉冲光照射小鼠背部右侧皮肤,左侧为对照,分别于照射后1?7?14?28天切取皮肤样本,行HE染色,苦味酸-酸性品红染色(VG 染色) 观察皮肤组织及胶原变化,免疫组化检测皮肤PCNA的表达?结果:与对照部位比较,IPL照射对真皮厚度无明显改变(P < 0.05);照射后1?7天两侧皮肤胶原含量无明显改变(P > 0.05),14及28天后照射部位皮肤胶原明显增加 (P < 0.05);PCNA表达于照射后1?7天无明显改变(P > 0.05),14及28天显著增强(P < 0.05)?结论:强脉冲光可促进皮肤胶原含量增加,并可诱导PCNA表达增强?     

直链烷基苯磺酸钠致小鼠皮肤组织氧化应激及胶原改变

目的：观察直链烷基苯磺酸钠(linear alkylbenzenesulfonate,LAS)对小鼠皮肤组织的氧化应激及胶原纤维 的影响,并初步探讨二者之间的关系。方法：将40只健康昆明种雄性小鼠随机分成4组,分别为正常对照组、LAS低 剂量组(150 mg/L)、中剂量组(300 mg/L)及高剂量组(600 mg/L),每组10只。分别用蒸馏水及不同剂量的LAS涂抹各组 小鼠的背部剃毛处,每日1次,连续涂抹60 d。观察各组小鼠的饮食、日常活动等一般情况及体质量变化情况;取涂 抹部位皮肤进行HE及Masson染色观察皮肤组织结构及胶原纤维变化情况;测定皮肤组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量评 价胶原蛋白量的变化;检测皮肤匀浆及血清中超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)含量及血清中乳酸脱氢 酶(LDH)活性评价氧化应激的变化。结果：实验期间,LAS各剂量组小鼠在饮食、日常活动及精神状态方面与正常对 照组没有明显差异;4周后,各剂量组小鼠体质量明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。HE及Masson染 色显示：LAS各剂量组小鼠皮肤明显变薄,表皮细胞部分坏死、脱落,真皮浅表有炎细胞浸润;胶原纤维减少,纤 维排列杂乱、松散、模糊。各生化指标显示：与正常对照组相比,LAS各剂量组小鼠MDA含量及LDH活性明显增加 (P<0.01),SOD活性及Hyp含量均明显降低(P<0.01)。结论：LAS能诱导小鼠皮肤组织氧化应激状态;破坏皮肤结构的 完整性,使其出现明显的病理改变;使胶原纤维形态发生改变且含量明显减少。氧化应激引起的氧化损伤可能是胶 原改变的主要原因。