γ-谷氨酰转移酶mRNA亚型对肝细胞癌变的监测

目的 探讨γ-谷氨酰转移酶（GGT）mRNA亚型的转化与原发性肝癌（HCC）发生的关系,寻找肝癌早期诊断的新方法。方法 以逆转录聚合酶链反应方法检测正常对照组、非癌肝病组、肝癌组及肝转移癌肝组织及外周血的3种GGTmRNA亚型(A、B、C亚型)。结果 正常肝纤维、非癌肝病的肝组织及肝转移癌癌周组织主要的GGTmRNA类型为A亚型,肝癌组织、癌旁组织及远癌组织GGTmRNA-B亚型的阳性率显著高于正常肝脏及非癌肝癌的肝组织（P＜0．05）,癌组织GGT mRNA-A亚型阳性率明显低于正常对照及非癌肝病组（P＜0．05）。在26例HCC中有12例外周血中检出GGTmRNA-B亚型,甲胎蛋白阴性的10例HCC中有5例检出GGTmRNA-B亚型。结论 GGT mRNA亚型转化与肝癌发生有密切关系,分析GGT基因可望成为监测肝细胞癌变的灵敏方法。     

肝组织谷氨酰转移酶mRNA亚型的测定及其意义

目的 探讨谷氨酰转移酶（ＧＧＴ）ｍＲＮＡ亚型转化与原发性肝癌（ＨＣＣ）发生的关系。方法 以ＲＴ—ＰＣＲ方法检测正常肝组织、非癌肝病肝组织、肝癌组织、癌旁组织、远癌组织及肝转移癌癌周组织的三种ＧＧＴｍＲＮＡ亚型（Ｆ Ｈ、Ｐ亚型）、结果 正常肝组织主要的ＧＧＴ ｍＲＮＡ类型为Ｆ亚型，非癌肝病肝组织及肝转移癌癌周组织的各ＧＧＴ ｍＲＮＡ亚型与正常肝组织相似，肝癌组织、癌旁组织及远癌组织ＧＧＴ ｍＲＮＡ—Ｈ亚型的阳性率显著高于正常肝脏及非癌肝病肝组织（９６．２％与０和２０．７％，ｘ２值分别为２８．３６、２２．４２，Ｐ＜０．０５），肝癌组织ＧＧＴ ｍＲＮＡ—Ｆ亚型阳性率明显低于正常对照及非癌肝病组（５０％与１００％，ｘ２＝１８．９９，Ｐ＜０．０５）。结论 ＧＧＴｍＲＮＡ亚型转化与肝癌发生有密切关系，分析ＧＧＴ基因可望成力检测肝细胞癌变的灵敏方法。     

熊去氧胆酸对肝癌模型大鼠γ-谷氨酰转移酶基因表达的影响

目的探讨熊去氧胆酸(UDCA)对肝癌模型大鼠γ-谷氨酰转移酶(γ-GGT)基因亚型表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应PCR检测正常组及肝癌模型组大鼠的不同癌变肝组织及其血液GGT mRNA亚型(F、H、P)的表达情况。对比正常组,UDCA实验A、B组和对照组大鼠GGT mRNA亚型的表达情况。结果癌组织中的GGT mRNA的F亚型阳性检出率显著小于正常肝组织、非肝癌肝组织及癌周组织(P<0.01);癌组织、癌周组织的H亚型阳性检出率均高于正常肝组织及非肝癌肝组织(P<0.01或P<0.05)。UDCA实验A、B组的不同肝组织及血液的GGT mRNA-H亚型的表达量均较模型组明显下降(P<0.05);UDCA实验A、B组癌组织F亚型的表达量较模型组显著降低(P<0.05)。结论在大鼠的肝癌发生过程中存在着GGT mRNA由F亚型向H亚型的转变。UDCA能减少GGT mRNA-H亚型的表达,间接反映UDCA能减少肝癌的发生,对肝癌的发生有一定的预防作用。     

肝组织及血ANXA2表达异常对肝癌诊断与鉴别的价值

目的分析乙肝病毒(HBV)感染相关原发性肝癌(PHC)组织及血膜联蛋白亚组分(annexin A2,ANXA2)水平及其临床价值。方法以自身配对法分别收集HBV相关肝癌术后的癌、癌旁和远癌组织,以免疫组化法分析肝组织ANXA2蛋白表达与细胞分布、荧光定量PCR检测ANXA2mRNA表达,以ELISA法定量肝病患者血ANXA2水平。结果肝癌组织ANXA2表达见于胞浆和胞膜,癌旁组织见于胞浆;癌组织ANXA2表达无论在蛋白还是mRNA水平都显著高于癌旁组织(P<0.001);肝癌患者血ANXA2水平显著高于良性肝病(F=498.221,P<0.001);伴肝外转移、门静脉癌栓患者血ANXA2明显异常;与中分化、低分化程度显著相关;HBV感染与非感染组间差异非常明显(t=6.820,P<0.001);如以血ANXA2≥18ng/ml为界,与AFP联合诊断肝癌阳性率达96.5%。结论 ANXA2过表达有助于PHC的诊断与鉴别。     

肝癌组织谷氨酰转移酶GGTmRNA-H亚型表达与肝癌早期诊断的研究

目的 研究肝癌组织中谷氨酰转移酶GGTmRNA—H亚型表达，并探讨其在肝癌早期诊断中的意义。方法 应用RT—PCR法，检测65例原发性肝癌病人癌组织及癌周组织、108例良性肝病肝组织、6例正常对照肝组织的GGTmRNA—H亚型，观察该基因的表达情况。结果 在65例原发性肝癌中，癌组织GGTmRNA—H亚型的阳性例数为61例（93．8％），肝组织血清AFP阳性40例（61，5％）（P〈0．05）；GGTmRNA—H亚型在20例小肝癌癌组织阳性表达例数为18例（阳性率为90．0％），与正常对照组比较，差异有统计学意义。急慢性肝炎组、肝硬化组与正常对照组比较，GGTmRNAH亚型阳性表达率虽明显升高，但其差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 肝癌组织中（如TmRNA—H亚型与血AFP联合分析可弥补AFP检测的不足，对提高肝癌、癌前病变的早期诊断具有重要意义。GGTmRNA—H亚型基因检测的结果比AFP的检测更敏感、特异性更高，有望成为肝癌早期诊断的理想指标。     

肝癌中细胞凋亡水平和p73基因转录表达的研究

目的　通过观察肝癌组织 ,对应癌旁组织和远癌肝组织中细胞凋亡及p73基因转录表达水平的变化 ,探讨细胞凋亡及p73基因转录表达水平与肝癌发生、发展的关系。方法　采用TUNEL及RT_PCR技术检测 3 2例乙肝相关肝癌癌组织、癌旁组织 ,以及良性肝脏疾病和对应正常肝组织细胞凋亡和p73mRNA的表达水平 ,并结合临床病理学资料进行统计学分析。结果　①肝癌癌组织中的凋亡指数明显高于癌旁组织和远癌组织 (P <0 0 1) ,细胞凋亡水平与肝癌组织学类型和P_TNM分期无明显关系 (P >0 0 5) ;②肝癌组织p73mRNA表达水平和表达率明显高于癌旁肺组织、远癌组织和肝良性病变组织 (P <0 0 1) ;③组织中凋亡指数的升高和p73基因转录表达水平的增加呈显著的正相关 (P <0 0 1)。结论　肝癌组织中存在细胞调亡水平的升高和p73基因的过度转录表达     

原发性肝癌C-kit和SCF基因的表达及意义

探讨C -kit、SCF基因编码的蛋白在肝癌(HCC)组织中的表达及其临床病理意义。采用免疫组化SP法检测92例肝癌中C -kit、SCF蛋白表达,同时取对应的癌旁肝组织及30例良性肝病组织作对照。结果显示,HCC中有较强的C -kit和SCF蛋白表达,癌旁组织呈弱表达,良性肝病组织则呈阴性表达。C -kit、SCF阳性率肝癌组织与癌旁组织、良性肝病组织比较差异有非常显著意义(P均<0 . 0 1)。C -kit、SCF蛋白表达与AFP异常、肝癌分级、门脉癌栓有关。C -kit、SCF蛋白过表达可能在原发性肝癌的发生、发展中发挥作用。     

肝癌细胞中γ-谷氨酰转肽酶基因甲基化研究

目的:研究肝癌细胞中γ-谷氨酰转肽酶(GGT)甲基化的改变。方法:纯化人肝癌及癌旁组织中总GGT及RNA,观察总GGT、膜结合和可溶性GGT的表达,并以逆转录巢式PCR扩增GGT非编码区基因片段,分析M_3位点的甲基化状态。结果:肝癌、癌旁和远癌组总RNA浓度呈明显的梯度升而趋势(P<0.05);癌组织总GGT、膜结合和可溶性GGT均高于癌周又远癌组织(P<0.05);在癌、癌旁及远癌组织中,特定基因片段的扩增检出率分别为100％、85％、75％,M_3位点低甲基化频率分别为75％、55％、50％。结论:肝癌组织中GGT呈异常表达与基因低甲基化状态有关。     

GGT亚组分及基因亚型与肝癌的特异性诊断

肝病及肝外肿瘤患者血γ-谷氨酰移换酶(GGT,EC 2.3.2.2)总活性均异常,肝癌患者血清经聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳,可将GGT分出十多种亚组分(Ⅰ,Ⅰ′,Ⅱ,Ⅱ′,β,δ,ε,φA,ⅦB,φC,γA,γB),而其中Ⅰ′,Ⅱ,Ⅱ′为肝癌所特有,被称为肝癌特异性GGT(HS-GGT).肝GGT基因表达与肝癌发展密切相关,其基因亚型有胎肝型(F)、胎盘型(P)和肝癌细胞型(H),基因型H主要见于肝癌组织.众多的基础及临床研究证实HS-GGT和基因H亚型为肝癌特异标志,具有较高的特异性和敏感性,其分析有助于肝癌诊断与鉴别.     

γ-谷氨酰移换酶同工酶对肝癌早期诊断价值的实验研究

本文以2-FAA喂饲Wistar大鼠制作肝癌模型．对膜结合γ-谷氨酰移换酶(GGT)及其同工酶在癌变过程中的早期改变进行了研究；经组织学及酶组织化学定位证实，在诱癌过程中肝细胞过度表达GGT并分泌入血．正常对照组鼠肝组织及血清GGT活性分别为0．34±0．23U／g蛋白和6．0±4．8U／L；诱癌后鼠肝组织GGT增加3～25倍，而鼠血清GGT增加3～6倍，实验组肝及血清GGT均明显高于对照组(P<0．01)。实验鼠2周时，异常增加的GGT便以多种分子形式在血或肝组织中同步出现，与胎肝GGT的形式相同。其结果提示．鼠肝癌发生过程中所表达的GGT具有癌胚性质，对异常区带的分析有助于肝癌的早期诊断。     

肝细胞癌组织Glypican3和Sonic Hedgehog蛋白表达及其功能分析

目的探讨肝细胞癌(HCC)组织Glypican3(GPC3)和Sonic Hedgehog(Shh)蛋白表达及其功能分析。方法取96例HCC患者癌组织和癌旁肝组织,体外培养Hep G2、MHCC97H、Huh7和SMMC7721细胞,采用免疫组织化学染色法检测组织GPC3和Shh蛋白表达水平,采用免疫荧光染色和蛋白印迹法检测体外培养的肝癌细胞GPC3和Shh蛋白表达,应用String数据库预测GPC3和Shh蛋白之间相互作用。结果在96例HCC癌组织,GPC3和Shh阳性率分别为77.1%和68.8%,而两种蛋白高表达率分别为60.4%和53.1%;高分化HCC癌组织GPC3蛋白阳性率为85.7%,显著高于低分化组的50.0%(P<0.05), Shh蛋白阳性率为81.0%,显著高于低分化组的40.0%(P<0.05);存在微血管侵犯(MVI)的HCC癌组织GPC3蛋白阳性率为72.7%,显著高于无MVI组的50.0%(P<0.05),Shh蛋白阳性率为65.9%,显著高于无MVI组的42.3%(P<0.05);体外培养的Hep G2、MHCC97H、Huh7和...     

肝细胞癌组织中Fas抗原和bcl-2蛋白的表达

目的 了解Ｆａｓ抗原及ｂｃｌ－２蛋白在肝癌中的意义。方法 用流式细胞技术对２６例肝细胞癌（ＨＣＣ）癌组织及相应硬变肝组织,以及１４例正常肝组织中Ｆａｓ抗原和ｂｃｌ－２蛋白的表达进行分析。结果 上述３种组织中均测到Ｆａｓ抗原和ｂｃｌ－２蛋白。ＨＣＣ组织中Ｆａｓ明显高于硬变肝组织中的表达（Ｐ〈０．０５）,而与正常肝组织Ｆａｓ表达差异无统计学意义（Ｐ〉０．０５）。ｂｃｌ－２在肝癌组织中明显低于正常组肝组     

肝细胞肝癌癌组织及癌旁肝组织中HCVNS5蛋白的检测

为了解肝细胞肝癌（ＨＣＣ）患者丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染状况，应用免疫组织化学方法以单克隆鼠抗－ＨＣＶＮＳ５检测了一组ＨＣＣ患者癌组织和癌旁肝组织中ＨＣＶ表达情况。结果：６４例ＨＣＣ患者癌旁肝组织中，共检出ＨＣＶＮＳ５阳性３０例（４６．９），阳性信号位于癌细胞和癌直细胞胞浆中，阳性细胞多呈弥漫或簇状分布；３０例ＨＣＶＮＳ５呈阳性的标本中，７例只于癌直细胞中检出，１２例只存在于癌组织中，另１１例癌旁     

Expression of Fas/Fas ligand (FasL) and its involvement in infiltrating lymphocytes in hepatocellular carcinoma (HCC)

Background. This study was conducted to examine the expression of Fas/Fas ligand (FasL), to elucidate its relationship with tumor-infiltrating lymphocytes (TILs), and to detect possible gene mutation of Fas/FasL in patients with hepatitis C virus (HCV)-related hepatocellular carcinoma (HCC). Methods. Indirect immunohistochemical staining was performed on formalin-fixed, paraffin-embedded sections of liver biopsy and surgery specimens from five normal livers, and from the livers of 30 patients with HCC. Fas/FasL mRNA-expressing cells and apoptotic cells were detected by in situ hybridization and DNA nick end labeling (TUNEL), respectively. We also performed polymerase chain reaction (PCR)-amplifying and direct sequencing for the Fas/FasL gene. Results. Fas/FasL and its mRNA were localized on the membrane or in the cytoplasm in some HCC cells, as well as hepatocytes. Their expression was enhanced in areas with infiltrating inflammatory cells in the noncancerous regions of liver tissue and on the margins of the cancerous tissue. The positivity rate for TUNEL was elevated along these margins. The labeling index of Fas/FasL was lower in the cancerous liver tissue than in the surrounding noncancerous region (P < 0.01), and tended to decrease in proportion to the malignancy of tumor cells; Fas/FasL expression was not found on poorly differentiated type cancer cells. Fas(−)/FasL(+), FasL-mRNA(+) HCC cells were seen in one specimen of moderately differentiated type. Some CD8+T lymphocytes were TUNEL-positive around the cancerous region. In this study, cancerous and noncancerous tissues in HCC revealed no genetic mutations in any exons of Fas/FasL. Conclusions. These findings suggest that Fas/FasL expression was decreased in proportion to the malignancy of tumor cells, and that infiltrating CD8+T lymphocytes play a role in apoptosis in HCC. The apoptosis in HCC could be regulated by the suppression of Fas/FasL expression, or, sometimes, by the enhancement of FasL expression. Received: October 5, 2000 / Accepted: February 23, 2001     

肝细胞癌组织COPB2基因水平变化及其临床意义探讨

目的 探讨肝细胞癌(HCC)组织衣被蛋白复合体亚基β2(coatomer protein complex subunit beta 2,COPB2)基因水平变化及其临床意义。方法 在113例HCC患者,采取肝癌切除术治疗,取癌组织和癌旁肝组织,采用RT-PCR法检测COPB2 mRNA水平,采用Western blot法和免疫组化法检测COPB2蛋白表达水平。建立多变量COX比例风险回归模型分析影响HCC患者预后的独立危险因素。结果 HCC组织和癌旁肝组织COPB2基因mRNA水平分别为1.32±0.40和0.47±0.14,差异具有统计学意义(P=0.013),两者COPB2蛋白相对表达水平分别为1.35±0.56和0.44±0.12,也具有显著性统计学差异(P=0.035);本组癌组织COPB2蛋白高表达45例(39.8%),低表达或阴性68例(60.2%);有无HBV感染、术前血清AFP水平、不同肿瘤结节数目、肿瘤分化程度和有无血管浸润患者癌组织COPB2蛋白表达强度不同(P＜0.05);本组113例患者死亡68例(59.8%),生存时间为(1047.0±167.7) d,中位生存时间1046 d;COPB2蛋白高表达组平均生存时间为(747.3±116.3) d,中位生存时间为610 d,COPB2蛋白低表达组平均生存时间为(1673.7±213.5) d,中位生存时间为1462 d(P=0.001);多因素Cox比例风险回归模型分析结果显示,术前血清AFP水平、血管浸润、肿瘤结节数目和肝癌组织COPB2表达水平是影响 HCC患者总生存时间的独立影响因素(P<0.05)。结论 HCC患者癌组织COPB2过表达可能预示不良预后,该基因及其蛋白表达可能与肿瘤细胞侵袭转移密切相关,COPB2可能成为预警HCC患者不良预后的一个新的分子标志物并可能成为潜在的治疗靶点。