三磷酸肌醇对大鼠逼尿肌细胞内钙影响的激光共聚焦显微镜观察

目的探讨三磷酸肌醇(IP3)/Ca2 信号转导过程与逼尿肌细胞内游离Ca2 浓度[(Ca2 )I]的关系.方法建立逼尿肌不稳定(DI)大鼠模型,利用激光共聚焦显微镜观察原代培养的逼尿肌稳定(DS)及DI大鼠逼尿肌细胞内钙荧光强度的变化以及10-5mol/L IP3影响DS大鼠逼尿肌培养细胞后细胞内钙荧光强度在有钙液及无钙液中的变化情况.结果DI大鼠逼尿肌培养细胞内钙荧光强度较DS大鼠显著增强(P＜0.01),经10-5 mol/L IP3处理后,DS大鼠逼尿肌培养细胞内钙荧光强度较处理前显著增强(P＜0.01),且有钙液中细胞内钙荧光强度显著高于无钙液中细胞(P＜0.01).结论由IP3激活引起的逼尿肌细胞内游离钙浓度的升高可能是DI发生的重要原因之一.     

逼尿肌不稳定大鼠逼尿肌组织三磷酸肌醇受体变化的研究

目的探讨逼尿肌不稳定(DI)大鼠逼尿肌组织三磷酸肌醇受体(IP3R)变化与DI的关系.方法建立DI大鼠模型,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测DI及逼尿肌稳定(DS)大鼠逼尿肌组织IP3R亚型变化.结果DS大鼠及DI大鼠膀胱逼尿肌组织均有IP3RⅠ、Ⅱ、Ⅲ亚型表达,DI大鼠IP3RⅠ、Ⅱ亚型表达显著高于DS大鼠(P＜0.05～0.01),IP3R Ⅲ亚型表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论DI大鼠IP3RⅠ、Ⅱ亚型表达增强可能参与了逼尿肌不稳定的发生.     

激光共聚焦显微镜在细胞内ROS研究中的激光干扰问题

目的 对激光共聚焦显微镜在细胞内ROS研究中的激光干扰问题进行探讨.方法 ROS探针标记ECV-304及BAW264.7细胞后,激光共聚焦显微镜488nm波长检测器分别进行连续和间隔观测1200s,比较两种观测方式下细胞荧光强度的变化;外源性加入H2O2,证实间隔观测时系统的灵敏性.结果 在连续观测方式下,细胞荧光强度短时间内显著增强,改为间隔观测后细胞荧光强度变化缓慢,但维持在低水平且在外源性加入H2O2后细胞荧光强度迅速增强.结论 激光共聚焦显微镜激发激光可引起细胞大量产生ROS,对检测系统造成干扰,采用间隔观测的方法可显著改善系统自身的这种缺陷,并能保持系统的检测灵敏性.     

激光共聚焦显微镜观察新生鼠海马齿状回神经干细胞的增殖

目的 观察新生鼠海马齿状回神经干细胞的形态及其分布.方法 新生7 d SD大鼠每天2次腹腔注射Brdu,至出生20 d及32 d分别取脑片标本,用Tritc(罗丹明)标记的麦芽凝集素及FITC标记的小鼠抗大鼠Brdu单克隆抗体行免疫荧光双染色,在激光共聚焦显微镜下观察大鼠海马齿状回神经干细胞的形态、分布特点及数量变化.结果 激光共聚焦显微镜观察显示,出生20 d大鼠海马齿状回Brdu阳性细胞主要聚集在颗粒下层,呈条带状分布,在海马的其他区域也有呈散在的阳性细胞存在,而出生32 d大鼠海马齿状回的神经干细胞呈散在分布,数目明显少于20 d大鼠.结论 新生SD大鼠海马齿状回存在一定数量的神经干细胞,其数量随着大鼠年龄的增大而减少.     

激光共聚焦显微镜观察神经细胞孤啡肽受体的分布

目的：介绍激光共聚焦显微镜技术及其在观察受体细胞分布实验中的应用。方法：采用原位杂交、免疫荧光双标结合激光共聚焦显微镜技术。结果：孤啡肽受体ORL1在成年大鼠的皮层，海马及下丘脑区域的神经元，星型胶质细胞，小胶质细胞上均有表达。结论：激光共聚焦显微镜技术及免疫荧光双标技术在检测受体的细胞分布方面是一种实用的、简单的方法。     

膀胱梗阻大鼠逼尿肌不稳定与三磷酸肌醇关系的实验研究

目的探讨膀胱梗阻大鼠逼尿肌不稳定(detrusor instability ,DI)与三磷酸肌醇[inositol(1,4,5)-trisphosphat ,IP3]含量变化的关系.方法建立DI大鼠模型,分别检测DI大鼠、逼尿肌稳定(detrusor stability, DS)大鼠及经卡巴可(Carbachol) 处理的DS大鼠逼尿肌原代培养细胞IP3含量.结果DI大鼠逼尿肌原代培养细胞IP3含量显著高于DS大鼠(P＜0.01),经10-5mmol/L卡巴可刺激后,DS 大鼠逼尿肌原代培养细胞IP3含量较刺激前显著升高(P＜0.01).结论肌醇脂质信号传导通路可能参与了逼尿肌不稳定的形成,IP3含量的升高可能在其中起着重要作用.     

激光共聚焦显微镜诊断棘阿米巴角膜炎

目的探讨激光共聚焦显微镜(LSCM)在棘阿米巴角膜炎(AK)快速诊断及随访中的价值。方法回顾分析4例(4眼)AK患者的临床表现、角膜组织刮片镜检及培养、LSCM检查结果。结果 4例患者中,2例裂隙灯检查见角膜混浊、浸润,基质雾状水肿,后弹力层皱褶,角膜溃疡形成;2例表现为典型角膜基质环形浸润。角膜真菌刮片镜检及培养均无阳性病例。LSCM显示,棘阿米巴包囊位于角膜上皮下或浅层基质150μm以内;1例患者角膜内查见多个包囊,余均见1个包囊;包囊形态为圆形至椭圆形高回声结构,双层囊壁,大小为25～150μm,内核形态类圆形。经治疗,2例患者包囊消失、基质炎症减退;2例包囊变小,形态发生改变,双层囊壁结构不清;仅在1例中查见滋养体。结论 AK检查手段较多,传统角膜刮片镜检及培养等方法易受角膜取材等因素影响,阳性率较低。LSCM可用于感染角膜快速无创的活体检查,具有高分辨率、准确深度定位、动态观察、纵向断层扫描等优势,是AK病原学快速诊断及随访的重要手段。     

激光共聚焦显微镜在骨计量学中的应用

激光共聚焦显微镜(LSCM)是九十年代初出现的一种可用荧光标记进行微形态观察的高分辨显微镜,与传统方法比较,具有精确、清晰、动态和三维成像等突出优点。骨计量学是研究代谢性骨病的重要方法。本研究将激光共聚焦显微技术引入骨计量学中,达到了精确定位和定量分析骨微结构的目的,具有无须染色,对厚片可进行荧光染色观察的特点,其清晰度高,制片易,可与组织化学、免疫组织化学等方法结合,从多个角度、多个层次同时观察骨微结构与各种骨细胞的形态与功能。为代谢性骨病的研究和诊断提供了新的方法和途径。     

激光共聚焦扫描显微镜与多光子激光扫描显微镜之比较

激光共聚焦显微镜是 80年代随着光学、视频、计算机等技术的飞速发展而诞生的新一代显微镜。自从 195 7年马文·闵斯基在他的美国专利上首次阐明扫描共聚焦显微镜技术的某些基本原理 ,激光显微镜技术得到逐步发展。 1970年牛津和阿姆斯特丹同时向科学界推荐了一种新型的扫描共聚焦显微镜[1 ] ,它是在荧光显微镜成像的基础上加装了激光扫描装置 ,利用计算机进行图像处理 ,使用紫外或激光激发荧光探针。能够得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像 ,由于它采用激光作光源 ,发射角小 ,方向性好 ,在发射光检测光路上放置了一个与入射光针孔共轭的…     

TUNEL技术原位检测肝癌细胞凋亡激光共聚焦显微镜观察

目的 用缺口末端标主技术（ＴＵＮＥＬ）对肝硬变,肝细胞肝癌及培养肝细胞癌细胞系的细胞凋亡进行形态学观察。方法 采用德国宝灵曼公司生产的原位末端标记试剂盒对福尔马林固定,石蜡包埋的肝组织和培养肝细胞进行ＴＵＮＥＬ染色,激光共聚焦显微镜观察会细胞凋亡的形态特征。结果：ＴＵＮＥＬ阳性信号为黄绿色或黄色强荧光,位于胞核,呈环行,小圆形或颗粒状,提示凋亡细胞有典型的新月体状染色质边集,核浓缩以及有大量微核体     

三磷酸肌醇剌激心肌成纤维细胞的增殖

目的　探讨钙调神经磷酸酶 (CaN)依赖的信号通路在三磷酸肌醇 (IP3)剌激的乳鼠心肌成纤维细胞 (FBs)增殖中的作用。方法　以培养的FBs为模型 ,用IP3剌激FBs内Ca2 +释放 ,环孢素A(CsA)阻断CaN ,维拉帕米 (Ver)阻断FBs钙通道 ,检测FBs的CaN、丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)、蛋白激酶C(PKC)活性 ,用3H 亮氨酸及3H 胸腺嘧啶掺入量作为反应FBs增殖的指标。结果　IP3剌激组FBs蛋白核酸合成速率明显增高 ,与对照组相比差异显著 (P <0 .0 1 ) ;CsA及Ver能明显抑制IP3介导的FBs蛋白核酸合成速率增高 ,与IP3剌激组相比差异显著 (P <0 .0 1 )。同时发现IP3剌激组CaN、PKC活性与对照FBs相比差异显著 (P <0 .0 5,P <0 .0 1 )。CsA和Ver抑制IP3介导的FBs的CaN活性增高 ,Ver抑制IP3介导的FBs的PKC活性增高。结论　CaN在IP3剌激的FBs增殖中起重要作用 ,但CaN信号通路不是IP3剌激FBs增殖的唯一信号通路 ,其它信号通路也可能参与了IP3剌激的FBs增殖。     

三磷酸肌醇、钙离子在胃泌素促人结肠癌SW480细胞株增殖中的作用

目的：探讨胃泌素对人结肠癌细胞株ＳＷ４８０内三磷酸肌醇（ＩＰ３）、钙离子（Ｃａ２＋）的影响及其在细胞增殖中的作用,为结肠癌抗信息传导治疗提供实验依据。方法：①３Ｈ－肌醇标记细胞进行ＩＰ３分析。②应用Ｃａ２＋荧光指示剂Ｆｕｒａ－２检测细胞内Ｃａ２＋的浓度。③ＭＴＴ比色分析法检测活细胞数（吸光度Ａ值）。结果：５肽胃泌素（Ｐｅｎｔａｇａｓｔｒｉｎ,ＰＧ）可使ＳＷ４８０细胞内ＩＰ３、Ｃａ２＋水平升高,同时活细胞数Ａ值增加;５肽胃泌素与其受体拮抗剂丙谷胺（Ｐｒｏｇｌｕｍｉｄｅ,ＰＧＬ）合用时,癌细胞内ＩＰ３、Ｃａ２＋水平和活细胞数Ａ值均无明显变化。结论：提示胃泌素可能通过肌醇脂质信号传导途径促进人结肠癌细胞株ＳＷ４８０的增殖     

三磷酸肌醇受体在大鼠血管平滑肌细胞的表达

目的：研究三磷酸肌醇受体（IP3R）在大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）的表达。方法：用异硫氰酸胍酸酚一步法提取大鼠VSMC总核糖核酸（RNA）。用AMV逆转录酶反转录,以IP3R各亚型的引物进行反转录PCR（RT－PCR）,并对扩增产物进行克隆及测序。用间接免疫荧光标记技术检测I型IP3R在VSMC的分布。结果：3个亚型IP3RmRNA在VSMC中均有表达,扩增片断分别为405、183和169bp。VSMC中表达缺失型I型IP3R。免疫荧光染色显示,I型IP3R在细胞质内围绕核膜周边分布。结论：大鼠血管平滑肌细胞内表达3种亚型的IP3R,提示单一细胞内存在复杂多样的信号转导途径。     

荧光定量法测量平滑肌细胞内钙离子浓度的探讨

目的 研究平滑肌细胞内Ca²⁺浓度的动力学变化,建立一种定量测量细胞内Ca²⁺浓度的方法。方法 分离肠系膜细动脉血管平滑肌(ASMC)细胞,用荧光探针Indo-1和激光扫描共聚焦显微成像技术测定单个平滑肌细胞Ca²⁺浓度的动力学变化;首先在37 ℃环境下标定Ca²⁺ 探针indo-1的解离常数Kd值,根据荧光-浓度换算公式将测量的荧光强度值换算成Ca²⁺ 浓度值。结果 激光扫描共聚焦显微成像技术测量的细胞荧光图像分析显示,平滑肌细胞[Ca²⁺]_i 在地塞米松的刺激下显著上升,有时会出现自发钙波的现象,并且细胞内出现钙超载的现象(细胞荧光图像呈现白色)。通过测量得到的Kd值结合荧光强度-浓度换算公式可准确地测量细胞内[Ca²⁺]_i。结论 荧光定量法结合共聚焦显微成像技术可以简易、快捷地监测细胞内钙离子的动力学变化,不失为一种定量测量细胞内钙离子的方法。     

糖尿病肾病大鼠肾脏组织中I型1,4,5-三磷酸肌醇受体的表达

目的:检测糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏组织中I型1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R)的表达.方法:35只健康雄性清洁级SD大鼠随机分成正常对照组(NC组,n=10)和DN组(以新鲜配制的枸橼酸缓冲液稀释链脲佐菌素成10 g/L的溶液,按60 mg/kg腹腔注射进行造模,当血糖值超过16.7 mmol/L,表明糖尿病模型...     

应用激光扫描共聚焦显微技术观察PDT导致癌细胞内钙水平的变化

肿瘤光动力治疗 (photodynamictherapy ,PDT)是现代癌症治疗中一种新的治疗法 ,为了更好地认识光动力诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制。方法 :用Fluo 3AM荧光探针负载培养的人肺腺癌GLC 82细胞 ,在激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞内Ca2 浓度的变化。结果 :激光单独照射前后GLC 82细胞内Ca2 的浓度变化不大 ;在PDT作用下 ,激光照射前GLC 82细胞内Ca2 的浓度变化明显。结论 :本方法灵敏、简单、快速 ,能实时监测细胞内游离钙的变化。     

败血症大鼠肝细胞内核膜三磷酸肌醇受体的改变

目的：观察早期、晚期败血症大鼠肝细胞内核膜上１,４,５三磷酸肌醇受体（ｉｎｏｓｉｔｏｌ１,４,５ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓ,ＩＰ３Ｒ）的变化。方法：通过结扎并穿刺盲肠制作大鼠败血症模型,差速离心分离内核膜,［３Ｈ］ＩＰ３放射配体分析肝内核膜ＩＰ３Ｒ与其配体的最大结合容量（Ｂｍａｘ）及亲和力（Ｋｄ）。４５Ｃａ２＋转运测定内核膜ＩＰ３Ｒ释放Ｃａ２＋功能。结果：早期和晚期败血症Ｂｍａｘ分别增加１４％（Ｐ＜０．０５）和９１％（Ｐ＜０．０１）。但Ｋｄ值无明显变化（Ｐ＞０．０５）。ＩＰ３引起４５Ｃａ２＋转运在败血症时也相应增加。结论：在败血症时肝细胞核被膜ＩＰ３Ｒ发生上调,其释放Ｃａ２＋的能力增强,但结构可能未发生变化。