CIK细胞体内外抗肝癌细胞作用

目的：研究肝癌患者CIK（cytokine-induced killer) 细胞的体外杀伤自体肝癌原代细胞的细胞毒活性以及正常人CIK细胞在裸鼠体内的抗肿瘤作用。方法：分别分离获得肝癌患者和下人的外周血单个核细胞（PBMC）,加入细胞因子,体外诱导成CIK细胞,用流式细胞仪对细胞作动态表型分析,并与正常人的CIK细胞作对比。用^51Cr释放法,测定肝癌患者的CIK细胞体外杀伤自体肿瘤细胞的细胞毒性活性。在Balb/c裸鼠皮下接种肝癌细胞BEL－7402,观察CIK细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用,并与LAK、PBMC细胞相对比。结果：肝癌患者的CIK细胞体外增殖力强,至培养28天时达到最大增值倍数300多,表型分析结果表明,CD^3 CD56^ 双阳性细胞得到了大量的扩增,其含量由原来的0．23％上升到第21天的17．8％。体外实验表明,肝癌患者的CIK细胞杀伤自体原代肝癌细胞的细胞毒性活性明显高于自体的PBMC细胞。裸鼠体内实验表明,肝癌患者的CIK细胞能够显著抑制肿瘤的生长,其抑瘤率可达84．7％,高于LAK细胞的52．8％及PBMC的37．1％（P＜0．05和P＜0．01）。结论：CIK细胞具有较强的体内外抗肝癌细胞活性,有可能应用于临床上肝癌的过继性免疫治疗。     

CIK体内外抗宫颈癌HeLa细胞的作用及其荷瘤小鼠体内分布特点

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)对荧光素酶标记的人宫颈癌HeLa-luc细胞的体内外抗肿瘤作用,了解CIK回输荷瘤小鼠后在不同器官的分布特点。方法:由健康志愿者外周血单个核细胞体外诱导培养CIK,流式细胞术检测CIK表面分子的表达,RT-PCR法检测IFN-γmRNA的表达,MTT法和瑞氏-姬姆萨染色测定CIK对HeLa-luc细胞的杀伤作用。建立荷HeLa-luc瘤BALB/c裸鼠模型,体内成像系统观察荷瘤小鼠肿瘤大小变化及CIK治疗效果,共聚焦显微镜观察不同器官中CIK的分布情况。结果:CIK在体外诱导培养14～21 d,其生长达到高峰,此时CD3+CD56+T细胞的比例增加50倍以上,IFN-γmRNA表达水平也达到高峰。在效靶比为20∶1、40∶1时,CIK对HeLa-luc细胞的杀伤率分别为(51.16±2.64)%、(72.14±4.21)%,明显高于对照组的(16.33±3.09)%、(21.26±2.71)%(P<0.05)。CIK治疗5周和8周后,对荷瘤小鼠的抑瘤率分别为47.18%、64.38%。CIK治疗组荷瘤小鼠外周血中IFN-γ水平为(61.92±6.49)pg/ml,明显高于对照组的(34.30±1.78)pg/ml(P<0.05)。CFSE标记的CIK经腹腔和瘤旁注射入荷瘤小鼠3 h,在肺、肝、脾、外周血、肿瘤中均可观察到绿色荧光;腹腔途径注射24 h时,肿瘤组织中CIK浓度达到高峰(20.56±1.72)%;瘤旁途径注射3 h时,肿瘤组织中CIK达到高峰(25.75±3.45)%。结论:CIK在体内外对宫颈癌HeLa-luc细胞均有较强的杀伤作用,CIK经不同途径注射荷瘤小鼠后可以广泛分布于全身器官,其到达各脏器的浓度与输注途径及时间密切相关。     

CIK细胞-肿瘤过继免疫治疗的新希望

1 概述CIK细胞（cytokine－induced killer）是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子（如抗CD3McAb、IL－2、IFN－γ、IL－1α等）共同培养一段时间后获得的一群异质细胞。由于该种细胞同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子1,故又被称为NK细胞样T淋巴细胞,兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。因此,应用CIK细胞被认为是新一代抗肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。2 CIK细胞表型特点CIK细胞中的效应细胞CD3＋CD56＋细胞在正常人外周血中极其罕见,仅1％～5％,在体外经多因子培养28～30天,…     

CIK细胞实验研究及治疗肿瘤的临床疗效观察

目的 研究CIK细胞体外增殖特性及对CIK细胞治疗肿瘤的临床疗效观察.方法 提取外周血的PBMC,第0天加入IFN-γ,第1天加入IL-2、抗CD3单抗和IL-1培养CIK细胞,用流式细胞仪进行表型测定,并与LAK细胞进行比较;静脉输注CIK细胞对43例肿瘤患者进行治疗.结果 体外培养5 d后,CIK扩增倍数明显高于LAK细胞,表型分析发现CIK细胞中杀伤作用细胞CD8和CD3+CD56+的比例分别为70.9%和36.9%,LAK细胞为50.6%和1.63%,CIK细胞治疗肿瘤的总有效率为32.6%;治疗过程中的主要毒副反应是发热,占治疗总人数的20.9%.体温37.5～38.5℃,发热在2 h内自动缓解.结论 CIK细胞治疗肿瘤是一种安全有效的方法.     

CIK细胞的研究现状

随着免疫细胞生物学及免疫分子生物学的飞速发展，细胞介导的过继免疫治疗已成为肿瘤患者放、化疗后辅助治疗的重要手段之一。对于促进患者免疫系统的重建、消除残留病灶及骨髓净化都具有良好效果。细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer cells，CIK细胞）是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同诱导而获得的一群异质细胞。大量研究表明CIK细胞是一种新型、高效、具有广谱杀瘤活性的非主要组织相容性复合体（MHC）限制性免疫效应细胞，在肿瘤免疫治疗中显露出巨大的应用价值。本文概述了CIK细胞的一些基础研究现状及近年的临床应用情况。     

纤维连接蛋白诱导CIK细胞治疗晚期癌症患者的安全性及疗效评价

目的:评价重组人纤维连接蛋白(RetroNectin,RN)诱导的CIK细胞治疗晚期癌症患者的安全性及疗效.方法:观察85例晚期癌症患者,经RN诱导的自体或异体血CIK细胞治疗的安全性.选择晚期非小细胞肺癌患者36例,分为2组:CIK细胞治疗组20例,化疗组16例,比较两组治疗前后的免疫功能、生活质量(用汉化生活量表QLICP系统测试)、临床疗效差异;选择晚期非小细胞肺癌患者32例,分为CIK细胞治疗组及姑息治疗组各16例,比较两组患者的生存期.结果:安全性:自体及异体CIK细胞治疗过程中主要出现兴奋感、失眠、低热,未见明显毒副反应.近期疗效:20例患者经CIK细胞治疗:PR 1例,SD 10例,PD 9例,ORR 5.00%,DCR 55.00%;16例患者经化疗:PR 5例,SD 5例,PD 6例,ORR 31.25%,DCR62.50%,2组的DCR差异不显著(P>0.05),但化疗组的ORR明显高于CIK组(P<0.05).在生活质量方面,化疗后病人心理模块中情绪方面明显低落(P<0.05),CIK细胞治疗的患者多有生活质量提高;CIK细胞治疗组与化疗组患者,治疗前后免疫功能无显著差异(P>0.05).CIK细胞治疗组(11.0个月)比姑息治疗组(6.0个月)中位生存期延长,但总生存时间无统计差异(x2=2.301,P=0.129).结论:RN诱导的CIK细胞自体及异体治疗均简便、安全、有效,可以改善晚期肿瘤病人的生活质量,延长生存期.     

CIK细胞治疗晚期肝癌的临床观察

目的 观察CIK细胞治疗晚期肝癌的临床疗效.方法 体外培养CIK细胞,14 d后分次回输给患者,观察患者治疗前后瘤体大小、肿瘤标志物、免疫指标、临床症状、生活质量、卡氏评分等的变化,并记录生存期.结果 晚期肝癌治疗前后肿瘤标志物CA199和AFP比较差异有统计学意义(P<0.05),CD4、CD19、CD3/CD16+CD56+比较差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后患者临床症状比治疗前有明显改善,差异有统计学意义(P<0.05);卡氏评分提高率为73.91%.结论 CIK细胞疗法为无手术放疗及化疗适应证的晚期肝癌患者提供了一种延长生存期,改善生活质量的新途径.     

CIK细胞治疗中晚期消化系统肿瘤的临床研究

目的 评估细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）过继免疫疗法治疗中晚期消化系肿瘤的临床疗效。方法 参照美国斯坦福大学骨髓移植中心建立的CIK细胞培养方法诱导扩增CIK细胞。培养14d后分次回输给患者,观察患者治疗前后瘤体变化、肿瘤标志物变化、免疫指标变化、临床症状改善、生活质量、卡氏评分等,同时记录生存期。结果 在53例接受CIK细胞治疗中晚期消化系肿瘤患者中,PR＋MR为39例,总缓解率为73．6％,随访1年生存率为92．4％,2年为83．0％,3年为75．5％。临床症状治疗前后有明显改善（P〈0．05）;生存质量卡氏评分提高率为79．24％;治疗前后CD4、CD19、CD3／CD16＋CD56差异均有统计学意义（P〈0.05）;肿瘤标志物CA199差异有统计学意义（t=7．91P〈0．05）;体重多数有增加。结论 CIK细胞对手术、放疗、化疗已无适应证的中晚期消化系肿瘤患者提供了一种可以延长生存期、提高生活质量的新途径。     

CIK细胞联合贝伐单抗对肝癌HepG2细胞的体内外抗瘤活性

目的:探讨细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞联合贝伐单抗(bevacizuma)对肝癌HepG2细胞的体内外抗肿瘤活性及其作用机制.方法:提取健康供血者外周血的单个核细胞(PBMC),加入多种细胞因子促进CIK细胞成熟,在流式细胞仪上进行CIK细胞的免疫表型分析.CIK细胞与贝伐单抗单独或联合作用于HepG2细胞后,利用CCK-8测定其对HepG2细胞体外增殖活性的影响;利用侵袭小室(Transwell)和划痕实验测定其对HepG2细胞侵袭迁移活性的影响;Western blotting检测HepG2细胞Akt和Erk信号通路相关蛋白磷酸化的变化.建立HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤模型,并随机分为生理盐水组、CIK组、贝伐单抗组及CIK细胞联合贝伐单抗组,给药28 d后处死裸鼠,剥取瘤体,免疫组化法检测瘤组织CD31及Ki67蛋白的表达.结果:提取健康人PBMC诱导14 d后,CIK细胞表型分析显示CD3+ CD56+细胞扩增达(36.33±2.58)％.与单独治疗组比较,联合组对HepG2细胞的抗肿瘤增殖活性显著增强(P ＜0.05);CIK细胞和贝伐单抗两药联合比单独给药组对HepG2细胞的侵袭[(75.6 ±9.53) vs (304.8 ±45.73)、(359.8 ±38.10)个,P＜0.01]和迁移[(29.35±8.14)％vs (55.07±6.27)％、(60.50±9.73)％,P＜0.05]能力的抑制更强;CIK细胞和贝伐单抗两药单独及联合都能抑制Akt和Erk的磷酸化;CIK联合贝伐单抗组可显著抑制移植瘤生长以及移植瘤组织平均血管密度和Ki67表达,与单独治疗及对照组细胞比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:CIK联合贝伐单抗在体内外对HepG2细胞增殖、侵袭、迁移均有抑制作用,且优于单独治疗组.     

CIK细胞治疗中晚期妇科肿瘤的临床观察

目的 评估CIK细胞过继免疫疗法治疗中、晚期妇科肿瘤的临床疗效.方法 参照美国斯坦福大学骨髓移植中心建立的CIK细胞培养方法诱导扩增CIK细胞.培养14 d后分次回输给患者,观察治疗前后瘤体变化、肿瘤标志物变化及生活质量.结果 32例接受CIK细胞治疗的中、晚期妇科肿瘤患者中,CR+PR+MR 28例,总缓解率为87.5%,随访1年生存率为90.6%,2年生存率为81.3%,3年生存率为75.0%.生存质量卡氏评分提高率为78.1%,体质量提高率为84.4%;肿瘤标志物CA125显著降低(t=3.95,P<0.05);少数患者有发热反应,大多在38℃以下,未经处理自行退热.结论 CIK细胞疗法为无法手术、放疗、化疗的中晚期妇科肿瘤患者,提供了一个可以延长生存期,提高生活质量的新方法.     

细胞因子诱导的杀伤细胞对宫颈癌细胞的体内外杀伤效应

目的：探讨细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokineinduced killer cells,CIKs）对宫颈癌CasKi和Hela细胞的体内外杀伤效应。方法：从宫颈癌患者的外周血分离单个核细胞,以改良方法（不加IFNγ,只加IL2 和antiCD3抗体）刺激扩增得到CIKs,用流式细胞仪分析CIKs表型。ELISA法检测CIKs培养上清中IFNγ、IL2 和TNFα的分泌水平。LDH释放法检测CIKs对CasKi和HeLa细胞的杀伤作用。建立荷CasKi或Hela细胞小鼠模型,以1×106或1×107个CIKs小鼠静脉注射治疗,每周1次,连续治疗3周,检测小鼠移植瘤的体积和重量。结果：在抗CD3抗体和IL2的刺激下,宫颈癌患者外周血单个核细胞被诱导培养成CIKs,其中CD3+CD56+细胞得到大量扩增。PHA激活后,CIKs产生大量的IFNγ和TNFα,而IL2的分泌量较少。被激活的CIKs可显著地杀伤宫颈癌CasKi细胞和HeLa细胞,最大杀伤率分别达（43.2±1.8）%和（46.2±15）%,且呈剂量依赖性。体内抗肿瘤实验结果显示,CIKs能显著抑制小鼠皮下宫颈癌移植瘤的生长（P<0.01）。结论：本实验的改良方法能有效制备CIKs,该CIKs在体内外对宫颈癌CasKi 和 Hela细胞有明显的杀伤效应。     

DC-CIK过继性细胞免疫治疗对卵巢癌患者的预后及免疫功能的影响

目的:探讨自体DC-CIK细胞疗法改善卵巢癌患者的预后及免疫功能的能力。方法:回顾性分析2014年1月至2015年12月在中国医科大学附属盛京医院均接受了规范的初始治疗、达到完全缓解（CR）的卵巢癌患者90例。分析比较其基本条件、免疫指标、无瘤生存时间及不良反应。结果:经DC-CIK生物免疫治疗的患者外周血CD3+、CD4+细胞百分率,CD3+、CD8+细胞百分率及CD4+/CD8+比值均上升,NK细胞即CD16+、CD56+细胞增多,同时随着疗程数的增多,升高的更加明显（P<0.05）。一线治疗后,单纯观察组平均无瘤生存时间为15.88±2.7个月明显少于DC-CIK生物免疫治疗组的22.5±4.13个月（P=0.039）。其中使用DC-CIK生物免疫治疗疗程≥5程的平均无瘤生存时间为27.25±4.53个月明显高于DC-CIK生物免疫治疗疗程≤4程的19.69±2.81个月,两者相比差异无明显统计学意义（P=0.412）。所有患者DC-CIK细胞治疗后血常规及肝肾功能检测与治疗前及单纯观察组患者相比无明显变化,也未见明显不良反应。结论:DC-CIK免疫治疗提高卵巢癌患者的免疫反应,改善卵巢癌患者预后,未见明显不良反应。     

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌的研究现状

细胞因子诱导的杀伤（cytokine induced killer,CIK）细胞免疫治疗作为一种毒副作用较轻、前景良好的过继性细胞免疫治疗方法,其联合化疗对胃癌的治疗已进行了一定的研究。虽然,目前所报道的临床研究已经证实CIK细胞治疗的安全性,但尚不足以充分证明CIK细胞联合化疗治疗胃癌的有效性,因为这些试验设计方案均存在一些缺陷,如为非随机对照的临床研究、样本量较小、未明确胃癌类型、未标准化的CIK细胞制备方法和治疗方案、无用于预测CIK细胞治疗效果的特异性生物标志物等。因此,迫切需要解决这些问题方能促进CIK细胞用于胃癌临床研究的发展。     

细胞因子诱导杀伤细胞对裸鼠胃癌移植瘤的靶向抑制作用

目的: 利用蛋白质组学基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(matrixassisted laser desorption/ionization timeofflight mass spectrometry, MALDITOF MS)技术检测食管癌患者血清蛋白指纹图谱,建立食管癌蛋白指纹图谱诊断模型,探讨其临床应用价值。方法: 收集河北医科大学第四医院2008年5月至9月间胸外科食管癌患者血清32例和健康志愿者血清28例,采用弱阳离子交换蛋白质芯片（WCX磁珠）提纯血清蛋白,MALDITOF MS技术进行血清蛋白质质谱检测,所得结果用ZUCI蛋白芯片数据分析系统进行分析。运用遗传算法结合支持向量机运算建立食管癌蛋白指纹图谱诊断模型;将60例标本随机分成训练组和盲法测试组,训练组为21名食管癌患者和19名健康人,盲法测试组为11名食管癌患者和9名健康人,验证诊断模型的特异性和敏感性。结果:采集食管癌患者和健康对照者的血清蛋白指纹图谱,经数据对比分析找到44个有显著性差异的质荷比峰（P<0.05）;从中筛选出差异最显著的6个蛋白质荷比峰（m/z分别为2 210、2 864、6 634、4 068、2 083和8 131）,并以此建立食管癌蛋白指纹图谱诊断预测模型;验证该模型诊断食管癌的特异性为88.9%、敏感度为100%。结论: 应用MALDITOF MS技术检测食管癌患者血清蛋白指纹图谱建立的食管癌蛋白指纹图谱诊断模型在食管癌的诊断中具有较高的敏感度和特异性。     

共培养的树突细胞和CIK细胞对肺癌的体内外抑癌作用

背景与目的:细胞因子诱导的杀伤(cytokine-inducedkiller,CIK)细胞是高效的肿瘤杀伤细胞。树突细胞(dendriticcells,DCs)是体内最强的抗原递呈细胞,并且能够提高效应细胞的抗瘤活性。本实验将DCs和CIK细胞共培养观察DCs对CIK细胞的细胞表型、增殖活性及体内外的抗肺癌作用的影响。方法:从健康人外周血单个核细胞中常规诱导出DCs、CIK细胞后,将DCs和CIK细胞按1∶10比例共培养5天获得DC-CIK细胞。流式细胞仪测DC-CIK细胞表型变化,3H-TdR掺入法测定其体外的细胞毒活性,并用肺腺癌细胞株A549建立裸鼠模型观察DC-CIK体内的抗肿瘤效果。结果:在培养第14天,DC-CIK细胞与单独CIK细胞培养组相比,增殖速率提高[(17.0±1.8)倍vs.(10.9±2.0)倍,P<0.05],CD3 CD56 表达水平明显上调[(36.0±4.2)%vs.(25.7±2.9)%,P<0.05],同时对A549细胞的细胞毒活性明显增强(P<0.05)。裸鼠体内实验表明,接种肺癌细胞51天后DC-CIK组、CIK组的抑瘤率分别为62.9%、41.5%,与对照组相比DC-CIK组及CIK组均抑制裸鼠皮下移植瘤的生长(P<0.01),且DC-CIK组与CIK组抑瘤效应差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DCs与CIK细胞共培养可使CIK细胞获得更高的增殖活性和更强的抑癌作用。     

Application of natural killer cells in pancreatic cancer

Pancreatic cancer, a highly malignant disease, is characterized by rapid progression and early metastasis. Although the integrative treatment of pancreatic cancer has made great progress, the prognosis of patients with advanced pancreatic cancer remains extremely poor. In recent years, with the advancements in tumor immunology, immunotherapy has become a promising remedy for pancreatic cancer. Natural killer (NK) cells are the key lymphocytes in the innate immune system. NK cell function does not require antigen pre-sensitization and is not major histocompatibility complex restricted. By targeting tumors or virus-infected cells, the cells play a key role in immune surveillance. Although several questions about NK cells in pancreatic cancer still need to be further studied, there are extensive theories supporting the clinical application prospects of NK cell immunotherapy in pancreatic cancer. Since very few studies have evaluated the role of NK cells in pancreatic cancer, this review provides a comprehensive update of the role of NK cells in pancreatic cancer immunotherapy.     

Increased effect of IMiDs by addition of cytokine‐induced killer cells in multiple myeloma

Immunomodulatory drugs (IMiDs), such as thalidomide, lenalidomide and pomalidomide, represent the basic principle of multiple myeloma treatment. However, the development of resistance is a limiting factor. Over the last years, the efficient application of cytokine‐induced killer (CIK) cells has been reported as an alternative strategy to treat hematological neoplasms. In this study, we tested for a potential synergistic effect by combining the IMiDs thalidomide, lenalidomide and pomalidomide with CIK cells in different myeloma cell lines in vitro. Myeloma cells tested with CIK cells were significantly reduced. In the combination, myeloma cells were significantly reduced compared with cells only tested with IMiDs but not to the cells tested with CIK cells. Otherwise, the number of CIK cells was significantly reduced when treated with IMiDs. Because IMiDs are active in patients with myeloma, these results lead to the expectation that combination of IMiDs and CIK cells achieve better results in the treatment of multiple myeloma compared with the single use of IMiDs. Therefore, further examinations in an in vivo setting are necessary to have a closer look on the cellular interactions. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

CIK细胞治疗癌症：国际临床试验的现状及展望

近年来,应用细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer cell,CIK细胞）进行恶性肿瘤治疗的临床试验在国内外陆续开展,CIK细胞免疫治疗在临床治疗中表现出明显优于其他过继性免疫治疗的强大优势,因而越来越广泛地被应用到临床肿瘤治疗中。CIK细胞可作为单独的治疗方法,也可与外科手术、放疗、化疗结合进行综合治疗。本文追踪国内外的研究进展,对CIK细胞的来源及表型、活化及扩增、抗肿瘤作用机制、新的技术方法及目前国际临床试验现状等诸多方面作一评述,并对目前CIK临床应用中存在的问题、规范化管理、质量监控、疗效评估和未来发展方向等进行探讨。