大黄对胆汁淤积幼龄大鼠的预防保护作用

目的:探讨大黄对胆汁淤积幼龄大鼠的保护效果。方法:将42只幼龄大鼠随机分为正常组、模型组、熊去氧胆酸(UDCA)组,地塞米松(DEX)组,大黄低、中、高剂量组,每组6只,正常组和模型组给予羧甲基纤维素钠溶液灌胃,其余组分别给予UDCA、DEX、及大黄灌胃。第5天各组动物(正常组除外),采用α-萘异硫氰酸酯(ANIT)50 mg/(kg·d)一次性灌胃建立肝内胆汁淤积模型,ANIT灌胃后48 h分别处死各组动物。比色法检测总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、总胆汁酸(TBA)、碱性磷酸酶(ALP)、γ谷氨酰转移酶(GGT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)。采用苏木精-伊红染色于光镜下观察各组肝脏形态学改变。结果:模型组血清TBIL、DBIL、TBA、ALP、GGT、ALT、AST水平较正常组明显升高(P0.01)。UDCA组血清TBIL、TBA、ALP、GGT、AST水平较模型组有不同程度降低(P0.01,P0.05)。DEX组血清TBIL、TBA、AST水平较模型组有不同程度降低(P0.01,P0.05)。大黄各剂量组血清TBIL、DBIL、TBA、ALP、GGT、ALT、AST水平较模型组有不同程度降低(P0.01,P0.05)。大黄高剂量组血清TBIL、DBIL、TBA、ALP、GGT、ALT、AST水平较UDCA组有不同程度降低(P0.01,P0.05)。大黄中剂量组血清TBIL、TBA、ALP、GGT、ALT、AST水平较UDCA组明显降低(P0.01)。大黄低剂量组血清TBIL、TBA、ALT、AST与UDCA组有不同程度降低(P0.01,P0.05)。大黄不同剂量组血清TBIL、DBIL、TBA、ALP、GGT、ALT、AST水平较DEX组有不同程度降低(P0.01,P0.05)。大黄低剂量组血清DBIL,TBA,ALP,ALT,AST水平较中剂量组、高剂量组有不同程度升高(P0.05,P0.01)。中剂量组血清DBIL,TBA,ALP,ALT,AST水平较高剂量组无显著性差异(P0.05)。模型组大鼠肝脏病理改变最重,UDCA组、DEX组、大黄不同剂量组肝脏病理较模型组有明显改善,其中大黄高剂量组病理改善最明显。结论:大黄可以缓解ANIT诱导幼龄大鼠肝内胆汁淤积,其效果优于UDCA和DEX,高剂量组效果最好。     

茵陈蒿汤对急性肝内胆汁淤积大鼠肠道黏膜屏障和NF-κB的影响

目的:观察茵陈蒿汤对急性肝内胆汁淤积大鼠肠道黏膜屏障及NF-κB的影响。方法:70只大鼠按照体重随机分为正常空白组(10只),大鼠经ANIT诱发急性胆汁淤积模型组(30只)、造模成功后茵陈蒿汤灌胃中药组(30只),其中中药组和模型组又按灌服ANIT后24 h、48 h、72 h 3个时间点分为3组,每组各10只。检测大鼠血清肝功能、小肠组织病理形态和肝组织NF-κB的表达。结果:与模型组比较,中药组大鼠活动量、进食、精神状态及毛色均有明显改善。与空白组比较,中药组与模型组大鼠均出现ALT、ALP、GGT、TBIL的迅速升高,中药组24 h与模型组24h比较,ALT及TBIL明显降低,差异具统计学意义(P<0.05)。在造模48 h后,中药组与模型组ALT、TBIL均达到高峰,且两组对比差异具统计学意义(P<0.05)。造模72 h后,中药组与模型组ALT、TBIL均较同组造模48 h下降,且两组比较差异具统计学意义(P<0.05)。而在造模后24 h及48 h两个时间点比较,中药组的ALP、GGT均低于模型组,但均无统计学差异;至造模72 h后,中药组ALP、GGT指标改善明显优于同期模型组,两组比较差异具统计学意义(P<0.05)。小肠病理显示各时期中药组较同期对照组小肠结构改变较轻;肝脏组织中NF-κB的表达中药组明显低于空白组(P<0.01)。结论:茵陈蒿汤可以改善急性肝内胆汁淤积大鼠的一般状况和肝功指标,保护肠道黏膜屏障,减轻肝脏炎症损伤。     

法尼醇X受体在胆汁淤积幼龄大鼠模型中的表达及利胆合剂的干预作用

目的研究法尼醇X受体(FXR)在胆汁淤积幼龄大鼠模型中表达及利胆合剂干预作用。方法将30只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组、模型组、熊去氧胆酸(UDCA)组、利胆合剂高、低剂量组。正常和模型组羧甲基纤维素钠溶液灌胃,其余UDCA或利胆合剂灌胃。第5天(正常组除外)给予α-异硫氰酸奈酯(ANIT),ANIT 48h处死。检测血清TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、GGT、ALP,实时荧光定量PCR检测肝组织FXR及小异源二聚体伴侣(SHP)、UDP葡糖醛酸基转移酶家族2多肽B4(UGT2B4)、胆盐输出泵(BSEP)mRNA;Western blot检测肝组织FXR及SHP、UGT2B4、BSEP蛋白。结果模型组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP、GGT水平较正常组增高(P0.01);与模型组比较,UDCA组、利胆合剂高、低剂量组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP、GGT水平降低(P0.01);与UDCA组比较,利胆合剂高、低剂量组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP、GGT水平降低(P0.01);与利胆合剂低剂量组比,高剂量组AST、TBA、GGT水平降低(P0.01)。模型组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白表达量较正常组降低(P0.01);与模型组比较,UDCA组、利胆合剂高、低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及高剂量组蛋白表达量升高(P0.01),低剂量组FXR、BSEP蛋白表达量升高(P0.05);与UDCA组比较,利胆合剂高、低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白表达量升高(P0.01,P0.05);与利胆合剂低剂量组相比,高剂量组FXR、SHP、UGT2B4、 BSEP mRNA表达量升高(P0.01,P0.05), SHP、UGT2B4蛋白表达量升高(P0.01)。结论利胆合剂可缓解ANIT诱导的胆汁淤积大鼠,且在一定范围内,剂量越高,效果越明显,其疗效优于UDCA,其机制可能与促进FXR及下游的SHP、UGT2B4、BSEP分子表达有关。     

基于TLR4/NF-κB信号通路研究益脾养肝方对大鼠肝癌前病变的影响

目的:观察益脾养肝方对二乙基亚硝胺(DENA)诱导的大鼠肝癌前病变中TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法:将大鼠随机分为空白组、模型组、益脾养肝方大剂量组、小剂量组,以DENA腹腔注射制作肝癌前病变模型,喂养16周后处死大鼠,检测肝功能变化、肝组织匀浆中TLR4、NF-κB的表达水平及对肝组织行HE染色。结果:与模型组比较,YPYGF小、大剂量组ALT、AST、ALP、TBIL和肝组织匀浆中TLR4、NF-κB表达水平均显著降低,且YPYGF大剂量组疗效更好(P0.01);肝组织HE染色病理切片显示,益脾养肝方可改善大鼠肝癌前病变的病理形态。结论:益脾养肝方可抑制大鼠肝癌前病变的进展,其作用机理可能是通过对TLR4/NF-ΚB信号通路的影响,抑制炎症反应来实现。     

五味子甲素对急性肝内胆汁淤积大鼠肝功能的保护作用研究

目的:研究五味子甲素对急性肝内胆汁淤积模型大鼠肝功能的保护作用。方法:将60只SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、五味子甲素高、中、低剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠均灌胃α-荼基异硫氰酸盐复制急性肝内胆汁淤积大鼠模型,各组大鼠于造模当日开始灌胃相应药物,每天1次,连续7天。末次给药后测定大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)的活性和总胆红素(TBIL)的含量,检测肝匀浆中Na~+,K~+-ATP酶的水平。结果:与空白组比较,模型组血清中ALT、AST、ALP及TBIL水平显著升高,肝匀浆中Na+,K+-ATP酶活性明显降低(P0.01);与模型组相比,各给药组大鼠血清中ALT、AST、ALP及TBIL水平明显降低,肝匀浆中Na~+,K~+-ATP酶活性明显升高(P0.05,P0.01),五味子甲素高剂量的作用与阳性药物作用相近。结论:五味子甲素对急性肝内胆汁淤积模型大鼠肝功能具有保护作用。     

退黄合剂对ANIT致胆汁淤积性肝损伤的保护作用及机制研究

目的 观察退黄合剂对异硫氰酸-1-萘酯（ANIT）诱导的胆汁淤积性肝损伤的保护作用.方法 SD大鼠随机分成5组,即空白对照组,ANIT模型组,退黄合剂低、中、高剂量组,大鼠在ANIT处理48 h后被处死,检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和碱性磷酸酶（ALP）活性及总胆红素（TBIL）和直接胆红素（DBIL）含量;肝组织做组织切片HE染色;分析肝组织中SOD和MPO活性;酶联免疫法分析肝组织中巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-2生成;免疫印迹法检测细胞间黏附分子（ICAM）-1表达.结果 与空白对照组相比,模型组ALT、AST、ALP、DBIL、TBIL、MPO和MIP-2显著增高（P＜0.01）,肝脏病理病变明显,肝组织Ⅰ-CAM-1表达上调;与模型组相比,退黄合剂呈剂量依赖地降低ALT、AST、ALP、DBIL、TBIL、MPO和MIP-2,减轻肝脏病变,下调ICAM-1的表达（P＜0.05或P＜0.01）.结论 退黄合剂能保护ANIT诱导的胆汁淤积性肝损伤,其作用机制可能与抑制MIP-2和ICAM-1,减少中性粒细胞浸润,减轻炎症性肝脏损伤有关.     

不同治则中药复方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠尿激酶型纤溶酶原激活剂的影响

目的 观察补益肝肾、活血化瘀方二至丸、失笑散及其合方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)的影响.方法 采用胆管结扎复制胆汁淤积性肝纤维化大鼠模型.造模大鼠于术后1周随机分为模型组、优思弗组、二至丸组、失笑散组及合方组:各药物干预组分别给予相应药物灌胃,模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,至4周末处死全部动物取材.观察各组大鼠一般情况、肝功能(ALT、AST、ALP、TBi 1)、肝组织病理,uPA蛋白表达(western blot法).结果 与假手术组比较,模型组大鼠ALT、AST、ALP、TBi 1、纤维化程度均显著升高.与模型组比较,3个复方均能降低大鼠血清ALP、ALT、AST水平(P＜0.01),失笑散及合方能降低TBi 1(P＜0.01),合方改善ALP、ALT优于两个单方.3个复方均能不同程度地减轻模型大鼠肝纤维化程度(P＜0.01),合方优于两个单方.优思弗能降低ALT、AST水平,但对肝脏纤维化无明显改善作用.与模型组比较,3个复方组uPA蛋白表达显著增加(P＜0.01),其中合方组最高,失笑散组次之,再次为二至丸组,三者之间比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 二至丸、失笑散及其合方均可不同程度地干预胆汁淤积性肝纤维化形成,其机制可能与调控uPA蛋白表达有关.     

琴叶榕对大鼠急性酒精性肝损伤的保护作用与机制研究

目的:研究琴叶榕对大鼠急性酒精性肝损伤的保护作用及其机制。方法:72只雄性SD大鼠按体质量随机分为正常对照组、模型组、水飞蓟宾(37.8 mg/kg)阳性对照组及琴叶榕高(144 g/kg)、中(72 g/kg)、低(36 g/kg)剂量组。各给药组预防性灌胃给予相应药物3 d,正常饲养;第4天起,除正常对照组外各组在给药1 h后,均给予50%乙醇灌胃2次,间隔6 h,高脂饲料饲养,连续7 d,末次造模后检测各组大鼠血清AST、ALT、TBA、TC、TG、TBIL、DBIL、LPO、NO、NOS及肝组织中SOD、GSH-Px、MDA、TNF-α水平。蛋白质印迹法(Western blot)测定肝脏组织NF-κB炎症信号通路相关蛋白的表达。观察大鼠一般体征与肝组织病理改变。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠的体质量显著降低,肝组织SOD、GSH-Px水平及IκBα蛋白表达显著降低,肝脏系数、肝组织NF-κB(p65)蛋白表达及血清AST、ALT、TBA、TBIL、DBIL、TC、NOS、MDA、TNF-α水平均显著升高(P0.05或P0.01),HE显示其肝细胞中广泛分布脂肪滴。与模型组比较,各给药组大鼠的以上指标均呈现不同程度的逆转。结论:琴叶榕具有降酶保肝、促进脂质代谢及抗炎等药理作用。     

片仔癀对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠肝功能及核因子-κB蛋白表达的影响

目的观察片仔癀对CCl_4诱导的肝纤维化大鼠肝功能和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法将24只大鼠随机分为正常对照组、模型组、片仔癀组、秋水仙碱组,每组6只,50%CCl_4灌胃8周制备肝纤维化模型。末次给药1 h后,血清测定ALT、AST、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白和透明质酸含量,取肝脏计算肝指数,HE染色和VG染色观察肝组织病理形态,Western blot检测NF-κB蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠肝指数及ALT、AST、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白、透明质酸含量和NF-κB蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组比较,各给药组大鼠肝指数及ALT、AST、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白、透明质酸含量和NF-κB蛋白表达均明显降低(P0.01)。结论片仔癀对CCl_4所致肝纤维化大鼠具有保护作用,其机制可能与抑制NF-κB的表达有关。     

复方狗肝菜汤对四氯化碳致急性肝损伤大鼠的保护作用及机制

目的:探究复方狗肝菜汤(FGD)对四氯化碳(CCl_4)致急性肝损伤大鼠的保护作用,及其相关的作用机制。方法:将60只大鼠随机分为正常组,模型组,水飞蓟素(120 mg·kg~(-1))组和FGD(475,950,1 900 mg·kg~(-1))组。正常组和模型组给予等体积生理盐水,其余各组按剂量连续灌胃给药10 d,末次用药2 h后,用12%的CCl_4花生油溶液腹腔注射(5 m L·kg~(-1))建立急性肝损伤模型,收集血清和肝脏组织。生化法检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),碱性磷酸酶(ALP),总胆红素(TBIL),丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏组织中核转录因子-κB(NF-κB)与过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)的蛋白表达;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理学改变。结果:与正常组比较,模型组血清中AST,ALT,ALP活性与TBIL,MDA含量显著升高(P0.01),肝组织中IL-1β,IL-6和TNF-α含量明显升高(P0.01),血清中SOD,GSH-Px活性明显降低(P0.01),肝组织中NF-κB表达明显上调(P0.01),PPAR-γ表达明显下调(P0.01),表明急性肝损伤模型建立成功;与模型组比较,FGD可降低血清中AST,ALT,ALP活性与TBIL,MDA含量(P0.05,P0.01),并减少肝组织中IL-1β,IL-6和TNF-α含量(P0.05,P0.01),且下调NF-κB表达(P0.05,P0.01),但可增强SOD,GSH-Px活性与PPAR-γ表达(P0.05,P0.01);镜下观察显示肝组织病变得到不同程度改善。结论:FGD对CCl_4致急性肝损伤大鼠有保护作用,其机制可能与抗炎、抗氧化和调节PPAR-γ和NF-κB信号通路有关。     

白花蛇舌草对ANIT 诱导的胆汁淤积大鼠保肝作用研究

目的研究白花蛇舌草对α-萘异硫氰酸酯（ANIT）诱导的胆汁淤积肝病大鼠的保肝作用及机制。方法 将48 只SD 大鼠随机分为正常对照组,模型组,白花蛇舌草高、中、低剂量组（1、0.5、0.25 g·kg-1）,熊去氧 胆酸组（100 mg·kg-1）,每组8 只,均连续灌胃给予相应药物5 d。其中第3 天除正常对照组外,其他各组采用 灌胃给予ANIT（65 mg·kg-1）制备ANIT 诱导胆汁淤积肝病大鼠模型。检测各组大鼠血清肝功指标谷丙转氨 酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）,血清黄疸指数总胆汁酸（TBA）、总胆红素（TBIL）及肝脏抗 氧化应激因子谷胱甘肽（GSH）和超氧化物歧化酶（SOD）水平;测定各组大鼠胆汁流量以及胆汁中TBIL 和TBA 的含量;采用HE 染色检测肝脏病理变化;Real-time PCR 法检测肝脏组织中胆汁酸合成、转运、排泄和重吸 收等相关基因的表达水平。结果与正常对照组大鼠相比,模型组大鼠血清的ALT、AST、ALP、TBA、TBIL 水平显著增加,而胆汁流量和胆汁中TBA 和TBIL 的排泄则显著降低,差异均具有统计学意义（P＜0.01）;胆 汁酸合成与转运的主要核受体（FXR、SHP）、胆汁酸顶腔侧膜转运体（BSEP、MRP2、MDR2）、胆汁酸合成 酶（CYP7A1、CYP8B1、CYP27A1）和胆汁酸重吸收转运体（NTCP、OATP1A1、OATP1A2）的mRNA 表达水平显 著降低,而胆汁酸基底侧膜转运体（MRP3、MRP4、OSTα、OSTβ）的mRNA 表达水平则显著升高,差异均具有 统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。与模型组相比,白花蛇舌草组大鼠血清的ALT、AST、ALP、TBA、TBIL 水 平显著降低（P＜0.01）,而大鼠胆汁流量和胆汁中TBA 和TBIL 的排泄量则显著升高（P＜0.01）;肝脏组织病理 损伤显著改善;胆汁酸核受体（FXR、SHP）、胆汁酸顶腔侧膜转运体（BSEP、MRP2、MDR2）和胆汁酸基底侧 膜转运体（MRP3、MRP4、OSTα、OSTβ）的mRNA 表达水平显著升高（P＜0.05,P＜0.01）,而胆汁酸合成 酶（CYP7A1）和胆汁酸重吸收转运体（NTCP、OATP1A1）的mRNA 表达水平显著降低（P＜0.05,P＜0.01）。 结论白花蛇舌草具有改善胆汁淤积肝损伤作用,其机制可能通过激活FXR-SHP 轴的表达,从而促进胆汁酸 外排,减少胆汁酸合成与重吸收作用有关。     

石斛合剂序贯法对糖尿病合并肝纤维化大鼠NF-κB信号表达的影响

目的:观察石斛合剂序贯法对2型糖尿病合并肝纤维化大鼠肝脏NF-κB信号通路的影响。方法:将40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、二甲双胍组、石斛合剂组,每组8只,采用高脂高糖饲料6周+STZ小剂量皮下注射形成2型糖尿病模型,后皮下注射40%CCL_4形成2型糖尿病合并肝纤维化模型,干预8周后取材,尾静脉取血测空腹血糖,腹主动脉取血制备血清检测肝功能(ALT、AST),免疫组化观察肝脏组织Ⅵ胶原表达,采用Western blot检测IKKβ、IκBβ、NF-κB P50、NF-κB P65蛋白表达情况。结果:石斛合剂可降低血糖、肝功能(ALT、AST)指标,减少肝脏Ⅵ胶原的阳性表达,改善肝纤维化,减少IKKβ、NF-κB P50、NF-κB P65表达,与模型组相比差异具有统计学意义(P0.05)。结论:石斛合剂可降低血糖、ALT、AST水平,改善肝纤维化,可能与其减少肝Ⅵ胶原纤维的生成,抑制NF-κB信号通路的活化有关。     

基于TLR4/NF-κB通路的解毒化瘀通腑方干预内毒素性肝损伤的作用机制

目的研究解毒化瘀通腑方通过TLR4/NF-κB通路干预内毒素性肝损伤的作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠共160只,随机分为模型组,中药高、中、低剂量组,TLR4单克隆抗体组各30只,并设置空白组。造模各组给予D-GalN (300mg/kg)+LPS(30μg/kg)腹腔注射制备内毒素肝损伤模型。分别在24h、48h、72h三个时间点处死8只大鼠,观察大鼠肝功能(ALT、AST)、内毒素、TNF-α、IL-1β、IL-6水平变化;RT-PCR法检测肝组织中TLR4、NF-κB mRNA表达;Western-Blot法检测肝组织中CD14、TLR4、MyD88、IKK、NF-κB蛋白表达;HE染色观察肝组织病理变化。结果造模后大鼠肝损害明显,内毒素及炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高,肝组织中TLR4、NF-κB mRNA表达及CD14、TLR4、MyD88、IKK、NF-κB的蛋白表达同步升高,24h达到高峰,之后逐渐下降,同一时间点以模型组大鼠肝脏损害最为严重,中药组损害程度较模型组相对较轻,其中以中药高剂量对肝脏的保护作用最为明显,在24h、48h时间点中药高剂量组ALT及AST与模型组比较有显著性差异(P0.05);内毒素水平及炎性因子TNF-a、IL-1β、IL-6水平在同一时间点与模型组比较有显著性差异(P0.05);在同一时间点,中药高剂量组大鼠肝组织TLR4、NF-κB mRNA表达及CD14、TLR4、MyD88、IKK、NF-κB的蛋白表达与模型组比较有显著性差异(P0.05),和TLR4抗体组表现相近,两者比较差异无统计学意义(P0.05)。肝组织病理损害以模型组最重,在同一时间点中药中、高剂量组肝组织病理损害表现较模型组轻。结论解毒化瘀通腑方能够降低内毒素肝损伤大鼠血清内毒素水平,影响TLR4/NF-κB通路炎性级联信号的传导,抑制NF-κB的激活,减少炎性递质及细胞因子的释放,从而减轻内毒素对机体的损害,起到肝细胞保护作用。     

小异源二聚体伴侣受体在淤胆型肝炎模型中的表达及大黄素的干预作用

目的研究小异源二聚体伴侣受体(small heterodimer partner,SHP)在急性淤胆型肝炎大鼠模型中的表达及大黄素的干预作用。方法 40只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为4组:正常对照组,模型组,大黄素组,熊去氧胆酸(UDCA)组,每组10只。除正常对照组外,其余3组给予α-异硫氰酸萘酯(alphanaphthylisothiocyanate,ANIT)50 mg·kg~(-1)一次灌胃,建立大鼠急性淤胆型肝炎动物模型,并给予相应的药物干预,造模后48 h留取标本,以实时荧光定量PCR法及Western blot法分别检测肝组织中SHPm RNA表达及蛋白表达的变化;全自动生化分析仪检测血清总胆红素(total bilirubin,TB)、直接胆红素(direct bilirubin,DB)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、胆汁酸(total bile acid,TBA)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、γ-谷氨酰转移酶(gamma glutamine transferase,GGT)的水平;肝组织切片、HE染色后显微镜下观察肝组织病理学改变。结果模型组肝组织中SHP m RNA及蛋白表达水平分别为0.559±0.194、0.313±0.087,均低于正常对照组(P0.05),大黄素组肝组织中SHP m RNA及蛋白表达水平分别为0.892±0.390、0.706±0.193,均高于模型组(P0.05);大黄素组血清TB、DB、ALT、TBA、AST、ALP均明显低于模型组(P0.05),且大黄素组TB、DB、ALT、TBA、AST、ALP明显低于熊去氧胆酸组(P0.05);大黄素组肝组织病理改变较模型组明显减轻,熊去氧胆酸组肝组织病理改变亦较模型组明显减轻,但程度重于大黄素组。结论大黄素可升高ANIT诱导的大鼠急性淤胆型肝炎肝组织中SHP m RNA及蛋白表达水平。大黄素可降低血清中TB、DB、ALT、TBA、AST、ALP水平及减轻肝组织病理学损害,疗效优于熊去氧胆酸,其作用机制与促进SHP表达有关。     

银杏叶提取物对肝缺血再灌注NF-κB p65表达的影响

目的观察银杏叶提取物对大鼠肝缺血再灌注NF-κB p65表达的影响并探讨其作用机制。方法将45只SD雄性大鼠分为对照组,模型组,银杏叶提取物低剂量给药组、中剂量给药组、高剂量给药组。参考Pringle's法建立模型。测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和肝组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);肝组织进行光镜检查;Western blot检测肝组织中核内NF-κB p65表达水平。结果肝缺血再灌注后,ALT和AST水平及MDA含量显著增高,SOD活性则下降;光镜下,可见到肝窦和中央静脉严重淤血,肝细胞水肿,变性及坏死;肝组织核内NF-κB p65表达水平升高。中剂量和高剂量给药组与模型组比较,ALT和AST水平及MDA含量升高受到显著抑制,SOD活性增加,肝组织病理变化显示肝损伤减轻,且核内NF-κB p65表达水平下降,呈剂量依赖性,以上变化有显著性差异。结论银杏叶提取物可减轻大鼠肝缺血再灌损伤程度,可能机制是通过增强自由基清除作用,减少NF-κB p65表达水平。     

理气化痰祛瘀中药复方对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织NF-κB、IκBα表达的影响

目的:观察理气化痰祛瘀中药复方对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝大鼠肝组织NF-κB、IκB表达的影响。方法:以高脂饲料喂养大鼠造模。造模结束后,分别以不同剂量的理气化痰祛瘀中药和易善复灌胃治疗,模型组和正常组予等容量的蒸馏水灌胃,均连续8周。取肝组织HE染色观察大鼠肝脏脂肪变程度,免疫组化法检测肝组织中NF-κBp65、IκBα的表达。结果:模型组大鼠肝组织脂肪变程度较正常组明显升高(P<0.01);应用大、中、小剂量中药治疗后肝组织脂肪变程度较模型组明显下降(P<0.01)。模型组大鼠肝组织中NF-κBp65、IκBα的阳性表达明显高于正常组(P<0.01);应用大、中、小剂量中药治疗后大鼠肝组织中NF-κBp65表达较模型组明显降低(P<0.05)。结论:理气化痰祛瘀中药能明显改善高脂饮食诱导的大鼠肝组织脂肪变性,抑制大鼠肝组织NF-κBp65表达可能是其作用机制之一。     

祛痰活血方调控LPS介导TLR4/Myd88/NF-κB信号通路抗NASH大鼠肝损伤的机制研究

目的:观察祛痰活血方调控LPS抑制TLR4/Myd88/NF-κB信号通路抗NASH大鼠肝损伤的作用。方法:30只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型对照组和祛痰活血方组,正常组给予普通饲料,模型对照组和祛痰活血方组给予高脂饮食8周建立NASH模型,造模成功后正常组和模型对照组灌胃生理盐水,祛痰活血方组给予中药灌胃,每日1次,连续4周。观察大鼠肝脏组织病理,血清ALT、AST、TC、TG、LPS,以及肝组织TLR4、Myd88、NF-κB表达的变化。结果:(1)与正常组比较,模型对照组大鼠肝小叶结构紊乱,可见大量气球样变细胞,局部可见少量炎症细胞浸润,并呈现大小不一的脂滴,祛痰活血方组大鼠肝脏脂肪变程度及肝细胞炎症均较模型对照组明显改善;(2)与正常组比较,模型对照组ALT、AST、TC、TG及LPS含量均明显升高,祛痰活血方组ALT、AST、TC、TG及LPS水平较模型对照组明显下降;(3)与正常组比较,模型对照组TLR4、MyD88及NF-κBmRNA水平和蛋白表达均显著上调(P0.05),与模型对照组比较,祛痰活血方组TLR4、MyD88及NF-κBmRNA水平和蛋白表达均显著下调(P0.05)。结论:祛痰活血方可以减少LPS产生,抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路从而改善NASH大鼠肝损伤。     

茵黄合剂对雌孕激素共诱导妊娠肝内胆汁淤积症大鼠胆汁酸转运蛋白MRP2与BSEP表达的影响

目的:观察茵黄合剂对雌孕激素共诱导妊娠肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)大鼠胆汁酸转运蛋白多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)与胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)表达的影响,探讨茵黄合剂治疗妊娠肝内胆汁淤积症可能的分子机制.方法:运用雌孕激素联合的方法建立孕鼠妊娠肝内胆汁淤积症模型,随机分为正常组、模型组、茵黄合剂低剂量组(9 g·kg-1·d-1,ig)和茵黄合剂高剂量组(18 g·kg-1 ·d-1,ig),分别给予生理盐水、低剂量与高剂量的茵黄合剂5d,取血,检测血清总胆汁酸(total bile acid,TBA)、总胆红素(total bilirubin,TBil)、丙氨酸转氨酶(alanine transarninase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活性,留取肝脏组织,置于液氮中保存,分别运用实时定量PCR法及蛋白免疫印迹法检测胆汁酸转运蛋白MRP2 BSEP mRNA与蛋白表达情况.结果:与正常组比较,模型组大鼠血清TBA,TBil水平增加,MRP2,BSEP mRNA与蛋白表达水平降低(P＜0.01),模型组ALT,AST含量与正常组比较虽有增加,但差异无统计学意义.与模型组比较,茵黄合剂低、高剂量均能降低妊娠肝内胆汁淤积症模型大鼠血清TBA,TBil水平(P＜0.01),并且可明显增加肝脏组织MRP2,BSEPmRNA与蛋白表达水平,P＜0.01.结论:茵黄合剂治疗妊娠肝内胆汁淤积症的分子机制可能是通过增加肝脏组织胆汁酸转运蛋白MRP2,BSEP,mRNA与蛋白表达水平实现的.     

降黄合剂Ⅱ号对肝内胆汁淤积大鼠肝损伤及肝组织中NTCP和BSEP表达的影响

目的探讨降黄合剂Ⅱ号对复合因素诱导的阴黄证肝内胆汁淤积模型大鼠肝损伤及钠-牛黄胆酸盐共转运多肽(NTCP)、胆盐输出泵(BSEP)表达的影响。方法将60只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、降黄合剂Ⅱ号高剂量组、降黄合剂Ⅱ号中剂量组、降黄合剂Ⅱ号低剂量组,每组12只。正常组大鼠予常规饲养;其余各组大鼠造模阶段施以寒湿条件、大黄煎剂灌胃及高糖高脂饮食,造模3周,第22天时模型组及降黄合剂Ⅱ号各组给予0.5%的ANIT 20 mg/100 g灌胃1次,正常组予以相同体积生理盐水灌胃,建立阴黄证肝内胆汁淤积大鼠模型。降黄合剂Ⅱ号各组于造模第8天开始每天下午给相应剂量的降黄合剂Ⅱ号灌胃,一直到造模后14 d,共用药28 d,正常组和模型组均予相同剂量生理盐水灌胃。观察各组大鼠一般状态,检测干预结束后各组大鼠血清碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)水平,镜下观察各组大鼠肝组织病理变化,采用Western blot法检测各组大鼠肝组织中BSEP、NTCP蛋白表达水平。结果正常组大鼠饮食量、活动量、被毛、体质量、排便排尿情况均正常;模型组大鼠形体均较消瘦,饮食量减少,大便增多,尿液明显变黄、增多,被毛枯黄、粗糙且易脱毛,精神状态不佳;降黄合剂Ⅱ号各组大鼠干预后情况均较模型组明显好转,以大剂量组最为明显。模型组大鼠血清ALP、ALT、AST、TBil水平均明显高于正常组(P均<0.05);降黄合剂Ⅱ号大剂量组和降黄合剂Ⅱ号中剂量组上述指标水平均明显低于模型组(P均<0.05),且降黄合剂Ⅱ号大剂量组各指标水平均明显低于降黄合剂Ⅱ号小剂量组(P均<0.05),其中血清ALP、ALT、TBil水平明显低于降黄合剂Ⅱ号中剂量组(P均<0.05)。HE染色显示降黄合剂Ⅱ号大、中剂量组肝组织较模型组中炎细胞浸润减少,毛细胆管淤堵减轻,肝细胞肿胀缓解,细胞核清晰,形态较完整,可见少量炎性细胞。模型组大鼠肝组织中NTCP、BSEP相对表达量均明显低于正常组(P均<0.05);降黄合剂Ⅱ号大剂量组和降黄合剂Ⅱ号中剂量组大鼠肝组织中NTCP、BSEP相对表达量均明显高于模型组(P均<0.05),降黄合剂Ⅱ号小剂量组与模型组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论降黄合剂Ⅱ号可改善阴黄证肝内胆汁淤积模型大鼠肝损伤,机制可能与上调NTCP和BSEP表达有关。